生物参考区间建立与验证

三种统计方法建立空腹血清胰岛素参考区间及临床验证成　斐，陈永德，李延伟，孙　磊，朝浩鹏（中国中医科学院望京医院检验科，北京１００１０２）ＤＯＩ：１０．１１７４８／ｂｊｍｙ．ｉｓｓｎ．１００６－１７０３．２０２０．１１．００４收稿日期：２０２０ ０１ ２２；修回日期：２０２０ ０３ ０８基金项目：中国中医科学院望京医院院级课题基金（编号：ＷＪＹＹ２０１８ １３）通讯作者：朝浩鹏。

Ｅ ｍａｉｌ：ｃｈａｏｈａｏｐｅｎｇ＠１２６．ｃｏｍ摘要：目的　采用三种统计方法建立空腹血清胰岛素的生物参考区间并验证其临床应用效果。

方法　通过问卷调查及严格标准，选取２０１８年１０月至２０１９年２月在中国中医科学院望京医院进行体检的表观健康个体，采用ＲｏｃｈｅＣｏｂａｓ８０００免疫分析系统检测其空腹血清中胰岛素水平。

依据ＣＬＳＩＣ２８ Ａ３中的非参法、对数（ｌｏｇ）转换后非参数及参数法分别建立空腹血清胰岛素的参考区间。

选择初诊糖尿病个体用本研究建立的参考区间、试剂说明书参考区间和全国临床检验操作规程参考区间对其进行验证。

结果　共入选１２３例表观健康个体。

空腹血清胰岛素水平无性别或年龄差异。

直接和对数转换（ｌｏｇ）后非参数法得到参考区间为４．１１～１７．９８μＩＵ／ｍＬ；对数转换（ｌｏｇ）后参数法得到参考区间为３．９１～１８．５９μＩＵ／ｍＬ。

共入选３６例初诊的糖尿病患者，其中１型１０例，２型２６例。

非参法和ｌｏｇ转换后非参法、ｌｏｇ转换后参数法、试剂说明书和全国临床检验操作规程临床符合率（９５％可信区间）分别为５２．８％（３６．５％～６９．１％）、５２．８％（３６．５％～６９．１％）、３６．１％（２０．４％～５１．８％）和３６．１％（２０．４％～５１．８％），差异无统计学意义（Ｐ＝０．１６）。

结论　三种统计方法建立的空腹血清胰岛素参考区间基本一致，本研究建立的参考区间更有助于糖尿病患者的诊断与及时治疗。

关键词：ＣＬＳＩＣ２８ Ａ３；　空腹胰岛素；　参数法；　非参数法；　参考区间中图分类号：Ｒ３９２ ３３ 文献标识码：ＡＴｈｅＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆＦａｓｔｉｎｇＳｅｒｕｍＩｎｓｕｌｉｎＲｅｆｅｒｅｎｃｅＩｎｔｅｒｖａｌｂｙＴｈｒｅｅＳｔａｔｉｓｔｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓａｎｄＩｔｓＣｌｉｎｉｃａｌＶｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＣＨＥＮＧＦｅｉ，ＣＨＥＮＹｏｎｇｄｅ，ＬＩＹａｎｗｅｉ，ＳＵＮＬｅｉ，ＣＨＡＯＨａｏｐｅｎｇ（ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ＷａｎｇｊｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｈｉｎａａｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１０２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅｆａｓｔｉｎｇｓｅｒｕｍｉｎｓｕｌｉｎ（ＦＳＩ）ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｅｒｖａｌｓ（ＲＩ）ｕｓｉｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｔｏｖｅｒｉｆｙｉｔｓｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｖａｌｕｅｉｎｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅｓｔｕｄｙｓｕｂｊｅｃｔｓｆｏｒｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇＲＩｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｂａｓｅｄｏｎｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅｓａｎｄｓｔｒｉｃｔｃｒｉｔｅｒｉａｆｒｏｍｐｈｙｓｉｃａｌｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｃｅｎｔｅｒｏｆＷａｎｇｊｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅｆｒｏｍＯｃｔｏｂｅｒ，２０１８ｔｏＦｅｂｒｕａｒｙ，２０１９．ＦＳＩｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｕｓｉｎｇＲｏｃｈｅｃｏｂａｓ８０００．ＲＩｓｗｅｒｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｆｏｌｌｏｗｉｎｇｔｈｅＥＰ２８ Ａ３ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ．ＰａｔｉｅｎｔｓｗｈｏｗｅｒｅｄｉａｇｎｏｓｅｄａｓＤＭｗｅｒｅｅｎｒｏｌｌｅｄｔｏｖｅｒｉｆｙｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｖａｌｕｅｏｆＦＳＩＲＩｓｆｒｏｍｏｕｒｓｔｕｄｙ，ａｌｓｏｔｈｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｅｒｖａｌｓｂａｓｅｄｏｎｒｅａｇｅｎｔｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＣｌｉｎｉｃａｌＴｅｓｔＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＯｐｅｒａｔｉｏｎ．ＲｅｓｕｌｔｓＡｔｏｔａｌｏｆ１２３ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｎｄｕｓｅｄｔｏｃａｌｃｕｌａｔｅｔｈｅｒｅｌｅｖａｎｔＲＩｓ．Ｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｍｏｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｇｅｓａｎｄｂｅｔｗｅｅｎｓｅｘｅｓ．ＴｈｅＲＩｓｆｏｒＦＳＩｗｅｒｅ４．１１ １７．９８μＩＵ／ｍＬｗｈｅｎｎｏｎｐａｒａｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅｕｓｅｄｗｈｅｔｈｅｒｌｏｇｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｒｎｏｔ．ＴｈｅＲＩｓｆｏｒＦＳＩｗｅｒｅ３．９１ １８．５９μＩＵ／ｍＬｗｈｅｎｐａｒａｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄｓ（ｌｏｇｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ）ｗｅｒｅｕｓｅｄ．Ｃｌｉｎｉｃａｌｃｏｎｃｏｒｄａｎｃｅｒａｔｅｓｗｅｒｅ５２．８％（３６．５％ ６９．１％），５２．８％（３６．５％ ６９．１％），３６．１％（２０．４％ ５１．８％）ａｎｄ３６．１％（２０．４％ ５１．８％），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｆｏｒｎｏｎｐａｒａｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄｓｗｈｅｔｈｅｒｌｏｇｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｒｎｏｔ，ａｎｄｐａｒａｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄｓ，７５８１标记免疫分析与临床　２０２０年１１月第２７卷第１１期ｕｓｉｎｇｒｅａｇｅｎｔｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＣｌｉｎｉｃａｌＴｅｓｔＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＯｐｅｒａｔｉｏｎｉｎ３６ｐａｔｉｅｎｔｓ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅＲＩｓａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｃｏｎｃｏｒｄａｎｃｅｒａｔｅｓｆｏｒＦＳＩａｒｅｓｉｍｉｌａｒｗｈｅｎ３ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｍｅｔｈｏｄａｒｅｕｓｅｄ．ＴｈｅＦＳＩＲＩｄｅｖｅｌｏｐｅｄｆｒｏｍｏｕｒｓｔｕｄｙｉｓｍｏｒｅｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＤＭｐａｔｉｅｎｔｓｔｉｍｅｌｙ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＣＬＳＩＣ２８ Ａ３；　Ｆａｓｔｉｎｇｓｅｒｕｍｉｎｓｕｌｉｎ；　Ｐａｒａｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄ；　Ｎｏｎｐａｒａｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄ；　Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｅｒｖａｌ 糖尿病是一种因胰岛素分泌不足或胰岛素作用低下而引起的高血糖为特征的代谢紊乱疾病。

临床实验室如何确定和建立生物参考区间（核准指南――第二版）1内容简介此指南是专为指导临床诊断实验室、诊断仪器试剂制造商和临床检验工作者在定量实验检测中确定参考值和参考区间而制定的。

它包括在临床医学实验室中建立可靠的参考区间所用的方法步骤和推荐程序。

而该推荐程序的主要内容是如何用最简便和最务实的方法去建立一个能保证足够可靠性和实用性的参考区3种方法。

无论你的诊断实验室规模大小，无论你是何种试剂生产商，倘若你想通过一项参考值研究来建立参考区间，你就必须遵循此文献提供的特定的指导方针和程序。

该文献包括了建立足够的和适当的决定参考区间的最低标准。

如果实验室规模太小且缺乏必要的资源去执行这一标准，按照稍后在文件中讨论的该议题程序，那么唯一可接受的替代方法就是，采用相同的或可比较的分析系统，对已经合适地确定的参考区间藉着调用的方法进行参考区间的验证后使用。

本文献从对某些术语定义的解释着手，因为术语对参考值的讨论是极其重要的。

所采用的术语均为国际临床化学家联合会（IFCC）的EPTRV分会提出建议，经过仔细探究后旨在形成更有系统和更明确的理论阐述。

此指南内容包括如何建立参考区间并且叙述了种种要素的特性，诸如用来实验的参考对象的选择程序，考虑分析前和分析中影响因素的重要性，估计有效参考区间的计算方法和要求，参考值的调用等等涉及这一议题的问题均将讨论到。

有关参考区间的描述和应用问题也有涉及，最后有一简单章节谈到如何检测一批重要的但并非主要的参考值话题。

2国际单位的使用(SI单位)虽然国家临床实验标准委员会（NCCLS）通常认可使用国际单位（SI），但这些不能总是与国际理位一致。

分子的)浓度（3分会及●●●●注意:参●样品组的分布和使用适当的统计方法来评估。

●参考限,n-：一个以描述为目的的并取自参考分布范围的值。

注意:常见的做法是确定一个参考限以便描述参考值级数。

假如所有参考值均大于或等于该值，它就是参考下限；而当所有参考值均小于或等于该值时，它就是参考上限。

第一章免疫室定量项目方法性能验证标准操作程序1 目的2对免疫室检测项目进行性能验证, 以保证所采用的相关试剂盒的分析性能能满足临床检测的要求和实验室检测结果的准确性。

3范围适应于免疫室开展的所有检测项目。

4 操作程序4.1 验证前准备仪器设备的准备:4.1.1 根据免疫室仪器设备的维护保养程序, 验证前, 实验人员或请仪器厂家工程师对验证过程中需要用到的仪器设备进行全面的维护保养, 以确保所涉及的仪器设备在最佳运行状态。

4.1.2 试剂的准备4.1.2.1 试剂盒的准备: 验证前, 确保足够用于验证的同批号试剂盒, 如可能, 可以再适当准备一些另一批号的试剂。

4.2 室内质控品的准备: 按照《免疫室定量项目室内质控管理程序》规定的室内质控品购买和制备方法进行准备。

4.3 免疫室定量项目的验证方法4.3.1 拟验证参数的确定4.3.2 根据试剂盒说明书或行业内（如CLIA´88）要求制定拟验证的性能参数。

免疫室定量项目需要验证的参数包括: 精密度（批内、批间精密度）、正确度、线性范围、临床可报告范围、生物参考区间、干扰、不同方法和仪器间的比对等。

要求检测过程中采取质量控制措施, 尽可能保证检测系统处于一个稳定状态。

4.3.3 批内精密度实验4.3.3.1 标本来源: 浓度分别处于正常和病理水平的混合的新鲜临床标本。

步骤：按照临床标本相同的检测方法, 同批次内检测相同的20份混合的新鲜临床标本。

记录结果并计算均值、标准差和批内变异系数CV（%）：表1: 批内精密度检测结果记录4.3.4 批间精密度实验4.3.4.1 标本来源: 浓度分别处于正常和病理水平的室内质控标本。

步骤：按照临床标本相同的检测方法, 将室内质控标本连续检测20天。

记录结果, 计算均值、标准差和批间精密度CV（%）：表2: 批间精密度检测结果记录表4.3.5 正确度验证实验4.3.6 免疫室对参加卫生部临检中心室间质评涵盖的项目进行正确度验证, 以卫生部临床检验中心室间质评结果为依据, 成绩在80%以上者即为验证通过。

西安地区健康孕妇血浆D-二聚体参考区间的建立及验证妊娠期妇女，由于体内促凝因子水平增高，抗凝物浓度降低等，血液处于高凝状态。

这属于正常生理过程，有利于产后机体恢复[1]O 既往报道，随着孕周增加，D-二聚体浓度会逐渐升高，其他凝血指标如凝血酶原时间、活化部分凝血酶原时间及凝血酶时间等变化不明显。

另一方面，D-二聚体(D-Dimer,DD)作为交联纤维蛋白的降解产物，是反映体内血栓形成和高凝状态的有效指标。

孕期出现多种并发症和合并症时，如妊娠高血压综合征、早产等情况时，D-二聚体浓度也会升高，是评价凝血异常的重要辅助手段。

因此,如何区分不同孕周期正常生理状态与疾病状态的D-二聚体浓度水平，是临床迫切希望解决的问题。

既往我国个别地区曾报道不同孕周D-二聚体参考范围，但是不同地区、人群参考范围可能存在差异。

而陕西地区尚缺乏相关研究。

我院作为西安地区三级甲等妇女儿童专科医院，有必要建立适用于西安地区的孕妇D-二聚体生物参考区间。

对象与方法一、对象1.分组：2020年12月至2022年3月，招募西北妇女儿童医院常规产检的1236例孕妇为研究对象，通过填写调查问卷的方式获取相关临床信息。

纳入标准包括：按照C1.S1.EP28-A3c[2]关于参考区间的定义、建立及验证指南要求，纳入各期妇女至少120例，年龄＞18岁且依从性较好，单胎。

排除标准包括：有不良孕产史（包括曾经有过自然流产、免疫性流产、稽留流产、胎停、死胎、胎儿畸形、胎儿发育不良）、正在服用可能影响纤溶系统或者凝血功能的药物、有凝血方面病史或家族史、患有慢性疾病（包括肾病、心血管疾病）、感染类疾病（包括乙肝、丙肝、艾滋、梅毒）或妊娠期合并症（包括妊娠期糖尿病、妊高症）。

根据文献[3],将1236例健康孕妇孕周分成5组，分别是：W13周，253例；13+1~20周,243例;20+1~27周,241例；27+1~35周,249例；235+1周，250例。

血细胞参数个性化参考区间的建立及验证岳波;刘曼娇;唐大海;贺嘉蕾;蒋梦洁;韦晓强;李丹杰;张尚珍【摘要】Objective To establish and verify the personalized reference interval of blood cells.Methods The results of blood cells from 2 089 health subjects in 2014,2015 and 2016 were collected.The ratio of the later results to the previous results was defined as the fluctuation (λ).The ratio (λ1) of the results of 2015 to the results of 2014 was calculated and λ1 was analyzed statistically to establish the fluctuation reference interval (CIλ).The ratio (λ2) of the results of 2016 to the results of 2015 was calculated.λ2 was used to verify λ2.The personalized reference interval (CIp) was established by multiplying each result of 2015 and CIλ.CIp was verified by results of 2016.The ratio of the upper and lower limits of CIp was calculated.The ratio of the upper and lower limits of the reference interval (WS/T 405) was calculated.Results The values of CIλ were as follows:WBC (0.66 to1.53),L(0.67 to 1.51),M (0.50 to2.00),N(0.56 to 1.78),E(0.4 to 2.51),PLT(0.76 to 1.32),RBC(0.92 to 1.12),Hb(0.92 to 1.11),Hct(0.91 to 1.12),MCV(0.95 to 1.07),MCH(0.95 to 1.05)and MCHC(0.94 to 1.06).The validation tests of CIλ and CIp showed that both CIλ and CIp were suitable for this pared with the reference interval of professional criteria,the ratio of the upper and lower limits of the CIp was smaller than that of traditional criteria.Conclusion CIp for this laboratory was established and pared with traditional criteria,CIp should be more personalized and highly sensitive.%目的建立血细胞参数个性化参考区间并验证.方法随机选取2014、2015、2016连续3年各项检查结果均正常的体检健康者,共2 089例,收集血常规结果.将体检者同一指标的后一次检测结果与前一次的比值定义为波动性(λ).计算2015年结果与2014年的比值(λ1),对λ1进行统计学分析并建立波动性参考区间(CIλ);计算2016年结果与2015年的比值(λ2),用λ2对CIλ验证.将各体检者2015年血常规结果分别与CIλ的上、下限相乘,得出各体检者的个性化参考区间(CIp),用2016年的血常规结果对CIp验证;分别计算CIp和行业标准参考区间的上、下限比值.结果CIλ:白细胞计数(0.66 ～1.53)、淋巴细胞绝对值(0.67 ～1.51)、单核细胞绝对值(0.50 ～2.00)、中性粒细胞绝对值(0.56 ～1.78)、嗜酸性粒细胞绝对值(0.4 ～2.51)、血小板计数(0.76 ～1.32)、红细胞计数(0.92 ～1.12)、血红蛋白(0.92～1.11)、红细胞压积(0.91 ～1.12)、平均红细胞体积(0.95 ～1.07)、平均红细胞血红蛋白含量(0.95 ～ 1.05)、平均红细胞血红蛋白浓度(0.94 ～1.06);CIλ的验证试验表明CIλ适合该实验室;CIp的验证试验表明CIp 适合该实验室;与行业标准参考区间相比,CIp的上、下限比值更小.结论建立并验证了CIp;CIp较传统参考区间更敏感、个性化.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2017(035)002【总页数】4页(P107-110)【关键词】个性化医疗;血细胞;参考区间;波动性【作者】岳波;刘曼娇;唐大海;贺嘉蕾;蒋梦洁;韦晓强;李丹杰;张尚珍【作者单位】解放军第四一一医院检验科,上海200081;解放军第四一一医院检验科,上海200081;解放军第四一一医院检验科,上海200081;解放军第四一一医院检验科,上海200081;解放军第四一一医院检验科,上海200081;解放军第四一一医院检验科,上海200081;解放军第四一一医院检验科,上海200081;解放军第四一一医院检验科,上海200081【正文语种】中文【中图分类】R4462015年美国启动“精准医学计划”，引发各国密切关注和迅速跟进。

生物参考区间和临床决定值评审程序1目的规范各检验项目生物参考区间和临床决定值的评审。

2范围本程序适用于检验科检验项目生物参考区间和临床决定值的评审。

3职责3.1 各专业组组长带领本组人员负责评审本组检验项目的生物参考区间；3.2 检验科主任负责组织本检验科人员与临床医生共同进行评审工作；3.3 技术负责人批准评审后的生物参考区间。

4 定义和术语4.1 参考个体（reference individual）根据明确规定的选择(入组)标准，选择出参加实验的个体，通过检验可以得到相应的参考值。

通常情况下，“健康人”的标准是难以制定的，但可以制定不健康因素的排除标准。

4.2 参考人群(reference populations) 是参考个体所代表的群体，为数量未知的假设实体，可以只有一个成员(为自身或其他人做参考)。

4.3 参考标本组(reference sample group) 指选出代表参考人群的、适当数量的参考个体。

统计意义上，一定数量的参考个体是参考人群中的一个抽样组。

参考区间的建立过程是对参考标本组的具体研究。

4.4 参考值(reference value) 是对参考个体的某一特定被测量进行检测而得到的值。

对一个参考个体进行某项目检测得到的值为该个体的参考值，从参考标本组可以得到一组参考值。

参考值反应在健康状态下，人的解剖、生理和生化等机能指标数据的波动状态。

4.5 参考分布(reference distribution) 是指一组参考值的分布状态。

4.6 参考限(reference limit) 是从参考分布得到的界限值，用于描述部分参考值的位置，如小于或等于上限、大于或等于下限。

将参考值由小到大排列，对大多数分析物，可以参考值分布的2.5％为低限，以97.5％为高限。

当只有单侧参考限具临床意义时，可以确定5％或95％为参考限。

4.7 参考区间(reference interval) 是在上、下参考限之间的参考值分布范围。