RNAblood 超纯全血总RNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

血液总RNA 提取试剂盒产品组分组分R1081（50 次） 溶液 NL溶液RG60 ml 50µl 溶液 MP10 ml 溶液 MW12 ml DEPC 处理水10 ml RNase-free 纯化柱50 个 RNase-free 离心管50 个 说明书1 份需要自备的溶液● 氯仿● 无水乙醇注意事项-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- ● 第一次使用前应该在溶液RW 中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。

● 严防操作环境、使用的容器、耗材和试剂的RNase 污染。

操作过程中要勤换手套。

● 请严格遵照操作步骤操作。

实例--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------T1T2R1 R2 M上图中T1/T2是使用血液总RNA 提取试剂盒（R1081）以人类全血为材料提取的血液total RNA ，R1/R2分别是以T1/T2为模板的逆转录产物电泳图，产物大小为750bp ，M 为DS TM 5000。

操作步骤-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------1. 取200-500µl新鲜血液，加入1ml裂解液NL，再加入10µl硫基乙醇，混匀，冰浴5min；2. 加入200 μl 氯仿，轻微混匀，静置3min，12,000rpm离心10min；3. 此时，样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和无色的水相，RNA 主要在水相中，水相的体积约为所用溶液NL试剂的60%。

总RNA提取试剂盒(配合TRIZOL使用)Catalog No. TR205-50 (50次反应含DNaseI)TR205-200 (200次反应含DNaseI)TR205-50N (50次反应无DNaseI)TR205-200N (200次反应无DNaseI)Highlights∙适用于从细胞，组织，酵母菌，植物，细菌或生物液体（任何TRIZOL或类似产品可以裂解的样品）中提取到总RNA（含microRNA）。

∙无需进行相分离，无需使用氯仿，无需沉淀过程。

∙提取到的RNA不含DNA,并可应用于Q-PCR，高通量测序等实验。

∙整个过程仅需10分钟。

Ver.1.0.9产品组成:50200RNA洗涤液1 室温40 ml 160 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNA洗涤液2室温12 ml 48 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇DNase I -20℃ 300μl x 1管（5U/μl） 300μl x 4管（5U/μl）DNA消化液室温 4 ml 16 mlRNase-free H2O 室温 6 ml 30 ml2号柱室温50个200个收集管（2ml）室温50个200个特性:1.样品来源：TRIZOL等类似试剂裂解的样品。

2.样品范围：≥17核苷酸。

3.RNA纯度：高质量的RNA可应用于高通量测序等敏感的下游实验。

4.RNA结合量：每个柱子可最多结合50μg的RNA。

试剂制备RNA洗涤液在使用之前一定要配好，添加好乙醇后在试剂瓶上做好标记！！！添加10ml或40ml的无水乙醇（95-100%）到40ml或160ml的RNA洗涤液1中。

添加48ml100%的乙醇（或52 ml95%的乙醇）到12ml的RNA洗涤液2添加192ml100%的乙醇（或208 ml95%的乙醇）到48ml的RNA洗涤液2操作步骤:整个操作步骤是由2个步骤组成：（I）样品裂解匀浆（I I）样品纯化（I）样品裂解匀浆此步骤主要参考TRIZOL等类似裂解试剂说明书的裂解液用量，以下给出我公司提供的可完美替换TRIZOL的TRIcom试剂用量作为参考。

总RNA提取试剂盒说明书货号：R1200规格：50T/100T产品内容：试剂盒组成R1200-50R1200-100保存有效期裂解液50ml100ml2-8℃一年漂洗液15ml15ml×2RT一年洗柱液50ml50ml×2RT一年RNase free ddH2O15ml15ml×2RT一年RNase free吸附柱50个100个RT一年RNase free收集管(2ml)50个100个RT一年操作步骤：1.样品处理：a.植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。

b.动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。

c.贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml裂解液。

用取样器吹打混匀。

d.细胞悬液：离心收集细胞。

每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。

e.血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。

弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。

离心后沉淀加入1ml裂解液混匀。

2.将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。

3.向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。

4.2-8℃12000rpm离心10分钟。

RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。

5.吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃12,000rpm离心2min，弃废液。

6.第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃12000rpm离心2min，弃废液。

7.向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8℃12,000rpm离心2min，弃废液。

全血总RNA提取试剂盒(离心柱型)货号：KTSM2908■产品简介：本产品采用全新技术从全血和血浆中进行RNA提取，本产品在提取时添加了特殊组分，可大幅度提高RNA和硅基质膜的结合能力。

在RNA提取过程中，加入RNase-Free DNase I，可完全去除痕量DNA杂质，而RNase-Free DNase I和其他残留的物质会在随后的漂洗过程中去除，从而有效地保证了提取RNA的得率和纯度。

本产品在常温下1小时内即可完成操作，且不使用酚氯仿等有机试剂。

■产品内容：■储存条件：该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。

2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中孵育10 min，以溶解沉淀。

■注意事项（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项）：（1）自备试剂与耗材：β-巯基乙醇，无水乙醇，1.5 ml RNase-Free离心管。

（2）样品的储存和处理：RNA容易被降解，所以新鲜的血液样品应储存于-70℃，冻存的样品不能反复冻融以避免RNA的降解，样品也可以在匀浆后加入裂解液RL，储存于-70℃，冻存的样品可稳定储存数月。

（3）RNA Carrier：当处理血浆时，可使用试剂盒中提供的RNA Carrier，RNA Carrier的加入将提高RNA的得率，且不会影响后续实验。

（4）所有步骤在室温进行，为了尽量避免RNA的降解，操作越快越好。

（5）在使用前，请用RNase-Free ddH 2O配制乙醇溶液。

（6）操作前在RL中加入β-巯基乙醇至终浓度1%，最好现用现配。

■操作步骤：使用前请先在去蛋白液和漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶子上的标签。

（1）取100 μl全血或血浆，加入350 μl裂解液RL，涡旋振荡1 min后用匀浆器匀浆30 s。

（2）加入0.1倍体积的醋酸钠，振荡混匀。

总RNA纯化试剂盒产品说明书此款RNA纯化试剂盒提供了一种从培养的动物细胞、组织样品、血液、细菌、酵母、真菌、植物和病毒中快速提取和纯化总RNA的方法，。

该试剂盒可以纯化所有大小的RNA，从大的mRNA和核糖体RNA到小RNA（microRNA或miRNA）和小干涉RNA（siRNA）。

RNA优先从蛋白等的细胞组分中纯化出来，而不使用抑制的苯酚或者氯仿。

纯化的RNA是高度完整的，可以应用到一系列的下游应用试验中，包括实时PCR，Northern免疫印迹分析，RNase保护实验和引物延伸，以及表达芯片分析。

纯化技术纯化的基础是旋转柱色谱法，用特有的树脂作为分离介质。

RNA优先从其他细胞组分（如蛋白质）中分离出来，而不使用苯酚或者氯仿。

纯化步骤包括首先用合适的裂解液融解细胞或组织，然后裂解液中加入乙醇后上样到旋转柱中。

树脂结合RNA是基于离子的浓度，所以只有RNA结合到柱子上而所有剩余的蛋白和其他的污染物会在流动液中而被除去或者仍在树脂的顶部。

然后结合的RNA用试剂盒提供的洗涤液洗涤以除去所有残余的杂质，然后纯化的总RNA用抽提缓冲液洗涤。

纯化的RNA是高度完整的，可以用于一系列的下游实验分析。

说明优点•使用旋转柱提取，步骤快且简单•提取总RNA，从大的核糖体RNA（rRNA）到小（RNAmicroRNA或者miRNA)•不需要苯酚或氯仿作提取液•从多种种类来源样品中提取高质量的总RNA•可以提取和检测到的RNA组织样品可以小到单个动物细胞试剂盒成分储存条件和产品稳定性所有的溶液需在室温密闭保存。

所有的试剂在不开封条件下稳定保存１年。

预防措施和警告事项该试剂盒只为科研目的设计，不可用于人或者临床。

要确保有合适的实验服，在操作化学试剂时一次性的手套和护目镜会磨损。

需要更多信息，请参考适合的材料安全表（MSDSs）。

所有人和动物组织的问题是要考虑到潜在的感染。

当操作全血样品时，所有在使用国家的有关当局建议的预防措施都要执行。

全血总RNA提取试剂盒(离心柱型)货号：KTSM2908■ 产品简介：本产品适用于从血液中提取高品质总RNA。

本试剂盒配有独特的裂解体系，将RNA从组织中释放出来后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过去蛋白液和漂洗液将蛋白等杂质去除，最后由RNase-Free Water将RNA从硅基质膜上洗脱下来。

本产品提取RNA方便快捷，无需使用氯仿、苯酚等有毒有害化学物质，对操作人员及实验环境无毒害作用。

■主要成分：■保存条件：DNase I，10 × DNase I Buffer置于-20℃保存；其他溶液于室温（15-25℃)保存。

■自备试剂：无水乙醇，β-巯基乙醇。

■ 注意事项：1．第一次使用前请先在去蛋白液RD和漂洗液RW瓶中加入指定量无水乙醇，并做好标记。

2．裂解液RG在使用前请加入β-巯基乙醇至终浓度为1%，如1 ml裂解液RG加10 µl β-巯基乙醇。

加入β-巯基乙醇的裂解液RG 在4℃可保存1个月，如出现沉淀，请加热溶解后使用。

3．裂裂解液RG和去蛋白液RD中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。

若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4．人类的血液或体液可能有潜在的感染性，所以如果对人类的全血进行处理，请注意做好防护措施。

5．在白细胞裂解后，该说明书中的所有步骤需在室温（15-25℃）进行，操作速度越快越好。

6．本试剂盒不适用于冻存的全血。

■ 预防RNase污染：1．全程佩戴一次性手套，经常更换新手套。

皮肤经常带有细菌和霉菌，可能污染RNA的抽提并成为RNA酶的来源。

培养良好的微生物实验操作习惯预防微生物污染。

2．使用无RNA酶的非一次性的玻璃器皿或塑料器皿。

玻璃器皿可以在150℃的烘箱中烘烤4 h，塑料器皿可以在0.5 M NaOH中浸泡10 min，用水彻底漂洗干净后高压灭菌备用。

■ 操作步骤：1．向新鲜的抗凝全血样本中，加入5倍血液样本体积的1×红细胞裂解液（请于使用前用RNase-Free Water 将10×红细胞裂解液稀释10倍），轻轻涡旋或颠倒混匀。

总RNA的提取(试剂盒法、氯化锂法和蛋白酶－热酚法)所有RNA的提取过程中都有五个关键点，即1）样品细胞或组织的有效破碎；2）有效地使核蛋白复合体变性；3）对内源RNA酶的有效抑制；4）有效地将RNA从DNA和蛋白混合物中分离；5）对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去。

关键词：试剂盒；蛋白酶；总RNA提取；试剂盒法；氯化锂法；蛋白酶－热酚法；Total RNA Isolation完整RNA的提取和纯化，是进行RNA方面的研究工作，如Northern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。

所有RNA的提取过程中都有五个关键点，即1）样品细胞或组织的有效破碎；2）有效地使核蛋白复合体变性；3）对内源RNA酶的有效抑制；4）有效地将RNA从DNA和蛋白混合物中分离；5）对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去。

但其中最关键的是抑制RNA酶活性。

RNA的提取目前阶段主要可采用两种途径，1) 提取总核酸，再用氯化锂将RNA沉淀出来；2) 直接在酸性条件下抽提，酸性下DNA与蛋白质进入有机相而RNA留在水相。

第一种提取方法将导致小分子量RNA的丢失，目前该方法的使用频率已很低。

方法一: 总RNA的试剂盒快速提取一些公司推出的总RNA提取试剂盒，可以用来制备高质量的可用于建库的RNA。

该总RNA纯化系统采用两种著名的RNA酶抑制剂，异硫氰酸弧(GTC)和β-巯基乙醇，加上整个操作都在冰浴下进行，这样就能显著降低RNA的降解速率。

GTC和N-十二烷基肌氨酸钠的联合使用，将促使核蛋白复合体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。

而进一步从复合体中纯化RNA，则根据Chomc zynski和Sacchi的一步快速抽提法进行，采用酸性酚-氯仿混合液抽提。

低pH值的酚将使RNA进入水相，这样使其与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离。

水相中的RNA可用异丙醇沉淀浓缩。

rna提取试剂盒的提取流程及注意事项下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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一种快速提取全血RNA的试剂盒（博尔诚）在用血液标本进行基因表达研究时，需要及时把新鲜血液中有核细胞的RNA 提取出来。

全血还不能直接放到-80℃保存，即使在-80℃保存，全血中的RNA 也容易发生降解。

传统的提取新鲜全血RNA方法是把先把有核细胞从全血中分离出来，需要加白细胞分离液、离心等步骤，比较繁琐，在临床医院往往难以实施。

我们发现美国Biochain Inc.公司研发的“Whole blood RNA extraction kit”，能直接使用全血进行RNA的提取，提取的RNA质量很好，并且能只用200μl的全血即能提取1-2.5μg高质量的总RNA。

特别方便的是，在该试剂盒中有一种Lysis buffer的液体，当把200μl全血溶于600μl的Lysis buffer后，可以在4℃保存2天，-20℃下可达2个月，-80℃可长期保存。

极大方便了临床上对全血RNA的保存。

具体操作过程（从英文protocol中翻译）1．Wash Buffer 2 中加入28ml 100%乙醇，总体积至35ml；2．2ml管中加入200ul 抗凝全血，后加入600ul Lysis Buffer，充分混匀；3. 加入80ul Lysis Enhancer Solution，充分混匀15s；4．加入880ul Acidified Phenol:Chloroform，充分混匀30s，16000g 4℃离心10min5. 上层液相~600ul转入无RNA酶置于冰中的离心管，；6．加等体积100%乙醇，充分混匀15s；7. 将650ul混合液转入过滤柱中，10000g室温离心30s；8．倒掉过滤液，过滤柱重新置入收集管中；9. 过滤柱中加入剩余混合液，重复7和8操作；10．加入650ul Wash Buffer1，10000g室温离心30s；11. 倒掉过滤液，加入650ul Wash Buffer2，10000g室温离心30s；12. 倒掉过滤液，开盖16000g 室温离心1min；13．过滤柱转入新的无RNA酶收集管，过滤柱中加入50-100ul预孵育约40℃RNase Free Water，封盖孵育1min；16000g室温离心1min，洗脱RNA；14．得到高纯RNA，可-20℃短期存储，或-80℃长期存储，备用。

RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS（溶液均需用DEPC处理过的水配制）。

操作步骤：1. 匀浆处理a. 植物组织:以叶片RNA提取为例.取新鲜叶片在液氮中充分研磨或将叶片剪碎后直接在Trizol中研磨,研磨要迅速,最好不要超过1min.，大约100mg 叶片使用1 ml Trizol.b. 动物组织:以鼠肝脏RNA提取为例.取新鲜或-70℃冻存组织,每50-100mg组织加1ml Trizol,用匀浆仪进行匀浆处理.样品体积一般不要超过Trizol体积的10%.c. 单层培养细胞.直接在培养板中加入Trizol裂解细胞,每10cm2面积加1ml Trizol.用取样器吹打几次.注意:Trizol加量根据培养板面积决定,不是由细胞数决定.如果Trizol加量不足,可能导致提取的RNA中有DNA污染.d.细胞悬液:离心取细胞，每5-10×106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml Trizol。

加Trizol 前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。

一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪处理。

e.血液处理:直接取新鲜的血液,加入3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10min，10 000rpm 离心1min。

弃上清，收集白细胞沉淀。

每1ml血液收集的白细胞沉淀中加入1ml Trizol。

2. 将匀浆样品在15-30℃放置5mim，使得核酸蛋白复合物完全分离。

3. 可选步骤:4 ℃10 000rpm离心10min，取上清。

如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。

离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。

处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应除去。

取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。

4. 每使用1ml Trizol加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈震荡15s，室温放置3min。