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鸡白痢灭活苗制备

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鸡白痢灭活疫苗的制造、检定与保存
班级：生物工程123 姓名：赵家熙学号：2012013409
摘要：鸡白痢是鸡沙门氏菌引起的一种流行广泛的细菌性传染病, 以经卵垂直传递为主要传播方式, 也可水平传播, 给养鸡业造成很大经济损失。

通过检疫、淘汰阳性鸡等措施净化种鸡场, 并通过抗菌素和生物制剂防治该病, 但由于该病多环节及多途径感染, 使防制很难达到预期目的。

因此，本文介绍用免疫学灭活疫苗方法来治疗鸡白痢。

关键词：鸡白痢沙门氏菌灭活苗制备保存鉴定
正文：此实验介绍了鸡白痢灭活疫苗制备的基本要点，菌苗的检定方法与保存措施。

其主要分为菌种培养，鉴定，保存三部分。

一、实验材料
鸡白痢伤寒杆菌、甲醛、磷酸盐缓冲生理盐水、肉汤琼脂、硫乙醇酸盐培养基、鸡白痢伤寒杆菌诊断血清、小白鼠、实验用兔
二、实验步骤
1. 菌种培养特性与生化特性
典型的形态：革兰氏阴性、两端钝圆的短杆菌，（0.7-1.5um）×（2-5um）散在，无荚膜和芽胞。

培养特性：在普通琼脂培养基上生长良好，培养24h后，形成中等大小、圆形、表面光滑、无色半透明、边缘整齐的菌落。

生化特性：不发酵乳糖、蔗糖和麦芽糖，不产生吲哚，不分解尿素，大多产生硫化氢。

发酵葡萄糖、麦芽糖和甘露醇，产酸不产气。

2. 血清凝集试验
用37℃培育18-20h的培养物以磷酸盐缓冲生理盐水稀释成含菌6亿/mL，与鸡白痢伤寒杆菌诊断血清作定量凝集试验，充分混合后放37℃过夜，以肉眼见到凝集（+）之血清最高稀释度为凝集反应之效价。

凝集价不应低于血清原效价之半。

3. 纯菌试验
原液采集后应逐瓶取样接种琼脂斜面1管，于37℃培育2d，如有杂菌生长应废弃。

4. 杀菌与无菌试验
将培养的合格细菌中加入不超过1.1%±0.1%(mL /mL)的甲醛溶液杀菌。

加杀菌剂后的原液应放在37℃，不得超过7天，取样接种不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基及普通琼脂斜面各1管，放37℃培育5天，如有本菌生长，可加培量复试一次；如有杂菌生长应废弃。

5. 抗原性试验
选体重2kg左右之健康家兔至少3只，用灭活的细菌皮下注射3次，每次0.5mL，第1次注射7亿菌/ mL，第2次14亿菌mL，第3次21亿菌mL，每次间隔7天。

末次注射后10～14d采血做定量凝集试验测定效价，2/3家兔血清之凝集效价不低于1∶12800为合格。

6. 菌苗稀释
稀释菌苗用含0.25%～0.5%（g /mL）苯酚或其他适宜的防腐剂之磷酸盐缓冲生理盐水。

菌苗浓度，含鸡白痢伤寒杆菌3亿/ mL
7. 成品检定
菌苗应为乳白色悬液，pH值为 6.8-7.4，不应有摇不散的菌块及异物。

苯酚含量应为0.25%-0.5%（g /mL）。

8. 保存与效期
应保存于2-8℃，自稀释之日起效期为1年半。

如原液保存超过1年稀释，应相应缩短效期（自采集之日起总效期不得超过2年半）。

此实验还要注意菌种是否灭活完全，在显微镜下观察需呈革兰氏阴性、两端钝圆的短杆菌，无荚膜和芽胞。

已经培养出来的菌种是否符合其培养特性和生化特性。

血清凝集实验加入血清之后放入显微镜下面观察是否有凝集现象。

使用阳性血清和阴性血清形成对照。

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自家组织灭活苗制作

自家组织灭活苗制作

自家组织灭活苗制作鸡组织苗的制作用具及其消毒:手术剪/镊子、饭盒、三角瓶、量杯、纱布等高压消毒。

捣碎机:用温和消毒水浸4-5小时(浓度为正常浓度的2倍)之后用温开水冲洗掉消毒药。

1.采病料:发病死亡鸡的典型脏器，肝、脾、肺、肾、法氏囊、输卵管等典型病变脏器，也可从不同的鸡采取(结合猪的典型病料提取)。

将组织的结缔组织去除。

放在冰箱或冰柜冷冻室反复冻融，冰冻后拿出融化，升至常温再放冰箱冷冻，反复操作最少三次。

这样做的目底是让病毒从内脏组织病料中最大程度的释放。

(也可借此机会逐渐切碎)2. 称重:将采取的组织称重，一般按W:V比加入1:3或1:5的生理盐水稀释，即300克组织加入1000或1500毫升生理盐水。

3. 粉碎:用组织粉碎机粉碎组织，越碎越好，制成组织悬液。

4.过滤:先用2层灭菌纱布粗过滤，边过滤边搅拌组织悬液;滤液再用8层灭菌纱布精过滤;最好用12层纱布过滤。

5.配制1%~2%的甲醛灭活液:99%以上纯的甲醛用灭菌生理盐水配制成1%(或2%)，如果是福尔马林，2.78毫升相当于1毫升甲醛，如配制1000毫升1%的甲醛灭活液需加入27.8毫升。

6.灭活:将甲醛溶液加入滤液中，使甲醛的终浓度为0.1-0.3-0.5%。

在37?(30~40?之间也可)灭活48~72小时，每2小时振摇一次，以充分灭活。

7.进行安全性检测。

无菌检查: 取灭活的组织液0.2ml，各接种血琼脂斜面及肉汤培养基，37培养24--48小时，观察无菌生长; 安全检查: 选择1.5Kg以上健康兔4只，分两组，每组两只，试验组皮下接种灭活组织液5ml/只，对照组接种PBS液5ml/只，观察7天，无不良反应则为合格;效力检验: 选择1.5Kg以上健康兔4只，每只肌注1ml，20天后采集兔的血液并分离血清，进行HI试验，检测血清抗体效价;或取对照兔2只，连同试验兔一起，用兔瘟强毒进行攻毒，结果对照兔2/2死亡，试验验兔3/4保护或对照兔1/2死亡，试验兔4/4保护，说明所制的兔瘟组织灭活疫苗合格。

重组鸡白痢沙门菌、制备方法及应用的制作技术

重组鸡白痢沙门菌、制备方法及应用的制作技术

本技术公开了一种重组鸡白痢沙门菌、制备方法及应用，属于动物细菌基因工程技术领域。

重组鸡白痢沙门菌的名称为鸡白痢沙门菌C79-13ΔcrpΔasd(pYA3493-HN)，保藏编号：CCTCC？NO:M？2015305，其表达的鸡新城疫病毒保护性抗原基因-HN基因是鸡新城疫病毒重要的免疫原性基因片段，具有良好的免疫保护性。

重组菌株衍生于鸡白痢沙门菌标准菌株C79-13，完全保留了C79-13针对鸡白痢沙门菌的免疫效力，且其毒力比C79-13更弱，具有良好的生物安全性，可同时提供针对鸡白痢沙门菌和鸡新城疫两种病原的保护力。

同时，该重组菌株不含抗性标记，完全符合疫苗生物安全性要求。

技术要求1.重组鸡白痢沙门菌，其特征在于：其为鸡白痢沙门菌C79-13ΔcrpΔasd(pYA3493-HN)，保藏编号：CCTCCNO:M2015305。

2.如权利要求1所述的重组鸡白痢沙门菌的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：1）原核表达质粒pET-32a-HN的构建：将新城疫病毒HN基因克隆至原核表达载体pET-32a；2）重组质粒pYA3493-HN的构建：将构建正确的原核表达质粒pET-32a-HN进行双酶切，并与经相同双酶切的穿梭质粒pYA3493连接，转化至大肠杆菌，并筛选阳性克隆；3）重组鸡白痢沙门菌的构建：将重组质粒pYA3493-HN转化至减毒鸡白痢沙门菌C79-13ΔcrpΔasd缺失株中，即得。

3.根据权利要求2所述的重组鸡白痢沙门菌的制备方法，其特征在于：步骤1）中新城疫病毒HN基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。

4.根据权利要求3所述的重组鸡白痢沙门菌的制备方法，其特征在于：步骤2）中双酶切为BamHI和HindⅢ双酶切。

5.如权利要求1所述的重组鸡白痢沙门菌在制备疫苗中的应用。

6.疫苗，其特征在于：其包含如权利要求1所述的重组鸡白痢沙门菌。

说明书重组鸡白痢沙门菌、制备方法及应用技术领域本技术涉及一种重组鸡白痢沙门菌，具体涉及一种不含抗性标记的表达鸡新城疫病毒主要保护性抗原的减毒鸡白痢沙门菌，以及该重组鸡白痢沙门菌的制备方法和应用，属于动物细菌基因工程技术领域。

组织灭活苗的制备过程

组织灭活苗的制备过程

组织灭活苗的制备过程
1、病料采集
2、病料处理
3、配苗
4、灭活
一、材料：脾脏、淋巴结等组织、甲醛、硫
柳汞、恒温箱、剪刀、漏斗、镊子、三
角烧瓶、烧杯、移液器、匀浆机、纱布
二、步骤：
1、无菌处理：去除被膜、大血管、脂肪、
筋膜，称重。

剪成1平方厘米大小的小块，匀浆。

2、无菌检验，测定病毒效价
3、生理盐水4-6倍稀释，搅拌均匀
4、过滤。

纱布4-8层进行过滤，取上清液
5、灭活剂配制：计算甲醛用量，使甲醛最
终浓度达到0.5%。

（用甲醛的目的是使蛋白变性）。

6、缓慢加入甲醛，边加边搅拌。

用三角烧
瓶盛装。

7、牛皮纸扎好三角烧瓶，放入恒温箱内，
38摄氏度下放置24小时。

（病毒苗24
小时，细菌苗48小时。

）
8、分装灭菌瓶，每瓶100毫升。

9、成品检验：要求无菌、达到一定的效价、
安全等。

10、保存：4摄氏度冰箱保存，用时摇匀。

注：若长久保存，需加入硫柳汞（防腐剂）。

固体硫柳汞配制成1%浓度的水剂，加入到灭活苗中的终浓度为万分之一；也可加入有治疗作用的双抗（如青链霉素）。

中兽医治疗鸡白痢的防治方法研究

中兽医治疗鸡白痢的防治方法研究

临床金鉴20237260中兽医治疗鸡白痢的防治方法研究伍金贵1，莫水均2（1.廉江市横山镇农业技术服务中心，广东廉江人 524443；2.廉江市动物卫生监督所，广东廉江人 524400）摘要：在鸡规模化、高密度养殖背景下，鸡白痢等疾病呈高发趋势，严重影响鸡的健康生长及养殖效益。

中兽医在鸡白痢的诊治中有着不可比拟的优势，相关部门应重视中兽医的推广及应用。

基于此，以实例探讨鸡白痢的中兽医治疗方法，希望能够为临床诊治鸡白痢的参考借鉴作用。

关键词：鸡白痢；流行特点；传染性；中兽医疗法中图分类号：S858.31 文献标志码：B 文章编号：1003-8655（2023）07-0025-03鸡白痢是鸡养殖常见肠道传染病，其病原为沙门氏菌，雏鸡是该病的高发群体，因此也被称之为雏鸡白痢、沙门氏菌病。

该病危害性大，传染性强，致死率高，目前我国将其列为二类动物疫病。

临床上患病鸡会出现明显的排糊状、粥样状灰白色粪便等症状，因此养殖人员要密切留意，及早发现并采用中兽医方法予以治疗，降低死亡率和经济损失。

1 病原及流行特点鸡白痢病原为沙门氏菌，属革兰氏阴性短小杆菌，呈杆状或卵圆形。

病菌广泛存在于病鸡的内部脏器，尤其是肝脏、胆囊、肠道以及卵黄囊中病菌数量最多。

病菌可随粪便排出体外，外部温度湿度环境适宜情况下病菌可长时间存活。

病菌具备较强的抵抗力和适应性，在土壤等环境中可长期存活，但不耐高温，在70℃热水中只需10 min 即可将其杀灭。

同时，鸡白痢沙门氏菌对紫外线、常规消毒剂的抵抗力不强，如火碱、高锰酸钾、来苏儿溶液、氢氧化钠等，短时间即可将其杀灭。

鸡白痢属二类传染病，同时亦是人畜共患病。

该病可侵害任何日龄、品种、性别的鸡，2～3周龄的雏鸡发病率更高，成年鸡即使患病也大多以隐性感染为主。

该病的主要传染源是患病鸡和带菌鸡，其传染方式较多，例如：成年鸡和雏鸡混群感染、其他带菌家禽混养感染、孵化室感染等，病菌主要经消化道、呼吸道等途径传播，若母鸡带菌则可经过种蛋传播至下一代。