新型莽草酸检测方法

莽草酸可用于出口鸡场【产品简介】莽草酸存在于大量高等植物或微生物中。

众所周知的抗流感新宠“达菲”就是通过莽草酸进一步衍生化得到的。

因其口服吸收好，生物利用度高，抗病毒效果可靠，使其在流感流行期间，全球掀起了抢购的热潮。

【分子结构】化学式：3,4,5-三羟基-1-环己烯-1-羧酸分子式：C7H10O5分子量：174.15【性状】类白色精细粉末，易溶于水，在水中的溶解度为18g/100mL，难溶于氯仿、苯和石油醚，气味辛酸。

【药理作用】莽草酸可以直接通过影响花生四烯酸代谢，抑制血小板聚集，抑制动、静脉血栓及脑血栓形成发挥作用，莽草酸还具有抗炎、镇痛作用。

莽草酸可以作为抗病毒和抗癌药物中间体，在体内莽草酸还可转化为多种对病毒、细菌和癌细胞有抑杀作用的物质。

抗菌抗肿瘤作用，1987年有报道中提到日本学者发现莽草酸的一种化合物对海拉细胞株（HeLacells）和埃希利腹水癌（Ehrlichascitescarcinoma）有明显的抑制作用，并能延长接种白血病细胞L1210的小鼠的存活时间，而且毒性相对较低，其抑制作用主要与硫氢化物反应有关。

流感病毒在宿主细胞内复制表达和组装之后，会以出芽的形式突出宿主细胞，但与宿主细胞以凝血酶-唾液酸相连接，神经氨酸酶以唾液酸为作用底物，可催化唾液酸水解，解除成熟病毒颗粒与宿主细胞之间的联系，使之可以自由移动侵袭其他健康的宿主细胞。

如果抑制神经氨酸酶的活性可以阻止病毒颗粒的释放，切断病毒的扩散链，从而抑制病毒的复制。

在发病后24小时内使用，病程会减短20%-30%，病情会减轻25%，作为预防用药，对流感病毒暴露者的保护率在60%-80%之间。

另外还可以通过阻断病毒的糖蛋白合成及抑制病毒成熟后从细胞的释放达到抗病毒效果。

口服迅速被吸收，进入血液循环，2～3小时后达血药峰浓度，其在体内可以定向分布至肺部、支气管、鼻窦等部位。

【特点】药效更持久：本品在体内发挥药效的同时，其体内衍生化产物同样具有抗病毒作用，因而药效稳定时间更长。

高效液相法测定八角属部分植物果实中莽草酸的含量1 药品与试剂莽草酸对照品为本室自制，熔点184～186℃，其IR，EI-MS，13CNMR及lHNMR与文献一致，色谱归一化法测得含量为98.22%；乙腈为色谱纯；H3PO4为色谱纯。

2 仪器及色谱条件惠普HP1050液相色谱仪，二极管阵列检测器；化学工作站。

H66025型超声清洗仪（无锡市超声电子设备厂）。

色谱柱：ZORBAX NH2（5μm，4.6 mm×150mm）；流动相：乙-2%H3PO4（95：5）；流速：1ml?min-1；测定波长213 nm，带宽4nm；参比波长300 nm，带宽80 nm。

衰减9；柱温：室温；柱效以莽草酸计，理论塔板数应不低于5400。

3 方法学考察3.1 样品提取条件优化精密称取干燥的红茴香果实粉末（过40目筛）约0.3 g，分别精密加入30 ml（1～5号）、40 ml（6号）甲醇，精密称重，按下述条件超声提取（250W）。

提取完毕后再精密称重，以甲醇补足至原重量。

取5ml上清液，以0.45μm微孔滤膜滤过，滤液进样，外标一点法测定含量，并对测定结果进行q检验。

检验结果表明各条件间无显著性差异，样品供试液的制备采用以下条件。

样品供试液的制备：精密称取干燥的八角属植物果实粉末（过40目筛）约0.2 g，精密加入20 ml甲醇，称重，超声提取（250 W）20 min，提取完毕后再精密称定，以甲醇补足至原重量，取5ml上清液，以0.45μm微孔滤膜滤过，滤液作为样品供试液。

3.2 标准曲线制备：精密称取莽草酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.3 mg的溶液，作为对照品溶液。

精密吸取对照品溶液2.5，5.0，10.0，15.0，17.5μl进样，测定色谱峰峰面积，并以色谱峰峰面积对对照品的量回归（包括原点），得回归方程为A=147.83+3285.56m，r=0.9995，其线性范围为0.61～4.27μg，可用外标一点法测定。

HPLC―ELSD法测定八角茴香中莽草酸的含量八角茴香，常绿乔木，高达20 m。

其聚合果含大量莽草酸，常由8个骨突果生在中轴呈星状，外表面红棕色，有不规则皱纹，顶端呈鸟喙状，上侧多开裂[1]。

主产广西、广东、云南等地[2]。

莽草酸是从中药八角茴香中提取的一种单体化合物，有抗炎、镇痛作用，是抗癌药物中间体。

有明显抗血栓形成作用，可抑制动、静脉血栓及脑血栓形成[3]。

莽草酸是世界上对付禽流感的唯一武器，莽草酸是可有效对付致命的H5N1禽流感病毒的药物“达菲”的重要成分。

莽草酸（shikimic acid）为三萜酸，结构式见图1。

它是有机弱酸，在水溶液中易解离。

现有的HPLC分析检测方法主要有以下几种：①直接用ODS柱测定，结果发现莽草酸不经吸附就可直接出峰。

为了在常规的ODS 柱上延长莽草酸的保留时间，一般要加入磷酸缓冲盐溶液[4]，或强酸溶液（HClO4，pH=2.5）[5-6]，或离子对试剂[7]。

但是，磷酸盐缓冲液系统和强酸溶液会增加对反相色谱柱损坏的程度。

②采用氨基键合相硅胶柱[8]，不需要加入强酸做流动相，即可获得令人满意的分离效果。

③在检测波长的选择方面，现有文献均用213 nm左右的波长进行测定，但是该吸收峰接近末端吸收，易受杂质干扰。

相比之下，蒸发光散射检测器（evaporative light-scattering detector，ELSD）由于其独特的检测原理却可以克服紫外检测器的不足，这是因为ELSD检测器适用于分析没有紫外吸收或者只有末端吸收的成分，其响应不依赖于样品的光学特性，任何挥发性低于流动相的样品均能被检测。

ELSD的响应值与样品的质量成正比，因而能用于测定样品的纯度或者检测未知物。

因此，为了提高莽草酸含量测定的准确性，本文选择了氨基键合相硅胶柱和蒸发光散射检测器进行含量测定研究。

1 仪器与试药Agilent 1100 HPLC，Alltech 2000型蒸发光散射检测器；色谱柱：Hypersil NH2柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），大连伊利特。

莽草酸质量标准shikimic acidOHOHOH OHOC 7H10O5174.15本品为3,4,5-三羟基-1-环己烯-1-甲酸，主要成分为莽草酸，含C7H10O5应不少于98.5%。

【性状】类白色粉末，易溶于水，难溶于氯仿、苯等有机溶剂，气味辛酸。

熔点本品的熔点（中国兽药典2005附录45）为210～220 ℃，熔解时同时分解。

【检查】pH值本品应为6.0～8.0（中国兽药典2005附录51）溶液的澄清度与颜色取本品五份，各1.0 g，分别加水10mL溶解后，溶液应该澄清无色，如显浑浊，与0.5号浑度标准液比较（中国兽药典2005附录45页），均不得更浑。

干燥失重取本品在恒温减压干燥器，干燥剂为五氧化磷，常温干燥2小时，减重不得过10%（中国兽药典2005附录69页）。

【含量测定】高效液相——质谱法色谱条件：色谱柱十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相甲醇-水(50∶50)；柱温25 ℃；流速0.7 mL/min，进样量10 μL。

质谱条件：离子源API-ESI源；喷雾电压4000 V；雾化气压0.4 MPa；辅助气压力0.03 MPa；加热毛细管温度350 ℃；碰撞气压力0.5 Pa；碰撞诱导解离CID电压均为25 eV；选择性反应离子检测(SIM)；m/z174.1→174.1。

测定法取样品适量，加水适量溶解并定容，配置成每100 mL溶液中含莽草酸20 mg 的溶液，取10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取莽草酸对照品，同法测定。

按外标法，以峰面积计算，即得。

【包装】25 kg/桶【储存】阴凉干燥处，密闭保存。

【有效期】两年。

广西柳州产马尾松松针中莽草酸含量测定
粟本超
【期刊名称】《安徽农业科学》
【年(卷),期】2011(039)021
【摘要】[目的]建立松针中莽草酸测定与有机溶剂提取分离方法.[方法]以水为试剂提取分离马尾松松针中莽草酸;用NH2色谱柱,乙腈和2％H3PO4 (90∶10,V∶V),柱温25℃,流速1 ml/min,检测波长213 nm,高效液相色谱(HPLC)法测定莽草酸含量.[结果]所得样品供试液中莽草酸杂质少;线性范围为0.29～2.88μg(R2=0.9999),平均回收率为98.30％,RSD为0.74％(n=5).[结论]提取分离方法高效、环保、成本低;HPLC法适用于松针及其他天然植物中莽草酸的测定;马尾松松针中莽草酸平均含量为1.14％.
【总页数】3页(P12933-12935)
【作者】粟本超
【作者单位】广西生态工程职业技术学院艺术设计系,广西柳州545004
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.UV法与HPLC法测定马尾松松针中莽草酸含量的比较 [J], 粟本超;肖万娟
2.马尾松松针中莽草酸的提取工艺研究 [J], 周文美;程兰香;赵辰路;张建敏
3.武当地区马尾松松针中总黄酮及莽草酸含量测定 [J], 柯昌虎;郑芳;严慧;刘慧敏;
付培虎;胡平;朱雪松
4.广西柳州产马尾松和湿地松松针挥发油的GC/MS分析 [J], 粟本超;谢济运;陈小鹏;陈芳
5.高效液相色谱法测定马尾松松针中莽草酸的含量 [J], 程兰香;周文美;赵辰路;张建敏
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