中华补血草金属硫蛋白基因的克隆及高盐处理下的表达模式分析
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中华补血草盐腺细胞发育的扫描电镜观察摘要利用扫描电镜技术观察盐腺细胞在中华补血草不同发育时期叶芽中的生长发育情况,结果表明:中华补血草盐腺细胞的发育时期远远早于气孔的发育时期。
关键词中华补血草;盐腺细胞;扫描电镜中华补血草(Limonium sinense Kuntze)是蓝雪科补血草属植物,它之所以能在含盐量较高的环境中生长发育,是因为它的叶片上长有独特的植物微形态结构——盐腺。
该文利用扫描电镜技术观察了盐腺细胞在中华补血草不同发育时期叶芽中的生长发育情况。
1材料与方法1.1试验材料培育了6个月的中华补血草幼嫩的叶组织。
1.2试验方法1.2.1盐处理。
将单株盆栽中华补血草植株第1次用100 mmol/L的NaCl溶液进行处理,第2次用200mmol/L的NaCl溶液进行处理,第3次以及以后均用300mmol/L的NaCl溶液进行处理。
1.2.2清洗。
分别取经过NaCl处理的和未经NaCl处理的植株各8株,把植株清洗干净,并将外部的大叶片去除,留下内部的6层幼叶幼芽,用刀片将其根部的外表皮切除。
1.2.3戊二醛固定。
用生理盐水将幼芽表面污物清洗干净,然后将幼芽按照幼叶的生长顺序剥离,并放入装有 2.5%戊二醛溶液(用0.1mol/L的磷酸缓冲液配制,pH值7.2~7.4)的EP管中,把EP管放入4℃冰箱中固定材料24h(中间换1次新液)。
1.2.4锇酸固定。
把EP管从冰箱中取出,将其中的戊二醛溶液倒出,然后用0.1mol/L的磷酸缓冲液清洗浸泡材料3h(中间每隔1h换1次新液);然后将磷酸缓冲液倒出,用1%锇酸固定材料1.5h;最后将锇酸倒出,用双蒸水清洗材料至无锇酸气味(约2h以上)。
1.2.5脱水。
用30%、50%、70%、85%、95%的梯度乙醇溶液对材料进行脱水处理,每个浓度处理15min,最后用无水乙醇处理2次,每次20min;脱水处理后的材料,用醋酸异戊酯置换处理30min,然后进行常规临界点干燥。
中华补血草和德国补血草的耐盐性比较骆建霞;张婷;王娜;杨硕;苏婷;卢兴霞;刘峄【摘要】[目的]比较中华补血草(Limonium sinense Kuntze)和德国补血草(Limonnium tataricum)的耐盐能力.[方法]以中华补血草和德国补血草为试材,设置1.66(对照CK),4,6,8,10,12,14 mg/g NaCl胁迫处理,分析不同处理下2种补血草的生长情况及叶片中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和电解质外渗率等指标变化,并比较2种补血草叶片的盐腺分布特征.[结果]在1.66~8 mg/g NaCl胁迫下,2种补血草植株外部形态无明显变化;在10~14 mg/g NaCl胁迫下,随盐胁迫程度的加剧,2种补血草盐害症状加重,且德国补血草比中华补血草盐害程度深,出现盐害症状时间早.在1.66~10 mg/g NaCl胁迫下,2种补血草叶片中的MDA含量变化小,德国补血草在NaCl含量为12 mg/g时、中华补血草在NaCl 含量为14mg/g时,MDA含量上升;SOD活性均随NaCl含量的增加而先升后降,中华补血草增幅大,而德国补血草降幅大;2种补血草细胞电解质外渗率均随NaCl含量的增加而总体呈上升趋势,德国补血草上升幅度大.中华补血草叶表皮分布的盐腺直径极显著小于德国补血草,分布密度极显著大于德国补血草,盐腺面积所占比例较德国补血草大.[结论]中华补血草能耐NaCl含量为14mg/g的土壤,德国补血草能耐NaCl含量为12mg/g的土壤,中华补血草的耐盐性强于德国补血草.【期刊名称】《西北农林科技大学学报(自然科学版)》【年(卷),期】2014(042)009【总页数】6页(P171-175,183)【关键词】盐胁迫;补血草;MDA;SOD;电解质外渗率;盐腺【作者】骆建霞;张婷;王娜;杨硕;苏婷;卢兴霞;刘峄【作者单位】天津农学院园艺系,天津300384;天津农学院园艺系,天津300384;天津农学院园艺系,天津300384;天津北林新苑绿化工程有限公司,天津300184;天津市北辰区种植业发展服务中心,天津300400;天津农学院园艺系,天津300384;天津农学院园艺系,天津300384【正文语种】中文【中图分类】Q948.113选择栽培耐盐碱、耐旱等适应性强的植物类型,是实现盐碱地优质绿化的重要途径之一。
盐胁迫下二色补血草叶片色素的光保护作用
刘永慧;杨海莹
【期刊名称】《山东商业职业技术学院学报》
【年(卷),期】2014(014)003
【摘要】用不同浓度的NaCl处理泌盐盐生植物二色补血草幼苗,15天后测定叶片色素组分的变化.结果发现:随着处理盐浓度的升高,叶黄素脱环化程度(DPS)逐渐升高,表明依赖于叶黄素循环的能量耗散在盐胁迫下能起到有效的保护作用.Car、Anth的相对含量随着盐度增加逐渐上升,其中Car的相对含量在不同盐度下较对照均显著上升.在400 mmol·L-1 NaCl处理下Anth%较对照上升显著.表明在二色补血草光保护的过程中,活性氧清除系统起着相当重要的作用,活性氧非酶系统含量的升高是其适应盐渍环境不可忽视的原因之一.
【总页数】4页(P121-124)
【作者】刘永慧;杨海莹
【作者单位】山东商业职业技术学院,山东济南250103;山东商业职业技术学院,山东济南250103
【正文语种】中文
【中图分类】Q945.78
【相关文献】
1.不同苹果砧木叶片解剖结构及色素含量对盐胁迫的响应 [J], 骆建霞;吴建强;曾丽荣;郑鑫;张婷;毛文文;荣涛
2.油菜素内酯对盐胁迫下香樟叶片光合色素以及叶绿素荧光的影响 [J], 王舒甜;张金池;张亮
3.外源亚精胺对盐胁迫下水稻根系活力及叶片光合色素含量的影响 [J], 吴正东;王仁雷;王燕;陈全战;周峰;华春
4.盐胁迫对甘草叶片光合色素含量和光合生理特性的影响 [J], 王丹;万春阳;侯俊玲;王文全;庞玉新;李卫东;韩亚男
5.彩叶杨树叶片中花色素苷的光保护作用 [J], 朱秀红;杨金橘;温道远;韩晓雪;茹广欣
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二色补血草LbARP基因的克隆及其表达分析刁桂萍;柳燕;宋佳;林佳忱;刘志华【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2014(042)032【摘要】从二色补血草(Limonium bicolor)cDNA文库中分离出一个生长素抑制蛋白基因LbARP(GenBank登录号为KF886022).该基因全长698 bp,含有3个外显子和2个内含子,开放读码框(ORF)387 bp,共编码128个氨基酸,推测蛋白质分子量为13.84 kDa,理论等电点为9.69.多序列比对结果显示,该基因编码的氨基酸序列与其他植物的ARP蛋白序列相似性达到50%以上,具有生长素抑制基因家族的保守结构域.荧光定量PCR结果表明,LbARP基因能够对NaCl、ABA、CuSO4、CdCl2及ZnCl2等非生物胁迫作出应答.【总页数】3页(P11250-11252)【作者】刁桂萍;柳燕;宋佳;林佳忱;刘志华【作者单位】东北林业大学,黑龙江哈尔滨150040;东北林业大学,黑龙江哈尔滨150040;东北林业大学,黑龙江哈尔滨150040;东北林业大学,黑龙江哈尔滨150040;东北林业大学,黑龙江哈尔滨150040【正文语种】中文【中图分类】S567【相关文献】1.二色补血草硫氧还蛋白过氧化物酶基因LbTPx的克隆及其表达 [J], 刁桂萍 ;杨传平 ;王玉成2.二色补血草海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶基因的克隆及分析 [J], 马辉;刘桂丰;徐晨曦;王玉成;杨传平3.二色补血草LbGRP基因的克隆及抗逆能力分析 [J], 潘妍;王玉成;张大伟;杨传平4.一个新的二色补血草金属硫蛋白基因LbMT2的克隆及其表达分析 [J], 班巧英;刘桂丰;王玉成;张大伟;蒋丽丽5.二色补血草硫氧还蛋白(Trx)的克隆和表达分析 [J], 张大伟;杨传平;王玉成;班巧英;马辉因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
中华补血草生长及有机渗透调节物质对盐胁迫的响应
李妍
【期刊名称】《农业与技术》
【年(卷),期】2007(027)002
【摘要】测定了0、100、200、400、500、600mmol/L NaCl浓度处理下中华补血草中重要有机渗透调节物质的含量变化;其中在100mmol/L NaCl浓度处理时SS含量增加,然后随盐浓度增加又逐渐减少,MDA含量则与其呈相反趋势;OA含量随盐浓度增加而下降,FAA和Pro含量随盐浓度而增加.结果表明低浓度的盐处理有利于中华补血草的生长,有机渗透调节物质对其在盐胁迫环境下生长起到了一定作用.
【总页数】4页(P82-85)
【作者】李妍
【作者单位】德州学院生物系,山东,德州,253023
【正文语种】中文
【中图分类】S481
【相关文献】
1.盐胁迫对中华补血草生长及体内Na+、K+、Cl-含量的影响 [J], 李妍;张霞
2.盐胁迫对2种苹果属植物愈伤组织及组培苗生长和有机渗透调节物质累积的影响[J], 王锴;张立新;高梅;赵永桂;吕丽霞;张林森;李丙智;韩明玉
3.补血草愈伤组织中渗透调节物对NaCl胁迫的响应 [J], 张赛娜;马旭君;李科文;刘军梅;杨颖丽
4.盐胁迫对中华补血草生长和保护酶活性的影响 [J], 李妍
5.黄河三角洲贝壳堤岛二色补血草生长和保护酶特性对盐胁迫的响应 [J], 李田;刘庆;田家怡;孙景宽
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过量表达大叶补血草LgNHX1基因对拟南芥耐盐性的影响周玲玲;祝建波;王爱英【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2011(000)009【摘要】利用植物表达载体pCAMBIA1301和农杆菌GV3101将LgNHX1(全长1 656 bp)基因在拟南芥中过量表达.在含30 mg/L潮霉素的培养基上筛选获得LgNHX1的纯合转化子,并对其进行了分子鉴定和耐盐性分析.结果显示,经PCR和RT-PCR鉴定,野生型植株(对照)没有出现扩增条带,而转基因株系有相应的扩增条带,表明LgNHX1的确已经整合到拟南芥的基因组中,并已正常转录.在不同盐浓度处理下,转基因株系生长情况好于野生型对照;转基因植株地上部分和根的干重、鲜重相对高于野生型对照,但差异没有达到显著水平;当盐浓度达到150-200 mmol/L 时,两个特基因株系的Na+含量显著高于野生型,K+含量极显著高于野生型.以上结果表明,过量表达LgNHX1基因可能增强了拟南芥将Na+区隔化至液泡的能力,提高了转基因拟南芥的耐盐能力.【总页数】6页(P90-95)【作者】周玲玲;祝建波;王爱英【作者单位】石河子大学生命科学学院,石河子832000;石河子大学生命科学学院,石河子832000;石河子大学生命科学学院,石河子832000【正文语种】中文【相关文献】1.大叶补血草Na~+/H~+逆向转运蛋白基因NHX1的克隆及番茄的遗传转化 [J], 宋晓丽;祝建波;周玲玲2.过量表达大叶补血草LgSOS1基因对拟南芥耐盐性的影响 [J], 周玲玲;祝建波;王爱英3.大叶补血草质膜Na+/H+逆向转运蛋白基因SOS1的克隆及对番茄的遗传转化[J], 马苏勇;祝建波;王爱英;周玲玲4.AtNHX5基因过量表达对拟南芥耐盐性的影响 [J], 安静;侯蕾;孔祥强;赵彦修;张慧5.大叶补血草LgNHX1基因对烟草的遗传转化及耐盐性分析 [J], 周玲玲;王爱英;祝建波因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
一个新的二色补血草金属硫蛋白基因LbMT2的克隆及其表达分析班巧英;刘桂丰;王玉成;张大伟;蒋丽丽【期刊名称】《遗传》【年(卷),期】2008(30)8【摘要】从二色补血草cDNA文库中分离出一个新的金属硫蛋白基因LbMT2全长cDNA序列.该基因全长518 bp,其中5'非翻译区(UTR)64 bp,3'非翻译区205 bp,开放阅读框(ORF)249 bp,编码由82个氨基酸组成的蛋白质,编码蛋白的分子量为8.1 kDa,理论等电点(pI)为4.72.利用实时定量PCR方法研究了二色补血草在CuSO4、CdCl2、NaCl、低温和PEG胁迫下不同时间该基因的表达模式.结果表明,CuSO4、CdCl2、NaCl和低温处理均能诱导LbMT2基因在二色补血草的根和叶中的表达,而PEG处理则抑制了LbMT2在根和叶中的表达.构建LbMT2基因的原核表达载体pGEX-LbMT2,通过IPTG诱导在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中融合表达,SDS-PAGE电泳获得35 kDa的蛋白条带,大小与预期相符.【总页数】8页(P1075-1082)【作者】班巧英;刘桂丰;王玉成;张大伟;蒋丽丽【作者单位】东北林业大学,哈尔滨,150040;东北林业大学,哈尔滨,150040;东北林业大学,哈尔滨,150040;东北林业大学,哈尔滨,150040;东北林业大学,哈尔滨,150040【正文语种】中文【中图分类】Q3【相关文献】1.二色补血草中2个金属硫蛋白基因的克隆及分析 [J], 李红艳;杨传平;王玉成;王丙锋2.二色补血草LbARP基因的克隆及其表达分析 [J], 刁桂萍;柳燕;宋佳;林佳忱;刘志华3.一个新的麻疯树毒蛋白基因(Curcin-L2)的克隆和表达分析 [J], 张晟;吴平治;陈雅平;李美茹;姜华武;吴国江4.棉花一个新F-box基因的克隆与表达分析 [J], 卫江辉;范术丽;宋美珍;庞朝友;喻树迅5.巴西橡胶树一个新的法尼基焦磷酸合酶基因的克隆及表达分析 [J], 郭冬;李辉亮;杨子平;彭世清因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
盐胁迫对中华补血草生长和保护酶活性的影响李妍【摘要】对中华补血草用不同浓度NaCl进行处理,测定地上及地下部分的干鲜重、可溶性糖含量、MDA含量,叶的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)等的活性.结果表明:低浓度NaCl处理中华补血草干鲜重增加,高浓度Nacl处理则降低干鲜重,对其生长有抑制作用;盐处理后中华补血草叶片中的丙二醛(MDA)含量先降低后升高、可溶性糖含量先升高后降低.抗氧化酶系统中的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性先升高后降低,过氧化物酶(POD)的活性呈先下降后上升趋势.表明低浓度的盐处理对中华补血草生长有利,丙二醛(MDA)含量减少,而高浓度的盐处理后,抗氧化酶不能及时将活性氧类清除,从而导致活性氧及MDA积累,引起质膜伤害,中华补血草生长量降低.【期刊名称】《种子》【年(卷),期】2007(026)012【总页数】4页(P76-79)【关键词】补血草;丙二醛;可溶性糖;活性氧;抗氧化酶【作者】李妍【作者单位】德州学院生物系,山东,德州,253023【正文语种】中文【中图分类】S332.6中华补血草(Limonium sinense Kuntze)是一种具有泌盐功能的盐生植物,可耐受高达600 mmol/L浓度的NaCl并完成其生活史,该植物可通过外排系统由根部细胞向土壤排Na+或由地上部分的盐腺向外排出盐分(Na+),盐分的外排是该泌盐植物抗盐的主要途径之一[1]。
它能在pH值8.5~9的碱性土壤中正常生长,是碱化较严重地区的理想绿化植物;此外,中华补血草花序着生于枝端,花色艳美华贵、韵味独特,花期长且不脱落,是插花艺术中不可多得的花材;中华补血草还具有止痛、消炎、补血等药用功能,具有较高的园林应用和经济价值。
在正常生理条件下,植物体内活性氧处于不断产生和清除的动态平衡之中,而一旦遭受盐、干旱、低温等逆境胁迫,这种平衡就会被破坏,活性氧水平上升[2,3]。
第35卷第8期东 北 林 业 大 学 学 报Vol.35No.8 2007年8月JOURNAL OF NORT HE AST F ORESTRY UN I V ERSI TY Aug.2007二色补血草中2个金属硫蛋白基因的克隆及分析1)李红艳 杨传平 王玉成 王丙锋(林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室(东北林业大学),哈尔滨,150040) 摘 要 从二色补血草中分离出2个金属硫蛋白基因的c DNA全序列,分别命名为Lb M T1和Lb M T2。
Lb M T1全长为569bp,其中5′非编码区23bp,3′非编码区300bp,开放读码框(ORF)长246bp,编码含81个氨基酸的蛋白,相对分子质量为8070,等电点为4.7;Lb M T2全长为523bp,其中5′非编码区61bp,3′非编码区216bp,开放读码框长246bp,编码81个氨基酸,编码蛋白的相对分子质量为8000,等电点为5.0。
这2个基因编码的氨基酸都含有14个半胱氨酸Cys,分布在蛋白质的N端和C端,呈CC、CXC和CXXC形式排列。
疏水性分析表明:这2个蛋白都存在35~48个氨基酸之间较强的疏水区。
通过对多种植物的MT蛋白序列比对分析表明,金属硫蛋白家族在氨基酸数目上保守性差,但半胱氨酸残基(Cys)的位置和数目保守性达到100%,揭示了Cys对金属硫蛋白的功能十分重要。
这2个基因已经在Genbank上注册,Lb M T1基因的登录号为EF103574,Lb M T2基因的Genbank登录号为EF103575。
关键词 二色补血草;基因克隆;金属硫蛋白分类号 Q785C lon i n g and Sequence Ana lysis of Two M et a lloth i one i n Genes fro m L i m on ium bicolor/L i Hongyan,Yang Chuan2p ing,W ang Yucheng,W ang B ingfeng(School of Forestry,Northeast Forestry University,Harbin150040,P.R.Chi2na)//Journal of Northeast Forestry University.-2007,35(8).-1~5T wo metall othi onein(MT)genes were cl oned fr om L i m onium bicolor,na med Lb M T1and Lb M T2,res pectively.The Lb M T1gene is569bp in length,including23bp of5′untranslated regi on and300bp of3′untranslated regi on.It has anopen reading fra me(ORF)of246bp,encoding a p r otein of81a mino acid residues,with p r otein molecular weight of8070and is oelectric point of4.7.The Lb M T2gene is523bp in length,including61bp of5′untranslated regi on and216bp of3′untranslated regi on.The open reading fra me(ORF)of Lb M T2is246bp,encoding81a m ino acid residues.The mo2lecular weight of encoding p r otein is8000with the is oelectric point of5.0.Both Lb M T1and Lb M T2have14Cysresidues(cys)that have conserved sequence positi on at N ter m inal and C ter m inal of p r otein,ranking in the for m s of CXC andCXXC.Hydr ophobicity analysis showed that there was a high hydr ophobic regi on bet w een35and48residue positi ons.M ulti p le sequence align ment of M T p r oteins fr om s ome p lants revealed that the M T gene fa m ily shared l ow identities in se2quence,but were conserved in Cys residue positi ons and the nu mber of Cys residues,i m p lying that Cys residues may p layvery i m portant r oles in the functi on of MT p r oteins.These t w o genes were accep ted by Genbank,the accessi on nu mber ofLb M T1is EF103574and Lb M T2is EF103575.Key words L i m onium bicolor;Gene cl oning;Metall othi onein 金属硫蛋白(metall othi oneins,M T)是一类低分子量、富含金属和巯基的非酶蛋白,广泛存在于生物界。