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附件5保健食品中9种脂溶性维生素的测定BJS 2017171范围本方法规定了营养素补充剂类保健食品中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素D3、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K1、维生素K2、β-胡萝卜素含量的液相色谱-串联质谱测定方法。
本方法适用于营养素补充剂类保健食品中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素D3、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K1、维生素K2、β-胡萝卜素含量的测定。
2原理试样经混合溶液（异丙醇：二氯甲烷：甲醇=10:10:80，v:v:v）提取后，采用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。
3试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1甲醇：质谱级。
3.1.2乙腈：质谱级。
3.1.3异丙醇：色谱纯。
3.1.4丙酮。
3.1.5二氯甲烷。
3.1.6提取溶液（异丙醇：二氯甲烷：甲醇=10:10:80，v:v:v）：取异丙醇50mL、二氯甲烷50mL，用甲醇稀释至500 mL，混匀。
3.1.7 0.1%甲酸水溶液：取甲酸1 mL用水稀释至1 000 mL，用滤膜（3.4）过滤后备用。
3.1.8 0.1%甲酸甲醇溶液：取甲酸1 mL用甲醇稀释至1000mL，用滤膜（3.4）过滤后备用。
3.2标准品维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素D3、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K1、维生素K2、β-胡萝卜素标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1，纯度≥98%。
3.3标准溶液配制3.3.1标准储备液（100μg/mL）—41 —3.3.1.1维生素K1标准储备液：称取0.01 g（精确至0.000 1 g）的维生素K1标准品（3.2），加入5mL丙酮（3.1.4）溶解，用甲醇转移并定容于100 mL棕色容量瓶中。
3.3.1.2 β-胡萝卜素标准储备液：称取β-胡萝卜素标准品（3.2）0.01 g（精确至0.000 1 g），用二氯甲烷（3.1.5）溶解，转移并定容至100 mL棕色容量瓶中。
总局关于发布保健食品中75种非法添加化学药
物的检测
【发布单位】国家食品药品监督管理总局
【发布文号】2017年第138号
【发布日期】2017-11-17
【生效日期】
【效力】2017-11-17
【备注】
按照《食品补充检验方法工作规定》有关规定，《保健食品中75种非法添加化学药物的检测》《畜肉中阿托品、山莨菪碱、东莨菪碱、普鲁卡因和利多卡因的测定》《食用油脂中脂肪酸的综合检测法》3项食品补充检验方法已经国家食品药品监督管理总局批准，现予发布。
特此公告。
附件：1.保健食品中75种非法添加化学药物的检测（BJS201710）
2.畜肉中阿托品、山莨菪碱、东莨菪碱、普鲁卡因和利多卡因的测定（BJS201711）
3.食用油脂中脂肪酸的综合检测法（BJS201712）
食品药品监管总局
2017年11月17日
附件
2017年第138号公告附件1.doc 2017年第138号公告附件2.docx 2017年第138号公告附件3.doc。
附件4保健食品中9种水溶性维生素的测定BJS 2017161范围本方法规定了保健食品中维生素B1、维生素B2、泛酸、维生素B6、生物素、叶酸、维生素B12、烟酸、烟酰胺含量的液相色谱-串联质谱测定方法。
本方法适用于营养素补充剂类保健食品中维生素B1、维生素B2、泛酸、维生素B6、生物素、叶酸、维生素B12、烟酸、烟酰胺含量的测定。
2原理试样经水提取后，采用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。
3试剂和材料注：除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1甲醇：质谱级。
3.1.2甲酸：质谱级。
3.1.3氨水：含量26%。
3.1.4冰醋酸。
3.1.5 浓盐酸。
3.1.6氨水（1+5）：量取100 mL 氨水（3.1.3）缓慢倒入500 mL 水中，混匀。
3.1.7 盐酸（0.01 mol/L）：吸取9 mL 浓盐酸（3.1.5），溶于1000 mL 水中。
吸取该溶液50 mL，用水稀释并定容至500 mL。
3.1.8 0.1%甲酸水溶液：取甲酸1 mL用水稀释至1 000 mL，用滤膜（3.4）过滤后备用。
3.1.9 0.1%甲酸甲醇溶液：取甲酸1 mL用甲醇稀释至1000mL，用滤膜（3.4）过滤后备用。
3.2标准品维生素B1（硫胺素盐酸盐）、维生素B2、泛酸（泛酸钙）、维生素B6（吡哆醇）、生物素、叶酸、维生素B12、烟酸、烟酰胺标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1，纯度≥98%。
3.3标准溶液配制3.3.1标准储备液（1 mg/mL）3.3.1.1维生素B1标准储备液：称取维生素B1标准品（3.2）0.1 g（精确至0.000 1 g），用0.01 mol/L 盐酸（3.1.7）溶解并定容于100 mL棕色容量瓶中。
3.3.1.2维生素B2、生物素、叶酸标准储备液：分别称取生物素、叶酸标准品（3.2）0.1 g（精确至0.000 1 g），加入30 mL氨水（3.1.6）溶解，甲酸调节pH值至7.0后，用水转移并定容至100 mL棕色容量瓶中。
第十二章 食品中维生素的测定【教学目标】：1.掌握维生素的概念，各种维生素的性质及生理功能和相关知识；2.了解各类维生素的检测方法，熟练地掌握分光光度计的操作技能。
维生素是人体必需的一类有机营养素。
它们的化学组成相互之间差异很大，但对于其他营养素在体内的正常代谢都起着不可缺少的催化作用。
维生素一般不能在体内合成，而必须从食物中摄取。
根据其溶解性，习惯上将维生素分为两大类：一类为脂溶性维生素，主要包括维生素A 、维生素D 和维生素E ：一类为水溶性维生素，主要包括B 族维生素和维生素C （即抗坏血酸）。
一、脂溶性维生素的标准测定方法(一)胡萝卜素的纸层析法（GB12389-90）本方法适用于植物性食物和含有植物性食物的混合食物中胡萝卜素的测定，其最小检出限为0.11μL 。
1.原理以丙酮和石油醚提取食物中的胡萝卜素及其他植物色素；以石油醚为展开剂进行纸层析，胡萝卜素极性最小，移动速度最快，从而与其他色素分离；剪下含胡萝卜素的区带、洗脱后于450nm 波长下定量测定。
2、试剂（1）石油醚（沸程30~60℃）：同时是展开剂。
（2）丙酮：分析纯。
（3）丙酮＋石油醚（3:7）(v/v)。
（4）无水硫酸钠：分析纯。
（5）5% 硫酸钠溶液。
（6）1：1 氢氧化钾溶液：取50g 氢氧化钾，溶于50mL 水。
（7）无水乙醇：需经脱醛处理。
（8）β-胡萝卜素标准溶液：取5mg β-胡萝卜素标准品，溶于10ml 三氯甲烷中，浓度约为500μg/mL,准确测其浓度。
取标准溶液10.0μL ，加正已烷3.00ml ，混匀，测吸光值，比色杯厚度1cm ，以正已烷为空白，入射光波长450nm ，平行测定三分，取均值。
计算分式：)213.( (01).001.3100011-⨯⨯=E A X 式中：1X －胡萝卜素标准溶液浓度，mg/mL; A －吸光值；E －β-胡萝卜素在正已烷溶液中，入射光波长450nm ，比色杯厚度为1cm ，溶液浓度为1μg/ml 的吸光系数，为0.2638；10001－将μg/ml 换算成mg/ml; 01.001.3－测定过程中稀释倍数的换算； （1） β-胡萝卜素标准使用液；将已标定的标准液用石油醚准确稀释后，每毫升溶液相当50μg.避光保存于冰箱中。
食物中的维生素含量测定实验维生素是维持人体正常生理功能的重要有机物质，缺乏维生素会引发各种健康问题。
因此，准确地测定食物中的维生素含量对于我们了解其营养价值以及合理膳食非常重要。
本篇文章将介绍一种常用的方法——高效液相色谱法（HPLC）来测定食物中的维生素含量。
一、实验介绍在开始实验之前，我们需要准备一些实验器材和试剂。
具体列表如下：1. 高效液相色谱仪：用于分离和检测维生素。
2. 四氯化钛（TiCl4）：用于提取样品中的维生素。
3. 醋酸乙酯：用于提取样品中的维生素。
4. 维生素标准品：用于制备浓度不同的标准曲线。
5. 色谱柱：用于分离维生素。
6. 注射器：用于装载样品和标准品。
二、实验步骤1. 标准曲线的制备a. 准备一系列不同浓度的维生素标准品溶液。
b. 将每种浓度的标准品溶液以等体积的方式进样到高效液相色谱仪中。
c. 记录每种维生素峰的面积，并绘制标准曲线。
2. 样品的制备a. 将待测食物样品称取一定量。
b. 使用四氯化钛和醋酸乙酯提取样品中的维生素。
c. 过滤提取的液体并将其转移到注射器中。
3. 样品的测试a. 将样品注入高效液相色谱仪中。
b. 使用标准曲线计算样品中各种维生素的含量。
三、结果分析通过实验测定，我们可以得到不同食物样品中各种维生素的含量。
根据这些结果，我们可以评估食物的营养价值，并根据个人需求合理安排膳食。
例如，如果某种食物富含维生素C，那么可以适当增加摄入量以满足身体对维生素C的需求。
此外，通过对不同食物维生素含量的测定，我们也可以比较不同食物之间的营养差异，从而选择更加丰富多样化的膳食，确保获得全面的营养。
四、实验注意事项在进行食物中维生素含量测定实验时，我们需要注意以下几点：1. 确保所有实验器材和试剂的洁净，并严格按照实验步骤和使用说明进行操作。
2. 仔细称取样品和标准品，以确保实验结果的准确性和可靠性。
3. 避免样品的长时间暴露于光线和高温环境中，以防止维生素的降解。
附件5
保健食品中9种脂溶性维生素的测定
BJS 201717
1范围
本方法规定了营养素补充剂类保健食品中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素D3、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K1、维生素K2、β-胡萝卜素含量的液相色谱-串联质谱测定方法。
本方法适用于营养素补充剂类保健食品中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素D3、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K1、维生素K2、β-胡萝卜素含量的测定。
2原理
试样经混合溶液（异丙醇：二氯甲烷：甲醇=10:10:80，v:v:v）提取后，采用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。
3试剂和材料
除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1甲醇：质谱级。
3.1.2乙腈：质谱级。
3.1.3异丙醇：色谱纯。
3.1.4丙酮。
3.1.5二氯甲烷。
3.1.6提取溶液（异丙醇：二氯甲烷：甲醇=10:10:80，v:v:v）：取异丙醇50mL、二氯甲烷50mL，用甲醇稀释至500 mL，混匀。
3.1.7 0.1%甲酸水溶液：取甲酸1 mL用水稀释至1 000 mL，用滤膜（3.4）过滤后备用。
3.1.8 0.1%甲酸甲醇溶液：取甲酸1 mL用甲醇稀释至1000mL，用滤膜（3.4）过滤后备用。
3.2标准品
维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素D3、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K1、维生素K2、β-胡萝卜素标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1，纯度≥98%。
3.3标准溶液配制
3.3.1标准储备液（100μg/mL）
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3.3.1.1维生素K1标准储备液：称取0.01 g（精确至0.000 1 g）的维生素K1标准品（3.2），加入5mL丙酮（3.1.4）溶解，用甲醇转移并定容于100 mL棕色容量瓶中。
3.3.1.2 β-胡萝卜素标准储备液：称取β-胡萝卜素标准品（3.2）0.01 g（精确至0.000 1 g），用二氯甲烷（3.1.5）溶解，转移并定容至100 mL棕色容量瓶中。
3.3.1.3维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素D3、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K2标准储备溶液：分别称取0.01 g（精确至0.000 1 g）的维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素D3、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K2标准品（3.2），用甲醇溶解，转移并定容至100 mL棕色容量瓶中。
3.3.2 空白基质溶液的配制
取空白试样按照试样制备方法(5.2)操作。
3.3.3基质标准工作液配制
准确吸取标准储备液（3.3.1）适量，用空白基质溶液稀释。
此溶液中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2含量为0.01 μg/mL、0.02 μg/mL、0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.5 μg/mL，维生素D3含量为0.02μg/mL、0.05 μg/mL、0.1μg/mL、0.5 μg/mL、1 μg/mL，维生素E、维生素E醋酸酯含量为0.1μg/mL、0.5 μg/mL、1 μg/mL、5μg/mL、10μg/mL，维生素K1、维生素K2含量为0.005 μg/mL、0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.25 μg/mL，β-胡萝卜素含量为0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.5 μg/mL、1 μg/mL、2.5 μg/mL，临用时配制。
注：操作过程应在避光环境下进行。
3.4微孔滤膜：0.22 µm，有机相。
4仪器和设备
4.1 高效液相色谱-串联质谱仪：配有大气压化学离子源。
4.2 超声波清洗器。
4.3分析天平：感量分别为0.01 g和0.000 1 g。
5分析步骤
5.1 试样制备
将20粒片剂或胶囊试样粉碎后混匀，液体试样混合均匀。
5.2 试样提取
准确称取混合均匀的试样2g（精确至0.01 g）于50 mL棕色容量瓶中，加入40 mL提取溶液（3.1.6），超声20 min，冷却至室温，用提取溶液（3.1.6）定容至刻度，摇匀，上清液经微孔滤膜（3.4）过滤，供液相色谱-串联质谱仪测定。
注：操作过程应在避光环境下进行。
5.3 仪器参考条件
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5.3.1 色谱条件
a）色谱柱：C18柱，1.7 μm，100 mm×2.1 mm（内径），或性能相当者。
b）流动相：A 为0.1%甲酸水溶液（3.1.7），B为0.1%甲酸甲醇溶液（3.1.8），洗脱梯度见表1。
c）流速：0.5 mL/min。
d）柱温：35℃。
e）进样量：5 μL。
表1 洗脱梯度
5.3.2 质谱条件
a）电离方式：大气压化学正离子模式。
b）检测方式：多反应检测（MRM）。
c）雾化气压力：45psi。
d）离子喷雾电压：4500V。
e）干燥气温度：200 ℃（测定维生素D2）、350 ℃（测定其余8种维生素）。
f）干燥气流速：6 L/min。
g）定性离子对、定量离子、碎裂电压和碰撞能量见表2。
表2 脂溶性维生素的定性离子对、定量离子、碎裂电压和碰撞能量
5.4 定性测定
按照上述条件测定试样和混合标准工作液，如果试样中的质量色谱峰保留时间与混合标准工作液中的某种组分一致（变化范围在±2.5%之内）；试样中定性离子对的相对丰度与浓度相当混合标准工作液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表3规定的范围，则可判定为试样中存在该组分。
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— 44 —
表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
5.5 定量测定 5.5.1 标准曲线的制作
将基质标准工作液（3.3.3）分别按仪器参考条件（5.3）进行测定，得到相应的标准溶液的色谱峰面积。
以混合标准工作液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
5.5.2 试样溶液的测定
将试样溶液（5.2）按仪器参考条件（5.3）进行测定，得到相应的样品溶液的色谱峰面积。
根据标准曲线得到待测液中组分的浓度，平行测定次数不少于两次；试样待测液响应值若低于标准曲线线性范围，应取5.2中试样提取续滤液进行分析；试样待测液响应值若超出标准曲线线性范围，应用提取溶液（3.1.6）稀释后进行分析。
标准品液相色谱图参见附录B 的图B.1-B.9。
6结果计算
结果按式（1）计算：
m
V c X 100
⨯⨯=
(1)
式中：
X —试样中某种组分的含量，单位为微克每百克（μg/100g ）；
c —由标准曲线得出的样液中某种组分的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL ）； V —试样溶液定容体积，单位为毫升（mL ）； m —试样称取的质量，单位为克（g ）；
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。
7精密度
在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
8其他
当称样量为2.00 g ，定容体积为50 mL 时，维生素A 、维生素A 醋酸酯、维生素D 2检出限为8μg/100g ，定量限为25μg/100g ；维生素D 3、维生素E 检出限为15μg/100g ，定量限为50μg/100g ；维生素E 醋酸酯、维生素K 1、维生素K 2检出限为4μg/100g ，定量限为12.5μg/100g ；β-胡萝卜素检出限为40μg/100g ，定量限为125μg/100g 。
附录A
脂溶性维生素标准品信息
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附录B
脂溶性维生素标准品色谱图
图B.1维生素A色谱图图B.2维生素A醋酸酯色谱图
图B.3维生素D2色谱图图B.4 维生素D3色谱图—46 —
图B.5 维生素E色谱图图B.6 维生素E醋酸酯色谱图
图B.7 维生素K1色谱图图B.8 维生素K2色谱图
图B.9 β-胡萝卜素色谱图
本方法负责起草单位：中国食品药品检定研究院。
验证单位：山东省食品药品检验研究院、武汉市食品化妆品检验所、天津市药品检验所、中国医学科学院药物研究所、厦门市药品检验研究院。
主要起草人：宁霄、金绍明、曹进、王聪、孔璇、贾艾玲
—47 —。
