FISH技术在白血病中的应用~

血液学荧光原位杂交指南（以BCR-ABL探针为例）Mark W. Drummond, Elaine K. Allan, Andrew Pearce and Tessa L. Holyoake翻译：黄劭mailto: huangshao@1.简介BCR-ABL融合基因由9号染色体和22号染色体相互易位而成，形成费城（Ph）染色体（小的22号染色体），在95%的慢性粒细胞白血病（CML）患者中能检测到此融合基因1。

22q11的BCR基因和9q34的ABL基因融合形成活性的BCA-ABL蛋白酪氨酸激酶2,3。

动物实验显示此融合蛋白能诱导小鼠患CML类似的疾病，提示此变异在CML及其它白血病（20%成人急性淋巴性白血病和较少的慢性嗜中性粒细胞白血病）发病中的重要地位。

因此，检测BCR-ABL易位对于临床治疗和研究都具有重要意义。

由于BCR-ABL阳性细胞没有典型的表面标志物，因此只能用分裂中期（MP）细胞核型分析、RT-PCR或荧光原位杂交（FISH）的方法进行检测。

FISH的优点在于可以对分裂间期（IP）细胞进行检测，极高的灵敏度和检测隐形易位的能力。

因此，使用FISH对骨髓或外周血标本的BCR-ABL阳性细胞数进行定量有助于对临床治疗进行监测。

同样，在研究上，也可以对单独的细胞克隆或分选的细胞进行分析。

最早的FISH技术使用S-FISH探针，分别对BCR和ABL基因用荧光进行标记4,5。

但在IP细胞中，由于信号随机分布的原因，许多邻接的分离信号看上去类似融合信号，导致出现了大量的假阳性细胞6。

而在MP细胞中，假阳性细胞的比例有所下降。

ES-FISH探针在ABL探针的5’端增加了一段序列，使假阳性的比例大为下降，同时可以检测变异9号染色体的缺失7。

D-FISH在ABL和BCR探针的5‘短都加入了额外序列，从而可观察到BCR-ABL和ABL-BCR 两个融合信号8。

ES探针和D-FISH探针都可以检测变异的9号染色体上靠近断裂点的可能缺失9。

荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization, 简称FISH)由于其直观, 快速, 敏感性高和方便灵活越来越得到广泛应用, 尤其是在血液学领域中. 因为白血病标本比较容易取得和制备, 不同类型的白血病又往往有其特异的染色体异常, FISH在白血病诊断, 治疗监测, 预后估计和微小残留病检测等诸方面都正成为不可缺少的重要手段.FISH的基本原理很简单, 就是标记了荧光的单链DNA(探针)和与其互补的DNA(玻片上的标本)退火杂交, 通过观察荧光信号在染色体上的位置来反映相应基因的情况.FISH探针按标记方法可分为直接标记和间接标记: 用生物素(biotin)或地高辛(digoxingenin)标记称为间接标记, 杂交后需要通过免疫荧光抗体检测方能看到荧光信号, 因而步骤较多, 操作麻烦, 其优点是在信号较弱或较小时可经抗原抗体反应扩大; 直接用荧光素标记DNA的方法称为直接标记. 由于直接标记的探针杂交后可马上观察到荧光信号, 省去了烦琐的免疫荧光反应, 不再需要购买荧光抗体, 也由于近年来荧光互的亮度和抗淬灭性的不断改进和提高, 直接标记的荧光探针越来越成为首选, 采用多种不同颜色的荧光, 方便在同一标本上同时检测多钟异常. 其荧光强度和信号大小都易于在普通荧光显微镜下观察, 操作过程中也不需要严格避光, 使FISH过程变得简便而易于操作. FISH并不能取代传统的白血病MCI诊断, 但它却能使MIC分型更为准确和深入. , MIC即细胞形态学(M), 免疫学和细胞遗传学(C), 三者结合对白血病进行分型诊断, 对不同类型的白血病采用不同治疗方案手段. 随着人们对白血病的不断认识, 仅进行MIC分型不够全面, 还要加上对白血病的分子(M)诊断, 成为MICM分型. FISH就是连接细胞遗传学和分子生物学的桥梁.FISH流程仪器设备1、医用微波炉；2、水浴锅；3、OLYMPUS BX51荧光显微镜；4、OLYMPUS DP11数字显微照相机。

临床常用基因突变及融合基因检查方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：临床常用基因突变及融合基因检查方法随着基因组学和分子生物学的发展，基因检测技术在临床诊断中的应用日益广泛。

基因突变和融合基因是许多疾病的发生和发展的关键因素，因此对其检测越来越受到重视。

本文将介绍一些临床常用的基因突变及融合基因检查方法，希望能够帮助读者更深入了解这一领域的知识。

1. PCR技术PCR技术是一种常用的基因检测方法，通过扩增特定基因片段，可以检测到基因的突变。

PCR技术具有高灵敏度和高特异性的优点，可以快速、准确地检测基因突变。

在临床诊断中，PCR技术经常用于检测与疾病相关的基因突变，如遗传性疾病、肿瘤等。

2. 高通量测序技术高通量测序技术是目前最流行的基因检测技术之一，可以同时测序大量基因，并快速高效地识别突变。

高通量测序技术具有高灵敏度、高准确性和高通量的优点，可以帮助医生更准确地诊断疾病，并指导个体化治疗方案的制定。

3. 质谱技术质谱技术是一种基于质量-电荷比的物质分析技术，可以用于检测DNA、RNA等生物分子。

质谱技术具有高灵敏度、高分辨率和高准确性的优点，可以用于检测基因突变、基因表达水平等，对于肿瘤的早期诊断和治疗、药物敏感性的评估等方面具有重要的意义。

1. FISH技术FISH技术是一种常用的融合基因检测方法，通过用荧光染料标记特定基因，可以直接观察到基因的融合情况。

FISH技术具有高分辨率、高灵敏度和高特异性的优点，可以帮助医生准确诊断某些特定的融合基因相关的疾病，如慢性髓性白血病、胃肠道间质瘤等。

在临床实践中，基因突变和融合基因的检测对于疾病诊断、治疗和预后评估具有重要的意义。

随着基因检测技术的不断发展和完善，相信在未来会有更多更高效、更精准的检测方法出现，为临床诊断和治疗带来更多的帮助和改善。

希望本文能为读者对基因突变及融合基因检查方法有更深入的了解和认识。

第二篇示例：临床常用基因突变及融合基因检查方法基因突变是指基因组中的某个基因发生了突变，使其序列发生了改变，导致基因的功能发生变化或失去功能。

分子生物学模拟试题含参考答案一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、平台效应的出现与下列哪个因素关系最密切：A、引物浓度B、初始模板量C、TaqDNA 聚合酶浓度D、Mg2+浓度E、反应变性时间正确答案：B2、关于 FISH 在白血病的应用中说法正确的是A、主要用于白血病的初诊和复发的检测B、只适用于体液、组织切片标本C、FISH 只能检测处于分裂中期的细胞D、FISH 的灵敏度高于 PCRE、FISH 是检测融合基因、确定染色体易位的首选方法正确答案：A3、关于切口平移法下述不正确的是A、可标记线性 DNAB、可标记松散螺旋 DNAC、可标记超螺旋 DNAD、可标记存在缺口的双链 DNAE、可标记随机引物正确答案：E4、关于分子信标技术的描述，不正确的是A、分子信标设计简单B、操作简便C、灵敏度高D、特异性强E、背景信号低正确答案：A5、母亲血浆中的胎儿 DNAA、占母亲血浆总 DNA 的 50%以上B、可用于检测胎儿从母亲遗传而来的线粒体 DNA 突变C、确定RhD 阳性孕妇所怀胎儿的RhD 情况D、确定胎儿是否从母亲遗传了X 连锁的基因突变E、血友病 A 的产前诊断正确答案：C6、乳腺癌分子生物学检测的意义不包括A、筛选适合内分泌、化疗及靶向治疗的患者B、预测早期乳腺癌复发、转移的风险C、反映肿瘤的生物学行为D、筛选易感人群E、帮助减轻化疗的不良反应正确答案：E7、研究得最早的核酸分子杂交种类是( )A、Northern 杂交B、菌落杂交C、液相杂交D、原位杂交E、Southern 杂交正确答案：C8、第二代测序技术最主要技术特征是A、对单分子 DNA 进行非 PCR 的测序B、针对 SNP 进行非 PCR 的测序C、高通量和并行 PCR 测序D、直接分析 SNPE、直接进行个体基因组测序和 SNP 研究正确答案：C9、下列关于 real-time PCR 引物设计的原则中，不正确的是A、两条引物的Tm 值相差尽量大B、G+C 的含量应在 45%~55%之间C、尽量避免引物二聚体的出现D、反应体系中引物的浓度一般在0.1~0.2μmol/L 之间E、引物过长可能提高退火温度正确答案：A10、PCR 技术扩增 DNA，不需要的条件是 ( )A、目的基因B、引物C、四种脱氧核苷酸D、DNA 聚合酶E、mRNA正确答案：E11、单基因遗传病分子诊断的主要应用是A、携带者筛查B、耐药基因检测C、产前诊断D、症状前诊断E、携带者诊断正确答案：C12、乙型肝炎病毒的核酸类型是 ( )A、双股 DNAB、负股 DNAC、正股 DNAD、单股 DNAE、DNA-RNA 二聚体正确答案：A13、开展耳聋基因诊断有重要临床意义，但不包括A、可作为有效治疗耳聋的手段之一B、可以了解患者发生耳聋的分子病因C、可以预测下一代出现耳聋的概率D、可作为听力筛查的一个有效辅助手段E、可以预测耳聋疾病的病情和预后正确答案：A14、发出临床检验报告前应进行结果审核，审核内容不包括A、室间质量评价是否合格B、临床医生申请的检验项目是否已全部检验C、室内质控是否在控D、检验报告是否正确E、检验结果与临床诊断是否相符正确答案：A15、最早应用于 HLA 基因分型的方法是A、RFLP 分型技术B、PCR-SSCP 技术C、测序技术D、PCR-SSO 技术E、PCR-SSP 技术正确答案：A16、DNA 提取中不能有效去除蛋白质的是A、酚/氯仿抽提B、SDSC、高盐洗涤D、蛋白酶 KE、RNase正确答案：E17、关于梅毒螺旋体的实验室检测，下列描述正确的是A、分子生物学方法不能早期诊断梅毒感染B、分子生物学方法是耐药基因分析和流行学研究的首选方法C、诊断梅毒的传统方法是体外培养D、血清学检查普遍用于梅毒的筛查、疗效观察和流行病学检查，对早期梅毒诊断敏感E、镜检法简便，特异性高，但不能用于皮肤黏膜损害的早期诊断正确答案：B18、未知突变的检测，下列最准确的方法是A、PCRB、RFLPC、核酸杂交D、序列测定E、ASO正确答案：D19、下列哪种病毒在复制过程中可产生 RNA-DNA 杂交体A、HIVB、HPVC、HBVD、HCVE、流感病毒正确答案：A20、肺癌的分子生物学检验的意义不包括A、有利于肺癌的早期诊断B、可以较早的发现微小转移的癌灶C、帮助降低肺癌患者的病死率D、可以对肺癌患者的预后作出评估E、可以减轻肺癌患者化疗的不良反应正确答案：E21、EB 作为核酸电泳指示剂的原理是 ( )A、EB 是一种可视物质B、EB 是核酸转性染料C、EB 特异性结合核酸分子D、EB 在紫外下发射荧光E、EB 插入核酸分子之间并在紫外下产生荧光正确答案：E22、被称为第 3 代 DNA 遗传标志的是：A、RFLPB、VNTRC、SNPD、STRE、EST正确答案：C23、寡核苷酸探针的最大的优势是A、杂化分子稳定B、易标记C、可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列D、易合成E、易分解正确答案：C24、线粒体病分子生物学检验标志物不包括A、SNP 位点B、缺失或插入片段C、重复序列D、点突变位点E、线粒体单体型正确答案：C25、连接酶链反应的描述错误的是A、需要 DNA 聚合酶B、靶 DNA 序列已知C、一对引物在模板上的位置是紧密相连的D、产物是被连接起来的引物E、属于探针序列扩增正确答案：A26、一个完整的生物芯片配套软件不包括A、生物芯片的图像处理软件B、统计分析软件C、生物芯片扫描仪的硬件控制软件D、画图软件E、数据提取软件正确答案：D27、焦磷酸测序技术不使用的酶是A、DNA 聚合酶 (DNA polymerase)B、DNA 连接酶 (DNA ligase)C、ATP 硫酸化酶 (ATP sulfurylase)D、荧光素酶 (luciferase)E、三磷酸腺苷双磷酸酶 (Apyrase)正确答案：B28、核酸分子杂交的基础是A、磷酸化B、碱基互补配对C、甲基化D、配体受体结合E、抗原抗体结合正确答案：B29、下列说法正确的是A、液状石蜡切片中缩短蛋白酶 K 的消化时间可增加提取 DNA 片段的长度B、组织样本不需蛋白酶 K 消化即可进行核酸提取C、用于提取核酸的石蜡切片需要先用二甲苯脱蜡D、用于提取核酸的石蜡切片不需脱蜡即可进行核酸提取E、新鲜的组织样本需要先用二甲苯脱蜡才能进行核酸提取正确答案：C30、能发出γ-射线的放射性核素是A、3HB、14CC、32PD、35SE、125I正确答案：E31、描述随机扩增多态性 DNA 技术不正确的是 ( )A、引物序列随机B、有多条引物C、电泳分离产物D、需要限制性内切酶酶切E、反应基因组多态性正确答案：D32、下列属于抑癌基因的是 ( )A、c-erb-2B、rasC、mycD、RbE、sis正确答案：D33、迪谢内肌营养不良 (DMD) 说法错误的是A、基因缺陷是 DMD 发生的主要原因B、DMD 属于 X 连锁性隐性遗传C、最常用的诊断技术为多重 PCRD、抗肌萎缩蛋白结构改变导致 DMDE、发病者都为女性正确答案：E34、Alu家族属于A、可变数目串联重复序列B、短串联重复序列C、长散在核原件D、短散在核原件E、DNA 转座子正确答案：D35、首个被证实和克隆的乳腺癌易感基因是A、BRCA1B、BRCA2C、c-erbB-2/HER2D、ATME、p53正确答案：A36、关于 DNA 芯片描述不正确的是A、探针为已知序列B、有序地高密度地固定于支持物上C、理论基础是核酸杂交D、可研究基因序列E、不能研究基因突变正确答案：E37、目前白血病的发病机制的研究主要集中的领域不包括A、遗传学疾病及白血病发病的后天因素B、白血病复发的后天因素C、白血病发病的先天因素D、融合基因与白血病E、基因多态性与白血病正确答案：B38、变性梯度凝胶电泳的描述中错误的是A、使 DNA 双链分子局部变性B、采用梯度变性凝胶C、变性难易由核苷酸组成决定D、突变检测率高E、可确定突变位置正确答案：E39、珠蛋白基因的碱基由G 突变为 C 时，造成的突变称为A、密码子缺失或插入B、单个碱基置换C、融合基因D、移码突变E、片段缺失正确答案：B40、PCR-ASO 描述错误的是A、需要寡核苷酸探针B、检测点突变的技术C、PCR 产物必须电泳分离D、需正常和异常两种探针E、需严格控制杂交条件正确答案：C41、提取 DNA 的原则除外A、保证核酸一级结构完整性B、保留所有核酸分子C、核酸样本中不应存在有机溶剂和过高浓度的金属离子D、蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度E、排除 RNA 分子的污染与干扰正确答案：B42、有关 HBV 长链和短链叙述正确的是A、长链和短链 DNA 的5’端位置是固定的，短链3’端的位置是可变的B、长链和短链 DNA 的3’端位置是固定的，短链5’端的位置是可变的C、短链 DNA 的3’端位置是固定的，长链和短链5’端的位置是可变的D、短链 DNA 的5’端位置是固定的，长链和短链3’端的位置是可变的E、长链 DNA 的5’端位置是固定的，长链和短链3’端的位置是可变的正确答案：A43、次氯酸钠去除临床分子生物学实验室污染源的原理是A、诱导同一 DNA 链上相邻的两个嘧啶之间形成嘧啶二聚体B、氧化损伤核酸C、水解核酸D、与扩增产物的嘧啶碱基形成单加成环丁烷衍生物E、与胞嘧啶形成羟氨基胞嘧啶正确答案：B44、点/狭缝杂交可以用于A、快速确定是否存在目的基因B、不仅可以检测 DNA 样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C、用于基因定位分析D、阳性菌落的筛选E、蛋白水平的检测正确答案：A45、用于基因定位的技术是：A、荧光定量 PCR 技术B、PCR-RFLP 技术C、PCR 微卫星检测技术D、原位杂交技术E、cDNA 表达芯片技术正确答案：D46、受精卵中的线粒体A、几乎全部来自精子B、几乎全部来自卵子C、精子与卵子各提供 1/2D、不会来自卵子E、大部分来自精子正确答案：B47、最常用的 DNA 探针标记方法是A、随机引物标记B、切口平移标记C、3’-末端标记D、5’-末端标记E、PCR 法正确答案：A48、下列不能用于核酸转移作固相支持物的是A、NC 膜B、尼龙膜C、化学活性膜D、滤纸E、PVC 膜正确答案：E49、下列说法错误的是A、用于 RNA 检测的样本短期可保存在-20℃B、用于 PCR 检测的样本可用肝素作为抗凝剂C、如使用血清标本进行检测应尽快分离血清D、外周血单个核细胞可从抗凝全血制备E、用于核酸提取的痰液标本应加入 1mol/L NaOH 初步处理正确答案：B50、下列不是临床分子生物学实验室分析前质量控制内容的是A、进行核酸提取的有效性评价B、所用试剂和耗材的质量符合要求C、定期进行仪器设备的功能检查、维护和校准D、实验室严格分区E、临床标本的采集、运送和保存符合要求正确答案：A51、杂交时的温度与错配率有关，错配率每增加 1%，则 Tm 值下降A、3~3.5℃B、4~4.5℃C、1~1.5℃D、2~2.5℃E、0.5℃正确答案：C52、在如下情况时，可考虑通过基因连锁分析进行分子生物学检验A、基因结构变化未知B、基因点突变C、基因缺失D、基因插入E、基因表达异常正确答案：A53、下列哪些技术不适用于鉴定菌种亲缘性：A、随机扩增DNA 多态性分析B、连接酶链反应C、PCR-RFLPD、多位点测序分型E、DNA 测序技术正确答案：B54、原核生物基因组特点不应包括：A、转录产物为多顺反子B、重复序列C、操纵子结构D、断裂基因E、插入序列正确答案：D55、下列属于核苷酸三联体重复序列发生高度重复所致的是A、血友病B、脆性 X 综合症C、迪谢内肌营养不良D、镰状细胞贫血E、珠蛋白生成障碍性贫血正确答案：B56、TaqMan 探针技术要求扩增片段应在A、250~300bpB、300~350bpC、50~150bpD、200~250bpE、150~200bp正确答案：C57、丙型肝炎病毒的核酸类型 ( )A、双链 RNAB、单链正链 RNAC、双链环状 DNAD、单链 DNAE、单链负链 RNA正确答案：B58、操纵子结构不存在于：A、病毒基因组中B、原核生物基因组中C、大肠杆菌基因组中D、细菌基因组中E、真核生物基因组中正确答案：E59、下列不是细菌感染性疾病分子生物学检验技术的是A、PCR-SSCPB、real-time PCRC、ELISAD、PFGEE、PAPD正确答案：C60、荧光定量 PCR 反应中，Mg2+的浓度对 Taq 酶的活性是至关重要，以 DNA 或 cDNA 为模板的 PCR 反应中最好的 Mg2+浓度是A、0.2~0.5mMB、1~2mMC、2~5mMD、6~8mME、0.5~2mM正确答案：C61、双脱氧终止法测定核酸序列时，使用 ddNTP 的作用是：A、作为 DNA 合成的正常底物B、形成特异性终止链C、标记合成的DNA 链D、使电泳时 DNA 易于检测E、使新合成的 DNA 链不易形成二级结构正确答案：B62、最容易降解的核酸探针是A、cDNA 探针B、dsDNA 探针C、ssDNA 探针D、gDNA 探针E、RNA 探针正确答案：E63、一位男性血友病患者，他亲属中不可能是血友病的是A、外甥或外孙B、姨表兄弟C、同胞兄弟D、叔、伯、姑E、外祖父或舅父正确答案：D64、由于突变使编码密码子形成终止密码，此突变为：A、同义突变B、错义突变C、移码突变D、无义突变E、终止密码突变正确答案：D65、引起亨廷顿舞蹈病的突变形式是：A、错义突变B、无义突变C、RNA 剪接突变D、插入缺失突变E、动态突变正确答案：E66、关于 p53 基因说法不正确的是A、属于抑癌基因B、在进化过程中高度保守C、编码蛋白为转录因子p53 蛋白，与调控细胞生长周期、调节细胞转化、DNA 复制及诱导细胞凋亡有关D、可单独作为乳腺癌预后的分子标志E、定位于人染色体 17q13 上正确答案：E67、基因芯片技术的临床应用不包括 ( )A、疾病的诊断B、由于蛋白质翻译后修饰的改变而引起的疾病C、基因突变的检测D、药物的筛选E、指导个体用药正确答案：B68、下列不可以作为核酸探针使用的是A、microRNAB、单链 DNAC、寡核苷酸D、mRNAE、病毒 RNA正确答案：A69、脆性 X 综合征的临床表现有A、智力正常张力亢进，特殊握拳姿势、摇椅足B、智力正常、身材矮小、肘外翻、乳腺发育差、乳间距宽C、智力低下伴头皮缺损、多指、严重唇裂及膊裂D、智力低下伴眼距宽、鼻梁塌陷、通贯手、指间距宽E、智力低下伴长脸、大耳朵、大下颌、大睾丸正确答案：D70、用于区分 HBV 主要基因型的序列是A、NS5b 区B、C 区C、NS3 区D、5’UTR 区E、NS5a 区正确答案：D71、目前已知感染人类最小的 DNA 病毒 ( )A、HIVB、HPVC、HBVD、HAVE、HCV正确答案：C72、HBV DNA 中最小的一个开放阅读框是A、P 基因区B、S 基因区C、X 基因区D、前 S 基因区E、C 基因区正确答案：C73、产前诊断临床应用尚不广泛，原因不包括A、需要生殖医学与遗传学技术的结合B、诊断技术不成熟C、诊断的准确性受到多种制约D、单个细胞的遗传诊断困难E、已明确母亲为携带者的婴儿正确答案：B74、关于核酸探针的种类下列不正确的是A、cDNA 探针B、寡核苷酸探针C、基因组 DNA 探针D、RNA 探针E、双链 DNA 探针正确答案：E75、任意引物 PCR 的特点描述错误的是A、需预知靶基因的核苷酸序列B、通过随机引物与模板序列随机互补C、扩增后可直接得到靶基因的多态性指纹图谱D、可用于基因组 DNA 图谱构建E、可用于临床致病菌的流行病学检测、分型正确答案：A76、PCR 反应的基本过程不包括以下：A、预变性B、退火C、探针杂交D、变性E、延伸正确答案：C77、RNA/RNA 杂交体的 Tm 值一般应增加A、1-5℃B、5~10℃C、10~15℃D、15~20℃E、20~25℃正确答案：E78、病毒的遗传物质是A、DNAB、RNA 和蛋白质C、DNA 或 RNAD、RNA 和 DNAE、DNA 和蛋白质正确答案：C79、以下对镰刀状红细胞贫血症叙述正确的是 ( )A、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成丝氨酸残基B、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成甘氨酸残基C、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成苯丙氨酸残基D、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成异亮氨酸残基E、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成缬氨酸残基正确答案：E80、指导合成蛋白质的结构基因大多数为：A、高度重复序列B、中度重复序列C、回文序列D、散在核原件E、单拷贝序列正确答案：E81、不是自动 DNA 测序仪主要系统之一的是A、测序反应系统B、电泳系统C、荧光检测系统D、探针荧光标记系统E、电脑分析系统正确答案：D82、关于 Sanger 双脱氧链终止法叙述错误的是A、每个 DNA 模板需进行一个独立的测序反应B、需引入双脱氧核苷三磷酸 (ddNTP) 作为链终止物C、链终止物缺少3’-OH，使链终止D、测序反应结果是产生 4 组不同长度的核苷酸链E、高分辨率变性聚丙烯酰胺凝胶电泳可分离仅差一个核苷酸的单链 DNA 正确答案：A83、转录依赖扩增系统与其他 PCR 技术的区别是A、模板是 RNAB、模板是 DNAC、引物是 RNAD、模板和产物都是 RNAE、需要热循环正确答案：D84、DNA 双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，DNA 分子成为单链，这一过程称A、变性B、复性C、复杂性D、杂交E、探针正确答案：A85、利用DNA 芯片检测基因的表达情况，杂交条件应选( )A、高盐浓度、低温和长时间B、低盐浓度、低温和长时间C、高盐浓度、高温和长时间D、高盐浓度、低温和短时间E、高盐浓度、高温和短时间正确答案：A86、下列几种 DNA 分子的碱基组成比例，哪一种的Tm 值最高 ( )A、A+T=15%B、G+C=25%C、G+C=40%D、A+T=80%E、G+C=60%正确答案：A87、基因诊断间接方法不包括A、基于 SNP 的单倍型分析B、Southern blotC、基于 STR 的微卫星分析D、PCR-RFLPE、RFLP 连锁分析正确答案：B88、关于 DNA 芯片描述不正确的是A、探针为已知序列B、有序地高密度地固定于支持物上C、理论基础是核酸杂交D、可研究基因序列E、不能研究基因功能正确答案：E89、HBV 的外膜主蛋白是由A、Pre-S1 基因编码的B、Pre-S2 基因编码的C、S 基因编码的D、Pre-S1、Pre-S2 和 S 基因三部分基因区共同编码的E、Pre-S2 和 S 基因区共同编码的正确答案：C90、在 pH 为下述何种范围时，Tm 值变化不明显A、pH 为 5~6B、pH 为 5~9C、pH 为 4~5D、pH 为 3~5E、pH 为 8~11正确答案：B91、Southern 印迹杂交的描述正确的是A、不仅可以检测 DNA 样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息B、检测靶分子是 RNAC、用于基因定位分析D、用于阳性菌落的筛选E、用于蛋白水平的检测正确答案：A92、巢式 PCR 错误的是A、是对靶 DNA 进行二次扩增B、第二次扩增所用的模板为第一次扩增的产物C、巢式 PCR 可提高反应的灵敏度和特异性D、常用于靶基因的质和 (或) 量较低时E、第二对引物在靶序列上的位置应设计在第一对引物的外侧正确答案：E93、下列关于引物设计的原则中，错误的是A、两条引物的Tm 值相差尽量大B、G+C 的含量应在 45%~55%之间C、尽量避免引物二聚体的出现D、反应体系中引物的浓度一般在0.1~0.2μmol/L 之间E、5’端可加修饰基团正确答案：A94、目前确认与人类肿瘤发生有关的RNA 病毒是A、人乳头状瘤病毒B、乙型肝炎病毒C、EB 病毒D、人类疱疹病毒-8E、丙型肝炎病毒正确答案：E95、探针基因芯片技术的本质就是A、核酸分子杂交技术B、基因重组技术C、聚合酶链反应技术D、蛋白质分子杂交技术E、酶切技术正确答案：A96、未来基因诊断的主要发展方向是A、胎盘着床前诊断B、母体外周血中胎儿细胞分析技术C、对常见病进行分子诊断D、对多发病进行分子诊断E、以上都是正确答案：E97、荧光原位杂交的描述正确的是A、快速确定是否存在目的基因B、检测靶分子是 RNAC、用于基因定位分析D、用于阳性菌落的筛选E、用于蛋白水平的检测正确答案：C98、点突变引起的血友病 A 的分子诊断方法不包括A、PCR-SSCPB、PCR-RFLPC、PCR-VNTRD、PCR-STRE、长距离 PCR正确答案：E99、丙型肝炎病毒基因组高变区位于A、E1 区B、C 区C、NS3 区D、NS4 区E、NS1/E2 区正确答案：E100、重复序列通常只有 1~6bp，重复 10~60 次并呈高度多态性的 DNA 序列称为A、微卫星 DNAB、小卫星 DNAC、cDNAD、高度重复顺序 DNAE、单拷贝顺序 DNA正确答案：B。

分子病理fish技术
分子病理FISH技术是一种重要的分子生物学技术，其通过荧光染色技术检测染色体的异常及其染色体上特定序列的分布情况，从而为疾病的分子诊断提供有力的支持。

FISH技术的原理是利用DNA探针与样本的靶DNA序列的高度互补性结合，形成荧光标记的探针-靶DNA杂交体，在荧光显微镜下进行检测。

根据探针的不同种类和荧光染色物的不同组合，可以检测到染色体的不同缺失、增多、重排和散在分布等染色体异常，也可以对某些特定基因的扩增、突变、融合等变异进行检测。

FISH技术的应用范围非常广泛，涉及到多种疾病的分子诊断和预后评估。

例如，在肿瘤的分子诊断中，FISH技术可以同时检测多种基因的扩增、融合或重排，如HER2、BCL2、BCL6等，在血液病学中，FISH技术可以用来检测染色体异常及其亚克隆性，如慢性髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤等。

FISH技术还可以应用于基因组、转录组和蛋白质组的分析。

在基因组水平，FISH技术可以用来确定基因组的大小和组织结构等；在转录组水平，FISH技术可以进行定量分析和空间分布的研究；在蛋白质组水平，FISH技术可以用来研究细胞核和染色体的空间分布和相互作用。

除了以上应用，FISH技术还可以用于辅助生殖医学，如评估胚胎染色体异常和性染色体异常等。

此外，FISH技术还可以用于动植物的基因组研究，如基因定位、染色体序列组装等。

总的来说，FISH技术在现代医学和生命科学中的应用范围非常广泛，可以为疾病的分子诊断、基因组学研究和辅助生殖医学等领域提供有力的支持。

未来，随着技术的不断发展和完善，FISH技术将会在越来越多的领域得到应用，为人类的健康和生命科学的发展贡献更大的力量。

FISH检测在临床上的应用FISH检测在临床上的应用一、简介- FISH（Fluorescence in situ hybridization）即原位荧光杂交技术，是一种用于研究基因组和染色体结构的分子生物学技术。

- FISH检测在临床应用中可以提供重要的染色体遗传学信息，用于诊断和监测某些疾病。

二、FISH检测的原理- FISH技术基于荧光标记的核酸探针与细胞或组织标本中的特定DNA序列发生互补杂交，通过荧光显微镜观察以检测特定基因组或染色体的异常。

- FISH检测可以提供高度准确的定量和定位信息，特别适用于检测具有微小或亚显性突变的染色体异常。

三、临床应用领域1、适用于癌症诊断和分型- FISH检测可以检测染色体上的特定基因重排，从而辅助癌症的诊断、分型和治疗方案的选择。

- 例如，FISH检测可以用于检测BCR-ABL融合基因以确认慢性髓性白血病的诊断。

2、适用于先天性遗传病的筛选和诊断- FISH检测可用于检测染色体异常，如唐氏综合征（21三体综合征）、爱德华氏综合征（18三体综合征）和智商障碍相关的染色体异常，用于婴儿和先天性遗传病的筛选和诊断。

3、适用于遗传性肿瘤相关基因的检测- FISH检测可以用于检测和定位遗传性肿瘤相关基因的异常，如BRCA1和BRCA2基因异常与乳腺癌和卵巢癌的遗传风险相关。

4、适用于感染性疾病的诊断和追踪- FISH检测可以用于检测和定位细菌、和寄生虫等感染性病原体的核酸序列，辅助感染性疾病的诊断和追踪。

四、技术要点和注意事项1、样本处理- 对于固定的细胞或组织标本，需要进行脱脂、脱水等预处理步骤。

- 不同类型的标本可能需要不同的处理方法，如骨髓涂片、组织切片等。

- 样本处理过程中需注意保持核酸完整性和避免污染。

2、探针设计与标记- 根据要检测的目标基因或染色体序列设计特异性的核酸探针。

- 核酸探针需要选择适当的荧光染料进行标记，以便在荧光显微镜中观察到。

- 标记的探针需要存储在适当的条件下，以保持标记稳定性和活性。

荧光原位杂交技术（FISH）的基本原理及应⽤我接触“FISH”也是刚刚两年多的时间，作为⼀个“初学者”刚开始接触“FISH”可能跟⼤多数⼈⼀样满脑⼦的疑惑：“FISH”是做什么的?有什么临床作⽤呢?那些红红绿绿的点都是些什么意思?……今天让我们慢慢的去揭开FISH的不太神秘的⾯纱。

1.FISH的前世今⽣在FISH技术问世之前，基于20世纪60年代，放射性核素探针的原位杂交⽅法，检测间期染⾊体和分裂期染⾊体上特定DNA和RNA序列的⽅法，该⽅法存在操做⽐较⿇烦、分辨率有限、探针不稳定、放射性同位素的危害较⾼等问题，故⽬前弃之不⽤。

20世纪80年代⽤⾮放射性半抗原如⽣物素进⾏核酸标记的技术逐渐开展后，探针也开始使⽤这种⾮放射性标记⽅法。

随后FISH技术逐渐开展起来，1986年以后该技术被应⽤于分析细胞分裂期染⾊体铺⽚的DNA序列。

相对于放射性来说，FISH具有稳定性好、操作安全、结果迅速、空间定位准确、⼲扰信号少、⼀张玻⽚可以标记多种颜⾊探针等优点。

这些优点逐渐使FISH成为⼀种研究分⼦细胞遗传学很好的⽅法。

FISH即染⾊体荧光原位杂交(Flourescence in situ hybridization,FISH)是通过荧光素标记的DNA探针与样本细胞核内的DNA靶序列杂交，从⽽获得细胞核内染⾊体或基因状态的信息。

FISH是将传统的细胞遗传学同DNA技术相结合，开创了⼀门新的学科——分⼦细胞遗传学。

（如下图所⽰)2.FISH信号解读-红红绿绿是什么⽬前临床上⽤于FISH检测的探针的荧光素⼤都是绿⾊的和橙红⾊标记，可⼤致分为：染⾊体计数(着丝粒)探针(centromere-enumerationprobes，CEP)，位点特异性识别探针(locus-specific identifier probes，LSI)，染⾊体涂染(paint，WCP)探针。

其中CEP和LSI探针中的计数探针、融合探针及分离重排探针，在⾎液病诊断与预后分型中最为常⽤。

2024荧光原位杂交技术在血液肿瘤中的应用规范（全文）荧光原位杂交（FISH）技术是基于碱基互补配对原则，利用荧光标记的核酸探针，对待测标本DNA序列进行定位、定性和定量分析的技术，是遗传学异常的主要检测手段之一。

相较于核型分析，FISH技术具有快速、灵敏度高及特异性强的优势，是血液肿瘤诊断和预后判定的重要手段。

为进一步规范FISH技术在血液肿瘤中的应用，中国抗癌协会血液病转化医学专业委员会、中国老年医学学会病理学分会及中华医学会血液学分会组织国内血液学、病理学和检验学专家，制定了FISH 在血液肿瘤中的应用规范。

1 FISH在血液肿瘤诊疗中的应用价值1.1 诊断分型遗传学改变是血液肿瘤诊断分型的主要依据。

急性白血病（AL）、慢性粒细胞白血病（CML）、伴嗜酸粒细胞增多和酪氨酸激酶基因融合的髓系/淋系肿瘤（MLN-TK）、骨髓增生异常综合征（MDS）、大B 细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤（FL）、套细胞淋巴瘤（MCL）、伯基特淋巴瘤（BL）、边缘区淋巴瘤（MZL）、间变大细胞淋巴瘤（ALCL）、T幼淋巴细胞白血病（T-PLL）等均需要借助FISH检测关键的遗传学异常才能精准分型。

1.2 预后分层目前针对急性髓系白血病（AML）、急性淋巴细胞白血病（ALL）、MDS、慢性淋巴细胞白血病（CLL）、原发性骨髓纤维化（PMF）、多发性骨髓瘤（MM）等血液肿瘤，世界卫生组织（WHO）、美国国立综合癌症网络（NCCN）指南已提出了基于遗传学异常的预后分层/评分体系。

FISH检测在血液肿瘤的预后评估中发挥着不可替代的作用。

1.3 指导治疗CML患者中费城染色体（Ph染色体）或BCR：：ABL1融合基因的发现开启了酪氨酸激酶抑制剂（TKI）靶向治疗的新时代。

此外，针对PML：：RARA融合基因或其他RARA重排的全反式维甲酸和砷剂、ABL信号通路（ABL1、ABL2、PDGFRA、PDGFRB重排）的TKI药物、JAK-STAT信号通路（CRLF2、JAK1/2/3重排）的JAK抑制剂、FLT3重排的FLT3抑制剂、ALK重排的ALK抑制剂等均已正式应用于临床治疗或处于临床试验阶段。