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第1篇一、实验目的本实验旨在掌握饲料分析检测的基本原理和方法，了解饲料样品的采集、制备和保存，以及常规营养成分、有害物质和微生物的检测技术。
通过实验，培养学生对饲料品质的判断能力和分析检测技能，为今后从事饲料生产、管理和科研工作打下基础。
二、实验原理饲料分析检测主要包括以下内容：1. 饲料样品的采集、制备和保存：保证样品的代表性、准确性和可靠性。
2. 常规营养成分分析：测定饲料中的水分、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、无氮浸出物等。
3. 有害物质检测：检测饲料中的重金属、农药残留、霉菌毒素等。
4. 微生物检测：检测饲料中的细菌、霉菌等微生物数量。
三、实验材料1. 实验仪器：电子天平、烘箱、分光光度计、高压灭菌锅、显微镜等。
2. 实验试剂：无水硫酸钠、硫酸铜、盐酸、硫酸钾、氢氧化钠、苯、氯仿等。
3. 实验样品：饲料样品（如玉米、豆粕、麦麸等）。
四、实验方法1. 饲料样品的采集、制备和保存：- 采集饲料样品时，应从不同部位、不同批次中取适量样品混合均匀。
- 将混合后的样品磨碎，过筛，制成待测样品。
- 将待测样品置于干燥器中，在室温下保存。
2. 水分测定：- 采用烘箱法测定饲料样品的水分含量。
- 将待测样品置于烘箱中，在105℃下烘干至恒重。
3. 粗蛋白测定：- 采用凯氏定氮法测定饲料样品中的粗蛋白含量。
- 将待测样品与硫酸铜、硫酸钾混合，加入浓硫酸，加热消化至溶液呈蓝绿色。
- 将消化液定容，测定其氮含量，计算粗蛋白含量。
4. 粗脂肪测定：- 采用索氏抽提法测定饲料样品中的粗脂肪含量。
- 将待测样品与无水硫酸钠混合，加入苯，在索氏抽提器中抽提。
5. 重金属测定：- 采用原子吸收光谱法测定饲料样品中的重金属含量。
- 将待测样品消解，测定其重金属含量。
6. 农药残留测定：- 采用气相色谱法测定饲料样品中的农药残留。
- 将待测样品提取，进行色谱分析。
7. 霉菌毒素测定：- 采用高效液相色谱法测定饲料样品中的霉菌毒素含量。
微生物降解黄曲霉毒素的研究进展张玲玲;杨彩梅;张旭;刘金松;曾新福【摘要】黄曲霉毒素是一组由黄曲霉、寄生曲霉等多种真菌产生的次级代谢产物,具有强烈的毒性,可以引起动物肝脏肿大、病变甚至癌变,对人和家畜的健康产生极大的威胁.运用安全、高效的微生物方法降解黄曲霉毒素是目前黄曲霉毒素研究的热点.文章对黄曲霉毒素的一般特性、污染现状以及微生物方法降解黄曲霉毒素的机理和应用现状等进行综述.【期刊名称】《饲料博览》【年(卷),期】2015(000)007【总页数】4页(P18-21)【关键词】微生物;降解;黄曲霉毒素【作者】张玲玲;杨彩梅;张旭;刘金松;曾新福【作者单位】浙江农林大学,杭州311300;浙江万方生物科技有限公司,浙江安吉313300;浙江万方生物科技有限公司,浙江安吉313300;浙江万方生物科技有限公司,浙江安吉313300;浙江万方生物科技有限公司,浙江安吉313300【正文语种】中文【中图分类】Q939.94;S861.3黄曲霉毒素（AFT）是一组由黄曲霉、寄生曲霉、特异曲霉等多种真菌产生的次级代谢产物，具有相似的化学结构和理化性质，其基本结构为双呋喃环和香豆素。
根据紫外线照射下发出的荧光颜色不同，黄曲霉毒素主要可以分为两类：蓝色荧光的B类和绿色荧光的G类，B类包括B1、B2、B2α，G类包括G1、G2；还包括一些衍生物如黄曲霉毒素M1、M2、P1、Q、H1、GM、毒醇等。
其中，黄曲霉毒素B1（AFB1）被认为是毒性最强、危害最大、分布最广的一种。
动物体内黄曲霉毒素主要通过肝脏的羟化、脱甲基、环氧化反应来降解，因此黄曲霉毒素主要影响动物的肝功能，引起肝脏肿大、病变甚至癌变，同时，动物食入被污染的饲料后，黄曲霉毒素在肝脏、肾脏和肌肉组织中蓄积，降低动物免疫力，引发一系列疾病，从而降低动物的生产性能，甚至通过食物链的传递进入人体，使人产生急性或慢性中毒的症状，影响人体健康。
黄曲霉毒素的污染及其程度受到各种因素的影响，包括粮食的种类和数量、地理位置、季节气候、粮食收割后的储藏条件等。
霉菌毒素检测方法1.呕吐毒素(DON)的检测ELISA法测试前请仔细阅读本说明在2—8℃冷藏—不要冻结1.简介 DON毒素脱氧瓜萎镰菌醇（DON，）是单端孢菌素烯烃中的一种，它通常是由生长在谷类物品（如小麦、玉米、大麦和秣草）霉菌镰红菌素生成的。
脱氧瓜萎镰菌醇的毒性效应包括：呕吐、不想进食、胃肠炎、腹泻、免疫抑制和血液病。
研究表明猪对脱氧瓜萎镰菌醇很敏感。
当脱氧瓜萎镰菌醇含量≥1ppm时，它们就拒绝进食。
其毒性也会对其他物种产生毒性效应，各种物种对脱氧瓜萎镰菌醇的敏感性各不相同。
研究表明脱氧瓜萎镰菌醇会使已加工食物发生问题，包括使可吃的谷类制品产生臭味、对生面团质量产生负面影响。
因此，精确测定可能含有脱氧瓜萎镰菌醇的食物和食品就现得十分重要。
FDA（美国食品和药品管理局）已经制定了脱氧瓜萎镰菌醇含量的强制标准。
美国食品药物管理局已经颁布的DON毒素建议限量如下：2.方法原理本测试盒的测试原理是一种竞争性的直接酶联免疫吸附剂测试方法（ELISA），可准确检测出样品中ppm级的DON毒素。
样品和标准控制液中游离的DON毒素与轭合物中的DON毒素竞争抗体结合位置。
清洗后，加入底物，底物与轭合物反应出现兰色，兰色越深表明DON毒素越少。
将其置于微型孔阅读器中可读出透光度，以控制标准液的透光度作标准曲线，将样品的透光度与标准曲线比较计算出样品中DON毒素的准确浓度。
3.贮存要求本试剂盒存放在2～8℃时，可以一直使用到标签上注明的到期日期。
4.试剂与仪器4.1已提供的材料48个包被了抗体的孔；48个红色标记的混合孔；5瓶2ml浓度为0、0.25、0.5、1、3 ppmDON毒素控制标准液(黄色标签)；1瓶DON毒素-HRP轭合物溶液(兰色标签)；1瓶24ml底物溶液(绿色标签)；1瓶32ml红色终止液（红色标签）4.2需要但未提供的材料提取材料；蒸馏水或去离子水；100ml量筒；150ml的具塞三角瓶；滤纸；样品收集具塞试管；漏斗；粉碎机；称量为5～25克的秤；带450nm滤光片的酶标仪；200μl移液器；200μl吸咀；纸巾或等效的吸水材料；计时器；防水记号笔；洗瓶；移液器用的试剂槽；蒸馏水或去离子水；计时器等5.注意事项本测试盒不使用时应在2～8℃下存放。
冻品检测报告样品信息：
样品名称：冻鱼片
品牌：美味冻品
生产日期：2021年5月1日
生产批次：20210501
检测日期：2021年6月1日
检测单位：ABC检测中心
检测结果：
1. 总大肠菌群：不偏离正常值范围
2. 沙门氏菌：未检出
3. 真菌和酵母菌：未检出
4. 大肠杆菌：未检出
5. 霉菌毒素：未检出
6. 甲醛含量：未检出
7. 青霉素和四环素残留：未检出
结论：
该冻品符合食品安全标准，可以放心食用。
检测人员：李某
检测日期：2021年6月1日
报告编号：123456789
备注：
1. 检测结果仅限于样品的检测，不能代表同种冻品的安全性。
2. 该报告仅用于该冻品的食品安全管理和质量控制，严禁用于
广告和其他用途。
3. 该报告的准确性不受未知因素影响的保证，如存储、运输等。
4. 检测单位对检测结果的准确性负责，但不承担与检测结果直
接或间接相关的其他责任。
5. 如需更多详细信息，请咨询检测单位。
化妆品中霉菌和酵母菌的检验2014年8月26日下载(2008-05-22 15:45:21)转载▼标签：杂谈化妆品中霉菌和酵母菌的检验科学2006-3-5 23:47化妆品中霉菌和酵母菌的检验1 概述1.1 化妆品真菌污染的现状真菌在自然界中分布甚广,化妆品的酸碱度,温度湿度和营养适合其生长繁殖。
目前国内外有资料表明，化妆品中真菌污染是相当严重的。
Wilson对眉目化妆品进行微生物检查，结果真菌污染率为12%，从睫毛油里检出茄病镰刀菌，密封的眼用化妆品染菌率为1.5%,在使用过程中急剧增至60%。
所染真菌中曲霉，念珠菌居首。
我国部分省市化妆品中霉菌染菌率也不低，一般为7～62.7%。
有资料报道在100份化妆品中分离到真菌15个（属14种）。
优势菌为酵母属，其次为青霉属和曲子霉属等。
Kuehne等人对233名妇女眉笔眼影霉菌检查，结果有115人（份）检出不同真菌19属（种），计有草酸青霉、黄曲霉、交链孢霉和致病的白色念珠菌和新型隐球菌等。
1.2 化妆品的真菌病1.2.1 念珠菌病：由白色念珠菌（白色假丝酵母）引起的急性、亚急性或慢性真菌病，可侵犯皮肤、粘膜或指甲，也可侵犯内脏或血行播散引起鹅口疮、唇炎、甲沟炎、泛发性皮肤念珠病、念珠性肉芽肿、支气管及肺念珠病、心内膜炎及脑炎和血行播散性念珠菌病等。
1.2.2 青霉病：由少数青霉菌引起呼吸道及肺部感染，使皮肤暴露部位出现湿疹样改变，还可致敏引起鼻炎及哮喘。
1.2.3 新型隐球菌病:由新型隐球酵母及其变种引起的一种深部真菌病,可侵犯肺、骨骼、皮肤淋巴结及内胖器官，主要侵犯中枢神经系统，引起隐球菌性脑膜炎。
1.2.4 曲霉病:由曲霉菌引起,可侵犯皮肤,指甲、外耳道、鼻窦、眼、气管、肺、心膜、子官、脑膜等器官形成炎性肉芽肿。
1.2.5 眼真菌病:真菌性角膜炎可由曲霉菌、镰刀菌、白色念珠菌等真菌引起角膜溃疡，见表3-2-1。
作者年份倒数菌种及株数Fazakas195520烟曲霉5，黄曲霉2，放线菌4，毛霉2，其他7Gingerich1963125曲霉16，白色念珠菌17，镰刀菌12，其他80Palack197133镰刀菌15，头孢霉11，念珠菌2，弯孢霉21，曲霉2，其他2渡道郁绪197759曲霉21，头孢霉16，白色念珠菌14，其他8齐绪哲、谭玉章1957～196513白色念珠菌7，曲霉3，镰刀菌1，酵母菌1，头孢霉1范德章1978204曲霉123，镰刀菌43，其他391.2.6 真菌毒素中毒：引起皮肤光过敏性皮炎、湿疹及皮肤变态，严重者导致机体中毒。
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猪业科学
SWINE INDUSTRY SCIENCE 2012年 第8期2012年1-6月全国饲料及
原料霉菌毒素调查报告
陈欠林1，杜 妮2，万冬莲1
（1.宜春市农业良种研究所，江西 宜春 336000；2.江西迈吉生化营养有限公司，江西 南昌 330029）
1 样品概述
2012年1月至6月，江西迈吉生化营养有限公司共收集来自河南、河北、江西、山东、福建、浙江、广东、广西等12省份的样本271份，其中玉米样116份、豆粕样69份、麸皮样77份、小麦样3份、饲料样6份。
2 采样
霉菌毒素广义上的检测，包括取样、制样和分析。
由于霉菌毒素的污染具有极不均匀性分布且在农产品中的存在是基于“μg/kg”水平，最终样品的检测值是不能完全代表最初样品的真正含量。
在检测的取样、制样和分析3个步骤中都不可避免地存在着误差。
其中，取样环节产生的误差最大，占总误差的85%以上，而制样与分析2个环节共占总误差的15%以下。
故为了减少误差，采用四分法取样，将样品磨粉，过筛网并混合，平铺成圆形，分成4等分，取相对的2份混合，然后再平分，直到达到要求。
3 检测方法
次分样用相应的提取液提取毒素，
并采用酶联免疫吸附测定技术（ELISA）进行霉菌毒素检测分析。
具体操作步骤参见霉菌毒素检测试剂盒的标准操作程序。
各霉菌毒素的检测限为：黄曲霉毒素B1AFB1：1μg/kg ；玉米赤霉烯酮ZEN ：10μg/kg ；呕吐毒素DON ：200μg/kg。
4 检测结果
所有116个玉米样本、69个豆粕样本、77个麸皮样本、6个配合饲料样本和3个小麦样本都进行AFB1、ZEN 和DON 毒素检测。
4.1 所有样品检测结果
从送检样品的检测结果来看，在全部样品中的AFB 1、ZEN 和DON 都呈现高阳性率，表明这3种霉菌毒素在当前饲料及原料中的污染很普遍。
在271份样品中，完全没有检测出霉菌毒素的样品仅7份，占样品总数2.67%；检测到1种霉菌毒素的样品48份，占17.85%；检测到2种霉菌毒素的样品85份，占31.25%；检测到3种霉菌毒素的样品131份占48.21%（见图1）。
相对而言，饲料及原料中的AFB 1
毒素污染较轻，ZEN 和DON 两种毒素污染较严重。
所有样品霉菌毒素污染情况见图2和表1。
样品AFB 1的阳性检出率达70.9%，AFB 1中值（表示阳性样品中50%样品毒素含量低于该数值，50%样品高于该数值）为0.5μg/kg，低于国家规定的饲料卫生标准；ZEN 的阳性检出率达91.82%，ZEN 中值为9.6μg/kg，低于国家规定的饲料卫生标准；DON 阳性检出率为59.1%，DON 中值为215.7μg/kg，低于国家规定的饲料卫生标准。
4.2 玉米样品霉菌毒素检测结果
全国玉米样品霉菌毒素检测结果见表2。
由表2可见，1-6月玉米样品AFB 1的阳性检出率为70%，高于2011年玉米全年平均检出率(51.165％)，中值(0.65μg/kg)高于2011年(0.49μg/kg)。
玉米中ZEN 的阳性检出率为97.5%，高于2011年玉米全年平均检出率(67.77％)。
玉米中DON 的阳性检出率为65%，高于2011
年玉米全年平均检出
图2 2011
年度全国饲料及原料中霉菌毒素污染阳性率
图
1 样品中霉菌毒素种类分布
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2012年 第8期 SWINE INDUSTRY SCIENCE 猪业科学
率(51.585％)，中值(1 770.2μg/kg)高于2011年(911.5μg/kg)。
说明2012年1-6月玉米的污染状况较2011年更为严重。
4.3 豆粕样品霉菌毒素检测结果
全国豆粕样品霉菌毒素检测结果见表3。
由表3可见，1-6月豆粕样品AFB 1的阳性检出率为43.47%，与2011年豆粕全年平均检出率(43.23％)持平。
豆粕中ZEN 的阳性检出率为73.91%，低于2011年豆粕全年平均检出率(93.35％)。
豆粕中未检出DON，低于2011年豆粕全年平均检出率(13%)。
说明2012年1-6月豆粕的污染状况较2011年有所好转。
4.4 麸皮样品霉菌毒素检测结果
全国麸皮样品霉菌毒素检测结果见表4。
由表4可见，2012年1-6月麸皮样品AFB 1的阳性检出率为88.46%，高于2011年麸皮全年平均检出率(68.11％)，中值(1.0μg/kg)低于2011年(2.0μg/kg)。
麸皮中ZEN 的阳性检出率为96.15%，与2011年麸皮全年平均检出率(95.19％)持平。
麸皮中DON 的阳性检出率为85.61%，低于2011年麸皮全年平均检出率
(100%)，
表1 所有样品霉菌毒素检测结果
表2 玉米样品霉菌毒素检测结果
表3 豆粕样品霉菌毒素检测结果
表4 麸皮样品霉菌毒素检测结果
中值(1 351.4μg/kg)低于2011年(2 372μg/kg)。
5 概括与结论
从检测结果可以看出，玉米、豆粕、麸皮等饲料原料霉菌毒素污染状况日益严重，高达97%的原料已经受到霉菌毒素污染；且多种霉菌毒素共存现象很普遍，79%的饲料及其原料受到2种及以上霉菌毒素污染。
按样品种类来分，玉米原料3种霉菌毒素污染率均在65%以上，且50%以上的玉米样品污染程度较高；豆粕样品污染率、污染程度较低；麸皮样品受3种霉菌毒素污染均在80%以上，且污染程度较严重。
按霉菌毒素种类来分，3种霉菌毒素中ZEN 污染率最高，平均达到80%以上，主要出现在玉米，麸皮样品中；DON 在麸皮样品中污染率、污染程度较高，平均污染率达到90%；AFB 1在麸皮样品中污染率较高，达到88%以上，但污染程度较低。
分析产生此现象的原因：ZEN、DON 均属于镰刀菌属田间霉菌的代谢物，通常在谷物未采收前就已感染。
因此，农作物受这2种霉菌毒素的污染率更高；而AFB 1属于曲霉菌
属仓储霉菌的代谢物，需在适宜的温度、湿度等条件下繁殖，造成污染。
因此，相对来说污染状况较其他2种毒素轻。
饲料及饲料原料中ZEN 与DON 污染呈现一定的相关性。
当饲料及饲料原料中ZEN 污染严重时，DON 也呈现出污染程度较高的现象，而DON 污染严重的情况下，ZEN 不一定是严重污染。
分析产生此现象的原因：由于ZEN 与DON 均属于镰刀菌属霉菌的代谢物，其中，粉红镰刀菌、禾谷镰刀菌均可产生ZEN 和DON。
因此，当样品检测结果中ZEN 污染严重时，DON 也会是严重污染。
然而产生DON 的霉菌除了以上2种，还有脱氧雪腐镰刀菌，因而，DON 严重污染的情况下，不一定ZEN 也是严重污染。
综上，霉菌毒素的污染范围日益扩大，就霉菌毒素污染的概率和程度而言，2012年前半年玉米和麸皮质量略差于2011年全年的整体水平。
因此，了解当前饲料及其原料污染状况，根据霉菌毒素的形成条件和规律，针对霉菌毒素污染状况采取相应预防措施是十分必要的。
（收稿日期：2012-07-12）
阳性样品中值：表示阳性样品中50%样品毒素含量低于该数值，50%样品高于该数值（下列各表同）。
