【高考真题分类汇编】微生物的培养与应用

(时间：90分钟，满分：100分)一、选择题(本题共20小题，每小题2.5分，满分50分)1．自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是( )A．碳源B．氮源C．无机盐D．生长因子解析：选A。

自养微生物能够利用二氧化碳和水生成有机物，不利用现成的含碳有机物；而异氧型微生物只能利用现成的含碳有机物，所以它们的主要区别是碳源不同。

2．酵母菌培养液常含有一定浓度的葡萄糖，但当葡萄糖浓度过高时，反而抑制微生物的生长，原因是( )A．碳源供应太充足B．葡萄糖不是酵母菌的原料C．改变了酵母菌培养液的pHD．细胞会发生质壁分离解析：选D。

当培养基中葡萄糖的浓度升高时，会导致培养液的渗透压升高，从而导致细胞发生质壁分离。

3．下列关于细菌的叙述，错误的是( )A．硝化细菌能以NH3作为氮源和能源物质B．某些细菌可以利用光能固定CO2合成有机物C．生长因子是某些细菌生长过程中需要额外补充的营养物质D．含伊红和美蓝试剂的培养基不能用来鉴别牛奶中的大肠杆菌解析：选D。

某些细菌如蓝细菌(蓝藻)、光合细菌以及红螺菌都能进行光合作用。

生长因子是指微生物生长不可缺少的微量有机物，主要包括维生素、氨基酸和碱基等。

而微生物的营养物质包括水、无机盐、碳源、氮源和生长因子，它们都是从外界获得补充的。

常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌，如果有大肠杆菌，则菌落呈黑色。

4．关于灭菌和消毒的下列说法不．正确的是( )A．灭菌是指杀死环境中的所有微生物，包括芽孢和孢子B．灭菌和消毒实质上是相同的C．接种环用灼烧法灭菌D．常用的灭菌方法有加热法、过滤法、紫外线法、化学药品法解析：选B。

灭菌与消毒是两个概念。

灭菌是指杀灭一定环境中的所有微生物，包括芽孢和孢子。

根据不同的材料选用不同的灭菌方法，如接种环用火焰烧灼法，培养基用高压蒸汽灭菌法等。

消毒是指杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)，使用的是较为温和的物理或化学方法。

2020届高考生物难点及易错题精讲精练专题12 微生物的培养和应用【难点精讲】一、微生物的实验室培养和无菌技术例题：(2018·全国Ⅱ，37)在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。

回答下列问题：(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具___________(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。

(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_____________________________________________________________________________。

(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能_______________________。

在照射前，适量喷洒________，可强化消毒效果。

(4)水厂供应的自来水通常是经过________(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。

(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是____________________。

【答案】(1)可以(2)在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少(3)破坏DNA结构消毒液(4)氯气(5)未将锅内冷空气排尽【解析】(1)干热灭菌是指将物品放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃条件下加热1～2 h。

耐高温、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等，可采用干热灭菌的方法。

(2)巴氏消毒法是在70～75 ℃条件下煮30 min或在80 ℃条件下煮15 min，可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶的营养物质损失较少。

(3)接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可以用紫外线照射30 min，紫外线能破坏微生物的DNA结构，以杀死物体表面或空气中的微生物。

在照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以强化消毒效果。

高考生物二轮专项检测试题（36）微生物的培养技术及应用一、选择题1．下列有关微生物营养物质的叙述，正确的是()A．是碳源的物质不可能同时是氮源B．微生物的培养都需要提供碳源、氮源、水、无机盐，缺一不可C．蛋白胨来源于植物，营养全面D．液体培养基有利于营养物质的吸收，可用于微生物的扩增培养解析：选D是碳源的物质同时也可以是氮源，如牛肉膏和蛋白胨均可作为碳源和氮源，同时还提供维生素，A错误；并非所有微生物的培养基中都必须含有碳源、氮源，自养的微生物不需要碳源，固氮微生物不需要氮源，B错误；蛋白胨来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质，C错误；液体培养基中不加任何凝固剂，这种培养基的成分均匀，微生物能充分接触和利用培养基中的养料，利于微生物扩增培养，D正确。

2．下列有关制备培养基和倒平板的具体描述，正确的是()①待培养基冷却至40 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板②将灭过菌的培养皿盖放在桌面上，左手拔出棉塞③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰④用左手的拇指和食指完全打开皿盖⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖⑥等待平板冷却5～10 s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上A．①③④⑤B．④⑤⑥C．①②④⑥D．③⑤解析：选D待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，防止杂菌污染，①错误；不能将灭过菌的培养皿盖放在桌面上，因为桌面上可能有杂菌，②错误；右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰，高温可防止杂菌污染，③正确；倒平板时培养皿只需要打开一条稍大于瓶口的缝隙，④错误；右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上皿盖，⑤正确；等待平板冷却5～10 min，待培养基冷却凝固后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上，⑥错误。

3．在微生物培养和现代生物学实验中的许多方面都要进行无菌操作，防止杂菌污染。

下列操作错误的是()①煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢②接种操作要在酒精灯火焰附近进行③无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒④家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌⑤培养基要进行湿热灭菌⑥加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌A．①③B．②④C．③⑤D．④⑥解析：选D无菌操作包括消毒和灭菌。

微生物的培养与应用1.（2013江苏卷,18）某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。

下列叙述正确的是（）A.培养基分装到培养皿后进行灭菌B.转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C.接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D.培养过程中每隔一周观察一次2.（2013新课标卷II,39）[生物——选修1：生物技术实践]临床试用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。

实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。

回答下列问题：（1）为了从样本中获取致病菌菌落，可用_______法或_________法将样本借种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。

（2）取该单菌落适当稀释，用______法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。

（3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A，B，C，D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_______；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B_____；含C的滤纸片周围的透明圈比含A 的小，说明________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的________。

（4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选择抗生素_______。

3.（2013四川卷,10）由于酵母菌利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程菌菌种（过程如图甲所示）。

（1）图甲中，过程①需要的酶有_____________。

为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以____________作为唯一碳源。

②、③过程需要重复几次，目的是______________。

（2）某间学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。

高考生物专题复习《微生物的培养技术与应用》真题练习含答案一、选择题1．(2024·重庆高三联考)熔喷布的主要成分是聚丙烯，会对环境造成污染。

某科研小组从土壤中分离到一种能分解聚丙烯的细菌。

下列说法正确的是()A．配制固体培养基时，需要在无菌的环境中进行B．制备培养基时需要先将培养基的pH调节至中性或弱碱性C．从土壤中分离能分解聚丙烯的细菌，可采用平板划线法进行分离与计数D．纯化培养时，在培养皿皿盖做标记后倒置在恒温培养箱中静置培养2．(2023·淮安高三模拟)如图为实验室中酵母菌纯培养过程的部分操作步骤，下列说法正确的是()A．微生物的纯培养物就是指不含代谢废物的微生物培养物B．步骤①中，用手触摸估计培养基冷却至室温后开始倒平板C．步骤①使用的培养基制备过程是先调pH再灭菌D．③到④过程中，每次划线后都需要灼烧接种环并蘸取菌液3．(2021·山东，14)解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。

脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。

将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。

甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是()A．甲菌属于解脂菌B．实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源C．可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比D．该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力4．(2023·山东，15)平板接种常用在微生物培养中。

下列说法正确的是()A．不含氮源的平板不能用于微生物培养B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物5．(2024·咸阳高三调研)为加速我国北方冬春季秸秆原位还田的腐化过程，研究人员以冻牛粪为材料筛选出耐低温(10 ℃)的纤维素降解菌。

下列相关叙述正确的是()A．选用冻牛粪为材料与其富含纤维素及含耐低温微生物有关B．初筛菌种前，要利用固体培养基在37 ℃条件下扩大培养目标菌种C．用于筛选的培养基是加入刚果红染料的牛肉膏蛋白胨培养基D．应选择菌落直径与周围透明圈直径比值大的菌落进行纯化6．(2024·湖北宜荆荆恩四市高三联考)营养缺陷型菌株是突变后某些酶被破坏，导致代谢过程中某些合成反应不能进行的菌株。

高二生物微生物的培养与应用试题答案及解析1.某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。

下列叙述正确的是A．培养基分装到培养皿后进行灭菌B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C．接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D．培养过程中每隔一周观察一次【答案】B【解析】在配制培养基的过程中要先灭菌后分装，A错误；转换划线角度后要对接种环进行灼烧灭菌再进行划线，B正确；接种后放置在恒温培养箱中进行培养，C错误；培养过程中一般要隔天观察一次，D错误。

【考点】微生物的分离和培养【名师】本题提醒学生要注意细节，如培养基的制备、灭菌的方法、接种方法的选择、结果的分析等，需要考生在平时的学习过程中注意积累，学会构建知识网络结构，对选项作出准确的判断。

2.关于微生物营养物质的叙述中，正确的是A．是碳源的物质不可能同时是氮源B．凡碳源都提供能量C．除水以外的无机物只提供无机盐D．无机氮源也能提供能量【答案】D【解析】是碳源的物质也同时可以是氮源，如牛肉膏和蛋白胨都可以作为碳源和氮源同时还提供维生素，故A错误。

碳源不一定都提供能量，如无机碳源，故B错误。

除水以外的无机物还可以提供维生素，故C错误。

无机氮源也能提供能量，如硝化细菌利用的氨，故D正确。

【考点】本题考查微生物的培养相关知识，意在考察考生对知识点的理解掌握程度。

3.下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水【答案】A【解析】能合成脲酶的细菌才能分解尿素，选择的原则是只有能够利用尿素的微生物才能够生长。

筛选出能够分解尿素的细菌，就必须是在以尿素为唯一氮源的培养基上，而且需要有碳源，故A项正确；B和D的配方中没有尿素，当然不能筛选出能够分解尿素的细菌，B、D项错误；C中有尿素，且为唯一氮源，但配方中缺少碳源，细菌不能生长（细菌不能利用尿素中的碳），故C项错误。

专题02微生物的培养与应用（高考题组）一、单选题1．下列关于微生物实验操作的叙述，错误．．的是A．培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌B．接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧C．接种后的培养皿要倒置，以防培养污染D．菌种分离和菌落计数都可以使用固体培养基【答案】A【解析】接种室、接种箱等常用紫外线消毒法处理，接种环等常用灼烧灭菌法处理，吸管、培养皿等常用干热灭菌法处理，培养基及多种器材用高压蒸汽灭菌法处理，A错误；为了防止杂菌污染，每次接种前后，接种环都要进行灼烧灭菌，B正确；接种后，培养皿需要倒置，以防皿盖上水珠落入培养基造成污染，C正确；分离菌种可以用平板划线法和稀释涂布平板法，后者还可以用于微生物的计数，所用培养基为固体培养基，D正确。

故选A。

2．为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。

下列叙述正确的是（）A．倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整B．图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落C．该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的D．菌落周围的纤维素被降解后，可被刚果红染成红色【答案】B【解析】A、倒平板后无需晃动，A错误；B、Ⅰ区、Ⅱ区没有出现单菌落，说明细菌数量太多，故应从Ⅲ区挑取单菌落，B正确；C、出现单菌落即达到了菌种纯化的目的，C错误；D、刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应，D错误。

故选B。

3．野生型大肠杆菌可以在基本培养基上生长，发生基因突变产生的氨基酸依赖型菌株需要在基本培养基上补充相应氨基酸才能生长。

将甲硫氨酸依赖型菌株M和苏氨酸依赖型菌株N单独接种在基本培养基上时，均不会产生菌落。

某同学实验过程中发现，将M、N菌株混合培养一段时间，充分稀释后再涂布到基本培养基上，培养后出现许多由单个细菌形成的菌落，将这些菌落分别接种到基本培养基上，培养后均有菌落出现。

考点47 微生物的培养与应用1．(2017·四川德阳月考，39)自然界中的微生物往往是混杂生长的。

人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。

下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。

步骤：①制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液；②用稀释涂布平板法接种样品；③适宜温度下培养。

结果分析：(1)为测定大肠杆菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是________。

A．一个平板，统计的菌落数是23B．两个平板，统计的菌落数是22和26，取平均值24C．三个平板，统计的菌落数分别为21、5和52，取平均值26D．四个平板，统计的菌落数分别是21、30、24和25，取平均值25(2)一同学在对应稀释倍数为106的培养基中，测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每毫升样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.2mL)________。

(3)用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量________，原因是________________________________________________________________。

【解析】(1)D中设有多个重复组，且实验结果相差不大，故结果最可信。

(2)由于菌落数的平均值为23.4，稀释倍数是106，所取稀释液的体积为0.2 mL，故每毫升样品中的菌落数是23.4÷0.2×106＝1.17×108。

(3)因为菌落可能由两个或多个细菌连在一起生长而成，所以实际活菌数量要比测得的数量多。

【答案】(1)D(2)1.17×108(3)多当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察的是一个菌落2．(2017·河南焦作二模，37)幽门螺杆菌是栖息在胃黏膜的螺旋状短杆菌，具有很强的脲酶活性。

如表是某实验小组培养幽门螺杆菌所用培养基的配方(培养细菌一般用牛肉膏蛋白胨培养基)。

藏躲市安详阳光实验学校考点71 微生物的培养和应用1．培养基（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。

（2）营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。

此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。

（3）种类：按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基。

2．无菌技术（1）含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。

（2）关键：防止外来杂菌的入侵。

（3）不同对象的无菌操作方法(连线)3．大肠杆菌的纯化培养（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基①操作步骤→→→→②倒平板的方法及注意事项a．请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。

b．甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。

c．丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。

（2）纯化大肠杆菌的方法①纯化培养原理：想方设法在培养基上得到由一个细菌繁殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。

②纯化大肠杆菌的关键步骤是接种。

③常用的微生物接种方法有两种a．平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

b．稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

系列稀释操作(如图所示)：涂布平板操作(如图所示)：（3）菌种的保存方法①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。

②对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。

4．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（1）分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。

（2）统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。

（3）实验流程：土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数。

5．分解纤维素的微生物的分离（1）纤维素酶①组成：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、C X酶和葡萄糖苷酶。

微生物的培育与应用例：（2024全国卷I)将马铃薯去皮切块，加水煮沸肯定时间，过滤得到马铃薯浸出液。

在马铃薯浸出液中加入肯定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M 培育基。

回答下列问题：（1）M 培育基若用于真菌的筛选，则培育基中应加入链霉素一抑制___________的生长，加入了链霉素的培育基属于___________培育基。

（2）M 培育基中的马铃薯浸出液为微生物生长供应了多种养分物质，养分物质类型除氮源外还有___________（答出两点即可）。

氮源进入细菌后，可参加合成的生物大分子有___________（答出两点即可）。

（3）若在M 培育基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培育，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产生淀粉酶的微生物，加入的显色剂是___________，该方法能筛选出产生淀粉酶微生物的原理 。

（4）甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果： 甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是110、140和149，取平均值133。

乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124。

有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其缘由是：。

【答案】（1）细菌选择（2）碳源、无机盐蛋白质、DNA 、RNA（3）碘液淀粉遇碘显蓝色，产淀粉酶菌落四周淀粉被水解，形成透亮圈（4）乙同学的结果中，1个平板的计数与另2个相差悬殊，结果的重复性差【解析】（1）M 培育基若用于真菌的筛选，说明M 培育基能满意真菌的生长，而能抑制其它微生物的生长，链霉素是一种抗生素，可以抑制细菌的生长。

加入了链霉素的培育基能筛选出真菌，该培育基属于选择培育基。

（2）微生物生长须要多种养分物质除氮源外，还须要碳源、无机盐、水以及特别养分物质等。

氮元素是蛋白质和核酸等生物大分子的组成元素，因此氮源进入细胞后,可参加合成的生物大分子有蛋白质和核酸。