辅助降血糖作用检验方法
1动物实验
1、1动物选择
选用健康成年动物,常用小鼠(25±2g)或大鼠(180±20g),单一性别,大鼠每组812只、小鼠每组1015只。
1、2材料
1、2、1试剂
四氧嘧啶(或链脲霉素)小鼠3550mg/kg、bw、iv(100160mg/kg、bw、ip)、大鼠5080mg/kg、bw、iv(200250mg/kg、bw、ip)用新鲜配制。
血溏测定试纸或试剂盒。
1、2、2仪器
血糖仪、全自动生化仪、721B型分光光度计。
1、3剂量分组及受试样品给予时间
设1个溶剂对照组与3个受试样品剂量组,根据人体每日每公斤体重推荐摄入量,小鼠扩大10倍作为其中一个剂量组(大鼠扩大5倍),根据受试样品得具体情况另设两个剂量组。受试样品给予时间原则上不少于30天,也可根据实验需要自行设定期限。
1、4实验方法
1、4、1降低空腹血糖实验
1、4、1、1高血糖模型动物
1、4、1、1、1原理
四氧嘧啶(或链脲霉素)就是一种β细胞毒剂,可选择性地损伤多种动物得胰岛β细胞,造成胰岛素分泌低下引起实验性糖尿病。
1、4、1、1、2造型
动物禁食24小时后,给予四氧嘧啶造型,57天后禁食35小时,测血糖,血糖值1025mmol/L为高血糖模型成功动物。
1、4、1、1、3操作步骤
选高血糖模型动物按禁食35小时得血糖水平分组,随机选1个模型对照组与3个剂量组(组间差不大于1、1mmol/L)。剂量组给予不同浓度受试样品,模型对照组给予溶剂,连续30天,测空腹血糖值(禁食同实验前),比较各组动物血糖值及血糖降低得绝对值(即实验前后血糖得差值)。
1、4、1、2正常动物
选健康成年动物按禁食35小时得血糖水平分组,随机选1个对照组与1个受试样品组(高剂量)。余操作同1、4、1、1、3。
1、4、2糖耐量实验
高血糖模型动物禁食35小时,剂量组给予不同浓度受试样品,模型对照组给予同体积溶
剂,1520分钟后经口给予葡萄糖2、0g/kg或医用淀粉352、0g/kg,测定给葡萄糖后0、0、5、2小时得血糖值或人医用淀粉后0、1、2小时得血糖值,观察模型对照组与受试样品组给葡萄糖或医用淀粉后各时间点血糖曲线下面积得变化。
血糖曲线下面积=1/2×(0小时血糖值+0、5小时血糖值)×0、5+1/2×(2小时血糖值+0、5小时血糖值)×1、5=0、25×(0小时血糖值+4×0、5小时血糖值+3×2小时血糖值)、
1、5数据处理及结果判定
一般采用方差分析,但需按方差分析得程序先进行方差齐性检验,方差齐,计算F值,F值降空腹血糖实验:受试样品剂量组与对照组比较,空腹血糖实测值降低有统计学意义,可判定该受试样品降空腹血糖实验结果阳性。
糖耐量实验:受试样品剂量组与对照组比较,在给葡萄糖或医用淀粉后、0、0、0、5、2、0小时血糖曲线下面积降低有统计学意义,可判定该受试样品糖耐量实验结果阳性。
1、6注意事项
1、6、1为了使实验动物糖代谢功能状态尽量保持一致,也为了准确地按体重计算受试样品得用量,实验前动物应严格禁食(不禁水),实验前后禁食条件应一致,鼠类在禁食得同时应更换衬垫物。
1、6、2血糖测定用试纸或试剂盒,按说明书操作;若自行配制试剂,按[附1]操作。
1、6、3如用血清样品进行测定,应于取血后30分钟内分离血清,分离后血清得含糖量在6小时内不变。用血清制备得无蛋白血滤液可保存48小时以上。
1、6、4高浓度得还原性物质如Vit C亦能与色素原竞争游离氧,干扰反应,使结果偏低。血红蛋白能使过氧化氢过早分解,亦干扰反应,致使测得血糖值偏低。故对已溶血得全血或血清必须制备无蛋白滤液后,再进行测定。
[附1]血糖值测定方法
1原理
葡萄糖氧化酶就是一种需氧脱氢酶,能催化葡萄糖生成葡萄糖酸与过氧化氢,后者在过氧化物酶作用下放出氧,使4氨基安替比林与酚氧化缩合,生成红色醌类化合物,可在波长505nm 比色测定。
2试剂配制
磷酸盐缓冲液(0、2mol/L, PH7、0)
0、2mol/L Na2HPO4 61ml,0、2mol/L KH2HPO4 39ml混合即可。
酶试剂
葡萄糖氧化酶400u,过氧化物酶0、6mg,4氨基安替比林10mg,叠氮钠100mg加磷酸盐缓冲液至100ml,PH调至7。冰箱存放至少可稳定2个月。
酚试剂
酚100mg溶于100ml蒸馏水中。
酶混合试剂
取等量酶试剂与酚试剂混合。在冰箱中可存放1个月。
葡萄糖标准液
储存液:无水D葡萄糖(A、R、)在烤箱中80℃烤4小时,冷却后,存放于干燥器中至恒重。精确称取2g以0、25%苯甲酸溶液溶解并移入100ml容量瓶中,再用苯甲酸溶液稀释至100ml。
应用液:在100ml容量瓶中准确加入储存液5ml,再用0、25%苯甲酸溶液稀释至100ml,即1mg/mL应用液。
蛋白沉淀剂
溶解磷酸氢二钠10g、钨酸钠10g、氯化钠9g于800ml蒸馏水中,加入1mol/L盐酸125ml,并用蒸馏水稀释至1000ml。
3操作步骤
取蛋白沉淀剂1ml加入血浆(血清)50ul混匀。室温放置7分钟后,离心,取上清液(无蛋白血滤液)测定。葡萄糖标准应用液亦进行同样处理。
混匀后,37℃水浴保温15分钟,用空白管调零点,在波长505nm处比色。
4结果计算
2人体试食试验
2、1试验设计
试验采用随机分组,组间与自身两种对照设计。
2、2受试产品
受试产品必须就是具有定型包装、标明服用方法服用量得定型产品;安慰剂除功效成分外,在剂型、口感、外观与包装上与受试产品保持一致。
2、3受试者选择
2、3、1纳入标准
选择经饮食控制或口服降糖药治疗后病情较稳定,不需要更换药物品种及剂量,仅服用维持量得成年II型糖尿病病人,空腹血糖≥7、8mmol/L(140mg/dl)或餐后2h血糖≥11、1mmol/L(200mg/dl);也可选择7、8mmol/L≥空腹血糖≥6、7mmol/L(120mg/dl)或11、1mmol/L≥餐后2h血糖≥7、8mmol/L得高血糖人群。
2、3、2排除标准
2、3、2、1 I型糖尿病病人。
2、3、2、2年龄在18岁以下或65岁以上,妊娠或哺乳期妇女,对受试样品过敏者。
2、3、2、3有心、肝、肾等主要脏器并发症,或全并有其它严重疾病,精神病患者,服用糖皮质激素或其它影响血糖药物者。
2、3、2、4不合作者(指不能配合饮食控制而影响观察结果者)。
2、3、2、5近3个月内有糖尿病酮症、酸中毒以及感染者。
2、3、2、6凡不符合纳入标准,未按规定服用受试样品,或资料不全影响观察结果者。
2、4受试者分组
按受试者得血糖水平随机分为试食组与对照组,尽可能考虑影响结果得主要因素如病程、服药种类(黄脲类、双胍类)等,进行均衡性检验,以保证组间得可比性。每组受度者不少于50例。、
2、5试验方法
试验前对每一位受试者按性别、年龄、不同劳动强度、理想体重参照原来生活习惯规定相应得饮食,试食期间坚持饮食控制,治疗糖尿病得药物种类与剂量不变。试食组在服药得基础上,按推荐服用方法服用量每晶就是食受试样品,对照组在服药得基础上,可不进行任何处理(或服用安慰剂)。连续观察时间不少于30天,必要时可以适当延长。
2、6观察指标
各项指标于实验开始及结束各检测一次,必要时实验中期血糖指标可加测一次。
2、6、1安全性指标
2、6、1、1一般状况体征包括精神、睡眠、饮食、大小便、血压等
2、6、1、2血、尿、便常规检查
2、6、1、3肝、肾功能检查
2、6、1、4胸透、心电图、腹部B超检查(仅试验前检查一次)
2、6、2功效指标
2、6、2、1症状观察
详细询问病史,了解患者饮食情况,用药情况,活动量,观察口渴多饮、多食易饥、倦怠乏力、多尿等主要临床症状,按症状轻重积分,于试食前后统计积分值,并就其主要症状改善(改善1分为有效),观察临床症状改善率。
临床症状积分表
2、6、2、2空腹血糖
观察试食前后空腹血糖值及血糖下降得百分率。
2、6、2、3餐后2h血糖
观察试食前后食用100g精粉馒头后2小时血糖值及血糖下降得百分率。
2、6、
3、4尿糖
用空腹晨尿定性,按—、±、+、++、+++、++++分别积0、0、5、1、2、3、4分,于试食前后统计积分值。
2、6、2、5血脂
观察试食前后血清总胆固醇、血清甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇水平。
2、7数据处理与结果判定
凡自身对照资料可以采用配对t检验,两组均数比较采用成组t检验,后者需进行方差齐性检验,对非正态分布或方差不齐得数据进行适当得变量转换,待满足正态方差齐后,用转换得数据进行t检验;若转换数据仍不能满足正态或方差齐得要求,改用t’检验或秩与检验;方差剂但变异系数太大(如CV>50%)得资料应用秩与检验。
结果判定
空腹血糖结果判定:①空腹血糖试验前后自身比较,差异有显著性,且试验后平均血糖下降≥10%,②试验后试食组血糖值或血糖下降百分率与对照组比较,差异有显著性。满足上述两个条件,可判定该受试样品空腹血糖指标结果阳性。
餐后2h血糖结果判定:①餐后2h血糖试验前后自身比较,差异有显著性,且试验后平均血糖下降≥10%,②试验后试食组血糖值或血糖下降百分率与对照组比较,差异有显著性。满足上述两个条件,可判定该受试样品餐后2h血糖指标结果阳性。
动物实验与伦理的案例分析及建议 摘要：实验动物是生命科学研究和发展重要的基础和支撑条件，对医学发展和人类健康具有十分重要的意义。但是随着动物保护运动的兴起，动物实验受到来自动物权利论和动物福利法的挑战，如何正确对待实验动物生命和维护实验动物福利伦理，如何使动物实验符合生命伦理学规范等一系问题引起了人们的深思。 关键词：动物实验；动物权利；福利；伦理学 一、案例介绍 1.案例背景 Chris Chisholm和Christie Chase从老鼠身上分离出一种能够产生攻击行为的荷尔蒙，施用了这种荷尔蒙的老鼠会变得非常暴戾、好斗。这种荷尔蒙的结构和功能都非常类似于人类的睾丸激素。Chisholm和Chase相信该研究结果有助于理解人类的攻击性。有些老鼠在施用了这种荷尔蒙后变得非常狂暴，在发作时几乎能彼此将对方撕成碎片。很多老鼠死于这种实验，幸存的也受到严重创伤。Chisholm和Chase还发现，很难估测引起老鼠适度发狂的荷尔蒙确切剂量：有些老鼠摄入很小剂量就会变得非常狂暴，有的则能够承受很高剂量，而不出现过分的狂燥。某些动物权益保护激进人士知晓后，便发起保护运动试图阻止这个实验。 2.案例分析 动物实验也称为动物试验，这两个词在很多地方是通用的，因为试验从本身来讲它是一种探索性的活动，而实验更多的是一种印证性的活动。动物实验是非常重要的，它给人类提供了多种保障，为人类医学的发展提供了一个实验的替代品。动物实验可能涉及到动物的伤害甚至死亡，这种伤害和剥夺动物的生命会引起一些值得我们思考的逻辑问题，那就是人有没有权利去伤害或者处死动物？人是否具备随意处置动物的权利，实际上是一个伦理价值判断和价值取向的问题。人类进化的比动物高级，智力水平也比动物高，但是人不是处于绝对的优先地位，动物和人都是生命，在生命的珍贵性方面，人和动物却是一致的，我们不可以去伤害它们，这不是大自然赋予我们的权利。所以我们对待其它的生命，在必要的情况下，在为人类社会服务和保证人类安全的前提下，我们要尽可能地减少对动物的伤害。 二、案例建议 1.动物实验的现状 动物实验是指在实验室里，为了获得有关生物学、医学等方面的新知识或者解决具体问题而使用动物进行的科学研究[1]。为了获得真正的知识，进行动物实验无可厚非，但是有些人在进行实验
应不应该用动物做实验邓应飞（大理学院） 提起科学实验，人们总要想起那一只只可爱的白鼠、白兔的功劳，由于它们“勇于献身”才换来了许许多多的科学突破。事实上，实验用动物远不止是白鼠、白兔，常见的还有狗、猫、猪、牛、羊以及灵长类动物等。在西方，不断有反对这种实验的声音传出。然而，实验动物又是医学、生命科学研究的基础和重要支撑条件。医药、化工、农业、轻工、环保、航天、商检、军工等许多领域的科学研究和生产应用，都离不开实验动物。说得严重一点，我们人类今天生活的方方面面都曾受到过实验动物的“恩惠”。所以，随着科学的进步、文化的昌明和环保意识的增长，实验动物的命运也受到了国际社会的普遍关注。 “3R法则”风行欧美 全世界每年用于实验的动物数以千万计。据美国一家动物保护组织估计，全美一年约有2800万只动物被用于实验，其中大约1800万只要被杀死。英国每年因实验而死的动物是251万只，加拿大是166万只，荷兰是73万只。如此巨大的数字不仅引发了动物保护组织的抗议，而且也引起了各国科研部门的注意。 目前，在如何对待实验动物上，美国及欧洲国家广为采用的选择方案是“3R法则”，即减少（Reduction）、优化（Refinement）和替代（Replacement）。具体而言，“减少”就是尽可能地减少实验中所用动物的数量，提高实验动物的利用率和实验的精确度；“优化”即是减少动物的精神紧张和痛苦，比如采用麻醉或其它适当的实验方法；“替代”就是不再利用活体动物进行实验，而是以单细胞生物、微生物或细胞、组织、器官甚至电脑模拟来加以替代。 “3R法则”在发达国家已经普遍采用，并被许多国家列入了保护动物的法律及修正案中。 立法保护势在必行 随着动物保护运动影响的不断扩大，许多世界级的大公司为了减少公众的诘难，自20世纪80年代开始，也先后采用了新方法，替代或是减少实验用动物。比如：雅芳、黛尔、爱丝迪劳德、吉列和露华浓等著名的化妆品公司就以停止使用动物实验来换取公众的支持。 在欧洲，关于实验动物的争论甚至浮上政治层面，成为一些政党、尤其是有“绿色”倾向的政党争取选民的“法宝”。今年4月初，欧洲议会通过一项议案，明确禁止已有替代选择的化妆品继续进行动物实验。该议案表示，到2005年1月将全面禁止新生产的化妆品进行动物实验。不过，这一议案能否行得通，还要看欧盟所有成员国的脸色。目前，英国、奥地利和荷兰等国已通过法律，明令禁止在开发新型化妆品方面进行动物实验。 与欧洲相比，美国在保护实验动物方面稍慢一点。尽管美国《动物福利法案》以及其它一些相关法律对实验动物有不少保护性条例，但目前还没有明文规定禁止某项研究、试验或是教学中使用实验动物。不过，保护动物也是一个日益热门的话题。近十几年来，4年一度的美国总统大选中，角逐白宫宝座的候选人没有哪个胆敢不许诺保护动物的。 动物实验还是少不了 随着人类保护动物意识的增强以及各国保护动物力度的加大，动物被用于实验的数量出现减少的趋势。根据美国农业部统计，包括私营公司的实验在内，全美实验动物用量1985年至1995年降低了约35％。但这不包括实验用的大鼠和小鼠。此两类动物目前在许多国家还没有被列为保护之列。 对实验动物“更加人道地对待”是众所赞同的观点，但要实现某些动物保护组织“全面禁止动物实验”的目的，在当前人类科学发展的条件下，似乎也不太可能。不少科学家明确指出，“3R法则”中的“减少”和“优化”实行起来不是太难。基础科学研究人员就取得了
附件6： 辅助降血脂功能评价方法 试验项目、试验原则及结果判定 Items, Principles and Result Assessment 根据血脂异常的类型，辅助降血脂功能按照不同的血脂类型设立分类的动物试验和人体试食实验。 1 试验项目 1.1 根据受试样品的作用机制，分成三种情况 1.1.1 辅助降低血脂功能：降低血清总胆固醇和血清甘油三酯 1.1.2 辅助降低血清胆固醇功能：单纯降低血清胆固醇 1.1.3 辅助降低血清甘油三酯功能：单纯降低血清甘油三酯 1.2 观察指标 1.2.1 体重 1.2.2 血清总胆固醇 1.2.3 血清甘油三酯 1.2.4 血清高密度脂蛋白胆固醇 1.2.5 血清低密度脂蛋白胆固醇 1.3 人体试食试验 1.3.1 血清总胆固醇 1.3.2 血清甘油三酯 1.3.3 血清高密度脂蛋白胆固醇 1.3.4. 血清低密度脂蛋白胆固醇 2 试验原则 2.1 动物实验和人体试食试验所列指标均为必测项目。 2.2 根据受试样品的作用机制，可在动物实验的两个动物模型中任选一项。 2.3 根据受试样品的作用机制，可在人体试食试验的三个方案中任选一项。 2.4 在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。 3 结果判定 3.1 动物实验： 3.1.1 混合型高脂血症动物模型 辅助降低血脂功能结果判定：模型对照组和空白对照组比较，血清甘油三酯升高，血清
总胆固醇或低密度脂蛋白胆固醇升高，差异均有显著性，判定模型成立。（1）各剂量组与模型对照组比较，任一剂量组血清总胆固醇或低密度脂蛋白胆固醇降低，且任一剂量组血清甘油三酯降低，差异均有显著性，同时各剂量组血清高密度脂蛋白胆固醇不显著低于模型对照组，可判定该受试样品辅助降低血脂功能动物实验结果阳性。（2）各剂量组与模型对照组比较，任一剂量组血清总胆固醇或低密度脂蛋白胆固醇降低，差异均有显著性，同时各剂量组血清甘油三酯不显著高于模型对照组，各剂量组血清高密度脂蛋白胆固醇不显著低于模型对照组，可判定该受试样品辅助降低血清胆固醇功能动物实验结果阳性。（3）各剂量组与模型对照组比较，任一剂量组血清甘油三酯降低，差异均有显著性，同时各剂量组血清总胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇不显著高于模型对照组，血清高密度脂蛋白胆固醇不显著低于模型对照组，可判定该受试样品辅助降低血清甘油三酯功能动物实验结果阳性。 3.1.2 高胆固醇血症动物模型 模型对照组和空白对照组比较，血清总胆固醇（TC）或低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）升高，血清甘油三酯（TG）差异无显著性，判定模型成立。各剂量组与模型对照组比较，任一剂量组血清总胆固醇或低密度脂蛋白胆固醇降低，差异有显著性，并且各剂量组血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）不显著低于模型对照组，血清甘油三酯不显著高于模型对照组，可判定该受试样品辅助降低血清胆固醇功能动物实验结果阳性。 3.2 人体试食试验 指标判定标准： 有效：TC 降低>10％；TG 降低>15％；HDL-C 上升>0.104mmol/L。 无效：未达到有效标准者。 3.2.1 辅助降低血脂功能结果判定 试食组自身比较及试食组与对照组组间比较，受试者血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇降低，差异均有显著性，同时血清高密度脂蛋白胆固醇不显著低于对照组，试验组总有效率显著高于对照组，可判定该受试样品辅助降低血脂功能人体试食试验结果阳性。 3.2.2 辅助降低血清胆固醇功能结果判定 试食组自身比较及试食组与对照组组间比较，受试者血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇降低，差异均有显著性，同时血清甘油三酯不显著高于对照组，血清高密度脂蛋白胆固醇不显著低于对照组，试验组血清总胆固醇有效率显著高于对照组，可判定该受试样品辅助降低血脂功能人体试食试验结果阳性。 3.2.3 辅助降低甘油三酯功能结果判定 试食组自身比较及试食组与对照组组间比较，受试者血清甘油三酯降低，差异有显著性，同时血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇不显著高于对照组，血清高密度脂蛋白胆固醇不显著低于对照组，试验组血清甘油三酯有效率显著高于对照组，可判定该受试样品辅助降低甘油三酯功能人体试食试验结果阳性。
我国动物实验领域的问题与对策 动物实验的科学定义指在实验室内，为了获得有关生物学、医学等方面的新知识或解决具体问题而使用动物进行的科学研究。随着整个世界科学技术的进步，以及我国生活水平的提高，吃饱穿暖已不再让人堪忧，更多为人关注的则是怎样能生活的有质量，人们似乎更趋于对自己生理构造的探究以及自己生命及生活质量的的保证和提高。我们不断着手于探索生物的起源，揭开遗传的奥密，攻克癌症的堡垒，研究各种疾病与衰老的机理，监测公害、污染，保护人类生存的环境，生产更多更好的农畜产品为人类生活造福，在药品、生物制品、农药、食品、添加剂、化工产品、化妆品、航天、放射性和军工产品的研究试验与生产中，在进出口商品检验。然而，此类科研结果不经动物实验又怎能轻易地施以人身？我们不能用人去做实验。因此动物实验领域，已受到世界各国的普遍重视，投入了巨大的人力物力，这是因为在生物科学领域内，我们必须借助实验动物去完成对人类生命的探索。动物总是做为人类的替身，去承担安全评价和效果试验，在生命科学领域内一切研究课题的确立，成果水平的高低，都决定于实验动物的质量，没有它，我们的科学实验就不能在时间、空间和研究者之间进行比较，我们的科研成果、论文就不能在国际上进行交流，得不到国际的公认，将被国际同行们看为科学水平不高甚至是一堆废纸。动物实验探索人类的生命奥秘，控制人类的疾病和衰老，延长人类的寿命，它具有深远的意义。而因此动物实验也是不可替代的方式。 对于科技起步较晚发展速度较快而经济水平以及人民素质依然较落后的我国，尽管随着动物实验领域的发展不断的收益，然而诸多的问题不断显现。围绕道德伦理和实验验本身的安全问题及各种可行性问题不断带来了一些障碍阻碍相关事业的发展。第一个问题，动物实验正确与否在人们心中的伦理性判断观点不一。有很多人对科学工作者的以动物为实验物进行省道和指责。随着动物实验的不断开展，有越来越多的动物权利主义者。动物实验反对者者反对将动物当作一般财货或是为人类效力的工具。他们有着各种离鸾观点。有人认为掠夺和杀害动物是非常残忍的，残酷行为本身是有悖于人的道德修养的。此外，人对动物的残忍行为会使一般人染上残忍的品性，是正常人变得对其他同伴也残忍，冷漠，麻木不仁。以上也是西方动物保护组织所持主流伦理学观点。而大多数反对的主要原因则是权利问题，及他们认为生命和感觉是人类拥有天赋和权力的基础；而动物也拥有生命和感觉，所以动物也应该具有天赋权利。动物的权利也应该受到保护。第二个问题则是我国的实验动物福利状况并不乐观，现有的实验动物管理法律体系对于实验动物福利问题的回应非常被动和保守。我国实验动物管理法律体系仍属于传统的行政管理法律体系，而并不是现有的一些理论成果认为的旨在保护实验动物福利的法律体系。法律规范，在人类和动物之间创造一种和谐的关系，是人类数百年来理性思考的结果。实验动物福利是动物实验与实验动物之间平衡的最佳纽带。实验动物福利问题既涉及到动物福利，又关乎我国科研技术的发展，同时与我国在国际贸易上应对技术壁垒等一系列的国际经济问题有着密切的联系，更与社会自身的发展息息相关。对实验动物福利的问题的关注是社会进步和经济发展到了一定阶段的必然产物，符合我国构建和谐社会的理念，也符合人与自然，人与动物和谐的理念。而我国在这一重要方面正有者十分严重的缺陷。第三个问题，则是对实验者本身的的探究与思考。包括他们的自我保护意识和安
低聚果糖降血脂作用的研究概况 低聚糖是指那些“人体不消化或难消化的成份，（低聚糖由2~10个单糖组成的糖类，由于其聚合度低，所以称作低聚糖。）这些成份可选择性刺激结肠生理活性益生菌的生长和活性，从而对宿主产生健康效应”，也称之为双歧因子（Bifidogenic Factor）。有益生元功能的低聚糖主要是一些非（或难）消化性低聚糖，如低聚异麦芽糖、低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、大豆低聚耱、水苏糖、棉籽糖、甘露低聚糖、低聚壳聚糖等[1]。低聚果糖是指蔗糖(GF)的果糖C1位置通过糖苷键结合1~3个分子果糖所构成的低聚糖，其分子式为G-F-Fn，n=1~3(F为果糖，G为葡萄糖)。一般而言，低聚果糖是蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖混合物的总称。低聚果糖是利用微生物或植物中具有果糖转移酶活性的酶作用于蔗糖而得到的。这一类低聚糖统称为Fructo-oligosaccharides (FOS)。FOS作为一种膳食纤维对脂质代谢产生影响[2]，FOS是一种优良的水溶性膳食纤维，通过肠内双歧杆菌的作用，FOS能发酵产生丙酸，阻碍胆固醇的合成，促使胆固醇向胆汁酸转换，增加胆汁酸排出量，能有效降低血清胆固醇、甘油三脂、游离脂肪酸的数量。另外，FOS不被人体吸收，不能由糖→脂代谢途径合成脂肪。 1. FOS降血脂作用的动物研究 FOS是广泛存在于水果、蔬菜、蜂蜜等食物中的天然物质，是融营养与保健为一体的活性成分，该成分不仅具有食物纤维的功能，还是一种双歧因子，对双歧杆菌具有显著增殖作用。双歧杆菌代谢产生烟酸的能力与血清胆固醇水平的降低有一定关系。认为双歧杆菌通过抑制人体内活化的T细菌，控制新生成低密度脂蛋白接收器，起到降低血清胆固醇含量的作用，从而对宿主产生健康效应。 国内外动物实验结果显示，FOS具有降动物血脂的效应[2-6]。Fiordaliso M等用含10% FOS的饲料分别喂大鼠30 d、16周后，分离肝脏进行体外研究，发现FOS能降低肝脏甘油三酯的水平，胆固醇的水平未受影响[3,4]。 徐进等人的研究中以高脂饲料诱发大鼠为高脂动物模型，同时给予高脂饲料与FOS 28 d 后，与高脂模型组比较。0.5、1.5、2.5 g/kg·bw FOS可显著降低大鼠血清总胆固醇和甘油三脂的水平(P<0.05)，但对高密度脂蛋白胆固醇的水平无显著影响[2]。 罗予等人的研究中以1 g/kg·bw FOS灌服小鼠，其血甘油三脂含量呈现下降趋势。FOS 作为消化性的膳食纤维，促进双歧杆菌增殖，后者产生的醋酸和乳酸能刺激肠蠕动，影响脂类吸收入血和促进脂类排出[5]。
实习一实验动物的一般操作技术 一、目的和意义 毒理学研究需要用实验动物来进行各种实验，通过对动物的实验观察和分析来研究毒作用，获得毒物的毒性、剂量-反应关系、毒作用机制等方面的资料，因此动物实验是毒理学研究中重要的手段之一。 通过本次实习学习毒理学实验中有关动物实验的基本操作技术，掌握实验动物的选择、动物抓取、染毒方法和生物材料的采集等技术。 二、内容 （一）健康动物的选择 无论选择哪种种属品系的动物进行实验，均要求选择健康的实验动物。健康动物检查时要求达到：外观体型丰满，被毛浓密有光泽、紧贴体表，眼睛明亮，行动迅速，反应灵活，食欲及营养状况良好。选择时重点检查以下项目： 1.眼睛明亮，瞳孔双侧等圆，无分泌物。 2.耳耳道无分泌物溢出，耳壳无脓疮。 } 3.鼻无喷嚏，无浆性粘液分泌物。 4.皮肤无创伤、无脓疮、疥癣、湿疹。 5.颈部要求颈项端正，如有歪斜提示可能存在内耳疾患，不应选作实验动物。 6.消化道无呕吐、腹泻，粪便成形，肛门附近被毛洁净。 7.神经系统无震颤、麻痹。若动物（大鼠、小鼠）出现圆圈动作或体位倒置呈圆圈摆动，应该放弃动物。 8.四肢及尾四肢、趾及尾无红肿及溃疡。 （二）实验动物的性别鉴定 动物性别不同对毒物的敏感性也不同，这可能与性激素、肝微粒体羟基化反应有关，也随受试物而异。因此，要根据实验要求选择性别，一般实验如对性别无特殊要求者，宜选用雌雄动物各半。 1.大鼠、小鼠主要依肛门与生殖孔间的距离区分，间距大者为雄性，小者为雌性。成年雄鼠卧位可见到睾丸，雌性在腹部可见乳头。 2.豚鼠用在一只手抓住豚鼠颈部，另一只手把开靠近生殖器孔的皮肤，雄性动物在圆孔中露出性器官的突起，雌性动物则显出三角形间隙，成年雌性豚鼠胸部有两个乳头。 3.家兔将家兔头轻轻夹在实验者左腋窝下，左手按住腰背部，右手拉开尾巴并将尾巴夹在中指和无名指中间，然后用拇指和食指稍稍把生殖器附近的皮肤扒开。雄兔即可见一圆
发扬人道关怀,探求科学真理 在生物学与医学的发展过程中，动物实验是不可或缺的一种研究途径。人们通过解剖实验来了解动物体本身的形态和结构，通过受控的动物实验来了解各种外界因子对动物生理及行为的影响，并从而为将这些因子作用于人和其他动物而做好前期的工作。随着动物保护运动的广泛开展及伦理学视野的扩大，动物实验的正当性和必要性，实验动物的福利及其保护等问题逐渐凸现出来，成为学术界和公众讨论的焦点。 一、我国动物实验领域存在的问题 1、饲养和实验环境落后,导致动物大脑与心理不健康 我国许多大学一级动物实验室建设已有较高水平和规模．但是动物实验室的发展还比较滞后，房舍陈旧．设施更显落后，有的七八年竟未填置过仪器设备。实验动物不达标，饲养员也未经专业训练．大多是雇来的临时工，给实验动物喂多喂少、营养搭配随意性根大，根本谈不上科学性。 研究表明动物的生活环境会影响到其大脑发育。在老鼠身上做实验时,科学家发现，生活在空间较大并且笼子里附加了迷宫、梯子、海绵等刺激物的老鼠，它们大脑中乙酰胆碱的含量相对较高，而通过这种酶可以看出神经系统的活动情况。 实验证明，不同的居住环境会改变神经细胞体的大小和突触接触的数量。而使用那些神经系统有问题的动物做实验，无论是涉及行为
科学、神经科学还是神经解剖学，研究者都可能被引入歧途,影响到研究所得出的数据的有效性和准确性。这意味着,疾病模型的设计、药剂研究和化学毒性检测的结果都将受到影响。 2、动物实验的操作情况不佳,实验中进行动物虐待 在一份对医学生的调查[1]中，实验前对实验操作步骤“非常熟悉”的人仅占l0%,“熟悉”的占52．99%,而“不是很熟悉，需要一边看步骤一边实验”的达到36．51 %。 动物实验大部分是活体实验，学生在实验前对实验步骤及注意事项不清楚，会延长实验时间，延长动物的痛苦，甚至导致实验失败，动物也就白白做了牺牲。这说明部分学生缺乏严谨的科学态度。这也表现在动物的麻醉给药上，约10%的学生对动物进行麻醉给药时是“只凭估计给药”或“随便给药”。这种不科学的给药方式是对动物痛苦的无视和对动物生命的淡漠。缺少严谨的科学态度，一切实验结果就有可能失真，在动物实验上就成了对动物的虐待。 3、我国动物实验替代方法(3R)研究存在问题 所谓3R理论，即在动物实验中遵循减少(reduction)、替代(replacement)和优化(refinement)的原则。“减少”就是要求在实验中尽可能减少实验动物的使用数量，提高实验动物的利用率和实验的准确性；“优化(精细)”即是确保动物在麻醉、镇痛、镇静或其他适当的手段作用下进行实验，不使其遭受不必要的伤害或痛苦。“替代”就是不再利用活体动物进行实验而是以组织细胞培养、各种活体外试验或计算机模型以及统计分析等方法来加以替代。
辅助降血脂功能评价方法 （征求意见稿） 保健食品评价试验项目、试验原则及结果判定 Items, Principles and Result Assessment 辅助降低血脂功能 根据血脂异常的类型，辅助降血脂功能按照不同的血脂类型设立分类的动物试验和人体试食实验。 1 试验项目 1.1 根据受试样品的作用机制，分成三种情况 1.1.1 辅助降低血脂功能：降低血清总胆固醇和血清甘油三酯 1.1.2 辅助降低血清胆固醇功能：单纯降低血清胆固醇 1.1.3 辅助降低血清甘油三酯功能：单纯降低血清甘油三酯 1.2 观察指标 1.2.1 体重 1.2.2 血清总胆固醇 1.2.3 血清甘油三酯 1.2.4 血清高密度脂蛋白胆固醇 1.2.5 血清低密度脂蛋白胆固醇 1.3 人体试食试验 1.3.1 血清总胆固醇 1.3.2 血清甘油三酯 1.3.3 血清高密度脂蛋白胆固醇 1.3.4. 血清低密度脂蛋白胆固醇 2 试验原则 2.1 动物实验和人体试食试验所列指标均为必测项目。 2.2 根据受试样品的作用机制，可在动物实验的两个动物模型中任选一项。 2.3 根据受试样品的作用机制，可在人体试食试验的三个方案中任选一项。 2.4 在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。 3 结果判定 3.1 动物实验： 3.1.1混合型高脂血症动物模型 辅助降低血脂功能结果判定：模型对照组和空白对照组比较，血清甘油三酯升高，血清总胆固醇或低密度脂蛋白胆固醇升高，差异均有显著性，判定模型成立。（1）各剂量组与模型对照组比较，任一剂量组血清总胆固醇或低密度脂蛋白胆固醇降低，且任一剂量组血清甘油三酯降低，差异均有显著性，同时各剂量组血清高密度脂蛋白胆固醇不显著低于模型对照组，可判定该受试样品辅助降低血脂功能动物实验结果阳性。（2）各剂量组与模型对照组比较，任一剂量组血清总胆固醇或低密度脂蛋白胆固醇降低，差异均有显著性，同时各剂量组血清甘油三酯不显著高于模型对照组，各剂量组血清高密度脂蛋白胆固醇不显著低于模型对照
?食品添加剂的食品毒理学评价与食品安全性 ?2010/1/3 16:55:37 ?食品添加剂对于改善食品色香味，对于食品原料乃至成品的保质保鲜，对于提高食品的营养价值，对于食品加工工艺的改善以及新产品的开发等诸多方面，都发挥着极为积极的作用。由于食品工业的快速发展，食品添加剂已经成为现代食品工业的重要组成部分，并且已经成为食品工业技术进步和科技创新的重要推动力。 对食品添加剂的毒理学的评价是正确认识和安全使用食品添加剂的基础。 一．食品添加剂的基本概念 FAO／WHO在1962年所提出的食品添加剂的国际定义为：“国际食品标准计划中的食品添加剂，是指其本身通常不作为食品消费，也不作为通常食品的典型成分使用的物质，所以，不论有无营养价值，在食品的制造、加工、调制、处理、装填、包装、运输或保管的过程中，出于技术目的(包括调味、着色、赋香等)而有意识地添加到食品中的物质。这些物质本身或其副产物直接或间接地成为食品的一部分，或给食品的性质以影响，或者可以充分造成预结果。它们不包括污染物质或者是为了维持或改善食品营养价值的物质”。 根据《中华人民共和国食品卫生法》（1995年）的规定：食品添加剂是指“为改善食品品质和色、香、味，以及为防腐和加工工艺的需要而加入食品中的化学合成或者天然物质”；同时规定，“为增强营养成分而加入食品中的天然或人工合成的属于天然营养素范围的食品添加剂”称为“营养强化剂”。因此，营养强化剂显然也属于食品添加剂范畴。 在食品加工和原料处理过程中，为使之能够顺利进行，还有可能应用某些辅助物质。这些物质本身与食品无关，如助滤、澄清、润滑、脱膜、脱色、脱皮、提取溶剂和发酵用营养剂等，它们一般应在食品成品中除去而不应成为最终食品的成分，或仅有残留。对于这类物质特称之为食品加工助剂。 二．食品添加剂分类 根据GB12493-1990《食品添加剂分类和代码》规定，按其主要功能作用的不同分为：酸度调节剂、抗结剂、消泡剂、抗氧化剂、漂白剂、膨松剂、胶姆糖基础剂、着色剂、护色剂、乳化剂、酶制剂、增味剂、面粉处理剂、被膜剂、水分保持剂、营养强化剂、防腐剂、稳定和凝固剂、甜味剂、增稠剂和其它共21类。 因食品用香料品种太多单独列出，见GB/T 14156-1993《食品用香料分类与编码》。 GB2760《食品添加剂使用卫生标准》,按照食品添加剂的功能分类分为酸度调节剂、抗结剂、消泡剂、抗氧化剂、漂白剂、膨松剂、胶姆糖基础剂、着色剂、护色剂、乳化剂、酶制剂、增味剂、面粉处理剂、被膜剂、水分保持剂、营养强化剂、防腐剂、稳定和凝固剂、甜味剂、增稠剂、其他、香料共22类，并以附录
简论动物实验以及我对动物实验的看法 人们一直以来对于动物实验这一问题就褒贬不一，就我的观点，用动物做实验是可行的，但必须要保证在最大程度上减少动物的痛苦，绝不可用十分残暴的手段对待动物！虽然用动物做实验是对动物生命的摧残，但综合各方面因素来看，用动物做实验是必需的。 在医学界，许多医学新知识的获得、医疗新方法的应用、探索人类疾病发病机制、寻找治疗新途径、评价新药效果和安全性时往往都要借助动物实验。通过动物实验人类在生物医学方面取得了许多巨大成就这些成就对人类的文明与进步起到了重要的推动作用.在哲学界，《圣经》对基督徒也是这么说的,人类处于动物之上,除了照看它们之外,也可以利用它们,动物与我们有质的差别,动物并没有我们人类才具备的意识。它们靠自己的本能和反射,而不是理性的思维。 因此，用动物做实验时人类生存发展过程中必不可少的一个环节，但是我们应该怎么做才能即保证能达到实验目的又在最大程度上减轻动物的痛苦呢？在我看来，有以下一些方法。 首先，我们要了解并知道如何使用”3Rs”原则，这是由英国出的著名3R”原则——减量化（reducing），再利用（reusing）和再（recycling）三种原则可以作为进行动物实验的基本原则：1．Reduction（减少）指在科学研究中，使用较少量的动物获取的试验数据或使用—定数量的地动物能获得更多实验数据的科学方法。2．Replacement（替代）指使用其他方法而不用动物所进行的试或其他研究课题，以达到某—试验目的。或是使用没有知觉的试验代替
以往神志清醒的活的脊椎动物进行试验的一种科学方法。3．Refinement（优化）指在符合科学原则的基础上，通过改进条等动物，提高动物福利：或完善实验程序和改进实验技术，避免或减轻给动物造成的与实验目的无关的疼痛和紧张不安的科学方法。 当然，除开这些理论上的方法，我们还可以采用其他一些比较实际的方法，比如在给动物做实验前好好善待它们，给它们喂一些好吃的东西；做各种注射前要采用气体麻醉后进行，抓持动物要轻柔，对一只动物操作时，其他动物我们要遮挡起来避免动物心理应激，等等；实验过程中尽量下手轻一点，准一点，快一点，不要磨磨蹭蹭给动物增加慢性痛苦；对于有些实验不做也罢，比如脊髓半横切，这个觉得实验现象一点也不明显，动物痛苦又大，就可以直接看录象算了；还可以对死亡的动物合理使用，避免伤害更多的小动物。 还有就是不进行没有必要的动物实验，不能仅因为好奇等原因就用动物做实验；对清醒的动物应进行一定的安抚,以减轻它们的恐惧和不良反应；实验外科手术中应积极落实实验动物的急救措施, 对术后或需淘汰的实验动物实施“安乐死”，不能粗暴的结束动物生命。 当然最重要的还是我们每个人都要真正从心底树立起保护动物的意识，在这个意识下，我们在进行实验时自然就会为动物们想的比较多，对它们的保护也就越到位！总之一句话，动物实验是不可或缺的，我们能做的就是尽我们最大的努力善待动物！ 最后让我说一句：小动物，谢谢你们！但请原谅人类的自私！
3.实验动物学的核心内容之一是实验动物的标准化，它包括实验动物的 ?遗传学控制标准 ?微生物学和寄生虫学控制标准 ?设施环境控制标准 ?饲料营养控制标准 实验动物标准化的意义在于用符合标准的实验动物，在标准化饲养、实验环境条件下，所做的动物实验无论在时间的先后上，还是在世界的不同实验室里，其实验结果应该具有可重复性和可对比性。 4.生命科学研究所必需的四个基本条件： AEIR 5.什么是动物福利？（选择，判断） 动物福利是指动物在整个生命过程中应得到人类的保护，其基本原则是要善待动物，保证动物的健康和快乐。 6.“3R”原则： Replacement 替代-是指用其它实验方法替代用哺乳类动物进行实验研究。 Reduction 减少-是指某一研究必须要使用实验动物，而又没有可靠的替代方法时，应考虑把使用动物的数量减少到实验研究目的所必需的最少数量。 Refinement 优化-是指通过改进和完善实验程序、利用先进仪器设备，减轻或避免给动物造成痛苦和不安，提高动物福利的同时，获得可靠的实验结果。 1.近交系:是指采用连续全同胞兄妹交配20代以上而培育成的动物。 近交系动物的特点 （1）基因的纯合性（近交系动物的每个个体） （2）遗传组成的同源性（一个近交系动物的所有个体） （3）遗传组成的独特性（不同近交系比较） （4）遗传特征的可辨别性（不同近交系比较） （5）遗传的稳定性（所有近交系） （6）表现型的一致性（同一近交系个体间） （7）背景资料的可查性 （8）国际分布的广泛性 2.封闭群:是指以非近亲交配方式进行繁殖生产的一个种群，在不从外部引入新个体的条件下，至少连续繁殖4代以上的动物群体。 3.杂交群动物:由两种不同的近交系杂交所繁殖的第一代杂交动物称为杂交群又称为系统杂交动物，或“F1”代。 杂交群动物的双亲来自两个不相关的近交系，它具有以下几种特征： （1)各个个体的基因型相同，是其父母基因型的组合。 (2)表型一致，对试验反应均一。 (3具有杂交优势，生活力和抗病力比近交系强。 (4)具备双亲的生物学特性。 (5)由于基因互作，可产生不同于双亲的新性状。 1.无特定病原体级动物定义除清洁动物应排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病原的实验动物。简称无特定病原体动物或SPF 动物。饲养条件：屏障系统内大规模生产/隔离器内保种。 2.无菌级动物:饲养条件：无菌隔离器内/无菌级大鼠和小鼠比普通级寿命长。普通级动物受辐射后往往是由于细菌感染引起的并发症而造成动物死亡，无菌级动物不存在这一问题，抗辐射的耐受量高。
《毒理学实验》课程大纲 课程代码： 课程学分：2 课程总学时：28 适用专业：生物科学专业 一、课程概述 1．课程性质 毒理学是利用医学实验动物学、分子生物学、遗传学、免疫学、细胞学以及病理学等相关学科的技术，从预防医学的角度，研究人类生产和生活活动中可能接触的外源化学物对机体的生物学作用，特别是损害作用及其机理，为制定防治措施和制定使用标准提供科学依据，并做出安全性评价、为科学管理提供指导的一门应用科学。 2．课程背景 在环境污染和环境安全问题日趋严重的今天，毒理学已经也应该作为一门人类的生存常识课程开设了。外源化学物几乎在时时刻刻、方方面面威胁、损害着我们的身体。尽早尽快地了解毒理学知识，是认识、预防、治疗外源化学物损伤的前提，是做好管理和正确使用的基础，是保证环境安全和食品安全的必要条件。 3．课程价值 通过本课程的学习，可使学生了解身边的有害物质及其对人体的危害方式，掌握毒理学的基础理论、基本知识和基本技能，初步熟悉毒理学的原理，概念和应用，并对毒理学的国内外新成就和发展有所了解，为学生预防身边有害物质的侵害提供方法，为政府制定防治措施和制定使用标准提供科学依据，为进一步学习有关学科打下毒理学的基础。 二、设计理念与开发思路
1．设计理念 毒理学是研究人类生产和生活活动中可能接触的外源化学物对人体的损害作用及其机理的科学。本课程是为保护人类健康而设计，它可以为预防和治疗现代频发高发的人类疾病提供基本的思路和方法。2．开发思路 面向全体学生,注重素质教育；整体设计目标,体现灵活开放；突出学生主体,尊重个体差异；倡导目标驱动,强调体验实践；注重过程评价,促进学生发展；开发课程资源,拓展学用渠道。 三、课程目标 （一）课程的总体目标 为获得保护自己、他人乃至全人类的健康的知识和技能的需要和进一步增强和增加保护环境的意识和行动而使学生较全面地理解和掌握毒理学基本概念、基本原理和基本技能。在学习过程中注重培养学生热爱生命、保护环境的道德理念，使学生能够认清潜伏在我们身边环境中、甚至日常生活和每天饮食中能经常伤害到我们身体的有毒有害物质，培养学生增强自我保护同时也珍爱他人，免受身边有毒有害物质伤害的能力，并注意引导和培养学生学会使用自学大纲、教科书和教学参考书，不断提高学生的动手能力、自学能力、语言表达能力和创新意识。 (二)具体目标 1、知识目标 （1）培养学生掌握毒理学及实验的基础知识。 （2）使学生能够认识和掌握潜伏在我们身边环境中、甚至日常生活和每天饮食中能经常伤害到我们身体的有毒有害物质。 （3）培养学生能运用所学知识对世界范围内特别是我国癌症、心脑血管疾病高发频发予以合理的解释并能给出一些预防方法的建议。 （4）培养学生能了解本课程的实际应用和发展动态。
实验动物的研究现状及发展趋势 连孝俐 西南大学荣昌校区动物医学系重庆荣昌 402460 摘要：生命科学发展的初始阶段，对实验动物定义较为简单，指凡是科学研究中用作试验的动物均是实验动物。后来随着生命科学的日益发展，对实验动物定义有了规范而严谨的表述。实验动物，是指人工饲养、对其携带的微生物实行控制、遗传明确或者来源清楚的，用于科学研究、教学、生产、检定及其他科学实验的动物。实验动物是生命科学和医学科研的基础和重要的支撑条件；实验动物质量的好坏，对生物制品产品质量的优劣起着十分重要的用；实验动物对相关领域有重大的推动作用,包括制药工业、轻工业与食品工业、农业和畜牧兽医及国防和军事科学等方面。随着人类的进步和社会的发展，实验动物越来越被世界各国重视，而且对各国的国民经济建设和高新技术的发展发挥了重要作用，其发展和应用程度是衡量一个国家和地区科学技术水平高低的重要标志之一。 关键词：实验动物；研究现状；发展趋势 1 实验动物的研究现状 1.1 实验动物在兽医生物制品生产、研究和检测中的应用 1.1.1 实验动物在兽用生物制品生产中的应用 兽用生物制品是用天然或人工改造的微生物、寄生虫、生物毒素或生物组织及代谢产物等为原料，采用生物学、分子生物学或生物化学等相应技术制成的生物活性制品，用于预防、治疗和诊断畜禽等动物传染病。兽用生物制品的生产与检验离不开实验动物及其动物性原材料，包括实验动物、鸡胚、动物血清、细胞等[1]。 1.1.2 实验动物在兽用生物制品研究中的应用 用于兽用生物制品研究、生产和检验的实验动物，全世界每年至少有几百万之多，其中20％用于新产品研究和开发旧。在兽用生物制品研究中，包括兽用疫苗菌(毒、虫)种的选育、免疫学研究、常规疫苗和基因工程疫苗研究、传统和新型抗体及诊断技术研究、安全评价以及建立传染性疾病的动物模型等方面都直接或间接利用实验动物[2]。可见实验动物对于各种兽医生物制品的研究具有无可替代的作用。 1.1.3 实验动物在兽用生物制品质量检验中的应用 兽用生物制品质量检验主要包括菌(毒、虫)种的制备与鉴定、无菌检验、支
辅助降血糖作用检验方法 1动物实验 1、1动物选择 选用健康成年动物,常用小鼠(25±2g)或大鼠(180±20g),单一性别,大鼠每组812只、小鼠每组1015只。 1、2材料 1、2、1试剂 四氧嘧啶(或链脲霉素)小鼠3550mg/kg、bw、iv(100160mg/kg、bw、ip)、大鼠5080mg/kg、bw、iv(200250mg/kg、bw、ip)用新鲜配制。 血溏测定试纸或试剂盒。 1、2、2仪器 血糖仪、全自动生化仪、721B型分光光度计。 1、3剂量分组及受试样品给予时间 设1个溶剂对照组与3个受试样品剂量组,根据人体每日每公斤体重推荐摄入量,小鼠扩大10倍作为其中一个剂量组(大鼠扩大5倍),根据受试样品得具体情况另设两个剂量组。受试样品给予时间原则上不少于30天,也可根据实验需要自行设定期限。 1、4实验方法 1、4、1降低空腹血糖实验 1、4、1、1高血糖模型动物 1、4、1、1、1原理 四氧嘧啶(或链脲霉素)就是一种β细胞毒剂,可选择性地损伤多种动物得胰岛β细胞,造成胰岛素分泌低下引起实验性糖尿病。 1、4、1、1、2造型 动物禁食24小时后,给予四氧嘧啶造型,57天后禁食35小时,测血糖,血糖值1025mmol/L为高血糖模型成功动物。 1、4、1、1、3操作步骤 选高血糖模型动物按禁食35小时得血糖水平分组,随机选1个模型对照组与3个剂量组(组间差不大于1、1mmol/L)。剂量组给予不同浓度受试样品,模型对照组给予溶剂,连续30天,测空腹血糖值(禁食同实验前),比较各组动物血糖值及血糖降低得绝对值(即实验前后血糖得差值)。 1、4、1、2正常动物 选健康成年动物按禁食35小时得血糖水平分组,随机选1个对照组与1个受试样品组(高剂量)。余操作同1、4、1、1、3。 1、4、2糖耐量实验 高血糖模型动物禁食35小时,剂量组给予不同浓度受试样品,模型对照组给予同体积溶
药物毒性试验指标 1.急性毒性试验 一、半数致死量（LD50）的测定 (一)目的:观察受试物一次给予动物后，所产生的毒性反应和死亡情况。 (二)动物分组和剂量 1.动物:一般用小白鼠8周龄，体重18---22g(同次试验体重相差不超过2g)大白鼠6~8周龄，体重120--150g，同次试验体重相差不超过10g。 2.受试物:溶于水的做成溶液，不溶于水的做成混悬液. (三)试验方法 1.剂量:一般选用3一5个剂量，各剂量间剂距根据受试物情况和预试结果而定。 2.给药途径和容积: 给药途径:应与临床试验的途径相一致。口服药物应灌胃给药，一、二类新药应采用两种途径给药，其中一种应为推荐临床研究的给药途径。水溶性好的药物还应测定静脉给药的急性毒性。 给药容积:小白鼠禁食(12~16小时)，不禁水，按体重计算:灌胃(ig)不超过0. 4ml/ 10g 体重。大白鼠禁食(12~16小时)，不禁水、灌胃(ig)，不超过3ml/只。 3.测定LD50:将动物按体重随机分组，每组至少10只(雌雄各半)。给受试物后立即观察动物反应情况，每天观察一次连续观察七天。详细逐天记录动物毒性反应情况及死亡分布，并用适当的统计学方法(申报时应说明方法名称)计算出LD50值及95%可信限。 4.观察毒性反应:给受试物后应严密观察反应情况，并记录动物的外观、行为活动、精神状态、食欲(饲料消耗量)、大、小便及其颜色、被毛、肤色、呼吸、鼻、眼、口腔有无异常分泌物，体重变化以及死亡等情况。死亡动物应及时进行尸检，发现病变器官应做病理组织学检查。 若发现中毒反应或死亡率一与动物的性别有明显相关时，则应选择性别敏感的动物进 行复试。 (四)试验报告和结果评价 应详细具体，包括试验日期、动物的规格、性别、数量、受试物来源及含量、试验方法。
动物实验替代方法 摘要：为了解决生命伦理学与动物实验的冲突,人们提出了动物实验替代方法。动物实验替代方法包括减少、替代和优化。在不断地实验操作过程中，科研人员对“减少”技术、“替代”技术、“优化”技术进行了深入研究，并提出了一系列可行的方法。 动物实验对科学研究而言是个重要的过程，是生命科学研究中必须采用的手段，对生物医学的发展起着十分重要的作用，但随着社会的发展、科技的进步和人类道德水准的提高，动物实验伦理问题引起了人们广泛的关注。为了解决生命伦理学与动物实验的冲突，动物实验替代方法被提出。 动物实验替代方法包括：减少科学研究活动中的动物使用量；探索能够达到相同目的或获得相同结果的动物实验替代方法；采用一切可行的技术和手段，使动物免受试验所造成的痛苦、不安和疼痛或和改善生活环境，从而提高动物生存质量的优化方法，是动物实验替代方法的核心内容。 一、减少 减少是指在科学研究中，使用较少量的动物获取同样多的试验数据或使用一定数量的动物能获得更多试验数据的科学方法。 1．已有研究数据的利用 在许多情况下，是否要进行某项动物实验取决于已有的动物实验结果。这是因为要检验的假设可以从已获得的实验结果中推断出来，重复性研究无任何科学价值。 获得科学数据的来源有很多，包括科学期刊、专业书籍、专题论文集、综述性文章、专题报告、参考手册、引文索引和数据参考书等。在当今计算机技术日新月异、快速发展的时代，已使科学信息和研究数据的储存、交换和查询发生了根本性的变化。在一些专业网站和数据库里，可以查到大量与动物实验和替代方法有关的文献资料，可以满足从事不同研究的科技人员的需要。 2．实验数据的统计分析 实验结果的统计学分析既可以减少动物的使用量，又可获得更加准确的结果。反之，将会导致动物实验科学研究及其它生物医学研究领域自然科技资源的浪费。 运用统计学方法对动物实验数据（包括计量资料和计数资料）进行分析，可使我们了解到动物实验结果的可信度和科学性，以确定是否需要做补充实验，实验结果是否可以被应用。如果实验结果有统计学的意义，可减少盲目性的重复实验，避免实验动物资源的浪费。 3．替代方法的使用 替代方法是指在能够达到同样目的的前提下，通过科学程序确认，利用非动物的体外方法代替动物或使用低等动物替代高等动物的实验方法。这些替代方法主要包括离体的组织器官和组织细胞培养、化学物理方法、分子生物学方法、微生物学方法和免疫学方法以及各种先进的技术方法。 4．动物的重复使用 动物的重复使用可以减少科研工作中动物的使用量。 5．选择高质量的动物 实验动物质量直接影响实验结果，必须按照标准化要求选用遗传质量和微生物质量合格的实验动物。实验动物遗传物质决定着生物学性状，即便是同一近交系动物，其生物学特性（包括生理、生化参数等）也会有所变化，反应在实验数据上可能差别更大。发生遗传污染的实验动物就更无法取得可靠的实验结果。 6．制定标准操作规程（SOP），提高动物实验成功率 动物实验成败与否受多种因素的影响，其中实验过程中的操作标准化至关重要。实验中每一操作步骤都对最终的实验结果产生直接的影响。因此，对任何实验来讲，制定并在实验进行中严格执行SOP是实验人员应给予高度重视的问题。 二、替代 替代是指使用没有知觉的实验材料代替活体动物，或使用低等动物替代高等动物进行试验，并获得相同实验效果的科学方法。 1．体外培养技术 体外培养包括器官培养、组织培养和细胞培养。器官培养是指用和组织培养相似的条件，培养器官的原基、器官的一部分或整个器官，使之在体外生存、生长和保持一定功能的方法。如应用重建的皮肤作为动物实验的一种替代方法，研究皮肤腐蚀和刺激物筛选。