H5N1禽流感病毒HA与NA基因克隆及分泌表达

赵文华, 翟屹, 胡建平, 等. 中国超重和 肥胖造成 相关慢性 疾病 的经济负担研究 [ J] . 中 华流行 病学杂 志, 2006, 27 ( 7 ): 555 -
559. 胡晓抒, 郭志荣, 周慧, 等. 江苏省 35 ~ 74 岁人群代 谢综合征的 流行病学调查 [ J] . 中华流行病学杂志, 2006, 27( 9 ): 751- 756. 中国肥 胖工 作 组. 中 国 成人 超 重 和肥 胖 症 预防 与 控 制指 南
中国公共卫生 2011年 1月第 27 卷第 1期 Ch in J P ubl ic H ealth Jan 2011 Vol. 27 N o. 1
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了 B细胞负担, 致使 B 细 胞功能 下降, 进 而发展 为糖 耐受 量 减退, 最终导致了 T2 DM 16- 72; 而 Ca、i Boben、Gokhan等人 也相 继从分子生物学的角 度发现, 肥胖 导致胰 岛素抵 抗并最 终导 致 T2DM 的可能 机制 18- 102, 与 本研 究结 果 类似; 而 基 线调 查 时超重或肥胖的人群 可能在得知自己超重或肥胖后已经采取
了相应的保 健措施, 故其发生 T2 DM 的 RR 低于基线体重正常 随访为肥胖的人群, 具体 的机制 还有待 探讨。本研 究结果 可 以证实, 肥胖是糖尿病一级预防的重点, 不论是对于基线体重 正常还是基线超重、肥胖者, 有效控 制体重 可降低 发生 T 2DM 的风险。
参考文献
1 12
1 22 1 32
[ J] . 营养学报, 2004, 26( 1) : 1 - 4. 1 4 2 程莹, 潘长玉 ( 译 ) . 糖尿病和中间高血糖的定义和诊断 ( WHO /
ID F评议报告 ) [ J] . 中 华内分泌 代谢杂 志, 2006, 22 ( 6) : I0006 - I0017. 1 5 2 毛斌, 史玲, 李晨 曦. 肥胖 与 2 型糖 尿病 [ J ]. 实 用全 科医 学, 2006, 4( 1 ): 91- 92. 1 6 2 胡晓抒, 郭志荣. 多代 谢异 常和 代谢 综合 征 [ J] . 中 国 公共 卫 生, 2003, 19 ( 12) : 1527 - 1529. 1 7 2 陈蕾, 贾伟平, 项坤三, 等. 肥胖者胰岛素抵抗与总体脂、局部体 脂关系的研究 [ J] . 中华内 分泌代 谢杂志, 2001, 17 ( 5) : 276 279. 1 8 2 Ca i D, Y uan M, Fran tz D F, et a.l Local and system ic in su lin resis-t ance resu lting from hepat ic act ivat iion of IKK-B and N F-JB [ J] . N atM ed, 2005, 11 ( 2) : 183 - 190. 1 9 2 Boden G, She P, M ozzo liM , et a.l Free fat ty acids produ ce in su lin resistance and act ivate th e proin flamm atory nucleal factor-kap-paB pathw ay in rat liver[ J]. D iabetes, 2005, 54( 12 ): 3458- 3465. 1102 H otam isligil G S. Inf lamm at ion and m etab olic d isord ers[ J] . N atu re, 2006, 444 ( 7121) : 860- 867.
收稿日期: 2010-05-17
(郭长胜编辑 王奕校对 )
H5N1禽流感病毒 HA 与 NA 基因克隆及分泌表达*
=论 著 >
吴蒙, 刘宇鸽, 李改瑞, 彭敬, 陆杰, 陆家海
摘 要: 目的 克隆和表达 H5N 1型流感病毒血凝素 (HA )基 因和神经 氨酸酶 ( NA ) 基因, 为制 备抗体 和亚单 位 疫苗打基础。方法 采用 PCR 技术扩增 H 5N 1型流感病毒 H 5A 和 N 1A 基因, 克隆 入含有 醇氧化 酶 - 1( AOX 1)启 动 子和分泌信号肽 序列的巴斯德毕赤酵母 (P ich ia p astoris )表达载 体 pP IC9K 中, 构建 重组载体; 经电穿 孔转化 酵母宿 主 菌 GS115, 筛选高拷贝重组转化子, 筛选后摇瓶培养, 1% 甲醇诱导表 达; 诱 导培养上清 经聚丙烯 酰氨凝胶电 泳 ( SDS PAGE )和蛋白免疫印迹 (W estern- blot) 检测蛋白表达情 况。结果 电泳和 测序证 实成功 构建酵 母表达 载体 pP IC9K - H 5A 和 pP IC9K - N1A, 重组蛋白在毕赤酵母中可以高效表达, 表达蛋白分子量大小约为 64和 52 kD, 第 3和第 4 天 表达量最高; W estern- blot检测显 示, 目的蛋 白能与 H5 亚型的 A IV 血 清结合。结论 成 功克隆并表达 H 5N 1型流 感 病毒 HA、NA 基 因序列, 为诊断试剂和疫苗开发等进一步研究奠定基 础。
Abstract: O b jective T o clone and express hem ag g lutin in ( HA ), and neuram id inase ( N A ) pro te in of H 5N 1 av ian influenza v irus for the preparation o f antibo dies and to lay a founda tion fo r gene tic eng ineer ing vacc ine. M ethod s H 5A and N 1A gene o f av ian v irus w ere am p lified w ith PCR and then c lo ned into P ichia pa sto ris expre ssion vec to r pPIC 9k con taining the AOX 1 prom o te r and A-facto r signal sequence be tw een N o tÑ and SnaBÑ site. T he recom b inan t plasm id pPIC9k-H 5A and pP IC9k-N 1A w ere transfo rm ed into P ich ia pa sto ris stra in G S115 w ith e lectropo ratio n. M ult-i co py recom binants w ere
screened and ferm en ted in f la sk s and induc ted w ith 1% m ethano .l Sod ium do decy l sulfate po lyacry lam ide ge l electropho re sis ( SD S-PAG E) and W estern-b lo t w ere used to de tec t the pro te in ex pre ssion in induced superna tan.t R esu lts A go-G el e lectrophoresis and sequence certificate ind icated that H 5A and N 1A gene w ere c loned into pP IC 9K succe ssfully. SD S-PA GE show ed tha t the g ene cou ld expre ss pro duct w ith con sisten tm o lecu lar w e ight as estim ated ( 64KD and 52KD ). T he h ighest v o lum e o f pro tein expression w a s observed a t the 3rd and 4th day. W estern-blo t show ed that the targe t pro tein could bind w ith H5 subtype A IV serum. Conc lusion The HA and N A gene s o f av ian influenza v irus H 5N 1 w ere successfu ly c lo ned and expressed, w h ich could be usefu l fo r dev eloping diagno se reagent o r vacc ine o f H 5N 1.
K ey word s: in fluenza v irus; H5N 1; P ich ia pa sto r is; secre tion expre ssio n
* 基金项目: 广东省科技计划项目 ( 2007B030702001) 作者单位: 中山大学公共卫生学院医学统计与流行病学系, 广东 广州 510080 作者简介: 吴蒙 ( 1986 - ) , 男, 河南驻马店人, 硕士在读, 研究方向: 分子流行病学与疫苗学。 通讯作者: 陆家海, E-m ai:l jiahailu@ yahoo. com. cn
关键词: 流感病毒; H 5N 1; 毕赤酵母; 分泌表达
中图分类号 : R 18313; Q 786
文献标志码: A 文章编号: 1001-0580( 2011) 01-0037-03
C lon ing and secretory exp re ssion of HA and NA gen e of H 5N1 av ian in fluenza virus in P ich ia pastoris W U M eng, L IU Y u-ge, L I G a-i re ,i e t a .l D epa r tm ent o f M ed ica l Sta tistics a nd Epidem io log y, Schoo l o f Public H ea lth, Sun Ya t-sen U niver sity (G uang zhou 510080, C hina )