石蜡切片和HE染色详细步骤

石蜡切片HE染色1.脱蜡：二甲苯1，二甲苯2，二甲苯3中各浸泡10分钟。

梯度酒精复水（100％100％，100％，95％，80％，70％）各5分钟。

2.清洗：用PBS洗1次，3分钟。

3.苏木素染色：取苏木素染液用去离子水按1：4稀释，然后染色约5 min（具体时间根据染色的组织而定，一般看到核有较深的蓝紫色就可以了）。

用自来水终止染色。

4.分化：染色后的切片在0.1%盐酸酒精分化3~5 s（具体时间根据染色的情况而定，分化的目的主要是让胞质与核的染色能够区分开，苏木素染色过了的话也可以通过分化后重新染色，这时处理时间需要长一些，如果分化过头即片子着色不深的时候可以再用苏木素染色)。

5.返蓝：分化后的片子置于自来水中，流水返蓝10～30min（具体时间根据染色情况而定，苏木素在碱性溶液中呈蓝色，别人做的时候都是先用弱碱性溶液返蓝后再用自来水冲洗，用时较短，我们是直接用自来水返蓝，由于自来水呈弱碱性，可以达到返蓝效果）。

6.伊红染色：伊红染液用95%酒精按1：1配制成工作液（伊红的贮备液瓶子上有注明），染色30s~1min（时间根据染色情况调整，建议是染深一点好，因为所用的染色伊红为水溶性，弱醇溶性的，在后面的脱水透明的时候非常容易掉色），染色后用去离子水洗1～3s（放在去离子水缸中立即拿去脱水透明）。

7.脱水透明：通风橱里梯度酒精（95％，100％，100％）脱水各30s，二甲苯1，二甲苯2，二甲苯3透明各3分钟。

（说明：这是我做的时候的步骤，因为按照一般的脱水透明的步骤，最后伊红的着色一般都没有了，原因我前面也说了是由于伊红为水溶性弱醇溶性的，但是按着这样的步骤比较容易污染95%酒精，后来看了相关的资料我的想法是伊红染色后先用95%酒精洗一下，再去通风橱从95%酒精梯度脱水，这样不会污染。

）8.封片：中性树胶封片（一般两滴就够了，从二甲苯中拿出时建议尽量不要让二甲苯干，这样中性树胶能够很快分散开，不会形成气泡）。

石蜡切片和HE染色详细步骤石蜡切片和HE染色方法与步骤1(取材颈椎脱臼法处死小鼠，打开腹腔，剪取肝组织(或其他组织)。

切取的组织块不宜太大，以利于固定剂穿透，通常以5mm×5mm×2mm或10 mm×10 mm×2 mm为宜。

取下所需要的肝组织，切成一小块2,3mm厚。

注意事项:(1)取材动作要迅速，不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。

(2)切片材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能不要损伤所需要的部分。

2(固定将切好的肝组织用生理盐水组织洗一下，立即投入中性福尔马林固定液中固定，固定30,50min。

注意事项:(1)一般固定液，都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化，失去固定作用。

(2)有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早，固定时就没有作用了。

(3)固定材料时，固定液必须充足，一般为材料块的20~30倍，有些水分多的材料，中间应更换1-2次新液。

(4)材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，并随同材料在溶液中投入相应的标签，以免相互混淆。

标签上注明固定液、材料来源、日期等。

标签上的文字，应用黑色铅笔或绘图黑墨水书写。

3. 脱水50%酒精?70%酒精?80%酒精?95%酒精?100%酒精?100%酒精。

每级0.5h。

注意事项:(1)脱水必须在有盖的玻璃品中进行，防止吸收空气中的水分。

(2)在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水剂，再用吸水吸尽器皿内剩余液，然后于皿中加入高一级脱水剂。

(3)在低浓度酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。

(4)在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使组织变脆，影响切片。

(5)如需过夜，应停留在70%酒精中。

(6)脱水必须彻底，否则不易透明，甚至使透明剂内出现白色混浊现象4. 透明1/2二甲苯+1/2无水乙醇 (2h) ?纯二甲苯(1.5h) ?纯二甲苯(1.5h)。

石蜡切片制备基本步骤一、准备工作（一）洗涤实验所需器皿：（玻璃器皿的清洗）1、用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷2、将器皿在自来水下冲洗干净3、将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干注：一般情况下，经以上步骤后，用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用，如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时，再经自来水彻底冲洗，再用蒸馏水过洗1~3次烘干备用。

（二）配制：硫酸洗液的配制清洁液（洗液）的配制：成分强酸液次强酸液弱酸液浓硫酸（ml）1000 200 100重铬酸钾（mg）63 120 100蒸馏水（ml）200 200 1000重铬酸钾1200g蒸馏水2000ml将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中，边倒边用木棒轻轻搅拌（三）载玻片与盖玻片的处理1. 将所需载玻片与盖玻片清洗后，放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时2. 流水冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍3. 95%~100%酒精浸泡24小时，用绸布擦干备用注：在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时，要一片片地投入，使其不致重叠。

二、常用液体的配制（一）缓冲溶液：1．磷酸盐缓冲液A液：0.1mol/L磷酸二氢钠B液：0.1mol/L磷酸氢二钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（3：7≈PH7.0）2．枸椽酸缓冲溶液A液：0.1mol/L枸椽酸B液：0.1mol/L枸椽酸钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（6.2：42.8≈PH6.2）（二）固定剂：1．甲醛：10%甲醛福尔马林100ml蒸馏水900ml注：实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。

2．10％中性福尔马林钙固定液甲醛液10ml蒸馏水90ml加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。

3．4%多聚甲醛：8%多聚甲醛多聚甲醛8g蒸馏水100ml加温至60℃左右，不时搅拌，成为乳白色溶液。

滴加1N NaOH，并不停搅动至液体清明。

石蜡切片及染色过程石蜡切片及HE染色过程一、石蜡切片1. 取材: 刀片要求锋利而薄,组织厚度约2—3mm, 大小1.5×1.5×0.2～0.3cm为宜. 取材时间越快越好.2. 固定: 组织取下后应立即放入10%福尔马林(相当于4%甲醛)固定.注意:(1). 固定液量应为组织块体积的40倍.(2) 固定时间固定时间与使用的固定液种类和组织块大小, 温度等有关. 一般为3—24h.(3)固定温度大多可在室温固定, 在低温(4℃)时间应延长.(4)固定容器应大些.3. 漂洗: 流水冲洗2—10h.4. 脱水: 从低浓度酒精到高浓度酒精.70%(数分钟)→80%(60-120’)→90%(60-120’)→95%(60-120’)→95%(60-120’)→100%(60-120’)→100%(60-120’).5. 透明: 组织块脱水后必须经过一种既能与酒精混合又能溶解石蜡的溶剂, 而使石蜡进入组织块. 常用二甲苯, 一般浸泡30m即可.6. 浸蜡: 组织经透明后在熔化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡. 一般需经2—3次浸渍才能完成, 总时间为3—4h. 用于浸蜡的石蜡熔点为52—56℃.7. 包埋: 先将熔化的石蜡倒入包埋框再用加热的镊子将组织块放入. 包埋面必须平整. 包埋后石蜡稍凝后可移入冷水或冰箱中加速凝固.8. 切片: 修块→切片→展片→捞片→烤片.二、 HE染色1. 染色前切片处理(1) 脱福尔马林色素.(2) 脱汞盐结晶.(3) 脱黑色素.2. 染色步骤二甲苯脱蜡(10’)→ 无水乙醇洗去二甲苯(1’×2次)→95%酒精(1’)→90%酒精(1’)→85%酒精(1’)→自来水洗(2’)→苏木精染色(1—5’)→自来水洗(1’)→1%盐酸酒精分化20s→自来水洗(1’)→稀氨水(1%)反蓝30s→自来水或蒸馏水洗(1’)→伊红染色(20s—5min)→自来水洗(30s)→85%酒精脱水(20s)→90%酒精脱水(30s)→95%酒精(1’)→95%酒精(1’)→100%酒精(2’)→100%酒精(2’)→二甲苯(2’)→中性树胶封片.3. 染色结果: 细胞核呈兰色, 胞浆呈红色.三、盐酸酒精的配制浓盐酸0.5—1ml + 75%酒精99ml.此液用一段时间后需延长或更换液体, 新液体分化时间要短.。

组织包埋步骤一、 脱水① 95%乙醇 Ⅰ 30 min② 95%乙醇 Ⅱ 30 ~ 40 min③ 100%乙醇 Ⅰ 20 ~ 30 min④ 100%乙醇 Ⅱ 20 ~ 30 min⑤ 100%乙醇 Ⅲ 20 ~ 30 min⑥ 二甲苯 Ⅰ 20 min⑦ 二甲苯 Ⅱ 30 min二、 浸蜡包埋⑧ 软蜡 30 min⑨ 软蜡 30 min⑩ 硬蜡 2 ~ 3 h （或过夜温度低2 ~ 3℃）⑪ 包埋蜡切片石蜡58 ~ 60 ℃；脱水、浸蜡过程可在温箱中进行。

常规HE 染色步骤① 二甲苯 Ⅰ② 二甲苯 Ⅱ③ 95%乙醇 Ⅰ④ 95%乙醇 Ⅱ ⑤ 80%乙醇 （可有可无）⑥ 蒸馏水 （＜10 min ）⑦ 苏木精染色 （10 ~ 15 min ）⑧ 流水稍洗去苏木精液 (1 ~ 3 s 流水冲组织背面)⑨ 1%盐酸乙醇 （1 ~ 3 s 分化上下移动 去蓝色）⑩ 流水冲洗 （15 ~ 20 min 去盐酸）⑪ 蒸馏水过洗 （1min ）⑫ 0.5%伊红液染色 （1 ~ 3 min ）⑬ 95%乙醇 Ⅰ⑭ 95%乙醇 Ⅱ⑮ 95%乙醇 Ⅲ⑯ 100%乙醇⑰ 100%乙醇 ⑱ 二甲苯 Ⅰ （20 min ）⑲ 二甲苯 Ⅱ （20 min ）⑳ 二甲苯 Ⅲ （≥20 min ）21 中性树胶封固 （将周围液体吸去 加光学树胶1滴 盖片）伊红染液配法① 水溶性伊红0.5 g ，用最少量水（1 ~ 2 ml ）溶解后② 用冰醋酸滴加至完全沉淀（呈浆糊状）③ 加95%酒精至100 ml苏木素染液配法④ 苏木素1g⑤ 100%乙醇10 ml⑥ 钾明矾 20 g⑦ 蒸馏水200 ml⑧ 氧化汞0.5 g ——加热离火后（1 min ）缓慢少量沿杯加入氧化汞，以免溢出伤人1%盐酸乙醇（分色）⑨ 盐酸1ml⑩ 70%乙醇99ml淡氨水—在400 ml 自来水中滴2滴浓氨水—胞核蓝化。

设备用具：切片机、恒温箱、溶蜡箱、玻璃缸、载玻片、盖玻片、手术刀片、镊子、包埋盒。

试剂：10％福尔马林、酒精、二甲苯、固体石蜡、苏木精、酸水、氨水、酒精伊红染色剂型、加拿大树胶（二）HE染色石蜡切片的制作过程步骤一：取材与固定：取动物新鲜组织块(一般厚度不超过0．5厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林，Bouin氏固定液)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。

步骤二：脱水透明：一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。

再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。

步骤三：浸蜡包埋：将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。

待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：先制备好容器(如折叠一小纸盒)，倒入已溶化的石蜡，迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。

冷却凝固成块即成。

包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片。

步骤四：切片与贴片：将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5—8微米厚。

切下的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干。

步骤五：脱蜡常用HE染色，以增加组织细胞结构各部分的色彩差异，利于观察。

苏木精(Hematoxylin，H)是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。

伊红(Eosin，E)是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色，被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。

染色前，须用二甲苯脱去切片中的石蜡，再经由高浓度到低浓度酒精，最后入蒸馏水，就可染色。

步骤六：染色HE染色过程是：①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。

②酸水及氨水中分色，各数秒钟。

③流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。

④入70％和90％酒精中脱水各10分钟。

⑤入酒精伊红染色液染色2—3分钟。

步骤七：脱水透明：染色后的切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明。

详细论述常规石蜡切片he染色的基本流程下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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he染色步骤 HE实验步骤动物病理切片小结[样本处理]动物麻醉后，开胸，暴露心脏，头皮针插入左心室尖，打开37?生理盐水输液装置，从右心耳下沿剪开右心房，灌洗至流出的生理盐水无血(20min)，换4%多聚甲醛固定液灌注(约5min)[固定]4%多聚甲醛固定。

[石蜡切片]取样从固定中取出待切组织，用手术刀切成2mm厚度的小样，装入脱水小盒中，铅笔标号纸条同放入小盒后流水洗30min，蒸馏水浸洗处理Mice:脱水50%乙醇 2-3h170%乙醇 1-2h80%乙醇 1h95%乙醇 2h(1h+1h)100%乙醇 2h(1h+1h)透明二甲苯 35min+35min浸蜡 1h+1h+1h (62?蜡)[HE染色]脱蜡二甲苯? 15min二甲苯? 15min二甲苯:无水乙醇(1:1) 2min无水乙醇? 2min无水乙醇? 2min95%乙醇 2min85%乙醇 2min70%乙醇 2min50%乙醇 2min蒸馏水 5min(如果是DAB染色要抗原修复)HE染色苏木素 6-8min (时间可以延长，现在10-30min)冲洗 1min(反向将载玻片反向冲洗，注意不要脱片)2含1%盐酸的乙醇进行分色(用75%乙醇配)2-3s动作要快氨水反蓝 >10min伊红 10s冲洗固定脱水95%乙醇 2min100%乙醇? 2min100%乙醇? 2min二甲苯? 2min二甲苯? 2min 树胶封片组织浸蜡-常规石蜡切片制作组织经过透明剂的完全透明后，被移放于65?左右熔化的石蜡中，于65?的电热恒温箱中浸渍的过程称为浸蜡。

组织在脱水时，组织中的脂类和类脂等物质在脱水剂的作用下被溶解掉，留下了许多腔隙，许多管腔组织和血管，也有许多腔隙，这些都严重地影响了切片。

组织浸蜡时，由于诱导剂(二甲苯)的作用，石蜡进入到组织的各个角落，并在各个角落中保存下来。

当石蜡包埋后冷却时，这浸入到里3面的石蜡便可起到支撑的作用，而且使组织不致于变形，塌陷等现象，使切片能完整的切出，便于镜下观察。

复方氯化钠滴眼液（5ml,8ml）兔眼刺激试验12.2-12.15 给药：左眼滴药，右眼滴生理盐水，1-3号滴小瓶（5ml）,4-6号滴大瓶（8ml），每日4次，每次间隔2小时12.18 给药完后72小时，第一次取材13:00-17:00 处死：耳缘静脉打空气取6只兔子左右眼球和上下眼睑投入10%福尔马林中浸泡，4℃，并标号：1左，1右，2左，2右，……18:00-12.25 10%福尔马林固定5天（长期固定的标本最好用水冲洗24-48h）12.25,11:30-12:30 第二次取材用长镊子将眼球取出，放在培养皿上，用刀片将眼球从正中沿矢状面切成两半，去除晶状体（透明坚硬小球）后，将其中一半的月牙形弯曲部分剪掉一段，使断层平直。

将眼球靠最里面一层环状部分沿冠状方向切掉，沿矢状方向切取一定厚度的组织两块，放入塑料包埋盒内，标号，盖上盖子，用线将12个盒穿起来。

脱水：依次浸入70%酒精（4h），80%（4h），90%（4h），95%（过夜）100%Ⅰ（1h），100%Ⅱ（1h）标本与乙醇体积比30：1透明：二甲苯Ⅰ(10min) 二甲苯Ⅱ(10min)常规标本透明时间为2－3h，边浸泡边观察浸蜡：蜡Ⅰ，蜡Ⅱ（共2h）将透明过的标本夹到滤纸上吸掉透明剂，放入蜡液中（若为新蜡块，在酒精灯上熔化成液体状，室温下凝固，再熔化成液体状才可用，去除气泡）将熔化为液体状的石蜡烧杯放入烘箱（69℃）包埋：（烘箱中进行，70℃）将液体石蜡倒入金属包埋盒内，倒满，用镊子将一串塑料包埋盒从液体石蜡中取出，放在表面皿上，打开每个包埋盒，将盖子去掉，用镊子夹取组织在液体石蜡中放一段时间，紧挨着放入金属包埋盒的石蜡中，尽可能放在中央，将塑料包埋盒底座浸入液体石蜡中一段时间后盖在组织上，此时停止在塑料包埋盖上倒石蜡，防止组织被冲走，将盖好的整个包埋盒放在烘箱外室温下凝固，放入冰箱下层，待冰冻后拿出，抠出石蜡块。

切片：将石蜡块两侧多余部分修掉，使平齐，夹在切片机上，调节厚度5μm，左手摇动手轮调节石蜡块与刀片之间的距离，右手摇动手轮切去多余部分。

石蜡切片、HE、免疫组化实验一：取材及石蜡切片的制作（本次取材为小肠、膀胱、子宫、宫颈）①取材：小鼠脱颈处死后，应立即找到自己所需的组织器官，用一张滤纸将所需器官放在其上（可以加一些生理盐水在上面，防止干了），修去多余的脂肪、系膜等不要的组织，根据不同器官切成合适大小的形状（如小肠应切成1cm长度的长柱形）。

将切好的组织装于冻存管中，加入4%的PFA（PFA的作用是保护蛋白，防止蛋白降解）固定过夜（固定时间不能超过24h，如果24h后不能完成脱水工作，可以先50%、70%酒精脱水后，置于4℃冰箱保存。

）②脱水（目的是为了使组织从水相置换到有机相）（根据不同的组织，脱水时间不同）：将PFA中的组织取出，放入组织盒（组织盒子应尽量选择小格子，防止组织脱水过程中掉出来），一个组织盒可以放4~8个组织小块，切一张与格子大小合适的纸条一并装入，做好标签，防止后期辨认不出具体组织（只能用铅笔写，中性笔会被酒精脱去）。

使用自动脱水机进行脱水，设定程序为：酒精50%、70%、80%、90%（各20min）、无水乙醇（30min/次，两次）、酒精二甲苯混合物（1：1）20min、二甲苯20min（两次）、二甲苯石蜡混合物（1：1）30min、石蜡Ⅰ1h；脱水结束后，取出组织盒，置于石蜡Ⅱ中1h（石蜡应提前融化，且不能凝固，放在70℃烘箱中）。

③包埋：用4X6cm的小纸条根据小木块形状，叠成盒子（盒子最好四边叠平，不要左右不平，便于放融化的蜡进去后能得到比较好的形状，最好不要漏），取一个盒子，将融化的石蜡Ⅱ倒入，在其快要凝固的时候，将组织按照所需的形状，摆正（如小肠切成的小柱子应立起来，便于后面切片的时候，可以切到所需的形状），再用做好标记的长纸条贴着盒子壁固定（为了包埋后识别组织，且不能将纸条放在蜡块中央，后期不好取出，会损坏刀片），倒蜡之前，可以将盒子放在铁皮或小铁块上（能够让石蜡更快凝固。

），每次用镊子拿组织或摆正组织之前，先烧一下（能够更好摆正组织块，可以随时调整组织位置）。

抗原修复工作液：9ml A＋41ml B＋450ml 水，调Ph＝6.0＋－1PV9000 两步法免疫组织化学1．石蜡切片脱蜡至水（烤箱温度56度，30分钟）二甲苯5min × 3100％乙醇5min × 290％乙醇5min × 180％乙醇5min × 1双蒸水 5min × 2PBS 浸泡5min 。

或陈老师方法：二甲苯室温2次，20min/次；100％、90％、70％乙醇各5min；PBS 5min 2．抗原修复微波预热抗原修复液（工作液）至沸腾。

取预热预热抗原修复液浸泡切片于株型容器中，放入微波炉中，中火， 5～10min，有修复液损失后，补充预热抗原修复液，继续，持续到10min左右。

取出容器，于室温等到修复液自然冷却 20～30min。

3．3％过氧化氢室温孵育5～10min， PBS冲洗，2min ×3；3％过氧化氢室温孵育5～10min，PBS冲洗，2min ×3；血清封闭15～30min，PBS洗一次；4．滴加一抗工作液（1：100），37度2h，或4度过夜，PBS洗，2min ×3；5．滴加检测试剂，室温或37度孵育30～60min，PBS洗2MIN×3，接DAB显色约20min （室温，镜下观察），5．滴加试剂1，室温20min，PBS洗，2min ×36．滴加试剂2，室温20min，PBS洗，2min ×37．DAB显色5～20min，镜下观察，适时终止。

8．自来水洗，复染（苏木素，90s，自来水冲洗，15min），脱水，透明，封片。

复染；苏木素，室温 30s，自来水冲洗，15min（如需要可0.1%HCL分色，0.1%氨水/PBS返兰）脱水：70％乙醇，5min × 190％乙醇5min × 1100％乙醇5min × 2透明：二甲苯，10min× 2封片：中性树脂。

组织包埋、HE染色石蜡切片的制作及HE染色1．取下的新鲜脾脏组织于10%甲醛固定液中固定，一般24h。

睾丸组织用Bouin固定液固定24h。

Bouin配方：苦味酸 75ml甲醛20ml冰醋酸5ml2．将相应的组织放入包埋框中，做好标记，进行脱水，包埋：70%酒精24h→80%酒精2h→ 90%酒精2h→100%酒（一）30min→100%酒精（二）30min → (脱水，将组织中的水溶于酒精中）酒精：二甲苯（1：1）25min → 二甲苯25min （酒精溶于二甲苯，将酒精置换出来）→ 石蜡（一）45min → 石蜡（二）45min （二甲苯石蜡互溶，让石蜡浸入组织）→ 包埋3．石蜡包埋后，将蜡块于4℃保存。

4．切片：切5μm厚度。

组织切片于65℃烤箱中过夜。

5．染色：37℃烤箱二甲苯（一）15min↓37℃烤箱二甲苯（二）15min（将组织中的蜡脱出）↓100%酒精（一）5min↓100%酒精（二）5min↓90%酒精5min↓80%酒精5min↓70%酒精5min（将二甲苯置换出）↓三蒸水5min ×2次↓苏木素5min（将细胞核染为蓝色）↓流水冲10min↓1%HCl中荡4下（分化，是胞核着色清楚，包浆脱色，利于之后用伊红染包浆）↓流水冲10min（洗后看片，若着色浅可复染）↓水溶性伊红5min（染包浆，不同成分红色深浅不一）↓70%酒精中荡4下↓80%酒精中荡4下↓90%酒精中荡4下↓100%酒精（一）1min↓100%酒精（二）1min↓二甲苯（一）15min↓二甲苯（二）15min（是片子中午水分便于切边长期保存）6．封片：用histomount封片，37℃烤箱中过夜。

7．显微镜下观察切片，拍照保存图像数据。

Live Scaling Measure着色情况与组织或细胞的种类有关0.5~1% 的伊红酒精溶液：取伊红Y 0.5~1 g，加少量蒸馏水溶解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。

石蜡切片xx精－伊红（HE）染色方法
（1）选择切片：
组织尽量完整，无分裂；
（2）脱蜡：65℃烤片1h，使用二甲苯进行脱蜡，二甲苯Ⅰ-20min（二甲苯先加热到65℃，然后水浴）→二甲苯Ⅱ-15min（常温）；
（3）水化：
采用乙醇梯度水化，乙醇二甲苯-2min→无水乙醇Ⅰ-2min→无水乙醇Ⅱ-
2min→95%-2min→90%-2min→80%-2min→70%-2min→60%-2min；
（4）RO/UP水冲洗一遍（约10s）；
（5）xx精染色：
水化后的切片放入苏木精染液中浸15min，染细胞核。

RO/UP水冲洗
1min；
（6）1％盐酸乙醇分化10 s;弱碱性水溶液（5%氨水溶液）返蓝10s
（7）自来水冲洗10分钟；
（8）梯度乙醇脱水：60%-70%-80%-90%，各2min
（9）伊红染色：
充分水化后的切片直接入伊红染色液中，染细胞质1min；
（10）梯度乙醇脱水：95%→100%Ⅰ→100%Ⅱ→乙醇二甲苯—二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ，各2min；
（11）中性树胶封片，65℃烤片至树胶凝固（3h以上）。

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石蜡切片制作和HE染色实验报告自查报告。

实验名称，石蜡切片制作和HE染色实验报告。

实验目的，通过石蜡切片制作和HE染色实验，观察组织或细胞的形态结构和染色效果，掌握制作和染色技术，为后续组织学研究提供基础数据。

实验步骤：
1. 取得组织或细胞标本，进行固定、脱水、透明化、浸蜡等处理。

2. 将处理后的标本置于石蜡中浸渍，使其充分浸透。

3. 制备石蜡块，用切片机将石蜡块切割成薄片。

4. 将切片置于盛有温水的载玻片上，使其展开并粘附在载玻片上。

5. 进行HE染色，依次浸入hematoxylin染液、脱色液、eosin
染液中，然后洗净、脱水、透明化、封片。

实验结果，观察切片下显微镜，发现细胞或组织结构清晰可见，染色效果良好，能够区分不同细胞或组织的形态特征。

实验总结，通过本次实验，我掌握了石蜡切片制作和HE染色的
基本技术，了解了组织学研究的重要性和方法。

在操作过程中，我
注意到了一些细节问题，例如切片厚度不均匀、染色时间控制不准
确等，需要在以后的实验中加以改进。

同时，我也意识到实验安全
和操作规范的重要性，要严格按照实验步骤进行操作，确保实验顺
利进行。

自查人，（签名）日期，（年月日）。

石蜡切片和HE染色详细步骤
一、石蜡切片制备
1、收集样品：根据样品的性质和形状，选择适当的采样工具和采样
容器，将样品采集到容品中并制冷处理，以防止样品发生腐败。

2、石蜡制备：在制作石蜡切片之前应先量出所需的石蜡，并将其放
入容器中，然后加入酒精等助剂加热溶解，当石蜡完全溶解熔融后，用桶
或温度控制的水浴加热，随着温度的升高，搅拌均匀，使石蜡液完全熔化，熔化后即可用于制作石蜡切片。

3、制备切片：将样品置于熔融石蜡中，用切片机将样品切成指定的
厚度，以便用于染色；将薄片分类清洗，用干净的棉棒涂上几滴石蜡，使
其连接牢固，然后放在凉爽的干燥地方。

二、HE染色
1、润湿：将样品片放入石蜡解决液，轻轻摩擦，使其充分润湿。

2、酒精消切：将石蜡解决液滴入被润湿的样品片，轻轻摇晃，完成
样品的酒精消切。

3、甲醛处理：将样品片放入含醛的苯乙酮溶液中，经摇晃后再放入95%乙醇中搅拌，使样品片可以完全吸收醛，促使样品受醛处理，使样品
片充分脱脂，加快染色效果和特殊部位的显示。

4、HE染色：将脱脂的样品片放入无菌玻璃容器内。