不染色标本检查法：是将细菌标本不经染色直接镜检，从而观察生活状态下细菌的形态及运动状况的一种检查方法。主要用于观察细菌的动力。常用方法：1、悬滴法：观察自然状态下需氧菌和兼性厌氧菌的动力。2、压滴法：观察需氧菌和兼性厌氧菌的动力。
按电离后染料离子的性质分类：（1）、碱性染料：此类染料电离时，染料离子带正电荷。如美兰。（2）、酸性染料：酸性染料电离时，染料离子带负电荷。如伊红。细菌的常用染色法：革兰染色、抗酸染色、荧光染色、鞭毛染色、荚膜染色。
革兰氏染色法：【原理】（1）革兰阳性细菌细胞壁结构较致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易渗入；革兰阴性菌细胞壁结构较疏松，肽聚糖层少，脂质含量多，乙醇易渗入。（2）革兰阳性菌的等电点低，革兰阴性菌的等电点较高，在相同pH条件下，革兰阳性菌所带负电荷比革兰阴性菌多，与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固不易脱色。（3）革兰阳性菌细胞内含有大量核糖核酸镁盐，可与结晶紫和碘牢固的结合成大分子复合物，不易被乙醇脱色；而革兰阴性菌细胞内含极少量的核糖核酸镁盐，吸附染料量少，形成的复合物分子也较小，故易被乙醇脱色。【步骤】：涂片→固定→（媒染）→染色→（脱色）→（复染）。【结果】:紫色为革兰阳性菌，红色为革兰阴性菌。
革兰氏染色的三个原理，操作步骤与临床意义:1、原理（1）渗透学说：革兰阳性菌细胞壁结构较紧密，肽聚糖层厚，含脂质少，脱色时乙醇不易渗入，反而使细胞壁脱水，通透性下降，胞内结晶紫与碘的复合物不易渗出。格兰阴性菌细胞壁结构较疏松，肽聚糖层薄，含脂质多，易被乙醇溶解，是细胞壁通透性增加，胞内结晶紫与碘的复合物易被乙醇溶解溢出而被脱色。【主要学说——细胞壁结构学说：G+菌和G-菌的细胞壁成分差异大，对脱色剂的反应不同】（2）化学学说：革兰阳性菌含大量核糖核酸镁盐可与结晶紫、碘牢固结合，而不易被乙醇脱色。革兰阴性菌内所含核糖核酸镁盐少，故易被脱色。（3）等电点学说：革兰阳性菌的等电点（pH2~3）比格兰阴性菌（pH4~5）低，在相同pH的条件下，革兰阳性菌比格兰阴性菌所带的负电荷多，与带正电荷的碱性染料结合较牢固，而不易脱色。2、操作步骤：①细菌涂片、干燥，经火焰固定（菌膜>1cmX1cm）②结晶紫染色1min，水洗甩干③加碘液媒染1min，水洗甩干④加95%乙醇脱色30s，水洗甩干⑤用稀释复红或沙黄复染30s，水洗吸干后镜检3、临床意义：①鉴别细菌②选择治疗用药③与细菌致病性有关抗酸染色：【原理】分枝杆菌细胞壁含脂质较多，其中主要成分为分枝菌酸，此物具有抗酸性，染色时与石炭酸复红结合牢固，能抵抗酸性乙醇的脱色作用，因此抗酸菌能保持复红的颜色，达到染色目的。【结果】：未脱色细菌呈红色为抗酸性细菌,脱色经复染呈蓝色的细菌为非抗酸性细菌。
发色团：分子结构的某些基团吸收某种波长的光，而不吸收另外波长的光，从而使人觉得好像这一物质"发出颜色"似的，因此把这些基团称为"发色基团/发色团"。助色基：带有“色基”的苯衍生物叫“色原”或“色原物”。“色原”虽有色，但不一定能和被染物结合而着色，常需在染料分子中加上一个能电离的基团，使其能生成盐类而与被染物结合着色。这种结合在色原物上、能电离的化学基团称“【助色基】”或“【助色团】”。
细菌的生化反应：是指利用生物化学的原理，来测定细菌对各种物质的代谢能力、代谢途径、代谢方式以及代谢产物的不同，从而对细菌进行鉴别鉴定的方法。碳水化合物的代谢试验：糖醇类发酵试验；葡萄糖氧化/发酵试验（O/F）；甲基红试验（MR）；V—P试验；β-半乳糖苷酶试验（ONPG）；七叶苷水解试验。
蛋白质和氨基酸的代谢试验：吲哚（靛基质）试验；硫化氢试验；尿素分解试验；苯丙氨酸脱氨酶试验；氨基酸脱羧酶试验；明胶液化试验。
碳源和氮源利用试验：枸橼酸盐利用试验；丙二酸盐利用试验。
各种酶类试验：氧化酶试验；过氧化氢酶试验（触酶试验）；硝酸盐还原试验；脂酶试验；卵磷脂酶试验；DNA酶试验；凝固酶试验；CAMP试验；胆汁溶菌试验。
抑菌试验：O/129抑菌试验；杆菌肽试验；奥普托欣试验(Optpchin)。
IMViC试验：I——吲哚试验M——甲基红试验V——V-P试验C——枸橼酸盐试验
糖（醇、苷）类发酵试验：【原理】各种细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，并且细菌对糖类分解后产生不同种类和数量的酸类或CO2，可根据此特点来鉴别细菌。【方法】根据待检菌的鉴别要求选用合适的含有糖类（单糖、双糖或多糖）、醇类（甘露醇、肌醇等）、苷类（水杨苷、菊糖等）的培养基，将待检菌接种经培养后观察结果。【结果】若分解糖类产酸，培养基中的指示剂呈酸性反应；产气的细菌能使半固体培养基内或液体培养基中倒置的小管内出现气泡，固体培养基则出现裂隙；不分解糖类，培养基则无颜色等变化。【应用】是鉴定细菌最主要和最基本的试验，特别用于肠杆菌科细菌的鉴定。如伤寒沙门菌分解葡萄糖产甲酸，而甲型副伤寒沙门菌分解葡萄糖产甲酸外还产生CO2用此可区别二者。
葡萄糖氧化/发酵试验（O/F）：【原理】细
菌利用糖的方式有氧化和发酵两种类型。
其中在分解过程中必须由氧分子参加的
为氧化型；能进行无氧酵解的为发酵型，
发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都
能分解葡萄糖。不分解葡萄糖的为产碱
型。O/F试验就是利用两管同样的含唯
一一种可分解糖——葡萄糖的培养基，一
管处于有氧状态；另一管造成厌氧环境，
接种细菌并经培养后，分别观察细菌在有
氧和无氧环境中分解葡萄糖的能力，从而
确定细菌对糖的分解类型的一类试验。
【培养基】通常所用的培养基是两管含葡
萄糖的半固体琼脂，其中一管加有1ml
的液体石蜡（隔绝空气），称“F管”；另
一管不加石蜡，称“O管”）。培养基中含
有溴麝香草酚兰，由于培养基在正常状态
下呈中性，故正常状态呈绿色。【结果】1、
O管：黄色；F管：绿色，氧化型。2、O
管：黄色；F管：黄色，发酵型。【意义】
（1）、用于葡萄球菌属与微球菌属的鉴
别；（2）、用于肠杆菌科、弧菌科与非发
酵菌的鉴别。
β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）：【原
理】有的细菌可产生β-半乳糖苷酶，能
分解邻硝基酚-β-D-半乳糖苷（ONPG），
而生成黄色的邻硝基酚，在很低浓度下也
可检出。【方法】从克氏双糖铁培养基上
取菌，于0.25ml无菌生理盐水中制成菌
悬液，加入一滴甲苯并充分振摇，使酶释
放。将试管置37℃水浴5min，加入
0.25mlONPG试剂，水浴20min～3h观察
结果。【结果】菌悬液呈现黄色为阳性反
应。一般在20～30min内显色。【应用】
常用于迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴定。
如埃希菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属
等为阳性；沙门菌属、变形杆菌属等为阴
性。
七叶苷水解试验：【原理】七叶苷可被细
菌分解为葡萄糖和七叶素，七叶素与培养
基中的枸橼酸铁的起反应，形成黑色化合
物，使培养基变黑。【方法】将待检菌接
种到七叶苷培养基上，培养后观察。【结
果】变黑色或棕黑色者为阳性，不变色为
阴性。【应用】主要用于D群链球菌（阳
性）和其他链球菌（阴性）的鉴别。也可
用于肠杆菌科、其他革兰阴性菌及厌氧菌
的鉴别。
甲基红试验（MR）：【原理】不同的细菌
分解葡萄糖后的代谢产物是不同的，如大
肠埃希氏菌分解葡萄糖后产生丙酮酸，丙
酮酸再进一步分解为甲、乙、丙、丁酸、
乳酸、琥珀酸等各种酸类物质，而使培养
基的ph值下降，当pH值下降至pH4.5
以下时，加入甲基红指示剂，培养基呈现
红色，此为阳性反应。若细菌分解糖后产
酸量较少，或产生的酸进一步转化为其它
物质（如醇、酮、醛、气体或水）培养基
的pH值则保持在 6.2以上，此时加入
MR指示基，培养基呈桔黄色，此为阴性
反应。【培养基】葡萄糖磷酸盐蛋白胨水。
【结果】培养基呈红色者为阳性；桔黄色
为阴性。【意义】主要用于肠杆菌科各属、
种间的鉴别。
V—P试验：【原理】测定细菌产生乙酰
甲基甲醇的能力。某些细菌如产气肠杆
菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一
步脱羧形成乙酰甲基甲醇。在碱性条件
下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，进而
与培养基中的精氨酸等含胍基的物质结
合形成红色化合物。即V-P试验阳性。【结
果】红色者为阳性，黄色或类似铜色为阴
性。【应用】主要用于大肠埃希菌和产气
肠杆菌的鉴别。本试验常与MR试验一起
使用，一般情况下，前者为阳性的细菌，
后者常为阴性，反之亦然。
吲哚（靛基质）试验：【原理】：某些细菌
具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨
酸生成吲哚（靛基质），当加入吲哚试剂
（对二甲氨基苯甲醛）后则形成红色的玫
瑰吲哚。【培养基】：蛋白胨水培养基。【结
果】：于两者液面接触处出现红色为阳性，
无色为阴性。【应用】：主要用于肠杆菌科
细菌的鉴定。
硫化氢试验：【原理】某些细菌能分解培
养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨
酸）产生硫化氢，硫化氢遇铅或亚铁离子，
可形成黑色的硫化铅和硫化亚铁沉淀。
【培养基】：醋酸铅培养基。【结果】：培
养基变黑为阳性，不变色为阴性。【意义】：
主要用于肠杆菌科的属种鉴定。
尿素分解试验：【原理】：有些细菌能产生
尿素酶，能将培养基中的尿素分解产生大
量的胺，从而使培养基变碱并使酚红指示
剂变红。【培养基】：尿素培养基。【结果】：
培养基变红为阳性，不变色为阴性【意
义】：主要用于肠杆菌科的属种间鉴别。
苯丙氨酸脱氨酶试验：【原理】：有些细菌
如变形杆菌属可产生苯丙氨酸脱氨酶，使
苯丙氨酸脱去氨基后生成苯丙酮酸，后者
与三氯化铁试剂作用，可形成一种不稳定
的绿色化合物。从而使苯丙氨酸斜面变为
绿色。【培养基与试剂】：培养基：苯丙氨
酸琼脂斜面；试剂：10%FeCL3溶液。【注
意事项】：结果必须立即观察，若延长时
间，则绿色会消退。【用途】：主要用于肠
杆菌科的初步分群。
氨基酸脱羧酶试验：【原理】：本试验是测
定细菌能否产生氨基酸脱羧酶以及氨基
酸脱羧酶种类的一种试验。临床上常用的
氨基酸脱羧酶试验共有三种：即赖氨酸脱
羧酶试验、鸟氨酸脱羧酶试验和精氨酸脱
羧酶试验。产物基本相同，即都产生胺和
CO2。由于胺是碱性物质，大量胺的产生
使培养基的Ph值升高（7.0以上），从而
使培养基中的溴甲酚紫指示剂显紫色。
【培养基】：1、试验管：含0.1%葡萄糖；
0.5%相应氨基酸；溴甲酚紫指示剂。2、
对照管：除不含相应的氨基酸外，余均同
试验管。3、两管均应加入液体石蜡或矿
物油，以隔绝空气。【结果】：孵育后，对
照管应呈黄色，测定管呈紫色（指示剂为
溴甲酚紫）为阳性；若测定管呈黄色为阴
性。若对照管呈现紫色则试验无意义，重
新做试验。【意义】：主要用于肠杆菌科的
属、种鉴定。
枸橼酸盐利用试验：【原理】：本试验就是
测定细菌能否利用枸橼酸盐作为唯一的
碳源和能否利用磷酸二氢铵做为唯一氮
源的一种试验。当把细菌接种到只含有枸
橼酸盐和磷酸二氢铵这种唯一碳源和氮
源的培养基中时，若细菌不能利用这种唯
一的碳源和氮源，则细菌不能生长；若细
菌能以此作为唯一的碳、氮源，则能利用
其生长繁殖，并将枸橼酸盐转变为碳酸
盐，同时将磷酸二氢铵分解成磷酸盐和
NH3。由于碳酸盐和NH3均属碱性，故
大量产生后可使培养基变碱，使溴麝香草
酚兰指示剂变蓝色。【培养基】：枸橼酸盐
斜面培养基。【结果】若培养基斜面由绿
色变为蓝色，则为阳性；若培养基斜面仍
为绿色为阴性。【意义】：主要用于肠杆菌
科的属、种鉴别。
氧化酶试验：【原理】：氧化酶（细胞色素
氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的最终呼
吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色
素C氧化，再由氧化型细胞色素C使对
苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物。【结
果】：取一洁净滤纸片，沾取被检菌的菌
落少许，加氧化酶试剂一滴，阳性者立即
呈粉红色，继而变为深红色，并于10～
30分钟内变为紫黑色；阴性者颜色无明
显改变。【质控菌】：阳性菌株：铜绿假单
胞菌：阴性菌株：大肠埃希氏菌。【意义】：
（1）、用于奈瑟氏菌属的鉴定（均阳性）。
（2）、用于肠杆菌科与其它相似菌科的鉴
别。【注意事项】：）（1）、操作过程中应避
免接触含铁物质，否则易出现假阳性；
（2）、若菌落本身呈红色，试验结果无法
判断时，可于试验时在纸片上滴加氧化酶
试剂后，再滴加一滴10%α—萘酚，此
时菌落变为蓝色为阳性；菌落仍为红色为
阴性。
触媒试验（过氧化氢酶试验）：【原理】具
有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生
成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气
泡。【试剂】：3%过氧化氢溶液。【方法】
取菌落置于洁净的试管内或玻片上，然后
加3%过氧化氢数滴；或直接滴加3%过
氧化氢于不含血液的细菌培养物中，立即
观察结果。【结果】有大量气泡产生者为
阳性。不产生气泡者为阴性。【应用】革
兰阳性球菌中，葡萄球菌和微球菌均产生
过氧化氢酶，而链球菌属为阴性，故此试
验常用于革兰阳性球菌的初步分群。【注
意事项】①、不得使用血琼脂培养基上的
菌落，因红细胞内血红蛋白上的铁离子也
有触酶作用，可出现假阳性。②、尽量使
用新鲜菌落，因陈旧培养物易丧失触酶，
造成假阴性。
硝酸盐还原试验：【原理】：硝酸盐还原反
应包括两个过程：一是在合成过程中，硝
酸盐还原为亚硝酸盐和氨，再由氨转化为
氨基酸和细胞内其他含氮化合物；二是在
分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替
氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。能使
硝酸盐还原的细菌从硝酸盐中获得氧而
形成亚硝酸盐和其他还原性产物。但硝酸
盐还原的过程因细菌不同而异，有的细菌
仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐，如大肠埃希
菌；有的细菌则可使其还原为亚硝酸盐和
离子态的铵；有的细菌能使硝酸盐或亚硝
酸盐还原为氮，如假单胞菌等。硝酸盐还
原试验系测定还原过程中所产生的亚硝
酸。【培养基】：硝酸盐培养基。【结果】：
出现红色为阳性。若加入试剂后无颜色反
应，可能是：1.硝酸盐没有被还原，试验
阴性；2.硝酸盐被还原为氨和氮等其他产
物而导致假阴性结果，这时应在试管内加
入少许锌粉，如出现红色则表明试验确实
为阴性。若仍不产生红色，表示试验为假
阴性。若要检查是否有氮气产生，可在培
养基管内加一小倒管，如有气泡产生，表
示有氮气生成。【质控菌】：阳性菌株：大
肠埃希氏菌；阴性菌株：醋酸钙不动杆菌。
【应用】：用于非发酵菌群的分类鉴定。
DNA酶试验：【原理】：某些细菌产生
DNA酶，可使长链DNA水解成寡核苷
酸链。因为长链DNA可被酸沉淀，寡核
苷酸链则溶于酸，所以当菌落平板上加入
酸后，会在菌落周围出现透明环。【培养
基】：0.2％DNA琼脂平板。【方法】：将
被检菌点种于上述平板上，于35℃培养
18～24h，用lmol/L盐酸覆盖平板，观察
结果。【结果】：在菌落周围出现透明环为
阳性，无透明环为阴性。【应用】：在革兰
阳性球菌中只有金黄色葡萄球菌产生
DNA酶，在肠杆菌科中沙雷菌和变形杆
菌产生此酶，故本试验可用于细菌的鉴
别。
血浆凝固酶原理操作及结果判断：原理：
金黄色葡萄球菌可产生两种凝固酶。一种
是结合凝固酶，结合在细菌的细胞壁上
（凝聚因子），它可以直接使血浆中的可
溶性的纤维蛋白原变成不溶性的纤维蛋
白而附着于细菌表面，在玻片上形成凝
块；另一种是分泌至菌体外的游离凝固
酶，其作用类似凝固酶原样物质，在血浆
中的协同因子的激活下变为凝固酶样物
质，此凝固酶样物质可使血浆中纤维蛋白
原变成纤维蛋白，从而使血浆凝固，可用
试管法测出。.【试剂】：新鲜的EDTA抗
凝的家兔（人）血浆。【方法】：1）玻片
法：于一张洁净玻片左、右两端各滴一滴
生理盐水，用无菌操作以接种环挑去①号
菌置于左端生理盐水中，制成浓的均匀的
菌悬液；再以无菌操作挑去②号菌置于玻
片右端生理盐水中制成浓的均匀的菌悬
液作阳性对照，两端的细菌必须无自凝现
象，然后再分别加1～2滴上述血浆，双手
拿着玻片的对角轻轻以一个方向转动玻
片，10s（20～30s）观察结果。2）试管
法：取洁净试管2支，分别取生理盐水
1.5ml于两支试管中，一支以无菌操作取
①号菌3～5个菌落充分研磨混匀做成菌
悬液；另一支试管以无菌操作加入②阳性
对照菌3～5个菌落研磨混匀，然后向两支
试管各加0.5ml血浆混匀，于35 ℃培养
3~4h。.结果判断：1）玻片法：血浆中有
明显的细菌凝块并且和阳性对照菌所形
成的凝块一致为阳性。若细菌在血浆中呈
均匀混浊则为阴性。2）试管法：血浆凝
固有明显的胶冻状纤维蛋白并和阳性对
照菌所形成纤维蛋白胶冻块一致为阳性。
反之，试管内血浆不凝固仍呈流动状，则
为阴性。【应用】：作为鉴定葡萄球菌致病
性的重要指标，也是葡萄球菌鉴别时常用
的一个试验。【质控菌】：阳性菌株：金黄
色葡萄球菌；阴性菌株：表皮葡萄球菌。
【注意】：（1）、金葡菌不是唯一能产生血
浆凝固酶的细菌。（2）、能产生血浆凝固
酶的细菌并非都能同时产生两种凝固酶。
游离凝固酶：分泌至菌体外，作用类似凝
血酶原物质，可将血浆中的凝血因子激活
变为凝血酶样物质，而是纤维蛋白原变为
纤维蛋白，从而使血浆凝固，可用试管法
测得。
CAMP试验：【原理】：在β溶血性链球
菌中，B群的无乳链球菌能产生CAMP
因子，可促进葡萄球菌的β–溶血素溶解
红细胞的活性，因此在两菌（B群链球菌
和葡萄球菌）的交界处溶血力增加，出现
矢状（半月形）的溶血区。【应用】：在链
球菌中，只有B群链球菌CAMP试验阳
性，故可作为特异性鉴定。【质控菌】：阳
性菌株：B群链球菌；阴性菌株：其它群
链球菌。【注意】：每次最好能以阴、阳性
菌株做对照。
胆盐溶菌试验：【原理】本试验是测定细
菌能否被胆汁或胆盐溶解的一种试验。有
些细菌如肺炎链球菌能被胆汁或胆盐裂
解。胆盐溶菌的原理目前尚不完全明了，
但多数人认为溶菌的机理有二：一是胆汁
（盐）能降低细菌的表面张力，从而促进
细菌的裂解；二是胆盐能促进细菌自溶酶
的活性，从而加速细菌的自溶。【质控菌】
阳性菌株：肺炎链球菌；阴性菌株：草绿
色链球菌。【意义】（1）、用于肺炎链球菌
与其它甲型溶血性链球菌的鉴别；（2）用
于致病性奈瑟氏菌（脑膜炎奈瑟氏菌）的
鉴别。【注意】（1）做此试验必须用活菌，
胆盐对死菌无裂解作用。（2）去氧胆酸钠
在酸性环境下易发生沉淀而成胶胨状，故
当细菌培养液呈胶胨状时，应先将其pH
值调至弱碱性再行试验。
葡萄糖酸盐利用试验：【原理】：该试验是
测定细菌在生长繁殖过程中能否利用葡
萄糖酸盐作为唯一碳源的一种试验。有些
细菌如产气肠杆菌，能利用葡萄糖酸盐作
为唯一碳源，因此能将葡盐分解，生成α
—酮基葡萄糖酸，后者具有较强的还原
性，在高温环境中，可将兰色的班氏硫酸
铜（或可溶性氢氧化铜）中的二价铜离子
还原成棕红色不溶性的氧化亚铜沉淀。
【结果】：直接加1ml班氏（Benedict）
硫酸铜试剂于经18～24小时培养的葡盐
菌液中，充分摇匀，置沸水浴中10分钟，
试管中产生棕红色沉淀者为阳性。【质控
菌】：阳性菌株：产气肠杆菌；阴性菌株：
大肠埃希氏菌。【意义】：用于肠杆菌科的
初步分群。
抗菌药物敏感性试验：测定抗菌药物在体
外对病原微生物有无抑菌或杀菌作用的
方法称为抗菌药物敏感性试验
（Antimicrobial Susceptibility Test），简称
药敏试验（AST）。【方法】Ⅰ、稀释法。
Ⅱ、扩散法：肉汤稀释法、琼脂稀释法。
【意义】1、预测抗菌治疗的效果；2、指
导抗菌药物的临床应用；3、发现或提示
细菌耐药机制的存在，能帮助临床医生选
择合适的药物，避免产生或加重细菌的耐
药；4、监测细菌耐药性，分析耐药菌的
变迁，掌握耐药菌感染的流行病学，以控
制和预防耐药菌感染的发生和流行。
MIC（最低抑菌浓度）：就是某抗菌药物
完全抑制某菌株的最低药物浓度。其测定
方法是：（1）、取一列洁净无菌的小试管，
各管分别加营养肉汤1ml；（2）、第一管
加入含1280 U/ml的抗菌药物原液1ml,
后倍比稀释至次末管后吸出1ml 弃去；
（3）、各管分别加入试验菌液0.1ml;（4）、
置37℃孵箱中培养18～24h，观察结果。
MIC50/ MIC90：MIC从小到大排列，位
于第50 / 90百分位菌株的MIC值。
敏感（S, Sensitive）：某抗菌药物对某菌
株的最小抑菌浓度（MIC）小于该抗菌药
物的治疗浓度。耐药（R, Resistant）：
某抗菌药物对某菌株的最小抑菌浓度
（MIC）大于该抗菌药物的治疗浓度。中
介度（I, Intermediate）：若MIC介于
治疗浓度的上下限之间。
K-B纸片琼脂扩散法药敏试验原理：将
含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测
试菌的琼脂平板上。纸片中所含的药物吸
取琼脂中的水分溶解后不断地向纸片周
围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片
周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑
制,从而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度,并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关关系,即抑菌圈愈大,MIC愈小。影响纸片法药敏试验结果的因素有:1培养基的质量,如pH、深度、硬度和表面湿度等。对每批商品化或自配MH琼脂必须用标准质控菌株进行检测,合格后方能使用;2药敏纸片的质量,含药量和保存方式;3接种菌量正确与否是影响结果的重要因素之一,取决于麦氏比浊标准的配制,正确使用和保存;4试验操作质量;5孵育条件,温度和时间;6抑菌圈测量工具的精度;7质控标准菌株本身的药敏特性是否合格,有无变异。
E-test法：是一种结合稀释法和扩散法原理对抗菌药物药敏试验直接定量的药敏试验技术。【原理】将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育过夜，围绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，其边缘与试条交点的刻度即为抗菌药物抑制细菌的最小抑菌浓度。【结果及意义】1、协同：①细菌对甲药无效，乙药抑菌环向甲药扩大，②甲乙两个抑菌环相交形成平角，③甲乙两药无抑菌环在两者之间出现抑菌环。2、无关：①细菌对两者均耐药，②细菌对甲药耐药对乙药敏感抑菌圈交接角呈尖锐角，③细菌对甲乙两药菌敏感抑菌圈相交为锐角。3、拮抗：①细菌对甲药耐药对乙药敏感，甲药对乙药发生切割状。②细菌对甲乙两药敏感，乙药使甲药的抑菌环呈扁圆形。4、相加：甲乙两药的抑菌圈相交为钝角。
稀释法：以一定浓度的抗菌药物与含有被试菌株的培养基进行一系列不同倍数稀释（通常为双倍稀释），经培养后观察其最低抑菌浓度。
抗菌药物联合用药可出现4种结果：无关作用、拮抗作用、累加作用、协同作用。金黄色葡萄球菌【菌落特征】：金葡菌在血平板上形成圆形、光滑、半透明、轻微凸起、边缘整齐，绝大多数菌株有奶油样黄色素、直径2~3mm大小且有透明溶血环的菌落。能在含10%~15% NaCl琼脂中生长。【单个菌体形态】：革兰阳性球菌，直径0.5-1.5μm，呈单个、成双或葡萄串状排列，无鞭毛和芽孢。在液体培养基中或脓汁中成短链状排列。【致病因素】：1.酶类：（1）凝固酶:结合凝固酶，是结合在菌体表面的凝固酶，能与血浆中的纤维蛋白原交联使菌体快速凝集。游离凝固酶。（2）耐热核酸酶.（3）透明质酸酶、磷脂酶。2.毒素：（1）葡萄球菌溶素（2）肠毒素（3）毒性休克综合征毒素（4）杀白细胞素（5）表皮剥脱毒素。【生化反应】：无菌操作做以下试验：1）【触酶】：+；2）【血浆凝固酶试验】：玻片法+，试管法+。3）其他生化反应：无菌操作接种以下培养基35℃培养18～24h，记录结果。
a.葡萄球菌属【O/F培养基】：F。
b.【DNA 酶】：+。
c.蕈糖+，甘露醇+，麦芽糖+，蔗糖+,尿素+。
d.【鸟氨酸脱羧酶】-，木糖- 。4.综上：该细菌鉴定为：金黄色葡萄球菌。
鉴定金黄色葡萄球菌的思路：1.定微球菌【科】的试验：革兰染色为阳性球菌，G+c；触酶试验，+ 。2.定葡萄球菌【属】的试验:O/F（F）。3.定金黄色葡萄球菌【种】的试验：血浆凝固酶（玻片法+，试管法+），DNA酶试验+，蕈糖+，甘露醇+，麦芽糖+，蔗糖+，尿素酶试验d，鸟氨酸脱羧酶试验-，木糖-。链球菌【菌落形态】：直径小于2μm的球形或卵圆形革兰阳性球菌，呈链状排列，链的长短和细菌的种类及生长环境有关。肺炎链球菌因荚膜多糖使菌落呈粘液状，因产生自溶酶，在平板上培养48小时后出现中心凹陷的“脐窝状”菌落。【单个菌体】：肺炎链球菌呈矛尖状、宽端相对尖端向外，成双排列，无芽孢，无动力，有荚膜和粘液层。生化反应：【触酶】—。【杆菌肽敏感试验】A群化脓性链球菌对0.04U的杆菌肽几乎全部敏感。【CAMP 试验】在金葡菌与B群链球菌的交界处有箭头形透明溶血区，可用来鉴别B群链球菌(无乳链球菌)与其他链球菌。【Optochin敏感试验】肺炎链球菌对其敏感，可被抑制。【胆汁溶菌试验】胆汁可活化肺炎链球菌的自溶酶，菌落消失为阳性。可鉴别肺炎链球菌和甲型链球菌。奈瑟菌【菌落特点】：血琼脂平板或巧克力（色）琼脂平板上呈光滑、湿润、透明或半透明、直径1~2mm的不溶血、圆形、灰蓝色菌落；卵黄琼脂平板上为无色、光滑、湿润奶油状的菌落。在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜。脑膜炎奈瑟菌于孵育24小时后在培养基上发生自溶。【单个菌体】:革兰阴性双球菌，菌体直径0.6~1.5μm，形似双肾或咖啡豆样，凹面相对。
脑膜炎奈瑟菌的判定标准：1、涂片染色镜检，形态染色必须典型。2、菌落与菌苔必须典型，不产生色素。3、在生理盐水中无自凝现象。4、糖发酵反应：葡、麦、蔗均为+。5、普通琼脂斜面：37℃、5-10%的CO2环境，24h不生长。6、巧克力血琼脂斜面：22℃，24h不生长。7、玻片凝集反应应与分群血清凝集。
肠球菌【菌落特征】：在血平板上呈灰白色、不透明、表面光滑的小菌落，菌落周围可出现α溶血环，也可无溶血环。【单个菌体】：革兰染色后：形态类似链球菌，为单个、成双或短链状排列的卵圆形革兰阳性球菌。无芽胞和荚膜，个别菌种有稀疏鞭毛。【生化反应】：【触酶试验】—，生长在血平板上的粪肠球菌可产生几个气泡，是假阳性。【胆汁七叶苷试验】培
养基中的胆汁对某些细菌有抑制作用，只
有既能在胆汁中生长，又能水解七叶苷的
细菌才能表现出对七叶苷的水解活性。肠
球菌和D群链球菌都能在含有胆盐的培
养基上生长并水解七叶苷，生成七叶素，
七叶素与培养基中枸橼酸铁的Fe3+反应
形成黑色沉淀，使培养基变黑色。用于鉴
定肠球菌，但不能区分肠球菌和D群链
球菌。【PYR试验】肠球菌+，D群链球
菌—。可用于二者的鉴别。【65g/LNaCl
生长试验】肠球菌具有很强的耐盐能力，
可生长。而链球菌的耐盐能力很弱，不能
生长。故可鉴别二者。
肠杆菌科分类：【PAD阳性VP阴性】：变
形杆菌属、摩尔根氏菌属、普罗维登斯菌
属。【PAD阴性VP阴性】：埃希氏菌属、
志贺氏菌属、沙门氏菌属、枸橼酸杆菌属
和爱德华氏菌属。【VP阳性PAD阴性】：
肠杆菌属、泛杆菌属、克雷伯氏菌属、沙
雷氏菌属和哈夫尼亚菌属。
大肠埃希菌【菌落特征】：兼性厌氧，血
琼脂平板上：圆形、灰白色、光滑湿润、
略扁平、较大菌落，有气味；可有β溶血。
【单个菌体】革兰阴性短杆菌，不规则排
列，周鞭毛、菌毛、有些有荚膜。【生化
反应】1、动力试验：+。2、糖发酵试验：
发酵葡萄糖、乳糖、麦、甘，产酸产气。
3、双糖铁试验：+ / +。
4、吲哚、甲基
红、V-P、枸橼酸盐（IMVC）:＋＋――，。
5、H2S 试验：－。
6、尿素分解试验：
－。
沙门氏菌：【分类】根据沙门氏菌的菌体
抗原（O抗原）分群；再根据其鞭毛抗原
（H抗原）分型。【菌落】兼性厌氧，最
适生长温度35～37℃，最适生长pH为
6.8～
7.8。本菌属对营养的要求不高，不
分解乳糖并产碱，故在普通营养琼脂上生
长的菌落为圆形、光滑、湿润、半透明、
边缘整齐、凸起的小菌落，产硫化氢的菌
株，在SS琼脂上形成中心黑色的菌落。
【单个菌体】革兰阴性直杆菌，较细长，
多具有周鞭毛，能运动，无芽孢，无荚膜。
【生化反应】1、触酶阳性、乳糖阴性、吲
哚阴性、动力阳性、VP 阴性、枸橼酸盐
阴性、鸟氨酸阳性、H2S阳性、脲酶阴性。
2、凡临床分离菌乳糖阳性、吲哚阳性或
脲酶阳性者均不考虑为沙门菌。
志贺菌：【菌落】兼性厌氧，形成乳糖不
发酵、中等大小、无色半透明、圆形、湿
润、光滑、凸起的菌落，宋内志贺菌常形
成粗糙型菌落。【单个菌体】革兰阴性
杆菌，菌体短小，无芽孢，无荚膜，无鞭
毛，有菌毛。【鉴别】主要靠血清学反应、
而非生化反应。
克雷伯菌属：【菌落】兼性厌氧，营养要
求不高，在初次分离培养基可形成较大、
凸起灰白色黏液型的菌落。菌落大而厚
实、光亮，相邻菌落容易发生融合。在
MAC培养基上发酵乳糖产酸，形成较大
的黏液型、红色的菌落，红色可扩散至菌
落周围的培养基中。血琼脂平板上灰白
色、大而粘稠、光亮且形成菌丝的菌落。
【单个菌体】革兰阴性杆菌，无鞭毛，无
芽孢，患者标本直接涂片或在营养丰富培
养基上的培养物可见菌体外有明显的荚
膜。【鉴定】（1）属的鉴定：动力阴性，
鸟氨酸脱羧酶阴性。（2）种的鉴定：肺炎
克雷伯菌吲哚阴性，而产酸克雷伯菌吲哚
阳性。
沙雷氏菌：【菌落】兼性厌氧，营养琼脂
上形成不透明，白色或有色（红色、粉红
色）菌落。色素的产生在室温中更明显。
所产生的两种不同色素是：灵菌红素、吡
羧酸。灵菌红素是非水溶性色素，不扩散，
而吡羧酸是一种水溶性、能扩散的粉红色
色素。【单个菌体】革兰阴性小杆菌、有
周身鞭毛，能运动，气味沙雷菌有微荚膜，
其余菌种无荚膜、无芽孢。黏质沙雷菌
是细菌中最小者，可用于检查除菌滤器的
除菌效果。
不发酵革兰阴性杆菌Nonfermenters：是
指一大类不能以发酵方式（或不能以明显
发酵方式）分解葡萄糖的革兰氏阴性无芽
孢的需氧或兼性厌氧杆菌，多为条件致病
菌。它们在分类学上分别隶属于不同的
科、属，但生理生化特性又很相似，故在
临床微生物学检验中，常把它们当作同一
类菌群来对待。
不动杆菌属：主要特性为：1、该属细菌
是一群革兰氏阴性球杆菌，常成双排列、
酷似双球菌，故常被误认为奈瑟氏菌属；
又由于该菌具有保留结晶紫的特性（革兰
氏可变性），又易被误认为革兰氏阳性球
菌。该菌无芽孢、无鞭毛，部分菌株有荚
膜。2、该菌为专性需氧菌；营养要求不
高，在普通培养基上生长良好。3、本菌
氧化酶阴性；硝酸盐还原试验阴性；多数
菌株分解尿素；所有生物型均水解土温—
80。
弧菌属的特点：1、G-b；2、形态短小、
弯曲呈弧状；3、端鞭毛：单或多运动活
泼，在固体培养基上可形成侧鞭毛；4、
OE(+)；5、葡萄糖利用为F型；6、利用
葡萄糖产酸不产气；7、Na+能刺激弧菌
属中所有菌种的生长。
TCBS平板：硫代硫酸盐、枸橼酸盐、胆
盐、蔗糖琼脂平板
霍乱弧菌生物学性状:【形态和染色】：1）
新鲜标本：取病人米泔水样便/呕吐物涂
片。A Gram’s染色：GN，弧形或逗
点状；B 如“鱼群样”排列。2）经培
养后再涂片，Gram’s染色：菌体由弧形
变为杆状。3）运动活泼、如流星状、穿
梭样运动（一端单鞭毛）。4）无芽孢、无
荚膜。【培养和生化反应】：1）兼性厌氧，
厌氧环境下生长不良。2）生长温度范围
较宽：16-42Co均可生长，最适温度为
37Co。3）耐碱性：霍乱弧菌怕酸耐碱，
PH8.4-8.6的碱性培养基（碱性蛋白胨或
碱性琼脂平板）作为选择性培养基：增菌。
4）耐盐性（嗜盐性）：可在无盐培养基中
生长，但在0-0.5%NaCl。培养基中生长
不好，在培养和鉴定培养基中应加
1%NaCl。5）在碱性蛋白胨水中增菌培养
6-9小时，液面形成菌膜，液体均匀浑浊。
6）营养要求不高，普通培养基上生长良
好。7）在选择性培养基上的生长特点A 、
碱性琼脂平板：较大扁平、无色透明或半
透明、水滴菌落或蓝灰色菌落，表面光滑
或有微细颗粒。B 、糖双洗琼脂平板（含
亚碲酸钾）庆大霉素琼脂平板：灰褐色
菌落。C 、TCBS平板：菌落较大，黄色
并轻度凸起。3、抗原：O抗原（菌体抗
原）：耐热特异性高。H抗原（鞭毛抗
原）：不耐热。【初筛试验】(1)霍乱红试
验；(2)O/129敏感试验；(3)黏丝试验；（4）
耐盐试验。
白喉棒状杆菌：【单个菌体】G +细长微
弯的杆菌，一端或两端膨大呈棒状，常排
列呈V、L、X等文字形，有异染颗粒。
【菌落特点】普通血琼脂平板：菌落灰白
色、光滑型、直径1～2mm、有狭窄β溶
血环（轻型）多次传代后菌体变为球型。
亚碲酸钾BAP：选择鉴别培养基37℃、
24～48h，白喉棒状杆菌可以还原碲盐为
有色元素碲，呈现黑色或灰黑色菌落——
鉴别依据。不同菌型还原能力不同，呈现
黑色或灰黑色菌落。【致病物质】是白喉
毒素，是白喉棒状杆菌产生的外毒素。【毒
力试验（鉴定致病菌株的重要依据）】体
外法：琼脂平板毒力试验（Elek平板毒
力测定）、SPA协同凝集试验、对流电泳。
体内法：用豚鼠作毒素-抗毒素中和试验。
炭疽芽胞杆菌：【形态结构】:致病菌中最
大的G+杆菌，两端平切、竹节状，有毒
株可有明显荚膜、无鞭毛，芽胞是卵圆形，
小于菌体，位于菌体中央。【抗原成分】
菌体多糖抗原、荚膜多肽抗原、芽胞抗原、
炭疽毒素。【培养特性】需氧或兼性厌氧，
生长条件不严格，最适温度30～35℃。
普通琼脂平板：—扁平、粗糙、不透明、
灰白色、无光泽，边缘不整齐的菌落，低
倍镜下菌落边缘呈卷发状。BAP：12～15h
不溶血，24h后轻微溶血。肉汤：絮状沉
淀生长。明胶：35℃18～24h表面液化成
漏斗状。NaHCO3血清琼脂平板：有毒株
--M型菌落，挑取时呈黏丝状（鉴别要
点）；无毒株--R型菌落。【生化反应】在
牛乳中生长2～4天牛乳凝固→缓慢胨
化，触酶（+）。噬菌体裂解试验：出现
噬菌斑或噬菌带者为阳性。串珠试验：接
种于含青霉素(0.05～0.5U/ml)的肉汤中，
35℃6h，大而均匀成串的圆球状菌体；
与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关；类炭
疽杆菌无此现象。
蜡样芽胞杆菌：【形态结构】：G+大杆菌、
两端钝圆，多数呈链状排列，芽胞椭圆形、
位于菌体中心或次末端、不大于菌体。引
起食物中毒的菌株多有周鞭毛、无荚膜。
【培养特性】：需氧或兼性厌氧
营养要求不高，最适温度35℃。普通琼
脂平板：菌落较大，灰白色，表面粗糙似
毛玻璃状或白蜡状。血琼脂平板：有β溶
血环。卵黄平板：生长迅速，培养3h后，
虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形
成白色的混浊环，称乳光反应或卵黄反
应。【生化反应】：能分解葡萄糖、麦芽糖、
蔗糖、水杨苷等能胨化牛乳，液化明胶，
VP（+）触酶（+）、卵磷脂酶（+）。多次
传代后生化特性常可改变。【确诊由该菌
引起的食物中毒必须】：1、从食物中分离
出菌数＞105/g，提示本菌活跃生长，构
成潜在危险；2、从可疑食物分离到的菌
株与从患者粪便和(或)呕吐物中分离到
的菌株属同一血清型
产单核细胞李斯特菌：【形态结构】G+短
小杆菌，直或微弯，常呈V形成双排列。
在20～25℃形成周鞭毛，37℃时鞭毛很
少或无；无芽胞；在含血清的葡萄糖蛋白
胨水中能形成黏多糖荚膜。【菌落】BAP
上形成较小、圆形、光滑而有狭窄β溶血
环的菌落。【鉴定】G+短小杆菌，菌落较
小，有狭窄β溶血环，25℃有动力、翻筋
斗样（而棒状杆菌无动力），37℃无动力
或动力缓慢。触酶阳性（链球菌为阴性），
CAMP试验阳性，分解葡萄糖、水解七
叶苷。
红斑丹毒丝菌：【形态结构】：G+细长杆
菌，单个存在或形成短链，粗糙型菌落涂
片可呈长丝状，且有分支及断裂，与放线
菌的形态相近，无芽胞、无鞭毛、无荚膜。
【培养特性】：厌氧或微需氧、初次分离
需在厌氧环境，传代后有氧环境也能生
长，最适温度30~35℃。BAP：35℃24h
可形成两种菌落光滑型菌落：细小、圆形、
凸起有光泽，毒力较强。粗糙型菌落：较
大，颗粒状、扁平、边缘不齐。【生化反
应】触酶阴性，分解葡萄糖、乳糖、阿
拉伯糖，TSI中产生H2S（该菌突出的特
点）。
细菌的生物氧化：指有机物质在细菌体内
氧化分解释放能量的过程。氧化通常有加
氧、脱氢和失去电子三种方式。细菌进行
的生物氧化主要为脱氢和失去电子两种
方式，很少有加氧反应。以有机物为受氢
体或电子受体的生物氧化过程，称为发
酵。以无机物为受氢体或电子受体的生物
氧化过程，称为呼吸。其中以分子氧为受
氢体的称需氧呼吸。而以非氧的其它无机
化合物（如硝酸盐、硫酸盐）为受氢体的
称厌氧呼吸。
氧化还原电势与厌氧菌生长繁殖的关
系：Eh较高的氧化型物质，能氧化Eh
较低的还原型物质，反之则不能氧化。固
体培养基可因在大气中放置而被氧化，培
养基表面Eh上升，对厌氧菌生长不利；
液体培养基亦可因溶解氧而不利于厌氧
菌生长，故在进行厌氧培养时，培养基在
使用前应作预还原处理，使Eh降低后方
可使用。
螺旋体（spirochete)：是一种细长、柔软、
螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。
支原体(Mycoplasma)是一类缺乏细胞壁、
形态上呈高度多形性，可以通过一般的除
菌滤器，是目前所知能独立生活，自行繁
殖的最小原核细胞型微生物。由于它们能
形成有分支的长丝，故称之为支原体。
衣原体：革兰氏阴性病原体，在自然界中
传播广泛；专性细胞内寄生，一般寄生在
动物细胞内；对多种抗生素敏感；能通过
细胞滤器，有独特发育周期、严格细胞内
寄生的原核细胞型微生物
立克次体(Rickettsia)是一类专性活细胞
内寄生的G-原核细胞型微生物，是引起
斑疹伤寒、恙虫病、埃立克体病等传染病
的病原体。
真菌(fungus)是一类具有典型细胞核，有
核膜和核仁，胞浆内有完整的细胞器，无
根、茎、叶，不含叶绿素，无光合色素，
细胞壁含几丁质和纤维素的单细胞或多
细胞异养真核细胞型微生物。【分类依据】
有性生殖的各种器官、无性菌丝和孢子及
菌落的形态等特征。【形态特性】1、单细
胞真菌：圆形或卵圆形，常见于酵母菌或
类酵母菌。2、多细胞真菌：菌丝+孢子
交织成团—菌丝体（霉菌）。3、二相性真
菌：在体内或含有动物蛋白的培养基上
37℃呈酵母型，25℃呈丝状型的真菌。
真菌在适宜环境中，由孢子出芽长出芽
管，逐渐延长呈丝状，称为菌丝（hypha）。
菌丝继续分支，交织成团，称菌丝体
（mycelium）。孢子（spore）是真菌的繁
殖结构。孢子分有性与无性两类。孢子与
细菌芽胞不同。【培养特性】常用培养基：
沙保培养基。培养基pH值：5.5（4.0～
6.0）。培养温度：浅部22～28C℃，生长
慢：1～4W；深部37℃，生长快：3～4d 。
菌落类型：酵母型菌落；丝状菌落。
浅部真菌（superficial fungi）：引起皮肤
和软组织感染的真菌，主要指侵犯机体皮
肤、毛发和指（趾）甲，寄生和腐生于表
皮、毛发和甲板的角质组织中，引起浅部
真菌病。浅部感染真菌包括表面感染真
菌、皮肤癣真菌和皮下组织感染真菌三
类。
深部感染真菌：引起侵袭性感染的真菌，
是指能侵袭深部组织和内脏及全身的真
菌，主要有假丝酵母菌、隐球菌、曲霉、
毛霉、组织胞浆菌和卡氏肺孢菌等，其中
以隐球菌感染较常见。组织胞浆菌为二相
性真菌，假丝酵母菌、曲霉菌、毛霉菌和
卡氏肺孢菌等为条件致病性真菌，只有在
一定条件下才引起机体致病。
白假丝酵母菌：【菌落特征】:标本、沙氏
培养基上、25℃或37℃培养1~4d后，培
养基表面可出现奶油色类酵母型菌落。镜
检可见假菌丝和芽生孢子。【鉴定试验】:
芽管形成试验，厚膜孢子形成试验，糖
同化或发酵试验，产色培养基鉴定。
隐球菌：【直接镜检】用患者脑脊液作墨
汁负染色检查是诊断隐球菌脑膜炎最简
便、快速之方法。【抗原检测】用免疫学
方法检测隐球菌荚膜多糖特异性抗原，以
乳胶凝集试验最为常用，此法简便、快速。
核酸检测、药物敏感试验、抗体检测。【分
离培养】将标本接种在沙氏培养基上，病
原性隐球菌在25℃和37℃孵育的可生
长，而非病原性隐球菌在37℃时不生长。
培养2~5d后观察菌落形态特点，并取菌
落作印度墨汁负染色镜检。【鉴定】1.酚
氧化酶试验：将菌接种L-多巴枸橼酸铁
和咖啡酸培养基中，培养2~5d，新生隐
球菌呈棕黑色菌落。用已知新生隐球菌和
浅白隐球菌分别作阳性和阴性对照。2.
脲酶试验：新生隐球菌能产生脲酶，可分
解尿素琼脂培养基的尿素形成NH4和
CO2，使培养基pH升高，培养基由黄色
变为粉红色。白假丝酵母菌则为阴性。3.
糖同化及发酵试验：新生隐球菌能同化葡
萄糖、半乳糖、蔗糖和肌醇，但不能发酵
糖类、不同化硝酸盐。非致病性隐球菌则
不能同化肌醇。
曲霉菌：最常见的是烟曲霉、黄曲霉和黑
曲霉。
病毒（virus）：最微小的、结构最简单的
非细胞型微生物。【特征】1. 体积微小；
2. 非细胞结构，结构简单“一包基因”
而且仅一种核酸；3、严格的胞内寄生；4、
以复制方式繁殖；5. 抵抗力特殊；6. 在
医学微生物中占重要地位。【结构】基本
结构由核酸和蛋白质构成，核酸只有一种
类型即DNA或RNA，蛋白质包裹核酸形
成保护性外壳，称为衣壳可核心组成的核
衣壳。
病毒的复制周期（replication cycle）：吸
附、穿入、脱壳、生物合成、组装成熟、
释放。
菌丝的定义：在适宜的条件下，真菌由孢
子生出芽管，芽管逐渐延长呈丝状，生物
学上把真菌的每一根细丝叫做菌丝。
神奈川现象：指在特定条件下,副溶血性
弧菌中某些菌株在含高盐(7%)的人O型
血或兔血及以D-甘露醇为碳源的琼脂平
板上可产生β溶血,该现象作为鉴定致病
性与非致病性菌株的一项重要指标
MRSA：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌：
有些金黄色葡萄球菌对甲氧西林及其它
与甲氧西林有相同结构的β-内酰胺类药物和头孢抗生素耐药，称MRSA MIC ：最小抑菌浓度是指测定抗菌药物抗菌活性大小的一个指标，指在体外培养细菌18~24小时后能抑制培养基内病原菌生长的最低药物浓度， 盲点试验：质控管理机构将模拟标本混入临床普通标本中，进行常规测定，实验结果由质控管理机构负责收回评价。 血浆凝固酶：是多数致病菌株能产生凝固酶，能使含有肝素等抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的酶类物质,致病株大多数能产生,是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标. 凝聚因子：即结合凝固酶，结合在细胞壁上，使血浆中的纤维蛋白原变成纤维蛋白而附着于细菌表面，发生凝集，可玻片法测出。 游离凝固酶：分泌至菌体外，作用类似凝血酶原物质，可将血浆中的凝血因子激活变为凝血酶样物质，而是纤维蛋白原变为纤维蛋白，从而使血浆凝固，可用试管法测得。 抑菌商数：抗菌药物在局部组织或体液中的浓度除以该药物的最小抑菌浓度MIC 。
何为真核细胞型微生物，其特点，那些微生物属此类？指具有真正细胞核（即核质和细胞质之间存在明显核膜）的细胞型微生物。特点：细胞核分化程度高，有核膜，核仁，细胞器完整。真菌和原虫。 细菌形态学检查意义：细菌常规的形态学检验方法有不染色标本检验法和染色标本检验法。不染色标本一般用于观察细菌的动力及其运动情况。染色标本检查法中革兰氏染色法是最常用的方法。革兰氏染色法的意义： ①鉴别细菌：革兰氏染色法将细菌分为G ＋菌与Gˉ菌两大类；②指导选择用药：大多G ＋菌对青霉素、红霉素、头孢菌素等药物敏感，而Gˉ菌对链霉素、卡拉霉素、庆大霉素等药物敏感；③判断致病性：Gˉ菌主要以内毒素致病为主，而G ＋菌主要以外毒素致病为主。
厌氧菌在有氧环境不能生长原因：1厌氧菌缺乏细胞色素酶和细胞色素氧化酶。2厌氧
菌缺乏过氧化物酶和过氧化氢酶。3厌氧菌缺乏超氧化物歧化酶。 厌氧菌感染的原因：（一）、组织氧化还原电势（Eh ）的降低。二）、机体免疫功能下降（三）、细菌的协同作用。四）、机体屏障作用的破坏。 芽管试验及意义：将待测假丝酵母菌接种于0.5~1.0ml 人和动物新鲜血清中，37℃孵育1.5~4h 有芽管生成为白假丝酵母菌。镜检观察有无芽管生成。试验应设立阳性对照（白假丝酵母菌）和阴性对照（热带假丝酵母菌）注意：观察时间不能超过4h ，因为热带假丝酵母菌超过6h 也可长生芽管；血清为病人血清，注意交叉感染。意义：分离鉴定白假丝酵母菌。白假丝酵母菌可形成芽管，但并非所有的都形成，其他假丝酵母菌一般不形成芽管。 厚膜孢子形成试验方法：将待测假丝酵母菌用接种针水平划线接种于玉米（大米）琼脂吐温培养基作小培养，25 ~30℃孵育1~2天，若是白假丝酵母菌可在显微镜下观察到在菌丝顶端、侧缘或中间形成厚膜孢子，同时也可观察到假菌丝。观察：先用低倍镜找到要观察的标本，再换高倍镜观察。注意：培养时注意保湿。 室间质量评价方法：主要形式:(一)、用模拟临床标本做质量评价：1、【初级活动】：1）模拟标本：纯菌种（我省的活动属初级）；2）活动频率低：每季度一次。2．【正常活动】：1）模拟标本：混合菌；2）活动范围高；3）目的： 迫使实验室按常规技术力量对待处理的问题，更能反映一个实验室的日常工作水平。3 【盲点试验】：质控管理机构将模拟标本混入临床普通标本中，进入实验室进行常规测定，实验结果由质控管理机构负责收回，进行评价。（二）用日常临床标本的检验结果作质量评价：比用模拟标本的评价具有真实的实际意义，因为质量保证的最终目的是为病人提供优质的服务。也就是提供可靠的结果。1.细菌分离率；2.细菌耐药率；3.社会有公认的耐药率，金菌：对青霉素G ，耐药率达90%，对万古，无耐药/低耐药，一个实验室结果与其客观存在室相差大，提示质量问题，这种评价方法尚在初始阶段，其统计方法，衡量指标的确定等有待进一步研究。
肠杆菌科包括一大类生物学性状相似的革兰氏阴性无芽胞杆菌；多数具有周身鞭毛（少数无鞭毛）。它们需氧或兼性厌氧生长；营养要求不高，在普通培养基上生长良好；能分解葡萄糖产酸或产酸产气，多数能还原硝酸盐为亚硝酸盐；氧化酶（—），触酶阳性，O/F 试验（F 型）；DNA G+C=38—60mol%。
病毒传代细胞定义特征及应用：指由癌细胞或二倍体细胞突变而来（如 Hela 、Hep-2、 Vero 细胞系等），染色体数为非整倍体。特征：细胞生长迅速，可无限传代；保存：在液氮中能长期保存；应用:病毒的实验室诊断工作，根据病毒对细胞的亲嗜性，选择敏感的细胞系使用。 D 试验：甲耐药乙敏感，甲药对乙药发生切割状拮抗现象，即D 试验。如红霉素耐药，克林霉素敏感，但红霉素诱导克林霉素耐药，即使体外敏感体内也耐药，即报“R ”。
β-内酰胺酶检测的方法：①淀粉测定法：检测菌产生酶，使碘化物转变为无色；②
头孢硝噻吩纸片法：纸片由黄色变为红色为阳性 肠杆菌科生物学特性：肠杆菌科具有以下共同特性：革兰阴性杆菌、大小为0.3~1.0μm ×1.0~6.0μm 、无芽胞、多数菌周鞭毛，少数菌种(或株)无鞭毛。对营养要求不高，绝大多数菌种在普通培养基和麦康凯琼脂上生长良好。兼性厌氧，发酵葡萄糖产酸或产酸产气。氧化酶阴性，触酶阳性，还原硝酸盐为亚硝酸盐。DNA 中G+C 含量为39 ~59mol%。 铜绿假单胞菌鉴别要点：（1）、铜绿假单胞菌在普通琼脂培养基上能产生水溶性绿色素，使整个培养基变为绿色。（2）、在血平板上经35—37℃，18—24h 培养可表现为：菌落灰绿色、半透明、大而扁平、表面湿润、边缘不齐；有金属光泽；有生姜样芳香气味；菌落周围有宽大的兰绿色透明溶血环。（3）、该菌为专性需氧革兰氏阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，菌体一端有单鞭毛，运动活泼。（4）生化反应：氧化酶和触酶均阳性；O/F 试验“O 型”产酸不产气；枸櫞酸盐利用＋，精氨酸双水解＋，明胶液化＋，吲哚阴性。
临床微生物学与检验测试题及答案——细菌感染的实验室检查与诊断及细菌生理 一、名词解释 1.血清学诊断 2.培养基 3.基础培养基 4.选择培养基 5.鉴别培养基 6.菌落 二、填空题 1.实验室细菌学检查结果的准确与否和标本的选 择、、有直接关系。 2.辅助诊断风湿热的抗“O”实验属于。 3.血清学试验一般需作两次，其血清分别取自疾病 的和.第二次抗体效价比第一 次时方有诊断意义。 4.对流行性脑炎患者进行细菌学检查，可采集的标本 有、和。 5.进行病原菌的分离培养时，从有正常菌群部位采取的标本应接种 于培养基或培养基。 6.细菌感染实验室检查中，常用的血清学方法 有、和三大类。 7.属于直接凝集反应的血清学试验有和。 三、单项选择题 1.目前在传染病的预防接种中，使用减毒活疫苗比使用灭活疫苗普遍，关于其原因下述不正确的是 A.减毒活疫苗的免疫效果优于灭活疫苗 B.减毒活疫苗刺激机体产生的特异性免疫的持续时间比灭活疫苗长 C.减毒活疫苗能在机体内增殖或干扰野毒株的增殖及致病作用，灭活疫苗则不能 D.减毒活疫苗可诱导机体产生分泌型IgA，故适用于免疫缺陷或低下的患者 E.减毒活疫苗一般只需接种一次即能达到免疫效果，而灭活疫苗需接种多次 2.白百破三联疫苗的组成是
A.百日咳类毒素，白喉类毒素，破伤风类毒素 B.百日咳死疫苗，白喉类毒素，破伤风类毒素 C.百日咳死疫苗，白喉死疫苗，破伤风类毒素 D.百日咳活疫苗，白喉活疫苗，破伤风死疫苗 E.百日咳活疫苗，白喉死疫苗，破伤风死疫苗 3.使用时要注意防止Ⅰ型超敏反应的免疫制剂是 A.丙种球蛋白 B.胎盘球蛋白 C.抗毒素 D.白细胞介素 E.干扰素 4.关于胎盘球蛋白的叙述，错误的是 A.由健康产妇的胎盘和婴儿脐带中提取制备 B.一般含IgM C.一般不会引起超敏反应 D.主要用于麻疹，甲型肝炎和脊髓灰质炎等病毒性疾病的紧急预防 E.免疫效果不如高效价的特异性免疫球蛋白 5.伤寒病人发病第一周内，分离病原菌应采取的标本是 A.血液 B.尿液 C.粪便 D.呕吐物 E.脑脊液 6.咽喉假膜标本涂片染色后，镜检出有异染颗粒的棒状杆菌，其临床意义在于诊断 A.结核病 B.军团病 C.白喉
微生物实验心得体会 这学期的微生物实验已经结束，这是我第一次接触到微生物的世界中，以前也只是在书本中学习，但是真正走进它们的世界中是通过这个课程开始的。在开始微生物实验之前我是以为这个实验不会很难，但是通过本学期的学习发现这个课程真的很难。你不仅需要理论知识作为铺垫，你还需要有严谨的实验精神。 第一节课老师给我们介绍了我们本学期微生物实验的几个实验和报告的要求，也让我们了解了微生物实验和以往其他实验的不同。实验步骤虽然很简单，但是往往一个微小的细节处理不当也会导致你整个实验结果的失败。这个我真的深有体会，我们小组的实验结果都很不理想。实验步骤说难也不难，其实无非是先对配置培养液，然后对清洗干净的试管、培养皿以及配置好的培养液进行灭菌，等灭菌完了就放入无菌室进行细菌的接种，最后将接种好细菌和培养液的培养皿放进恒温培养箱进行培养。看似很简单的操作过程我却状况百出。我总结了几点导致这么多次实验失败的地方。第一是操作不够规范，在培养皿中倒入培养液后没有摇匀导致培养基边缘开裂，未等琼脂培养液凝固就倒置导致培养基分布不均匀。第二是理论知识欠缺，没有等培养液冷却至40到50摄氏度就倒入培养基然后马上就接种了细菌，导致细菌已经被烫死。 好在值得欣慰的是最后一个自主实验还是比较成功的。试验以环境对微生物生长的影响为题设计实验，我们小组通过PH值，温度，紫外线照射三个方面进行研究，结果很满意，很明显。大肠杆菌在PH值为7时生长最适，在温度为37℃时生长最佳，紫外线会抑制其生长。 不得不承认，通过这次实验的学习，我们学到了很多，得到了很多，有些是书本上学不到的，只有自己参与了，操作了，才会知道。也要感谢老师对我们的照顾。
一、选择题(A型): !、下列细菌中哪一种细菌在血平板上一般不出现溶血环? A、金黄色葡萄球菌 B、表皮葡萄球菌 C、甲型链球菌 D、肺炎双球菌 2、进行玻片法血浆凝固酶试验不需要下列哪种材料? A、免血浆 B、生理盐水 C、2%红细胞悬液 D、待检细菌 3、UMI系统不包括下列哪一项试验? A、尿素酶 B、甲基红 C、靛基质 D、动力 4、麦康凯培养基和克氏双糖铁共有的成分是: A、葡萄糖 B、酚红 C、中性红 D、乳糖 5、对浓汁标本进行细菌学鉴定,下列哪一项试验一般不包括在内? A、涂片染色镜检 B、血平板分离培养 C、血浆凝固酶试验 D、抗"O"试验 6、乙链在血清肉汤中的生长情况是： A、完全沉淀生长 B、均匀混浊生长 C、部分沉淀生长 D、形成菌膜 7、甲基红试验和VP试验阳性表明被检菌具有以下哪一特性： A、分解乳糖产酸产气 B、分解葡萄糖生成丙酮酸 C、生成甲醇、甲醛 D、以上全部 8、下列哪一项不符合霍乱弧菌的特点 A、有动力 B、抵抗力较强 C、耐碱不耐酸 D、在自然界广泛存在，人是唯一易感者 9、对于一个脓汁标本，首先应进行的检验步骤是： A、涂片镜检 B、接种血平板 C、含硫氨基酸 D、苯丙氨酸 10、抗"O"试验管法中，溶血素应预先用还原剂处理，原因是： A、还原被氧化的S溶血素，恢复溶血能力 B、溶血素O对热不敏感 C、溶血素S对氧敏感 D、以上全错 11、观察乙型溶血性链球菌典型形态，选择哪一种培养基可得理想结果： A、普通琼脂平板 B、普通肉汤 C、血琼脂平板 D、血清肉汤 12、对脑膜炎奈瑟氏菌的标本采送，哪一种是错误的？ A、低温 B、保温 C、防干燥 D、快速 13、区别志贺氏菌和沙门氏菌可采用下列哪种试验？ A、氧化酶试验 B、乳糖发酵试验 C、葡萄糖发酵 D、动力试验 14、下列哪一项可用于区别肺炎双球菌和甲型链球菌？ A、胆汁溶菌试验和甘露醇发酵试验 B、溶血试验和胆汁溶菌试验 C、菊糖发酵试验和胆汁溶菌试验 D、溶血试验和菊糖发酵试验
1.微生物microorganism：是存在于自然界的一大群形体微小、结构简单、肉眼直接看不见，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大数百至数万倍才能观察到的微小生物。 2.微生物学microbiology：是生物学的一个分支，是研究微生物的类型、分部、形态结构、生命活动及其规律、遗传、进化，以及人类、动物、植物等相互关系的一门科学。 3.医学微生物学medical microbiology：主要是研究与医学和疾病有关的病原微生物的生物学特性、致病性、免疫性，以及特异性诊断和防治措施的学科，目的是控制和消灭微生物引起的感染性疾病，以保证和提高人类的健康水平。 4.细菌L型bacterial L form：细菌在体内外受到各种直接或间接的理化或生物因素影响后导致细胞壁肽聚糖直接破坏或合成被抑制进而形成一种细胞壁缺失或缺陷的细菌。 5.?原生质体protoplast：细菌变成为L型后，细胞壁完全缺失，细菌仅被一层细胞膜包裹。 6.原生质球spheroplast：源于革兰阴性菌的L型。 7.中介体mesosome：细菌细胞膜可内陷形成一种特有的结构，是部分胞膜折叠形成的泡囊状、管状或薄层状结构，在电子显微镜下方能看到。 8.?质粒plasmid：是细菌染色体外的遗传物质，存在于细胞质中，是小的双股闭合环状DNA分子，可独立于染色体存在并复制，也可整合到染色体上。 9.芽孢：很多革兰阳性菌在一定条件下可在菌体内部形成具有多层膜包裹的原型或卵圆形的小体，是细菌代谢处于相对静止状态、维持生存、具有特殊抵抗力的休眠结构。 10.热原质pyrogen：是细菌合成的一种注入人体或动物体内能引起发热的的物质。 11.?噬菌体bacteriophage or phage：是感染细菌、真菌、放线菌和螺旋体等微生物的病毒，只能在活的宿主菌内复制，噬菌体的DNA不仅随着它的感染可在宿主菌之间及宿主菌与噬菌体之间传播，而且还能赋予宿主菌某些生物学性状。 12.?毒性噬菌体virulent phase：为感染宿主后，能在宿主菌细胞内独立复制增殖，产生许多子代噬菌体并最终裂解细菌的噬菌体。 13.溶源性细菌lysogenic：染色体上有前噬菌体的细菌。 14.溶原性噬菌体lysogenic phase：为感染宿主菌后，将其基因组整合到宿主菌染色体上或像质粒存在于细胞之中，随细菌的DNA复制而复制，并随细菌的分裂而传代的噬菌体。15.转座子transposon，Tn：是一类在细菌的染色体、质粒或噬菌体之间自行移动的遗传成分，是细菌基因组中一段特异的具有转位特性的独立DNA序列。 16.突变mutation：是细菌遗传物质的结构发生突然而稳定的改变，导致的变异可传于后代。 17.?转化transformation：是供体菌游离的DNA片段直接进入受体菌，使受体菌获得新的性状。 18.?接合conjugation：是细菌通过性菌毛相互连接沟通，将遗传物质（质粒）从供体菌转移给受体菌。 19.?转导transduction：是以温和噬菌体为载体，将供体菌的遗传物质转移到受体菌中，使后者获得新的性状。 20.?溶原性转换lysogenic conversion：是侵入细菌的噬菌体在溶原期可以前噬菌体形式在
临床微生物学检验技术试题及答案 A1题型 1. 机体抵抗病原微生物的屏障结构包括 A、皮肤与粘膜 B、血脑屏障 C、胎盘屏障 D、免疫系统 E、A、B和C 答案E 2. 有关内毒素的描述哪项是错误的 A、均由革兰氏阴性菌产生 B、其化学成分为脂多糖 C、160℃，2~4小时才被破坏 D、毒害效应具有组织器官选择性 E、毒性作用较弱 答案D 3. 下列描述哪项是错误的 A、病原菌致病力的强弱度称为毒力 B、毒力主要由侵袭力和毒素所决定 C、破伤风毒素属于内毒素 D、侵袭力是指病原菌突破宿主机体的防御功能，并能在体内定居、繁殖和扩散的能力 E、以上均不是 答案C 4. 下列哪种成分不属于外毒素 A、脂多糖 B、痉挛毒素 C、肉毒毒素 D、表皮剥脱毒素 E、霍乱肠毒素
答案A 5. 下列哪种成分不属于外毒素 A、金黄色葡萄球菌肠毒素 B、产毒性大肠杆菌肠毒素 C、白喉毒素 D、表皮剥脱毒素 E、类脂A 答案E 6. 内毒素的毒性作用包括 A、发热反应 B、白细胞反应 C、内毒素血症与内毒素休克 D、以上都是 E、A和C 答案D 7. 慢性志贺菌感染的病程一般在（）以上 A、两周 B、一个月 C、两个月 D、六周 E、七周 答案C 8. 志贺菌随饮食进入体内，导致人体发病，其潜伏期一般为 A、一天之内 B、1-3天 C、5-7天 D、7-8天 E、8天以后 答案B 9. 下列关于结核分支杆菌描述正确的是
A、类脂质为胞壁中含量最多的成分 B、产生外毒素 C、产生内毒素 D、耐药性低 E、一般采用革兰氏染色 答案A 10. 我国的卫生标准中，每升饮用水中不得超过（）个大肠杆菌 A、1 B、3 C、5 D、7 E、8 答案B 11. 大肠杆菌指数测定时，37℃培养24小时，能发酵乳糖（）为阳性 A、产酸 B、产酸产气 C、产酸不产气 D、产气不产酸 E、以上都不产生 答案B 12. 下列何种细菌为革兰氏阴性菌 A、脑膜炎奈瑟菌 B、结核分支杆菌 C、铜绿假单细胞 D、枯草芽孢杆菌 E、白喉棒状杆菌 答案C 13. 下列何种细菌为革兰氏阳性杆菌 A、大肠杆菌 B、铜绿假单细胞
临床微生物学及检验习题集 第一部分基础题绪论一、名词解释:微生物()、微生物学()、医学微生物学( )二、选择题1．下列描述的微生物中，不是所有微生物共同特征的是A个体微小B 分布广泛C 种类繁多D 只能在活细胞内生长繁殖E 结构简单2．不属于原核细胞型微生物的是A 细菌B真菌 C支原体 D 衣原体E立克次体3属于真核细胞型微生物的是 A 螺旋体 B 放线菌 C 真菌 D 细菌 E 立克次体4下列那种微生物属于非细胞型微生物 A 细菌B衣原体 C支原体 D病毒 E立克次体 细菌的形态及结构 一、名词解释：1.肽聚糖（）2.脂多糖()3. 质粒（）4. 异染颗粒()5. 革兰染色()6. 芽胞()7荚膜() 二、选择：1．及真核细胞结构相比较，细菌所特有的一种重要结构是A核蛋白体（核糖体）B线粒体C高尔基体 D细胞膜 E 细胞壁2．及细菌运动有关的结构是A鞭毛B菌毛C纤毛D荚膜E轴丝3．及内毒素有关的细菌结构是A外膜层B核膜C线粒体膜D荚膜E细胞膜4．芽胞及细菌致病有关的是A抗吞噬B产生毒素C耐热性D粘附于感染部位E侵袭力 5．细菌核质以外的遗传物质是 A B 核蛋白体 C质粒D异染颗粒 E性菌毛 6．及细菌粘附功能有关的细菌结构是A菌毛B荚膜 C中介体D 胞浆膜E细胞膜
7．不属于细菌基本结构的是A鞭毛B细胞质C 细胞膜D核质（拟核）E细胞壁 8．细菌内毒素的主要成份是 A 肽聚糖 B 蛋白质 C鞭毛 D 核酸E脂多糖 9．及细菌感染侵袭相关的结构是A 中介体B 细胞膜 C异染质颗粒D 芽胞E 荚膜 10．青霉素的抗菌作用机理是A 干扰细菌蛋白质的合成B抑制细菌的核酸代谢C抑制细菌的酶活性D破坏细菌细胞壁中的肽聚糖E破坏细胞膜11细菌的L型是指：A细菌的休眠状态B细胞壁缺陷型细菌C非致病菌D不可逆性变异的细菌E光滑型—粗糙型菌落()变异 12．溶菌酶杀菌的作用机理是：A裂解聚糖骨架的β-1，4糖苷键 B竞争肽聚糖合成中所需的转肽酶C及核蛋白体的小亚基结合 D竞争性抑制叶酸的合成代谢 E破坏细胞膜 13．关于细菌的L型错误的是：A主要由肽聚糖结构的缺损引起的B可在体外试验中形成C呈多形性D需在高渗透压的培养基中分离培养E失去产生毒素的能力而使其致病力减弱 14．细菌的革兰染色性不同是由于A细胞核结构B细胞壁结构C 细胞膜结构同D磷酸壁的有无 E中介体的有无15．细菌哪种结构类似真核细胞线粒体A核蛋白体B中介体C胞质颗粒D质粒 E 核质16．需用电子显微镜才能观察到的结构是A荚膜B异染颗粒C鞭毛D菌毛 E芽胞17．革兰染色所用试剂的顺序是A稀释
年级：2009 专业：医学检验班级：一班姓名：赵富海学号：2009221792 实验八、细菌的药物敏感试验 【K-B法】 菌种（均为幼龄菌）：金黄色葡萄球菌1.5×108/ml、大肠埃希菌1.5×108/ml 药物纸片：青霉素、庆大霉素、新诺明、环丙沙星 方法： 1.涂菌（棋盘划线法），室温放10min； 2.贴药敏纸片，注意间距（大于24mm）和边距（大于15mm）； 3.置35℃ 24h判读结果。 结果如图所示： 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验评价结果 实验结论：金黄色葡萄球菌对青霉素耐药，对庆大霉素、新诺明、环丙沙星敏感。 【试管稀释法】 菌种：金黄色葡萄球菌1.5×108/ml、大肠b1.5×108/ml 抗生素：庆大霉素32u/ml 方法： 1.对倍稀释抗生素 2.加菌液0.1ml/管，摇均35℃ 16—18h
3.判读MIC 试验操作如下图所示： 注意 :设立对照管(肉汤对照管,待测菌生长对照管和质控菌生长对照管) 结果判断: 不出现肉眼可见生长的最低药物浓度为该药对该细菌的MIC. 如图： 实验结论：MIC=原药物浓度(32u/ml) ×稀释倍数(1:24)=2u/ml 【联合药敏试验】（示教） 金黄色葡萄球菌大肠b 结果判断： 金黄色葡萄球菌联合药敏试验结果判读： ①青+链=青单+链单→相加作用 ②青+红=青单+红单→相加作用
③青+万=青单+万单→相加作用 ④青+林＞青单+林单→协同作用 大肠b联合药敏试验结果判读： ①青+红=青单+红单→相加作用 ②青+链=青单+链单→相加作用 ③青+林=青单或林单→无关作用 ④青+南＞青单+南单→协同作用 【实验讨论】 1．K-B法原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中所含有的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关关系，即抑菌圈愈大，MIC 愈小。 2.K-B法影响因素 ①培养基的质量，如PH、深度、硬度和表面湿度等； ②药敏纸片的质量，含药量和保存方式； ③接种菌量正确与否是影响结果的重要因素之一，取决于比浊标准的配制，正确使用和保存； ④试验操作质量：接种细菌后贴片时5~15分钟； ⑤孵育条件，温度和时间：培养时间 16~18h,不要超过24h。 3．稀释法原理： 以水解酪蛋白（MH）液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释，然后种入待测细菌，定量测定抗菌药物对被测菌的最低抑菌浓度(MIC)或最低杀菌浓度（MBC）。 4. 稀释法影响因素：培养基、接种菌量、蛋白质结合率、抗菌药物的配制、结果观察的时间等因素均能影响本试验的结果。 5．抗生素药物敏感性试验（AST）的意义 ①可预测抗生素治疗的效果，既AST试验结果为“敏感”时，治疗可能有效；试验结果为“耐药”时，使用该药物治疗肯定失败； ②指导临床医生选择使用抗生素，AST的结果往往在给予病人经验性治疗24~48h之后，若AST结果为“敏感”，该治疗为有效，若结果为“耐药”，即应更换药物； ③提供所选择药物的依据； ④监测耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握耐药菌感染病的流行病学，控制和预防耐药菌感染的发生和流行。 6．通过此次实验掌握纸片扩散法（K-B法）、试管稀释法的原理、操作方法、结果的判读及其临床意义，并掌握联合药敏试验结果的观察、判断。
临床微生物学检验技术试题及答案A1题型 1、人类ABO血型抗原包括 A、A抗原 B、B抗原 C、O抗原 D、AB抗原 E、A抗原和B抗原 答案：E 2、ABO血型物质在人体中可引起哪几种Ab产生 A、抗B抗体 B、抗AB抗体 C、抗A抗体 D、抗O抗体 E、抗A和抗B抗体 答案：E 3、免疫耐受就是 A、非特异性无反应性 B、特异性无反应性 C、机体无反应性 D、免疫抑制性 E、对任何抗原都不反应 答案：B 4、迟发型皮肤过敏反应与下列哪种物质有关 A、IgE B、IgA C、活化B细胞 D、活化T细胞 E、活化NK细胞
答案：D 5、佐剂作用是 A、将Ag送入机体各部位 B、将Ag固定在局部 C、增强Ag免疫原性 D、赋予Ag免疫原性 E、增强机体对Ag的免疫应答 答案：E 6、下列哪种物质既有非特异性免疫也参与特异性免疫反应 A、IgG B、干扰素 C、IgA D、前列腺素 E、补体 答案：E 7、TDH 细胞是 A、产生Ab细胞 B、天然杀伤细胞 C、细胞毒细胞 D、迟发变态反应T细胞 E、依Ab杀伤T细胞 答案：D 8、关于霍乱弧菌是否侵入上皮细胞，下列说法正确的是 A、不侵入 B、侵入 C、在特定条件下侵入 D、具有侵袭基因的霍乱弧菌侵入 E、侵入后局限于上皮细胞内 答案：A 9、葡萄球菌能产生多种溶血素，其中最主要的是
A、α、β溶血素 B、α、γ溶血素 C、β、γ溶血素 D、δ、ε溶血素 E、α、γ溶血素 答案：A 10、与其他肺部感染病原菌相比较，铜绿假单胞菌的毒力特点是 A、产生外毒素 B、具有内毒素 C、产生溶血素 D、产生绿脓素 E、具有菌毛 答案：D 11、有荚膜的流感嗜血杆菌含有荚膜多糖抗原称作： A、V抗原 B、M抗原 C、A抗原 D、X抗原 E、S抗原 答案：B 12、下列关于铜绿假单胞菌叙述中，正确的是 A、革兰氏阳性球菌 B、革兰氏阳性杆菌 C、无芽孢 D、具有荚膜 E、无鞭毛 答案：C 13、下列何种微生物具有荚膜结构 A、军团菌 B、支原体
临床微生物学与检验测试题及答案一一细菌感染的实验室检查与诊断及细菌生理 一、名词解释 1. 血清学诊断 o 拉圭苴 2. 培养基 3. 基础培养基 4. 选择培养基 5. 鉴别培养基 6. 菌落 二、填空题 1. 实验室细菌学检查结果的准确与否和标本的选 择、____________________ 、____________________ 有直接关系。 2. 辅助诊断风湿热的抗“ O'实验属于_____________________ 。 3. 血清学试验一般需作两次，其血清分别取自疾病 的____________________ 和 __________________ .第二次抗体效价比第一 次____________________ 时方有诊断意义。 4. 对流行性脑炎患者进行细菌学检查，可采集的标本 有____________________ 、 ___________________ 和___________________ 。 5. 进行病原菌的分离培养时，从有正常菌群部位采取的标本应接种 于____________________ 培养基或 _____________________ 培养基。 6. 细菌感染实验室检查中，常用的血清学方法 有____________________ 、 _____________________ 和______________________ 三大类。 7. 属于直接凝集反应的血清学试验有 _____________________ 和______________________ 三、单项选择题 1. 目前在传染病的预防接种中，使用减毒活疫苗比使用灭活疫苗普遍，关于其原因下述 不正确的是 A. 减毒活疫苗的免疫效果优于灭活疫苗 B. 减毒活疫苗刺激机体产生的特异性免疫的持续时间比灭活疫苗长 C. 减毒活疫苗能在机体内增殖或干扰野毒株的增殖及致病作用，灭活疫苗则不能 D. 减毒活疫苗可诱导机体产生分泌型IgA ,故适用于免疫缺陷或低下的患者
临床微生物学与检验习题集 本习题集由三部分构成,第一部分为基础题,主要测试学生对每一章节内容得掌握程度;第二部分为综合题,侧重考查学生综合分析问题得能力及对本门课程掌握得程度;第三部分为病例分析题,考查学生利用所学知识解决实际问题得能力。 第一部分基础题 绪论 二、选择题 1．下列描述得微生物中,不就是所有微生物共同特征得就是 A 个体微小 B 分布广泛 C 种类繁多 D 只能在活细胞内生长繁殖 E 结构简单 2．不属于原核细胞型微生物得就是 A 细菌 B 真菌 C 支原体 D 衣原体 E 立克次体 3．属于真核细胞型微生物得就是 A 螺旋体 B 放线菌 C 真菌 D 细菌 E 立克次体 4.下列那种微生物属于非细胞型微生物 A 细菌 B 衣原体 C 支原体 D 病毒 E 立克次体 二、选择: 1．与真核细胞结构相比较,细菌所特有得一种重要结构就是 A 核蛋白体(核糖体) B 线粒体 C 高尔基体 D 细胞膜 E 细胞壁 2．与细菌运动有关得结构就是 A 鞭毛 B 菌毛 C 纤毛 D 荚膜 E 轴丝 3．与内毒素有关得细菌结构就是 A 外膜层 B 核膜 C 线粒体膜 D 荚膜 E 细胞膜 4．芽胞与细菌致病有关得特征就是 A 抗吞噬 B 产生毒素 C 耐热性 D 粘附于感染部位 E 侵袭力 5．细菌核质以外得遗传物质就是 A mRNA B 核蛋白体 C 质粒 D 异染颗粒
E 性菌毛 6.与细菌粘附功能有关得细菌结构就是 A 菌毛 B 荚膜 C 中介体 D 胞浆膜 E 细胞膜 7.不属于细菌基本结构得就是 A 鞭毛 B 细胞质 C 细胞膜 D 核质(拟核) E 细胞壁 8.细菌内毒素得主要成份就是 A 肽聚糖 B 蛋白质 C 鞭毛 D 核酸 E 脂多糖 9.与细菌感染侵袭相关得结构就是 A 中介体 B 细胞膜 C 异染质颗粒 D 芽胞 E 荚膜 10.青霉素得抗菌作用机理就是 A 干扰细菌蛋白质得合成 B 抑制细菌得核酸代谢 C 抑制细菌得酶活性 D 破坏细菌细胞壁中得肽聚糖 E 破坏细胞膜 11.细菌得L型就是指 A 细菌得休眠状态 B 细胞壁缺陷型细菌 C 非致病菌 D 不可逆性变异得细菌 E 光滑型—粗糙型菌落(S—R)变异 12.溶菌酶杀菌得作用机理就是 A 裂解聚糖骨架得β-1,4糖苷键 B 竞争肽聚糖合成中所需得转肽酶 C 与核蛋白体得小亚基结合 D 竞争性抑制叶酸得合成代谢 E 破坏细胞膜 13.关于细菌得L型,错误得说法就是 A 主要就是由肽聚糖结构得缺损引起得 B 可在体外试验中形成 C 呈多形性 D 需在高渗透压得培养基中分离培养E失去产生毒素得能力而使其致病力减弱 14.细菌得革兰染色性不同就是由于 A 细胞核结构得不同 B 细胞壁结构得不同 C 细胞膜结构得不同 D 磷酸壁得有无 E 中介体得有无 15.细菌哪种结构得功能类似真核细胞得线粒体 A 核蛋白体 B 中介体 C 胞质颗粒 D 质粒 E 核质 16.需用电子显微镜才能观察到得结构就是 A 荚膜 B 异染颗粒 C 鞭毛 D 菌毛
临床微生物学检验 确保高压效果的可靠性。 【适用范围】 蒸气式高压锅。 【该SOP变动程序】 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 【操作方法】 1．将水加到高压锅内至其刻度线，将欲灭菌物品放入锅内，关闭锅门，拧紧螺丝并确认已经封闭。 2．打开排气阀。 3．打开蒸汽开关，向锅内输入蒸汽或接通电源，使产生蒸汽。 4．观察排气阀的排气情况，待排出的气体由冷气变为蒸汽，压力表达到0.05mPa 时，关闭排气阀。 5．观察压力表，当压力升至0.15mPa时，开始计时。 6．压力达0.15mPa后，可调节进气阀，减少进气量，维持压力并使其稳定在 0.15mPa。电加热时，可切断电源，维持压力持续15分钟，至多不超过30分 钟，否则营养物质破坏。 7．关闭进气阀门或切断电源，让锅内物品自然冷却，不可马上打开排气阀，以免发生意外。 8．待锅内压力降为零时，可打开锅盖，取出物品。 操作人员部门主管质量负责人姓名唐玉贞检验科检验科 日期 06年06月06日
确保培养箱温度恒定。 【适用范围】 各种类型隔水式、温度设定为27℃、35℃、42℃、56℃培养箱。 【该SOP变动程序】 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 【操作方法】 1．培养箱应放置于水平地面（或坚固的水平台），电源电压须匹配。 2．从注水口先将隔水箱内的水注满到浮标要求的位置。 3．将温度调节旋扭调至所需温度，然后将电源开关拨至“开”处。 4．每次使用时应在培养箱顶部插入标准温度计，监测实际温度。 5．培养箱工作温度波动范围应控制在±10C以内。 6．培养箱正面贴有温度记录表，记录每天上班和下班时温度，如温度超出正常范围，指示该温度的刻度应划上红圈，并把修正温度记录下来。 7．培养箱内外应保持清洁。 操作人员部门主管质量负责人 姓名唐玉贞检验科检验科 日期 06年06月06日
临床微生物学检验技术考试题库及答案 2、（正常菌群）条件致病性微生物——临床上多引起内源性感染。 3、G+菌特有成分：磷壁酸（重要表面抗原，可用于细菌血清学分型）（外毒素） 4、G-菌特有成分：外膜层（由脂多糖（内毒素）、脂质双层（磷脂）、脂蛋白） 5、G+菌和G-菌细胞壁的共同成分是肽聚糖。结构由聚糖骨架、四肽侧链和五肽交联桥（G-菌无。是溶菌酶、青霉素作用部位） 6、细菌的主要遗传物质：核质（染色体）、质粒（存在于胞质，双链闭合环状DNA分子）、转位因子 7、细菌特殊结构：荚膜（保护，致病，抗原性，鉴别）、芽胞、鞭毛（运动器官）、菌毛（普通菌毛—粘附，致病性；性菌毛—接合方式转移遗传物质）*将芽胞是否被杀死而作为判断灭菌效果的指标 8、L型（细胞壁缺陷）菌落：①“油煎蛋”（荷包蛋）样菌落（典型L型细菌）。②颗粒型菌落（简称G型菌落）③丝状菌落（简称F型菌落）。高渗环境生长。（环丙沙星） 9、自营菌：以无机物为原料；异营菌(腐生菌：以无生命的有机物质为营养物质；寄生菌：以宿主体内有机物为原料),所有致病菌都是异营菌。 10、细菌营养物质：水、碳源、氮源、无机盐类和生长因子。 11、细菌个体的生长繁殖方式：无性二分裂，在对数期以几何级数增长 12、细菌分类（伯杰）等级依次为界、门、纲、目、科、属、种（最小分类单位）。 13、常用的细菌培养方法是：需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法； 14、通常由正常无菌部位采取的标本接种血平板，置于空气或含5%～ 10%CO2的气缸中培养，大部分细菌可于24～48h生长良好。 15、血清学诊断时，一般要在病程早期和晚期分别采血清标本2～3份检查，抗体效价呈4倍或以上增长才有价值。 16、透射电子显微镜适于观察细菌内部的超微结构；扫描电子显微镜适于对细菌表面结构及附件的观察。
微生物学实验报告格式 专业学号 姓名 实验一、???培养基的配制和高压蒸汽灭菌 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（实际用到哪些试剂、材料、玻璃器皿等都要写出，包括数量） 四、实验步骤（按照实际步骤填写,切忌抄袭） 五、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 六、思考题 1、简述培养基的配制原则？ 2.为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？ 3.高压蒸汽灭菌时，为什么要先将灭菌锅锅内的冷空气完全排尽？ 实验二自生固氮菌的分离纯化 （这是个综合实验，请大家回顾三周来的所有操作步骤，将其整理成连贯完整的一份报告，注意每次实验的衔接，不要把其他的实验项目写进来，但也不要漏写该实验的相关步骤。） 一、实验目的
二、实验原理 三、实验材料（整个综合实验有涉及到的材料都要列出） 四、实验步骤（详叙每周所做的相关步骤） 五、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 六、思考题 1、划线分离时，为什么每次都要将接种环上多余的菌体烧掉？划线为何不能重叠？ 2、如何从自然界中分离自己所需要的纯培养？ 实验三平板培养测数法 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（实际操作有涉及到的材料都要列出） 四、实验步骤（详叙相关步骤） 五、实验结果 六、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 七、思考题 1、平板菌落计数法中，为什么溶化后的培养基再冷却至45℃左右才能倒平板？
2、本次实验是否成功？如果失败，试分析原因。 实验四简单染色 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（包括菌种、染料、玻璃器皿） 四、实验步骤 五、实验结果（黏贴染色结果图片并描述所观察到的细菌的显微形态） 六、思考题 1、简单染色要获得成功，有哪些问题需要注意，为什么？ 实验五革兰氏染色 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（包括菌种、染料、玻璃器皿） 四、实验步骤 五、实验结果（黏贴染色结果图片并判断自己分离到的菌种是G还是G+-？） 六、思考题 1、革兰氏染色要获得成功，有哪些问题需要注意，为什么？
临床微生物学检验 题型 单选（4选1） 多选（5选多） 判断改错（错误的并改正） 简答（适当解释说明） 论述（案例分析，具体阐述） 革兰氏染色属复染法，初染，媒染，脱色，复染4个过程 革兰阳性（呈紫色）革兰阴性（呈红色） 第二章 1.细菌大小以微米（μm）为测量单位。 2.细菌结构： ①附属结构：鞭毛、菌毛（光镜下看不见，不能作为鉴定依据，没鉴定价值）或纤毛； ②表层结构：糖萼（荚膜或粘液层）； ③内部结构：细胞质、质粒、芽孢。 3.细菌功能： ①动力（鞭毛是细菌的运动器官），观察细菌动力可用悬滴法或压滴法在显微镜下直接观察其运动，也可将细菌穿刺接种半固体培养基观察动力。 鞭毛具有鉴定价值，采用鞭毛特殊染色（如镀银染色）可观察有无鞭毛及鞭毛数量、分布；一般染色不能看见鞭毛（如革兰氏染色）。 4.芽孢的功能：①对热力、干燥、辐射、化学消毒剂等具有强大抵抗力； ②以是否杀死芽孢作为物品消毒灭菌判断效果的指标。 ③芽孢在菌体的位置和直径大小随菌种不同，这种形态特点有助于细菌鉴别。 5.细菌生长曲线（要求整个过程，结合生长曲线记忆4个时期比较容易，可能是简答题） 细菌二分裂方式进行繁殖。 以倾注平板法计数孵育后的菌落数换算菌落形成单位（CFU）。 生长曲线：连续检测细菌不同培养时间的CFU，以CFU为纵坐标，培养时间为横坐标作出一条反映细菌生长数变化的规律曲线。 典型的生长曲线分为迟缓期、对数生长期、稳定期、衰亡期。 ①迟缓期。也称为准备时期，是细菌适应环境的过程。特点：细菌的核酸、蛋白质、辅酶等物质合成增加，细胞体积增大，细菌数量恒定或极少量增加。 ②对数生长期。特点：细菌以最大的速率生长和分裂，细菌数量成对数增加。细菌代谢活跃、稳定，其大小、形态、染色性和生化反应典型，对外界因素反应敏感，是检测细菌生物学性状和进行药物敏感性试验的适宜阶段。不添加培养基下一般细菌对数期维持4~8h。 ③稳定期。特点：由于培养基中营养物质消耗、有害代谢产物积累和P H等环境变化，细菌生长速率降低，细菌死亡数增加使生长繁殖菌数和死亡菌数处于动态平衡，细菌数量达到最大，即处于稳定期。此时期细菌合成代谢产物较多，通常维持10h。向培养基系统中补充营养物质，取走代谢产物，改善培养条件，可延长稳定期。由于代谢产物较多，是细菌生化反应试验鉴定的最佳时期。 ④衰亡期。特点：细菌死亡速率逐步增加，活菌数减少，死亡数大于增加数，细菌形态不典型，甚至出现自溶，该时期的细菌不能用于细菌的鉴定和研究工作。 6.细菌的生化反应：由于不同细菌所具有的酶系统各不相同，对营养物质的分解能力也不一致，因而其代谢产物不同。根据此特点，利用生化试验的方法来检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的反应。 7. 灭菌：破坏和去除物体上所有微生物（包括病原微生物和非病原微生物）和细菌芽孢的方法。
临床微生物学与检验测试题及答案
————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：
临床微生物学与检验测试题及答案——细菌感染的实验室检查与诊断及细菌生理 一、名词解释 1.血清学诊断 2.培养基 3.基础培养基 4.选择培养基 5.鉴别培养基 6.菌落 二、填空题 1.实验室细菌学检查结果的准确与否和标本的选 择、、有直接关系。 2.辅助诊断风湿热的抗“O”实验属于。 3.血清学试验一般需作两次，其血清分别取自疾病 的和.第二次抗体效价比第一 次时方有诊断意义。 4.对流行性脑炎患者进行细菌学检查，可采集的标本 有、和。 5.进行病原菌的分离培养时，从有正常菌群部位采取的标本应接种 于培养基或培养基。 6.细菌感染实验室检查中，常用的血清学方法 有、和三大类。 7.属于直接凝集反应的血清学试验有和。 三、单项选择题 1.目前在传染病的预防接种中，使用减毒活疫苗比使用灭活疫苗普遍，关于其原因下述不正确的是 A.减毒活疫苗的免疫效果优于灭活疫苗 B.减毒活疫苗刺激机体产生的特异性免疫的持续时间比灭活疫苗长 C.减毒活疫苗能在机体内增殖或干扰野毒株的增殖及致病作用，灭活疫苗则不能 D.减毒活疫苗可诱导机体产生分泌型IgA，故适用于免疫缺陷或低下的患者 E.减毒活疫苗一般只需接种一次即能达到免疫效果，而灭活疫苗需接种多次
2.白百破三联疫苗的组成是 A.百日咳类毒素，白喉类毒素，破伤风类毒素 B.百日咳死疫苗，白喉类毒素，破伤风类毒素 C.百日咳死疫苗，白喉死疫苗，破伤风类毒素 D.百日咳活疫苗，白喉活疫苗，破伤风死疫苗 E.百日咳活疫苗，白喉死疫苗，破伤风死疫苗 3.使用时要注意防止Ⅰ型超敏反应的免疫制剂是 A.丙种球蛋白 B.胎盘球蛋白 C.抗毒素 D.白细胞介素 E.干扰素 4.关于胎盘球蛋白的叙述，错误的是 A.由健康产妇的胎盘和婴儿脐带中提取制备 B.一般含IgM C.一般不会引起超敏反应 D.主要用于麻疹，甲型肝炎和脊髓灰质炎等病毒性疾病的紧急预防 E.免疫效果不如高效价的特异性免疫球蛋白 5.伤寒病人发病第一周内，分离病原菌应采取的标本是 A.血液 B.尿液 C.粪便 D.呕吐物 E.脑脊液 6.咽喉假膜标本涂片染色后，镜检出有异染颗粒的棒状杆菌，其临床意义在于诊断 A.结核病 B.军团病
CNAS-CL42 医学实验室质量和能力认可准则在 临床微生物学检验领域的应用说明 Guidance on the Application of Accreditation Criteria for the Medical Laboratory Quality and Competence in the Field of Clinical Microbiology 中国合格评定国家认可委员会
前言 本文件由中国合格评定国家认可委员会（CNAS）制定，是CNAS根据临床微生物学检验的特性而对CNAS-CL02：2012《医学实验室质量和能力认可准则》所作的进一步说明，并不增加或减少该准则的要求。 本文件与CNAS-CL02：2012《医学实验室质量和能力认可准则》同时使用。 在结构编排上，本文件章、节的条款号和条款名称均采用CNAS-CL02：2012中章、节条款号和名称，对CNAS-CL02：2012应用说明的具体内容在对应条款后给出。 本文件的附录A为规范性附录。附录的序号及内容与CNAS-CL02:2012不对应。 本文件于2012年制定，本次为第1次修订换版。
医学实验室质量和能力认可准则 在临床微生物学检验领域的应用说明 1 范围 本文件规定了CNAS对医学实验室临床微生物学检验领域的认可要求。 临床微生物学检验领域中涉及的病毒血清学检验、基因扩增检验、寄生虫检验等应符合相关专业领域应用说明的要求。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括修改单）适用于本文件。 CNAS-RL02 能力验证规则 3 术语和定义 4 管理要求 4.1 组织和管理责任 4.1.1.2 实验室为独立法人单位的，应有医疗机构执业许可；实验室为非独立法人单位的，其所属医疗机构执业证书的诊疗科目中应有医学实验室，自获准执业之日起，开展医学检验工作至少2年。 4.1.1.4 e) 应根据工作流程及性质定期实施生物安全风险评估，根据生物安全理论和技术的新进展制定、修订相应的生物安全操作和防护规程并进行培训，以减小职业暴露的危险。当工作流程及性质发生变动时，应及时实施再评估。 应制定生物安全事故和危险品、危险设施等意外事故的预防措施和应急预案，并对全体人员进行培训。 至少应规定如下安全要求： （a）不同控制区域的防护措施及合适的警告； （b）已知或有潜在经空气、气溶胶传播危险的样品或病原体在生物安全柜内操作； （c）样品安全运送及处理，如：工作人员接种疫苗，戴手套和进行呼吸道防护（适用时），确保容器密封性，嗅平板时的潜在危害及其防护等； （d）渗漏样品的处理措施；
临床微生物学检验技术试题及答案 1.在对病人进行诊断时，常采用血清学方法，Ag-Ab反应有许多特点，但Ag-Ab反应主要特点是 A、分阶段性 B、可逆性 C、敏感性高 D、特异性 E、非特异性 答案：D 2.革兰氏染色是重要的细菌鉴别染色之一其媒染剂（卢戈氏碘液）所起的作用 A、增加摄取染料作用，不易脱色 B、固定初染细菌 C、对下一步脱色起促进作用 D、杀死细菌 E、破坏细菌细胞壁 答案：A 3.血清制品的保存常加一些防腐剂，防止杂菌生长，常用的是硫柳汞常用浓度为 A、0.001% B、0.01% C、0.1% D、1% E、10% 答案：B 4.能在SS琼脂上生长出的大肠埃希氏菌呈现______色 A、浅红 B、深红 C、微黄 D、无 E、深灰
答案：B 5.在用血清学方法诊断或进行流行病学调查时，常采用Ag与Ab反应，进行此反应必须有电解质参与，电解质量与反应有关，当电解质超出最佳浓度时 A、提高反应敏感性 B、降低敏感性 C、不反应 D、反应不变 E、提高特异性 答案：A 6. 肺炎链球菌在临床上主要引起下列何种疾病 A、脓胸 B、大叶性肺炎 C、肺纤维化 D、肺结节 E、支气管炎 答案：B 7. 颗粒型细菌抗原（死或活菌）在哪种反应中采用 A、沉淀反应 B、琼脂扩散 C、中和试验 D、凝集试验 E、对流电泳 答案：D 8.抗酸染色的结果判定 A、菌体着兰色为抗酸菌 B、菌体着红色为抗酸菌 C、菌体着绿色为抗酸菌 D、菌体着黄色为抗酸 E、菌体无色为抗酸菌 答案：B
9. 下列何种培养基适合军团菌培养 A、庆大霉素培养基 B、BCYE琼脂培养基 C、巧克力平板 D、PPLO培养基 E、Korthof培养基 答案：B 10. 冻干菌种待完全干燥后，需将安瓶中空气抽成真空，当用真空火花检测器检测时，火花是什么颜色证明为真空 A、红色 B、黄色 C、白色 D、紫色 E、兰绿色 答案：D 11.戊烷脒选择性培养基，胆汁湟绿培养基适用于什么细菌培养 A、霍乱弧菌 B、白喉杆菌 C、破伤风杆菌 D、布鲁氏菌 E、炭疽杆菌 答案：E 12.活性炭酵母琼脂培养基CYE是适用于培养什么细菌 A、分离鼠疫杆菌 B、布鲁氏菌培养 C、白喉杆菌培养 D、肠道细菌培养 E、军团菌的培养 答案：E 13.牛肉膏汤是常用的培养基，但它有一个特点是什么
微生物学实验报告 实验一普通光学显微镜的使用及细菌染色与形态观察 第一部分：显微镜的使用 一、目的要求 1．熟悉普通光学显微镜的构造、油镜的使用原理和显微镜的维护方法。 2．学会正确使用油镜观察细菌的基本形态和特殊构造。 3．了解各种显微镜的主要特征。 二、实验原理 （一）光学显微镜的构造 微生物实验室中最常用的是普通光学显微镜，它的构造可分为机械部分和光学部分。 1、机械部分 普通复式光学显微镜的机械部分通常包括以下几个部分：目镜、镜筒、基座回转器、物镜、载物台、光圈、聚光器、光源、镜臂、细调节器、粗调节器等。 2、光学部分：目镜、物镜、聚光器、光圈、光源。 （二）放大倍数 标本首先经物镜放大，在目镜的焦距平面上形成一个实像，再经过目镜放大成最终的虚像。总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。 物镜的放大倍数愈大，其工作距离（物镜镜头到标本片之间的距离）愈短，这时光圈就要打开得愈大。 显微镜的性能受物镜的分辨距离或分辨力所限制。分辨距离即透镜所能分辨的两个物点之间的最小距离，分辨距离愈小，透镜的分辨力愈高，物像也就愈清晰。因此常以分辨距离来衡量显微镜的分辨力。 R=0.61λ/N.A 式中：R-----分辨距离； λ------作用光的波长； N.A------数值口径。 一些介质的折射率
介质折射率 空气 水玻璃香柏油 1 13 55 1.56 三、实验内容 （一）材料：显微镜，香柏油，擦镜纸。 （二）方法： 细菌很小，须使用油镜方可观察到。油镜是显微镜上最重要的部件之一，观察时与玻片非常接近，稍不小心即可压碎玻片，更严重的是损坏镜头，故必须极其仔细地学习油镜的使用方法： 1、为使低倍镜取得最适之光源，可将低倍镜头调节到离载物台约1cm的高度，将聚光器提高，光圈完全打开，然后调节电压旋钮至视野最合适。 2、滴一滴香柏油，固定于载物台上，用推动器调节到载物台正中。在双目侧视下，下旋粗调节器，使油镜头浸入油中几乎与标本片相接触。然后眼睛从目镜观察（如光线不足，可适当增大电源电压），徐徐上旋粗调节器至看到模糊物像之后，再用细调节器调节以使物像清晰。如镜头已离开油面还未看到物像，则再重新操作。 3、更换标本时应先提高油镜头，再更换玻片，切勿随意移动显微镜的位置。 4、油镜观察完毕后，按“显微镜保护”中（6）项处理。 5、最后将油镜各部分还原，聚光器下降，反光镜垂直于镜座，镜头转成八字形， 以免与聚光器发生碰撞。 四、思考题 1、使用显微镜时为何调节下列构造？反光镜，光圈，聚光器，粗调节器，细调节器，镜头回转器。 答：聚光器的位置之升降可影响视野的明亮度，上升则视野明亮，下降则光线减弱。光圈的放大或缩小也可控制视野明亮程度。粗调节器和细调节器均是调节焦距的装置。镜头回转器为装置物镜和转换物镜之用。 2、使用不同放大倍数的物镜时，工作距离与光圈的关系。如何利用这一原理用好显微镜？ 答：物镜的放大倍数愈大，其工作距离（物镜镜头到标本片之间的距离）愈短。标本首先经物镜放大，在目镜的焦距平面上形成一个实像，再经过目镜放大成最终的虚像。总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。 3、为何要选用与玻璃折射率相似的香柏油作为油镜的介质？油镜的原理是什么？ 答：香柏油只在使用油镜头时（100倍物镜）使用，因为当镜与装片之间的介质为空气时，由于空气（n= 1.52）的折射率不同，光线会发生折射，不仅使进入物镜的光线减少，降低了视野的照明度，而且会减少镜口角。当以香柏油（n=1.515）为介质时，由于它的折射率与玻璃相近，光线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射，不仅增加了视野的照明度，更重要的是通过增加数值孔径达到提高分辨率的目的。可见光的波长平均为0.55μm。当使用数值孔径为0.65的高倍镜时，它能辨别两点之间的距离为0.42μm；而使用数值孔径为1.25的