马铃薯茎线虫的培养_徐进军

马铃薯腐烂茎线虫在甘薯上的形态鉴定马铃薯腐烂茎线虫（Ditylenchus destructor）是一种全世界分布广泛的植物寄生性动物，广泛存在于农作物种植区域，主要危害马铃薯等根茎作物，可导致茎瓤叶变黑枯死，经济损失极大。

甘薯也是马铃薯腐烂茎线虫的宿主之一，但往往出现子母不对应，鉴定和认定被感染者时，要视具体情况进行实地鉴定。

马铃薯腐烂茎线虫可以使甘薯叶片与叶脉变黑、潮烂，也可以出现蔫萎、绿叶变白、表皮粗糙等症状。

也可能出现灰白色的病斑，病斑处经过按压或抠取时会检查到狭长的成虫或褐色的卵。

此外，甘薯根中的马铃薯腐烂茎线虫也可能长期潜伏，成熟者不能很容易被发现，因而检疫要特别当心，及早发现和防治。

为了准确鉴定马铃薯腐烂茎线虫存在情况和治疗情况，需先进行常规检查和实验室检测，同时进行模拟试验，全面分析对马铃薯腐烂茎线虫影响因素所造成的蔓延状况，根据检查结果及时采取合理的防控措施。

我们可以利用细胞凝聚和入侵的实验，进行靶物的分离、检测，采用荧光显微镜观察叶片上卵和幼虫的形态特征，及时确认病原及其传播蔓延情况，并采取科学的防控措施，尽早控制病害的发展和经济损失，确保农作物的平安产量。

鉴定马铃薯腐烂茎线虫在甘薯上的形态首先应到种植或病害发生原位查看，关注甘薯叶片是否出现植物萎蔫发黄、叶肉变黑等症状，出现有病斑的话，应将病斑取出及时浸泡，以提高动物的表观密度。

同时，应采用洗涤的方法将病斑表面的植物残渣洗净，然后仔细观察叶片表面，可以发现褐色粒状的卵、灰白色的成虫，以及褐色小虫、灰褐色小虫等，经过确认就可确定马铃薯腐烂茎线虫感染情况。

另外，还可以进行发芽实验，将病害发生区甘薯叶片在75℃水里浸泡，共浸泡2小时，再将其浸出，移植到湿土中，用文房四宝在植物叶片下编号，每天清洗观察包含的褐色卵和灰白色的成虫是否孵化，若有，则说明病情严重平时动物积累已达到有感染的程度。

综上所述，用于鉴定马铃薯腐烂茎线虫在甘薯上的形态，需要对植物叶片、叶肉、病斑进行一一分析查看，结合发芽实验和显微镜查看，观察褐色的卵和灰白的成虫，并采取有效的防控措施，及时鉴定并处理马铃薯腐烂茎线虫在甘薯上的形态。

甘肃定西马铃薯腐烂茎线虫的发生、病原学研究及品种抗性评价甘肃定西马铃薯腐烂茎线虫的发生、病原学研究及品种抗性评价引言：甘肃定西地区是中国马铃薯的主要种植区之一，然而，近年来马铃薯腐烂茎线虫病却严重威胁着该地区的马铃薯产量和质量。

该病害在甘肃定西地区广泛分布，严重影响了当地的马铃薯产业发展。

因此，对该病害的发生机制、病原学特性以及马铃薯品种的抗性进行研究具有重要意义。

一、马铃薯腐烂茎线虫的发生机制1.1 天气因素对病原菌的影响研究发现，温暖湿润的气候条件是马铃薯腐烂茎线虫大量繁殖的适宜环境。

高湿度和高温度会促进线虫发育并加速病害的传播速度。

1.2 马铃薯种薯处理与传播马铃薯种薯是马铃薯腐烂茎线虫传播的重要途径。

研究发现，使用受感染的种薯种植会导致腐烂茎线虫病的迅速蔓延，因此，使用健康的种薯是控制病害的关键。

二、马铃薯腐烂茎线虫的病原学特性2.1 病原菌的形态特征马铃薯腐烂茎线虫根据形态特征可分为雌、雄两性。

雌虫头部小，体长约0.2mm，背部有13纵行状毛带。

雄虫体型较小，约0.15mm，呈弯曲状，体后部有尾刺。

2.2 病害症状表现受感染的马铃薯植株表现为根部呈黑褐色腐烂，根系受损，影响植株正常摄取水分和养分，导致植株整体生长衰弱，最终导致减产甚至死亡。

三、马铃薯品种的抗性评价3.1 选择抗性较强的品种通过测试不同品种的抗性，可以根据植株的生长状况、根系的腐烂情况等指标评价其抗病性能。

选择抗性较强的品种进行大面积种植，可以有效防止病害蔓延。

3.2 强化病害管理措施除选择抗性较强的品种外，还应采取科学的病害管理措施，如地块轮作、适时排水排涝、合理用药等，以进一步加强对马铃薯腐烂茎线虫的防治。

结论：甘肃定西地区马铃薯腐烂茎线虫的发生与气候因素、种薯处理等因素密切相关，病原菌形态特征和病害症状表现已被初步研究明确。

通过对品种的抗性评价，可以选择适应该地区气候特点且抗性较强的品种进行种植，结合科学的管理措施，有望有效控制该病害的发生和传播，保障马铃薯产业的健康发展综上所述，马铃薯腐烂茎线虫的形态特征包括雌虫头部小、体长约0.2mm，背部有13纵行状毛带，雄虫体型较小约0.15mm，呈弯曲状，体后部有尾刺。

马铃薯块茎腐烂线虫发生与防治承德市北部的丰宁、围场两县年种植马铃薯4万余公顷，年产种薯、商品薯8亿余千克，冬季储薯1.2亿千克左右，是全国四大马铃薯生产墓地之一。

近年来，由于马铃薯块茎腐烂线虫的危害造成很大储薯损失，1994年造成储薯损失5%～7%，为害严重的薯窖造成损失高达20%～30%。

根据目前所检索到的资料来看，此种线虫广泛分布于亚洲、欧洲、美洲及非洲马铃薯种植区，寄主范围广泛，对马铃薯储藏都构成不同程度的危胁，经过两年来的工作，摸索出发生规律与防治措施如下。

1.病原物及为害症状1.1病原物经显微镜鉴别确认为马铃薯块茎腐烂线虫。

1.2症状此种线虫在马铃薯生长期间只侵染其块茎，地上部无特殊症状，最初的直观症状是在薯块上出现淡白色的小斑点。

薯块的严重发病出现在储藏期，被侵染的薯块组织干枯，呈颗粒状，当整个薯块全部被侵染后，块茎表皮变得象纸一样薄，并裂开，薯块变干，重量损失80%以上。

且受线虫侵染的组织易被真菌造成二次浸染。

2.侵染循环2.1越冬越冬主要有三个途径：①广泛存活于土壤中，在马铃薯收获后营腐生生活。

②可在杂草及多种作物上寄生；③随种薯入窖越冬，并在来年随薯块入田里。

2.2侵染在马铃薯定植后，线虫自皮孔及芽眼附近的表皮进入幼小的马铃薯块里。

在马铃薯生育前期，只有少量线虫侵入薯块的皮下组织里，在块茎膨大及成熟期，在薯块上形成很小的白色斑点，大量线虫存在于病健交界处，病斑下面的组织软化并呈颗粒状，当薯块收获后，线虫随薯块入窖，一旦入窖较早或储藏量过大，大量产生呼吸热而导致温度升高时.线虫便严重发生，更多的块茎组织受到危害，并导致青霉、曲霉等病菌对薯块造成的二次感染。

2.3适宜温湿度①温度。

此线虫在5～34℃的范围内均可发育，在大田情况下，在-28℃的低温下仍可存活。

②湿度。

适宜相对湿度为90%～100%，在相对湿度低于40%时，对此线虫基本不造成危害。

3.防治措施3.1带药播种使用5%杜耳颗粒剂，按每667平方米4～5千克，采取穴施法，在播薯时同时施入田里。

腐烂茎线虫对马铃薯块茎危害症状及其线虫分布研究王宏宝;刘伟中;郭小山;李茹;熊战之;赵桂东【摘要】为了解马铃薯（Solanum tuberosum）块茎上腐烂茎线虫危害症状及线虫的侵染分布情况，通过室内在马铃薯上接种腐烂茎线虫进行了观察研究。

结果显示：接种腐烂茎线虫至马铃薯薯块上表现的症状除了马铃薯块茎表皮容易剥离外，其他症状表型如部分组织软化、变暗变黑、内陷外等与文献报道的基本一致。

镜检块茎坏死组织可见线虫发生量不大，原因可能与坏死组织营养严重流失、生存环境恶化不利于线虫生存有关；镜检块茎表皮层组织发现有大量成虫，大龄幼虫和卵聚集在表皮层和皮孔下的薄皮细胞及组织中，这对解释腐烂茎线虫对环境的适生性有一定意义；同时，在降低线虫数量方面，马铃薯病残体块茎以及表皮坏死组织应彻底清除，以有效降低线虫发生量。

【期刊名称】《长江大学学报（自科版）农学卷》【年(卷),期】2013(000)012【总页数】3页(P1-3)【关键词】腐烂茎线虫;马铃薯 (Solanum tuberosum);皮孔【作者】王宏宝;刘伟中;郭小山;李茹;熊战之;赵桂东【作者单位】江苏徐淮地区淮阴农业科学研究所，江苏淮安 223001; 南京农业大学植保学院，江苏南京210095;江苏徐淮地区淮阴农业科学研究所，江苏淮安223001;江苏徐淮地区淮阴农业科学研究所，江苏淮安223001;江苏徐淮地区淮阴农业科学研究所，江苏淮安223001;江苏徐淮地区淮阴农业科学研究所，江苏淮安223001;江苏徐淮地区淮阴农业科学研究所，江苏淮安223001【正文语种】中文【中图分类】S435.313+4;S435.32马铃薯腐烂茎线虫（Ditylenchus destuctor）是国际公认的检疫性线虫，也是严重危害马铃薯的重要病原之一［1］。

Kuhn首次观察并描述此线虫危害马铃薯块茎，引起马铃薯干腐病。

马铃薯腐烂茎线虫病是植物侵染性病害，被我国列入植物线虫检疫对象名录。

马铃薯金线虫病马铃薯金线虫病，又称马铃薯胞囊线虫病、马铃薯根线虫病。

〔病原学名〕HeteroderarostochinesisWollen.〔寄主作物〕马铃薯、番茄、茄子等。

〔病害诊断〕线虫主要在地下根部为害，一般地上部分症状并非特色明显可鉴。

常形成嫩叶苍白色、像缺肥或缺水的衰弱状，干旱条件下会产生萎蔫。

严重病株会造成矮化、早衰。

受害根部经常出现侧根增生，开花期症状尤其明显，根部表皮上叮着很多乳白或乳黄色的、略显半透明的小球形的雌虫虫体。

被害根部表皮常出现龟裂，易于受到其他腐生真菌或细菌的侵染而加剧枯亡。

致病线虫为马铃薯金黄线虫。

线虫雌雄异形。

雄虫体为线形，雌虫成虫近球形或洋梨形。

虫体分卵、幼虫、成虫三个历期。

幼虫具5个龄期。

雄雌虫体在成虫期才有形体上明显区别。

〔发病规律〕胞囊线虫以胞囊在土壤里越冬。

春天，胞囊内的卵在适宜条件下开始孵化，一龄幼虫在卵壳内生活，至二龄期幼虫破卵而出，作为侵染期幼虫，侵入植株根部，取食发育，而后连续3次蜕皮，发育为成虫。

雌成虫膨大，突破组织外露，仅头颈部可附于根部。

雄成虫离开根并与雌虫交配。

雌成虫受精后体积增大呈近球形，颜色变深，体壁变厚，内中充满虫卵（约500粒）。

马铃薯收获后，胞囊保留在土壤里越冬。

线虫喜于较低的土壤温度、通气良好的土质以及相对潮湿的条件。

幼虫在10℃时开始活动，16℃时根部受侵染严重，26℃时线虫发展受到抑制，故冷凉地区病害严重。

土质上中等黏土、排水良好和通气的砂壤土、含水50%～70%的泥炭土等适合线虫活动。

胞囊内的卵抗干燥，可存活20年之久，病土、附带有胞囊的种薯、器具，均可远距离传播线虫。

品种间抗性有差异。

〔防治措施〕（1）严格检疫措施。

此病为检疫性病害，应严加限制从疫区调运带虫种薯。

（2）合理进行轮作。

重病地区和非寄主作物实行5年以上的轮作，水旱轮作效果更优。

（3）选种抗病品种。

对压低病情有一定效果。

（4）进行土壤消毒。

播种时每667平方米用3%克线磷5千克拌土后穴施，效果明显。

甘肃定西马铃薯腐烂茎线虫的发生、病原学研究及品种抗性评价马铃薯腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor)是马铃薯贮藏期的一种重要病害,也是一种重要的全球检疫性有害生物,严重威胁马铃薯的生产。

本研究对甘肃省定西地区马铃薯腐烂茎线虫(D.destructor)的发生危害、种类鉴定、培养条件、侵染规律和抗性评价等方面进行了研究,主要研究结果如下:1.2014年12月和2015年3月,采集甘肃省定西地区马铃薯腐烂茎线虫病样,对马铃薯腐烂茎线虫为害马铃薯的症状进行观察和描述,并采用随机抽样的方法对该病在甘肃省定西地区的发生情况进行调查。

调查结果表明,甘肃定西地区马铃薯腐烂茎线虫病的发病率为2-11%,病情指数为0.72-5.33;品种间的发病程度差异较大,其中青薯9号和荷兰15号的发病程度显著高于其它品种。

2.采用形态学结合分子生物学的方法对甘肃定西马铃薯上的4个线虫群体进行了鉴定,利用UPGMA法构建线虫群体ITS序列的系统发育树,并按照柯赫氏法则进行了致病性测定。

结果表明,4个线虫群体在形态学上与马铃薯腐烂茎线虫一致,但群体DX27与群体DX11、DX16、DX19存在差异。

利用通用引物TW81/AB28扩增rDNA-ITS 序列获得了长度均为915 bp的片段;序列比对分析表明,群体DX27与其它3个群体相比,在ITS1区的96-255 bp片段内有25个位点的差异;系统发育树显示,群体DX27与马铃薯腐烂茎线虫C型群体聚为1支,群体DX11、DX16、DX19与马铃薯腐烂茎线虫B型群体聚为1支。

根据形态学特征及rDNA-ITS序列分析结果,将该病原线虫确定为马铃薯腐烂茎线虫,其中群体DX27属于C型,群体DX11、DX16、DX19属于B型。

3.选用茄镰刀菌(Fusarium solani)、轮枝镰刀菌(F.verticillioides)、尖孢镰刀菌(F.oxysporum)、半裸镰刀菌(F.semitectum)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)、交链孢(Alternaria alternate)和茄链格孢(A.solani)等8个真菌菌株,在15℃、20℃、25℃和30℃4个温度梯度下对马铃薯腐烂茎线虫的最佳室内培养条件进行筛选。

几种植物提取物对马铃薯茎线虫的活性与有效组分分离
为寻找环境友好杀线虫剂,本文以马铃薯茎线虫(Ditylenchus Destructor Thorne)为靶标,采用室内离体生物活性测定方法,对14种植物的杀线虫活性进
行了筛选与验证。

同时,对筛选出杀线虫活性较高的植物银杏的杀线虫活性组分进行了初步分离;作为比较,研究了15种植物源化合物对马铃薯茎线虫的活性,
旨在为植物性杀线虫剂的研究与开发提供理论依据。

结果如下:1.室内离体生物活性测定结果表明:14种植物中,3种不同提取物的杀线虫活性都在90%以上的植物是银杏和马樱丹;而银杏、黄荆和苘麻对马铃
薯茎线虫的活性是首次报道。

各植物均以强极性甲醇溶剂与中等极性乙酸乙酯溶剂的提取物的杀线虫活性较强,说明几种杀线虫植物的杀线虫活性成分主要存在于强极性或中等极性提取物中。

2.不同方法制备银杏苯提取物的杀线虫活性间存在显著性差异,即银杏苯提取物的杀线虫活性与不同提取方法的提取率之间存在一定的相关性。

银杏中生物碱的杀线虫活性不高,其杀线虫活性成分主要存在于苯提取物的石油醚萃取物中。

3. 15种植物源化合物对马铃薯茎线虫的毒力测定表明:DL-薄荷醇、香茅醇等10种化合物对马铃薯茎线虫表现出较高的活性;而苦豆碱、苦参碱、毒扁豆碱、对苯二酚与间苯二酚则活性较低。

槐定碱、槐胺碱和槐果碱3种化合物对马铃薯茎线虫表现出快速击倒性,但部分被击倒线虫会随处理时间的延长而复苏,表明
此3种化合物对马铃薯茎线虫的毒杀作用是可逆的。

不同药剂对马铃薯腐烂茎线虫的防治效果作者：黎明泉来源：《广东蚕业》 2020年第10期DOI：10.3969/j.issn.2095-1205.2020.10.17黎明泉（吉林省德惠市植物检疫站吉林德惠 130303）作者简介：黎明泉（1970- ），男，汉族，吉林德惠人，大专，研究方向：农学。

摘要马铃薯如果感染腐烂茎线虫，即便伤害比较轻，也会导致减产20%左右，重度会减产55%～83%，甚至没有收获，这对农户而言简直是一种灾难。

对马铃薯腐烂茎线虫要以预防为主，治疗为辅，在防治工作中可以使用的药剂有多种，效果也各有不同。

关键词不同药剂；马铃薯；腐烂；茎线虫；防治效果中图分类号:S435.32 文献标识码:A 文章编号:2095-1205(2020)10-43-02马铃薯茎线虫病又称糠心病，也被形象地称为空心病等，它对马铃薯生产的影响很大，甚至会带来毁灭性灾难。

通过人工接种试验，研究了在自然条件下马铃薯幼苗使用浓度为1.8%的阿维菌素、浓度为20%的磷酸酯和浓度为20%的硫代磷酸酯所起到的保护作用，以及对马铃薯茎线虫病所产生的治疗效果。

1 材料和方法1.1 用于实验的线虫与马铃薯品种对马铃薯腐烂茎线虫的预防和治疗采自受线虫侵染已经患病的马铃薯。

实验之前对患病的马铃薯进行处理，将其切成约1 cm3的小块，长宽高都是1 cm，放到浅盘中，加入适量的灭菌水，之后将分离出来的线虫使用浓度为0.5%的硫酸链霉素消毒处理，再使用灭菌水对线虫进行冲洗，至少3 次，之后将线虫溶液接种到高度感病的马铃薯品种，使用石蜡将口封住。

在培养箱中培养，要求处于25 ℃环境，1个月后使用浅盘将线虫再一次分离，放到浓度为0.5%的NaCIO溶液中进行消毒处理，大约1 min后，再用灭菌水进行3 次冲洗，对线虫液浓缩处理。

1.2 用于实验的药别及药品的配制浓度为1.8%阿维菌素乳油45.90线虫，浓度为20%的辛硫磷乳油质量为180 μg/ml，浓度为20%丁硫克百威乳油质量为500 μg/ml。

马铃薯腐烂茎线虫对低剂量杀线虫剂的适应性研究马铃薯腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor)是引起植物病害的主要病原物之一,每年都会给农业生产带来巨大的损失。

已有大量的杀虫剂相关文献报道指出低剂量杀虫剂可提高害虫对环境的适合度,从而诱导害虫再猖撅加重危害。

为此,本研究拟应用杀线虫剂阿维菌素、丙溴磷和涕灭威三种药剂,在低剂量条件下探讨药剂对马铃薯腐烂茎线虫的侵染活性的影响,同时研究热激蛋白70在化学农药胁迫下的诱导表达,初步探讨其生化机制,为进一步理解植物寄生线虫在低剂量杀线虫剂胁迫生境中的适应性以及合理使用杀线虫剂提供基础数据和科学依据。

本研究以Pluronic(?)F-127凝胶为培养基质,对马铃薯腐烂茎线虫分别采用2种处理方式来评价药剂的活性：1是将马铃薯腐烂茎线虫接种至含系列浓度药剂的基质与胡萝卜苗共培养；2是先将线虫采用系列浓度药液处理再接种至基质与胡萝卜苗共培养。

分别于14天后采用酸性品红染色,观察阿维菌素、丙溴磷、涕灭威3种杀虫剂对马铃薯腐烂茎线虫侵染胡萝卜苗的影响。

研究结果表明,2种不同处理方式对药剂活性的影响基本一致。

供试药剂中涕灭威对马铃薯腐烂茎线虫侵染的抑制活性最高,丙溴磷次之,阿维菌素的抑制活性较低。

本研究还采用RT-PCR和RACE技术克隆了马铃薯腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor)三个热激蛋白70基因,分别命名为Dd-Hsp70-A (GenBank登录号KF792307)、 Dd-Hsp70-C(GenBank登录号JQ422276)和Dd-Hsp70-F (GenBank登录号JQ422277),并利用Real-time PCR检测了马铃薯腐烂茎线虫经低剂量(10、1、0.1、0.01和0.001μg/mL)杀线虫剂阿维菌素、丙溴磷和涕灭威处理24h后,三个热激蛋白70基因表达量的变化。

结果表明,Dd-Hsp70-A基因的cDNA全长为2081bp,开放阅读框为1938bp,编码了645个氨基酸；Dd-Hsp70-C基因的cDNA全长为2436bp,开放阅读框为2019bp,编码了672个氨基酸；Dd-Hsp70-F基因的cDNA全长为2092bp,开放阅读框为1959bp,编码了652个氨基酸。

编辑：王勇***********************水产养殖600～800 毫升/100公斤种子，或400克/升萎锈・福美双悬浮种衣剂200～300毫升/100公斤种子，或35克/升精甲・咯菌腈悬浮种衣剂245～430毫升/100 公斤种子包衣。

⑵生长期防治。

花生结荚期，用25%咪鲜胺乳油200 毫升/亩，或250 克/升嘧菌酯悬浮剂60毫升/亩，或39%精甲・嘧菌酯悬浮剂50～100毫升/亩进行滴灌或灌根。

4.建立生产档案。

应建立田间生产技术档案，对病害防治及相关环节所采取的主要措施进行详细记录，并保存两年以上。

根结线虫病是马铃薯连作减产的主要原因之一。

为研究根结线虫病的农艺防治措施，云南农业大学薯类作物研究所开展了品种抗性评价及稻、薯轮作和土壤淹水下的线虫消减动态研究。

结果表明，马铃薯与水稻轮作可完全控制马铃薯根结线虫病。

抗性评价试验表明，18个品种(系)中没有筛选到同时抗南方根结线虫和爪哇根结线虫的材料，品系1002-1和品种丽薯6号相对抗性较好，青薯9号和合作88相对敏感。

马铃薯根结线虫发病土壤中可同时检测到卵、幼虫和成虫等不同形态。

水旱轮作试验表明，经一茬水稻栽培便可使土壤中根结线虫虫态完全消失，再种植马铃薯也不会发生根结线虫病，且马铃薯有效产量显著提高。

青薯9号、合作88和丽薯6号的单株有效产量较对照分别提高50.5%、43.7%和26%，差异均极显著；1002-1单株有效产量与对照差异不显著。

由此可见，稻、薯轮作根结线虫防治效果明显。

为进一步探索水旱轮作的防治机制，观察了土壤淹水进程中各种虫态消减动态。

结果表明，在淹水过程中，根结线虫的卵、幼虫和成虫不同虫态此消彼长，要淹水60天文/ 山东省宁阳县农业农村局 刘刚稻薯轮作可控制马铃薯根结线虫病编辑：杨风光**************文/ 阳光特色小麦新品种以上，土壤中才检测不到所有形态虫体。

水早轮作中水稻生长期淹水时间足够长，才满足防治线虫的淹水条件。

(10)申请公布号 CN 102318585 A(43)申请公布日 2012.01.18C N 102318585 A*CN102318585A*(21)申请号 201110128860.X(22)申请日 2011.05.18A01K 67/033(2006.01)A23K 1/18(2006.01)A23K 1/14(2006.01)(71)申请人江苏徐淮地区淮阴农业科学研究所地址223001 江苏省淮安市清河区淮海北路104号(72)发明人王宏宝 梁照文 李茹(74)专利代理机构淮安市科文知识产权事务所32223代理人谢观素(54)发明名称一种纯化培养甘薯腐烂茎线虫的方法(57)摘要本发明公开了一种纯化培养甘薯腐烂茎线虫的方法，包括下列步骤：（1）线虫的准备。

在40×体式显微镜下用针挑取腐烂茎线虫种群雌虫放在玻片上，在100×显微镜下进一步确认为受孕雌虫，然后放到器皿中备用；（2）纯化培养。

将整薯横向或纵向切开，在其中的一个断面上打孔，在每个孔里注入少许无菌水，以不溢出孔为准，之后将步骤（1）得到的腐烂茎线虫，一条接入一个小孔内，再将切下的薯块做为天然保湿盖盖在接入腐烂茎线虫后的薯块上，用石蜡将边缘缝隙密封好，并用弹性材料捆绑后放置在培养箱里，于25℃培养30天，用直径为13毫米打孔器将接种过线虫的小孔取下分别进行线虫分离。

本发明方法简单、容易操作、工作量小，更为重要的是获得的群体纯度高、生命力好，为系统研究该线虫的生物学特性、致病机理、种群群体及个体的遗传变异等工作的提供了保证。

(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 1 页1.一种纯化培养甘薯腐烂茎线虫的方法，其特征在于包括下列步骤：（1）线虫的准备在40×体式显微镜下用针挑取腐烂茎线虫种群雌虫放在玻片上，在100×显微镜下进一步确认为受孕雌虫，然后放到器皿中备用；（2）纯化培养将整薯横向或纵向切开，在其中的一个断面上打孔，在每个孔里注入少许无菌水，以不溢出孔为准，之后将步骤（1）得到的腐烂茎线虫，一条接入一个小孔内，再将切下的薯块做为天然保湿盖盖在接入腐烂茎线虫后的薯块上，用石蜡将边缘缝隙密封好，并用弹性材料捆绑后放置在培养箱里，于25℃培养30天得到若干纯腐烂茎线虫。

马铃薯茎线虫Ditylenchus destructor Thorne,1945的描
述
刘维志;刘清利;尼秀媚
【期刊名称】《青岛农业大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2003(020)001
【摘要】1995～2002年期间,在辽宁省、吉林省、河北省、山东省的多种植物的根际土壤里发现马铃薯茎线虫Ditylenchus destructor Thorne,1945,并做了详细的形态描述.
【总页数】3页(P1-3)
【作者】刘维志;刘清利;尼秀媚
【作者单位】莱阳农学院植保系,山东,莱阳265200;美国加里福尼亚大学戴维斯分校;莱阳农学院植保系,山东,莱阳265200
【正文语种】中文
【中图分类】S154.38+6
【相关文献】
1.土壤中的食菌茎线虫Ditylenchus myceliophagus Goodey,1958的描述 [J], 刘维志;刘清利
2.三形茎线虫 (Ditylenchus triformis Hirschmann ＆ Sasser,1955)的描述 [J], 刘维志;刘清利
3.中国茎线虫属rn(Ditylenchus)rn线虫种类的鉴定 [J], 刘清利;刘维志;刘晔;赵洪
海
4.甘薯茎线虫(Ditylenchus destructor)对甘薯定向行为研究 [J], 徐振;杨冬静;张成玲;赵永强;孙厚俊;谢逸萍
5.腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor Thorne,1945)生物学研究进展 [J], 赵洪海;梁晨;张浴;段方猛;宋雯雯;史倩倩;黄文坤;彭德良
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腐烂茎线虫的培养李世通;肖顺;章淑玲;周峡;张绍升【摘要】采用长柄链格孢和茄病镰刀菌进行培养腐烂茎线虫的比较试验,接种量为20条,在27℃黑暗条件下培养60d.结果表明,长柄链格孢适合培养腐烂茎线虫,线虫的培养量平均为26800条·管-1.【期刊名称】《福建农林大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2014(043)001【总页数】3页(P11-13)【关键词】腐烂茎线虫;长柄链格孢;培养【作者】李世通;肖顺;章淑玲;周峡;张绍升【作者单位】福建农林大学植物保护学院,福建福州350002;福建农林大学植物保护学院,福建福州350002;福建农林大学植物保护学院,福建福州350002;福建农林大学植物保护学院,福建福州350002;福建农林大学植物保护学院,福建福州350002【正文语种】中文【中图分类】S432.4+5腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor Thorne)是农作物上重要的病原线虫，主要为害马铃薯块茎和甘薯块根.在我国，腐烂茎线虫主要引起甘薯糠心病，一般可导致其减产20%－50%，重者则达80%以上，甚至绝收，在储藏期还可引起烂窖［1－2］.研究表明，腐烂茎线虫可与尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)在甘薯上形成显著的复合侵染;茄病镰孢(F.solani)也可以通过茎线虫造成的伤口侵染，加重甘薯病害的发生［3］.研究腐烂茎线虫的生物学特性、致病机理、遗传特点及防治技术等都需要大量的线虫群体，因此，掌握能够大量培养腐烂茎线虫的方法是非常必要的.用真菌培养腐烂茎线虫操作简单，培养量大，是目前常用的培养方法.已报道的可培养茎线虫的真菌有链格孢菌(Alternaria spp.)、镰刀菌(Fusarium spp.)、弯孢霉菌(Curvularia spp.)、葡萄孢菌(Botrytis spp.)、丝核菌(Rhizoctonia spp.)等［4］.本试验采用长柄链格孢(A.longipes)和茄病镰刀菌培养腐烂茎线虫，旨在筛选出适合培养腐烂茎线虫的真菌.1 材料与方法1.1 材料2011年9月，从河北省迁安市甘薯田中采集感染糠心病的薯块和根际土壤.长柄链格孢和茄病镰刀菌均由本实验室保存.1.2 方法1.2.1 线虫的分离将采集到的薯块冲洗干净，切成小块，然后采用改良贝曼漏斗法［4］分离，收集得到茎线虫，并在显微镜下剔除其他线虫.1.2.2 真菌的培养用18 mm×150 mm的试管制作PDA斜面(约10 mL)，在PDA斜面上分别接种长柄链格孢和茄病镰刀菌，在26℃的恒温箱中培养，至菌丝长满斜面.1.2.3 线虫的消毒与培养取灭菌的玻片，分别滴上1滴无菌水和1滴0.1%氯霉素溶液.挑取分离纯化的线虫20条，在无菌水中清洗1次，然后挑入0.1%氯霉素溶液中，再用移液枪将含有线虫的氯霉素溶液移入PDA斜面的菌丝上.每种真菌做6个重复.将斜面放入27℃恒温箱中培养60 d.1.2.4 线虫的计数与统计分析培养60 d后，将试管中的线虫用无菌水冲洗到灭菌的50 mL离心管中，离心并吸掉上清液，定容至7 mL，充分震荡使线虫在水中分布均匀.用20 μL移液枪分别吸取10滴线虫混合液，滴至载玻片上，在倒置显微镜下计数，并估算出线虫总数.用SPSS软件进行数据处理.2 结果与分析在27℃黑暗条件下，2种真菌培养腐烂茎线虫表现出一定的差异.从外观上看，长柄链格孢的菌丝浓密，在接种线虫后菌丝变得湿润(图1A)，这是被线虫取食的典型现象;在倒置显微镜下观察，线虫在试管壁聚集成密集的线虫网群(图1C).茄病镰刀菌的菌丝较稀薄，也有被线虫取食的典型现象(图1B);在倒置显微镜下观察，线虫数量比较少，试管壁上聚集成的线虫网较稀薄(图1D).图1 2种真菌培养腐烂茎线虫的外观差异Fig.1 Appearance differences ofD.destructor cultured by two fungiA:长柄链格孢培养线虫;B:茄病镰刀菌培养线虫;C:显微镜下A中的腐烂茎线虫;D:显微镜下B中的腐烂茎线虫.统计结果(表1)表明:在27℃黑暗条件下培养60 d，在长柄链格孢上的最大培养量为35000条·管－1，最小为21000条·管－1，平均26800条·管－1;在茄病镰刀菌上的最大培养量为6230条·管－1，最小为3360 条·管－1，平均4853 条·管－1.表1 2种真菌培养腐烂茎线虫的数量Table 1 Number of D.destructor cultured by two fungi真菌重复接虫数量条·管－1统计数量条·管－1平均值条·管－1 变异系数%真菌重复接虫数量条·管－1统计数量条·管－1平均值条·管－1 变异系数%长柄链格孢 1 20 35000 26800 7.9 茄病镰刀菌1 20 5250 4853 9.9 2 20 21000 2 20 3500 3 20 28000 3 20 4970 4 20 29400 4 20 3360 5 20 25900 5 20 6230 6 20 217006 20 58103 讨论Young et al［5］在1995年培养了从人参根上分离到的腐烂茎线虫，确定最佳培养温度为20℃.但我国的报道指出，该线虫的最佳生长繁殖温度为27－28℃［2，4］.这可能是由线虫种群的差异所导致.本试验选用27℃培养线虫.用真菌培养茎线虫的报道很多.Young et al［5］、徐进军等［6］报道了茄病镰刀菌是比较好的培养材料;刘斌等［7］报道在三角瓶中用玉米培养基培养的灰葡萄孢菌对该线虫的培养效果很好;林茂松［8］报道用毛壳菌可以培养腐烂茎线虫.在本试验中发现利用长柄链格孢培养腐烂茎线虫效果很好，适合该线虫的大量培养.该真菌具有两大优点:(1)易于培养，生长迅速，采用多点接种，3 d即可长满整个斜面;(2)菌丝浓密，适宜大量线虫的繁殖.在接种方面，采用无菌水清洗1次后，连同线虫消毒液一起滴在菌丝上.这样既简化了操作步骤，又能防止细菌的污染，且对线虫和真菌的影响不大.参考文献【相关文献】［1］刘维志.植物线虫志［M］.北京:中国农业出版社，2004:69－71.［2］段玉玺.植物线虫学［M］.北京:科学出版社，2011:172－175.［3］章淑玲，张绍升.甘薯茎线虫与镰孢菌对甘薯的复合侵染［J］.福建农林大学学报:自然科学版，2007，36(4):361－364.［4］张绍升.植物线虫病害诊断与治理［M］.福州:福建省科学技术出版社，1999:73－156.［5］YOUNG H K，SEUNG H O.In vitro culture and factors affecting population changesof Ditylenchus destructor of ginseng［J］.Korean Journal of Plant Pathology，1995，11(1):39－46.［6］徐进军，李世东，杨之为.马铃薯茎线虫的培养［J］.西北农业学报，2004，13(4):77－80. ［7］刘斌，郑经武.腐烂茎线虫单异活体繁殖方法研究［J］.浙江农业学报，2006，18(6):445－447.［8］林茂松.室内人工接种测定甘薯品种对马铃薯腐烂线虫的抗性［J］.南京农业大学学报，1989，12(3):44－47.。