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核酸与核苷类药物概述及合成工艺

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核酸类药物及其生产工艺

核酸类药物及其生产工艺
系核苷酸的类似物，取代正常腺嘧啶核苷酸 参与病毒的合成但不能继续复制，从而达到 阻止病毒增值的目的。
叠 氮 胸 苷 A Z T 合 成 工 艺
2、三氮唑核苷
（Vira301, RibacirinRTC)
商品名称病毒唑，主要应用于小儿呼 吸系统的疾病治疗。显著改善艾滋病 患者的症状，毒副作用小，价格便宜， 比AZT相差50倍。 它对病毒的作用点多，不易使病毒产 生抗药性。
4、Mn2+在限量的情况下培养后期产氨短杆 菌细胞膜容易透过细胞膜，并且嘌呤核苷 酸补救合成所需的酶和中间体核糖－5－磷 酸很容易透过，在细胞外重新合成大量的 肌苷酸； 5、因工业原料和工业水都含较高的Mn2＋， 通过诱变育种的方法选育了对Mn2+不敏感 的变异株，使发酵液Mn2＋ 含量高达 1000g/ml时，肌苷酸的生物合成仍不受影 响。
2、核苷酸的制备 3、核苷的制备
1 发 酵 法 制 备 R N A
2 酶 法 制 备 脱 氧 核 苷 酸
酶 法 制 备 5’ 单 核 苷 酸
双 酶 法 生 产 肌 苷 酸 和 鸟 苷 酸
产氨短杆菌嘌呤核苷 酸生物合成调节机制
3被A阻遏
4受ATP ADP AMP GMP反馈抑制
1被G阻遏 2受GMP反馈抑制
5受GMP ATP的反馈抑制 6受GTP的反馈抑制 注：PRPP——5－磷酸核糖焦磷酸
型 菌 株 发 酵 机 制
产 氨 短 杆 菌 腺 嘌 呤 缺 陷
IMP
肌 苷 酸 诱 变 图 谱
肌 苷 酸 产 生 诱 变 过 程 的 产 量 变 化
提高IMP产量的因素
1、选用产氨短杆菌腺嘌呤缺陷型菌株以解 除腺嘌呤衍生物对的反馈抑制； 2、提供亚适量A培养基通过补救途径合成微 生物生命活动所需要的DNA，不足以产生反 馈抑制的腺嘌呤衍生物； 3、培养基中加入特异抑制IMP脱氢酶的化学 物质（如8－氮杂鸟嘌呤）则IMP被切断， GMP不能生成，解除GMP的反馈抑制，使IMP 进一步被积累；

核酸药工艺的技术方法

核酸药工艺的技术方法

核酸药工艺的技术方法
核酸药物是一类以核酸为主要成分的药物，主要包括DNA和RNA。

核酸药物的制备工艺主要包括以下几个步骤：
1. 核酸的设计和合成：首先，需要根据药物的作用机制和目标，设计出具有特定功能的核酸序列。

然后，通过化学合成的方法，将这些核酸序列逐一合成出来。

2. 核酸的纯化：合成出来的核酸需要进行纯化处理，去除可能存在的杂质和副产品，以保证药物的安全性和有效性。

3. 核酸的修饰：为了提高核酸的稳定性和生物利用度，通常需要对核酸进行修饰。

修饰的方法包括磷酸化、甲基化、糖基化等。

4. 核酸的封装：为了保护核酸不被体内的酶分解，通常需要将核酸封装在纳米颗粒、脂质体、聚合物等载体中。

5. 核酸的质量控制：在整个制备过程中，都需要对核酸的质量进行严格的控制，包括纯度、浓度、结构等方面。

6. 核酸的体内输送：最后，需要研究如何将核酸药物有效地输送到体内的目标部位。

这可能需要借助一些特殊的输送系统，如病毒载体、纳米粒子等。

以上就是核酸药物制备的主要工艺步骤。

需要注意的是，由于核酸药物的特殊性，其制备过程需要高度的精细化和自动化，同时也需要严格的质量控制和安全性评估。

此外，核酸药物的研发还面临着许多挑战，如如何提高药物的稳定性、如何提高药物的生物利用度、如何解决药物的免疫反应等问题。

生物制药：第十二章 核酸类药物

生物制药：第十二章 核酸类药物
自然结构类似物或聚合物
临床：病毒、肿瘤、艾滋病、产生干扰素、免疫抑制剂 代表药物：三氟代胸苷、叠氮胸苷、无环鸟苷、恩替卡韦等 制备方法：由自然结构核酸类物质通过半类药物
恩替卡韦
二、核酸类药物的生产方法
（一）核酸类药物的原材料 除病毒外，所有的动植
物组织中都含有核酸类物 质，包括大分子DNA和RNA、 小分子的核苷酸、核苷、碱 基等成分，但不同的组织中 含量有所不同。
酶液
混合，调pH 保温
鱼精
绞肉机粉碎
鱼精匀浆
热变性 冷却，过滤
DNA溶液
酶解液
加热使酶失活，调pH9.0置冷过夜，过滤
DNA降解液
吸附于氯型阴离子交换树脂分步洗脱
脱氧胞苷酸 dCMP
脱氧腺苷 dAMP
脱氧胸苷酸 dTMP
脱氧鸟苷酸 dGMP
三、主要核酸类药物的生产
1、RNA的提取——等电沉淀法
酵母菌体
稀NaOH，提取
提取液
中和，分离
抽提清液
pH2.5
RNA精品
洗涤、干燥
RNA粗品
工艺过程：
（1）预处理：压榨、除水；（2）提取：0.13%NaOH，使细胞壁变 性，使核酸从细胞内释放出来；（3）中和、除菌体；（4）分离：等 电点法，调pH2.5，使RNA沉淀下来；（5）洗涤、干燥
2、DNA的提取
猪脾脏
[预处理] 冷冻，绞碎
组织浆液
[预处理]
0.1M NaCl-0.5M 柠檬酸混合液，
离心
沉淀
[抽提] 1M NaCl
上清液
0.14M NaCl
沉淀物
95%乙醇
上清液 氯仿-异戊醇 （DNA）
溶解液
10% NaCl

第十三章 生化药物制造工艺 核酸类药物

第十三章 生化药物制造工艺 核酸类药物

六、胞二磷胆碱（CDP-胆碱）
（一）结构与性质 胞二磷胆碱其化学名称为胞嘧啶核苷 -5 ＇ - 二磷酸 胆碱钠盐本品为白色无定形粉末，易吸湿，易溶于水， 几不溶于乙醇、氯仿、丙酮等多数有机溶剂。
四、阿糖胞苷
（一）结构与性质
阿糖胞苷又称胞嘧啶阿拉伯糖苷，糖的组成部分 是阿拉伯糖。 阿糖胞苷进入体内转变为阿糖胞苷酸，抑制DNA聚 合酶，抑制DNA的合成，干扰DNA病毒繁殖和肿瘤 细胞增殖。
（二）生产工艺
1．以5＇－CMP为原料的合成法 （1）工艺路线：
2、以葡萄糖酸钙为原料的合成路线
（五）聚肌胞苷酸（聚肌胞）
（三）核苷的制备
本节叙述核苷的化学法和发酵法生产。 1、RNA化学水解法制备核苷 （1）核苷生产工艺流程 RNA经甲酰胺化学水解制备核苷
2、发酵法生产核苷
发酵法生产核苷是近代发酵工程领域中的杰出成果， 产率高，周期短，控制容易，产量大。用发酵法生产 各种核苷的菌株有着许多共同特点： ①它们都使用磷酸单酯酶活力很强的枯草芽孢杆菌 或短小芽孢杆菌为诱变出发菌株； ②它们都是通过使用物理或化学诱变方法选育出在 遗传性状上具有特定标记的诱变菌；
此合成路线的起始原料是胸苷。
（二）阿糖腺苷Adenine arabinoside
1、结构与性质 阿糖腺苷的化学名称为 9-β-D-阿拉伯呋喃糖腺嘌呤， 或称腺嘌呤阿拉伯糖苷。 早在1960年就在实验室合成了阿糖腺苷，1969年美 国用Streptomyces antibioticus NRRL3238菌株，1972年 日本用Strepto－myces hebacecus 4334菌株发酵法分别 制备了阿糖腺苷。
（2）以5`-AMP为原料的化学合成
3、作用与用途 阿糖腺苷是近年来引人注目的广谱DNA病毒抑制 剂，对单纯疱疹Ⅰ、Ⅱ型，带状疱疹，巨细，牛痘等 DNA病毒，在体内外都有明显抑制作用。 而且阿糖腺三磷对于病毒DNA聚合酶的亲和性比 宿主细胞的同一个酶的亲和性高。因此这个药物对于 抑制病毒具有较高选择性。

核酸与核苷类药物概述及合成工艺

核酸与核苷类药物概述及合成工艺
只能先合成XMP，后转化为GMP： 方法如下：
选育鸟嘌呤、腺嘌呤缺陷型菌株，同时解除PRPP转酰 胺酶及XMP合成酶的阻遏，积累大量XMP(GMP合成酶及SAMP 合成酶缺失）。
XMP转化为GMP菌株的条件:
(1)GMP不被分解 (2)GMP合成酶活力要强化(抗生素激动剂) (3)增加细胞通透性
半合成法制备核苷酸
三、用酶解法、发酵法和半合成法制备核苷酸 1、酶解法及碱水解法制备核苷酸
酶解法制备脱氧核苷酸
桔青霉产生5`-磷酸二脂酶 红酵母产生3`-磷酸二脂酶
酶解法制备戊糖核苷酸 我国从60年代开始使用核酸酶P1降解核糖核酸生
产单核苷酸，日本年产呈味核苷酸（肌苷酸和鸟苷酸） 3000吨，其中60%是使用酶解法生产的。
第一节 概述
一、核酸与核苷类药物
核酸与核苷类药物是指具有药用价值的核酸、核 苷酸、核苷或者碱基
天然的、类似物、衍生物及其聚合物 作用：
影响生物的蛋白质合成和脂肪、糖类的代谢 恢复正常代谢或干扰某些异常代谢
• 用途：放射病、血小板减少症、白细胞减少症、 急慢性肝炎、心血管疾病和肌肉萎缩、肿瘤、病 毒病
本都可经微生物发酵或从生物资源中提取。
后一类药物是治疗病毒感染性疾病、肿瘤的 重要手段，也是产生干扰素、免疫抑制的临 床药物。
正式用于临床的抗病毒核苷类药物有三氮唑 核苷、叠氮胸苷、阿糖腺苷等。
二、核酸与核苷的一般理化性质
核酸
核苷酸
（DNA、RNA）
核苷 磷酸
核糖（核糖 脱氧核糖） 嘌呤（腺嘌呤、鸟嘌呤）
工业用DNA的提取
[提取]
鱼精
[热变性]
[沉淀]乙醇
提取液
纤维状DNA

核酸类药物生产工艺

核酸类药物生产工艺

核酸类药物生产工艺
接下来是核酸的纯化。

纯化步骤通常包括离心、柱层析和溶液浓缩等
过程。

离心能够分离出核酸与其他细胞组分。

柱层析则利用离子交换、凝
胶过滤或亲和层析等方法，从样品中分离出纯净的核酸。

最后，溶液浓缩
可以将核酸在适当的缓冲液中浓缩，以便进行下一步的处理。

第三个步骤是核酸的合成。

核酸合成可以采用化学合成或重组DNA技术。

化学合成是指通过有机合成方法合成核酸。

这要求高纯度和高效的合
成试剂，以确保合成的核酸具有良好的纯度和活性。

重组DNA技术则是通
过克隆技术，将目标基因插入表达载体中，并经过细胞培养和表达，生产
目标核酸。

接下来是核酸的包装。

核酸类药物通常通过载体或纳米粒子进行包装，以保护核酸并提高其递送效率。

载体可以是合成的脂质体、聚合物或病毒
颗粒。

这些载体通常具有良好的稳定性和低毒性，并能够在体内稳定地释
放核酸。

最后一个步骤是质控。

质控是核酸类药物生产过程中至关重要的一步，它确保了生产的药物符合安全和有效的要求。

质控包括对原材料、生产过
程和最终产品的检验和测试。

常见的质控检测方法包括高效液相色谱法、
质谱法、凝胶电泳以及分子生物学技术。

总之，核酸类药物的生产工艺涉及核酸提取、纯化、合成、包装和质
控等多个步骤。

每个步骤都非常关键，需要严格的控制和检测，以确保生
产的核酸类药物具有良好的质量和效果。

这些步骤的不断改进和优化将有
助于提高核酸类药物的生产效率和质量，进一步推动其在临床上的应用。

核酸类药物生产工艺

2020/2/9
HO 5
OH
CH2 O
4 H3 H 1
H OH 2OHH
β-D-核糖
腺嘌呤（A）
（U）
HO 5
OH
CH2 O
4 H3 H 1
H OH 2H H
β-2-D-脱氧核糖
鸟嘌呤（G）
（T） （C）
3
生物制药工艺学——核酸类药物
核苷酸的制备
核酸(RNA主要存在于微生物中，如啤酒酵母、纸浆酵母以及 多种抗生素的菌丝体；DNA主要存在于动物内脏等)经酶、酸、 碱水解生成核苷酸，然后分离提取制备各种核苷酸的方法通称 水解核酸法。用催化剂的不同，分为酶水解、酸水解和碱水解 等。
滤液，冷处静置3析柱，用pH3的水将柱平衡。
提取液上柱流速控制在0.6一1ml／(cm2.min)左右，吸附ATP。上柱过程 中用DEAE—C薄板检查。
④洗脱饱和ATP柱，用pH3、0.03M氯化钠液洗涤柱上滞留的AMP、ADP 及无机盐等，流速控制在1mL／(cm2.min)。再用pH3.8、1M氯化钠液洗 脱 ATP ， 流 速 控 制 在 0.3ml/(cm2.min) ， 收 集 洗 脱 液 。 操 作 温 度 在 0 一 10℃。
反义核酸技术及反义药物：反义技术是用人工合成的或生物中自然 存在的寡聚核苷酸片断（反义DNA和反义RNA），结合目标基因或 mRNA特定序列(靶核酸)，从而有效地抑制或封闭基因的转录与翻译。
反义药物能与特定基因杂交，在基因水平干扰致病蛋白的产生过程， 即干扰遗传信息从核酸向蛋白质的传递。
2020/2/9
②发酵培养 培养温度30℃，36h，投入腺嘌呤，加尿素、氢氧化钠和氨， 控制pH。通风量1：0.5v／(v·min)。

核酸与核苷类药物(1)


AMP GMP
脱氨
还原
酶
酶
SAMP 合成酶
IMPIMP脱 Βιβλιοθήκη 酶GMP合 成酶XMP
馈抑制的。 • 枯草杆菌的腺嘌呤缺陷
强
弱
AICAR
型，当培养基中提供限
量腺嘌呤时就累积肌苷。
SAICAR
• 而枯草杆菌的腺嘌呤、 黄嘌呤缺陷型，当培养 基中提供限量鸟嘌呤时 就累积腺苷。
PRPP PRPP
PRPP转酰胺酶
• ATP：用于心肌炎、心肌梗死、心力衰竭、及动脉或冠状动脉硬化、 肝炎等的治疗或辅助治疗。
• 肌苷(IMP)：用于急慢性肝炎、肝硬化、白细胞减少、血小板减少等。
医学课件ppt
5
核酸类药物分类
——自然结构核酸类物质的类似物和聚合物
• 它们是当今人类治疗病毒、肿瘤、艾滋病的重要药物，也是产生干扰素、 免疫抑制剂的临床药物。
医学课件ppt
2
• 核酸是一种多聚体大分子，它的组成单元是核苷 酸，将核苷酸中的磷酸基团去掉，剩余部分称核 苷，核苷进一步分解可生成戊糖和碱基。
胰核酸酶
胰、肠核苷酸酶
核苷酶
医学课件ppt
3
嘌呤核苷酸
AMP 嘧啶核苷酸的结构
GMP
医学课件ppt
4
核酸类药物分类
——具有天然结构的核酸类物质
• 如：ATP、GTP、CTP、UTP、IMP、CoA、CoI(NAD+) 、 CoII(NADP+) 。
具有生物活性dna的制备可从动物内脏肝脾胸腺中提取制备操作条动物内脏加4倍量生理盐水经组织捣碎机捣碎1分钟匀浆于2500rpm离心30分钟沉淀用同样体积的生理盐水洗涤3次每次洗涤后离心将沉淀悬浮于20倍量的冷生理盐水中再捣碎3分钟加入2倍量5十二烷基磺酸钠并搅拌23小时在02500rpm离心在上层液中加入等体积的冷乙醇离心即可得纤维状dna再用冷乙醇和丙酮洗涤减压低温干燥得粗品dna

5第五章 核酸类药物(生化制药技术)

2013-3-4 25
质量检测
CoA的效价有化学、微生物和酶学三种测定法。
• 以乙酸盐作为乙酰基供体，以黄胺作为受体，在乙酰化酶 的催化下（CoA作乙酰基的传递体），ATP供给能量，生 成乙酰磺胺。在乙酰化酶、ATP、乙酸盐及磺胺过量存在 下，CoA的量与反应的进行有一对应关系。如果反应前磺 胺精确定量，则未被乙酰化的磺胺的量也是确定的。将其 重氮化，并与萘乙胺反应，则生成的淡红色溶液可在 454nm波长下定量测定。从测定结果可推算出已被乙酰化 的磺胺量，当以已知单位的CoA标准品作对照时，即可计 算出未知样品的CoA的单位。
核酸(RNA主要存在于微生物中，如啤酒酵母、纸浆酵母以及
多种抗生素的菌丝体；DNA主要存在于动物内脏等)经酶、酸、 碱水解生成核苷酸，然后分离提取制备各种核苷酸的方法通称 水解核酸法。用催化剂的不同，分为酶水解、酸水解和碱水解 等。 (1)酶水解 最常用的酶有桔青霉A.S3.2788产生的5’—磷酸二酯酶，也 可用红酵母发酵所产生的3’—磷酸二酯酶。
2013-3-4 11
RNA的含量测定
消化
核苷酸、碱基、戊糖
+钼酸，H+
RNA
浓硫酸or过氯酸 正磷酸 磷钼酸 还 原 剂 660nm处最大吸光度；分光光度法检测。 钼蓝
DNA含磷量：9.4% RNA含磷量：9.9%
2013-3-4 12
三磷酸腺苷生产工艺
三磷酸腺苷是体内广泛存在的辅酶，是体内组织细胞所需能 量的主要来源，蛋白质、脂肪、糖和核苷酸的合成都需ATP参 与。ATP经腺苷酸环化酶催化形成环磷酸腺苷(cAMP)，是细胞 内的生物活性物质，对细胞许多代谢过程有重要的调节作用。
2013-3-4 8
RNA的制备

核酸药物及其生产技术

核酸药物及其生产技术随着生物科技的不断发展，核酸药物逐渐成为了一个备受瞩目的领域。

核酸药物是指以核酸分子作为药物的药物产品，包括DNA、RNA和核酸类似物等。

与传统药物相比，核酸药物具有精准疗效、高效性和低毒副作用等优势，因此受到了广泛的关注和研究。

本文将介绍核酸药物及其生产技术的相关信息。

一、核酸药物的种类核酸药物可分为DNA药物和RNA药物两大类。

其中，DNA药物主要指DNA疫苗、基因编辑药物、基因疗法等技术；RNA药物主要指RNA干扰技术、RNA编辑技术等。

1. DNA药物DNA药物有许多种类，包括：（1）DNA疫苗：以DNA为载体，将病毒、细菌等病原体的抗原编码进去，并通过注射等方式，使人体能够产生相应的抗体，从而起到预防疾病的作用。

（2）基因编辑药物：使用CRISPR/Cas9等技术对基因进行编辑，从而达到治疗遗传性疾病、癌症等疾病的效果。

（3）基因疗法：将正常的基因插入到有缺陷的基因中，以改变异常的表达，从而治疗遗传性疾病等。

2. RNA药物RNA药物主要包括：（1）RNA干扰技术：针对不同的疾病，设计特定的小分子干扰RNA(siRNA)或miRNA等，通过靶向特定的基因，抑制对应的蛋白质的合成，从而达到治疗疾病的效果。

（2）RNA编辑技术：通过CRISPR-Cas9或其他RNA编辑技术，实现对RNA序列的特定修改，从而改变某些基因的表达，从而达到治疗疾病的效果。

二、核酸药物的生产技术核酸药物的生产技术是核酸药物研究的重要组成部分。

生产技术的不断完善和提高，对于核酸药物的研究和开发具有重要的推动作用。

1. DNA药物生产技术DNA药物生产的核心部分是质粒的构建和提纯。

一般采用的是大肠杆菌作为质粒的宿主细胞，通过转染、电转化等技术将质粒导入到大肠杆菌中。

大肠杆菌在大规模生产DNA疫苗等药物时，需要进行上千升的发酵，然后将细胞破碎，提取DNA质粒，并加以纯化。

为了适应大规模生产，目前常用的提纯方法包括离子交换、透析、凝胶过滤、超滤、液相层析等技术。

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第二节 一些药物的制备工艺及原理
一、RNA的提取与制备
工业用RNA的提取
（1）RNA及其工业来源：从微生物中提取RNA 是工业上最实际和有效的方法。一些最常见 的菌体含有丰富的核酸资源，如酵母、白地 霉 、 多 种 抗 菌 素 的 菌 丝 体 —— 青 霉 素 ， 制 霉 菌素等菌体。
通常在细菌中RNA占5％～25％，在酵母 中占2.7％～15％，在霉菌中占0.7%～28％。
核酸类物质药物一般可分为两大类：
一类具天然结构的核酸类物质，
另一类是自然结构碱基、核苷、核苷酸的结 构类似物或聚合物。
前者是生物体合成原料或蛋白质、脂肪、糖生物合成
与降解以及能量代谢的辅酶，这一类药物有助于改善机体 的物质代谢和能量平衡，加速受损组织的修复，促使缺氧 组织恢复正常生理机能，临床上已广泛使用于放射病、血 小板减少症、白细胞减少症、急慢性肝炎、心血管疾病、 肌肉萎缩等病症的治疗，包括肌苷、辅酶A、GTP、CTP、 UTP、ATP、腺苷、辅酶I、辅酶Ⅱ等，多数是生物体自 身能够合成的物质，具有一定临床功能，毒副作用小，基
第一节 概述
一、核酸与核苷类药物
核酸与核苷类药物是指具有药用价值的核酸、核 苷酸、核苷或者碱基
天然的、类似物、衍生物及其聚合物 作用：
影响生物的蛋白质合成和脂肪、糖类的代谢 恢复正常代谢或干扰某些异常代谢
• 用途：放射病、血小板减少症、白细胞减少症、 急慢性肝炎、心血管疾病和肌肉萎缩、肿瘤、病 毒病
要避免分子降解，可采用苯酚法制备RNA。用苯酚处理生 物材料，使蛋白质变性，然后离心，上层水溶液内含有全部 RNA，可用乙 醇 沉 淀出来。脱氧核糖核蛋白 溶于浓盐溶液 1mol/L,不溶于0.14mol/L,而核糖核蛋白溶于0.14mol/L盐溶 液。
（3）RNA的提取实例：
啤酒酵母是提取RNA的很好的资源。取100g压榨啤酒 酵母（含水份70%），加入230ml含NaOH 3g的水，20℃以 下缓慢搅拌30分钟。用6mol／L HCl调至pH7，搅拌15分钟， 离心得清液255m1。冷至10℃以下，6mol／L HCl调pH2.5， 置冷过夜，离心得RNA l.8g（纯度80％）。
在菌体内RNA含量的变化受培养基组成影响，其中关键是 铵离子浓度和磷酸盐浓度。培养酵母菌体收率高，易于提取 RNA。
很显然在许多酵母中，早期细胞中的RNA含量高，其确切 数值取决于碳、氮比例和培养基组成等。
（2）高RNA含量酵母菌株的筛选
可以从自然界筛选到RNA含量高的酵母菌株，也可用诱变 育种的方法提高酵母菌的RNA含量。
生物活性DNA的制备
[提取]
[洗涤3次]
5%SDS
动物内脏
沉淀
沉淀
上层液
（肝、脾）生理盐水
生理盐水
[再捣碎]
离心、30min
[沉淀]
[洗涤、干燥]
[提取]
纤维状DNA
粗品DNA
上清液
95%乙醇
冷乙醇、丙酮
水、5%SDS 离心
[沉淀]
[洗涤、干燥]
DNA沉淀
活性DNA本都可经微生物发或从生物资源中提取。 后一类药物是治疗病毒感染性疾病、肿瘤的 重要手段，也是产生干扰素、免疫抑制的临 床药物。
正式用于临床的抗病毒核苷类药物有三氮唑 核苷、叠氮胸苷、阿糖腺苷等。
二、核酸与核苷的一般理化性质
核酸
核苷酸
（DNA、RNA）
核苷 磷酸
核糖（核糖 脱氧核糖） 嘌呤（腺嘌呤、鸟嘌呤）
工业用DNA的提取
[提取]
鱼精
[热变性]
[沉淀]乙醇
提取液
纤维状DNA
水、100℃ 冷却、离心
70%--80% （无生物活性）
15min 干燥
粗品DNA（热变性后无活性）
具有生物活性DNA的制备
动物内脏（肝、脾、胸腺）加4倍重量生理盐水经组织捣 碎机捣碎1分钟，匀浆于2500r／pm离心30分钟，沉淀用同样体 积的生理盐水洗涤3次，每次洗后离心，将沉淀悬浮于20倍重 量的冷生理盐水中，再捣碎3分钟，加入2倍量5％的（用45%乙 醇作溶剂）十二烷基磺酸钠，并搅拌2～3小时，在0℃2500r／ pm离心，在上层液中加入等体积的冷95％乙醇，离心即可得到 纤维状DNA，再用冷乙醇和丙酮洗涤，减压低温干燥得粗品DNA。 粗品DNA溶于适量蒸馏水，加入5％十二烷基磺酸钠达1／10体 积，搅拌1小时，经5000r／pm离心1小时，清液中加入NaCl达 1mol／L，再缓慢加入冷95%乙醇，DNA析出，经乙醇、丙酮洗 涤，真空干燥得具有生物活性的DNA（活性DNA制备需在0～3℃ 操作）。
稀碱法：是用氢氧化钠溶液（1%），使细胞壁变性，使核 酸从细胞内释放出来。需用酸中和PH7。然后除去菌体，将pH 调至RNA的等电点（pH2.5），使RNA沉淀出来。上法的缺点是 制得的RNA Mr较低,(磷酸单脂酶、磷酸二脂酶降解RNA，90 ℃保持3－4h破坏酶)。
浓盐法：是用高浓度盐溶液（6%－8%）处理，同时加热， 以改变细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释放出来。
碱基 嘧啶（胞、尿、胸腺嘧啶）
DNA和RNA是存在于细胞中的正常成分。 DNA主要存在于细胞核中，少量（2%）存在于线粒体和叶绿体中； RNA主要存在于细胞质中，少量（10%）存在于核仁、核浆和染色体中。
核酸的含量与细胞大小无关，以生长旺盛的组织细胞中含量较多，如 动物胰脏、脾脏、胸腺，植物的茎尖、根尖及各种分生组织等。
RNA提取实例：
[提取]
[中和] HCl
[酸化、沉淀]HCl
酵母
提取液
上清液
RNA
NaOH、水
pH 7、离心
pH 2.5、离心
二、DNA的提取与制备
工业用DNA的提取
取新鲜冷冻鱼精20kg，用绞肉机粉碎2次成浆状，加入等 体积水，搅拌均匀，倾入反应锅内，缓慢搅拌，升温至100℃， 保温15分钟，迅速冷却至20～25℃，离心除去鱼精蛋白等沉淀 物，获得35L含热变性DNA的溶液，经精确测定DNA含量后直接 可用于酶法降解生产脱氧核苷酸。如要制成固体状DNA，在热 变性DNA溶液中逐渐加入等体积95％乙醇，离心可获得纤维状 DNA，沉淀用乙醇、丙酮洗涤，减压低温干燥得DNA粗品，产品 含热变性DNA50％～60％。