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最新DNA重组技术的基本工具说课课件

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DNA重组技术的基本工具(共32张PPT)

DNA重组技术的基本工具(共32张PPT)
基础理论和技术发展催生了基因工程
E·coliDNA连接酶
3)1977年DNA合成和测序技术的发明
E·coli DNA连接酶
或T4DNA连接酶
通过长期的进化，细菌中含有某种限制酶，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到识别序列的
碱基上，使限制酶不能将其切开。
这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。
——特异性
（1）识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列
（2）在特定的位点切割DNA分子。
例如：大肠杆菌的EcoRⅠ限制酶只能识别GAATTC序
列，并在G和A之间切开。
“分子手术刀”---限制性核酸内切酶(限制酶)
• 限制酶的识别序列：
能被限制性内切酶特 大异多性数识限别制的酶切的割识部别位序都列具由
操作。
实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要 进行人工改造后才能用于基因工程操作。
思考与探究 P7
4、DNA连接酶有连接单链DNA的本领吗？
迄今为止，所发现的DNA连接酶都不具 有连接单链DNA的能力，至于原因，现在还 不清楚，也许将来会发现可以连接单链DNA 的酶。
通过长期的进化，细菌中含有某种限制酶，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到识别序列的
碱基上，使限制酶不能将其切开。
Haemophilus influenzae d )中先
后分离到3种限制酶，则分别命名为:
HindⅠ、HindⅡ、 HindⅢ
一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀”
大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成 少数的识别序列由4、5或8个核苷酸组成

课件17：1.1 DNA重组技术的基本工具

课件17：1.1 DNA重组技术的基本工具

小结:
限制酶
主要存在于原核生物中 具有专一性(识别序列) 切开DNA分子的磷酸二酯键
基因工程 的工具
DNA连 接酶
连接磷酸二酯键
种类
E.coliDNA连接酶 T4 DNA连接酶
结构简单,大小适中
能在宿主细胞中自
运载 工具
具备的 条件
我复制并稳定存在 具一个多个限制酶切位点 具标记基因
质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒
课堂练习
1.在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的
DNA片段，需使用（ A ）
A.同种限制酶
B. 两种限制酶
C.同种连接酶
D. 两种连接酶
2.不属于质粒被选为基因运载体的理由是（ D ） A .能复制 B .有多个限制酶切点 C .具有标记基因 D .它是环状DNA
3. 基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。 在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的 步骤是 （ C ） A . 人工合成目的基因 B .目的基因与运载体结合 C .将目的基因导入受体细胞 D .目的基因的检测和表达
• 什么叫黏性末端？
什么叫平末端？
限制酶存在于原核细胞中的作用是什么？ 为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？
二、ＤＮＡ连接酶——“分子缝合针”
１.作用：连接磷酸二酯键
２.DNA连接酶的种类
限制酶切割后产生两种不同的末端。那么恢复它们的连 接时，所用DNA连接酶是否可以不加选择？ E.coliDNA连接酶：连接黏性末端 T4DNA连接酶：连接黏性末端和平末端
DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？
连接DNA链 连接部位
DNA连接酶
双链
在两DNA片段之 间形成磷酸二酯键

DNA重组技术的基本工具优秀课件

DNA重组技术的基本工具优秀课件
基因工程(gene engineering)
• 又称基因拼接技术,或DNA重组 技术。 通俗的说，就是按照人们的意愿，进行 严格的设计，并通过体外DNA重组和转 基因等技术，赋予生物经新的遗传特性， 从而创造出更符合人们需要的新的生物 类型和生物产品。
DNA重组技术的基本工具优秀课件
设想
让禾本科植物也能 固氮？ 根瘤菌的固氮作用
为你 作什能用么推是限测什制限么酶吗制不酶？剪存切在细于菌原本核身生的物D中NA的？
通 的 的 基 不原在制菌利安能过 细 识 转长核，全的用长 胞 别 移将期以。生一 限的防 所物种 制期，切到其进止 以易酶防的其割所切化外 ，受御将进序识开D过来限自性外N化 列 别。程病制然工源A， 序，这分中原酶界具DN细 列或样形物在外，子A切菌 的者，成的原源当中割了侵核外D中 碱通尽不N掉一害生源含 基管过A具的，套。物D有 上细甲备N入以完中限A某 ，菌基这侵侵保善主制种 使中化种入证，的要酶限限含酶自时但防起限就制制有将身，生御到是制的会物机切细酶酶某甲酶 种割限外制源D酶N也A、不使会之使失自效身，从的而D达N到A被保切护自断身，的并 且目可的以。 防止外源DNA的入侵。
DNA连接酶的作用
把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将 脱氧核糖和磷酸连接起来催化形成磷酸二酯 键
DNA重组技术的基本工具优秀课件
DNA连接酶的缝合作用
可把黏性末端之间的 缝隙“缝合”起来，
两DNA片段要具有互补 的黏性末端才能拼起来
注意：DNA连接酶可连接双链DNA中的DNA单链缺口， 但不能连接单链DNA！
①细菌的质粒 ②病毒：λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。
DNA重组技术的基本工具优秀课件
最常用运载体——质粒

DNA重组技术的基本工具 课件

DNA重组技术的基本工具 课件

体
细
胞
DNA
质粒的模式图
质粒
大肠杆菌细胞
目的基因 插入位点
氨苄青霉素 抗性基因
复制原 核苷酸序列，使每一条链中特定 部位的两个核苷酸之间的磷酸二 酯键断开（特异性）
3.结果：形成黏性末端
EcoRⅠ
EcoRⅠ限制酶识别： GAATTC序列
限制酶在识别序列的中心轴线两侧将DNA 两条单链切开，这样的切口叫黏性末端。
3.结果：形成平末端 SmaⅠ限制酶识别：GGGCCC序列
思考
不同点： DNA连接酶是将_两__个__D_N__A__片_连段接起来,
不需要 模板 DNA聚合酶是将_单__个__核__苷__酸__连接起来，
需要 模板 共同点： 都催化磷酸二酯键的形成
四、分子运输车—— 基因进入受体细胞的载体
1.载体的种类：
质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒
最常用的载体
(2) T4 DNA连接酶： 既可以连接黏性末端，又连
（T4噬菌体）
接平末端。
寻根问底
DNA连接酶与DNA聚合酶
DNA聚合酶
……… …… …… …… …… ……… …… ……
……
DNA
母链
A A T C T A T AG
T T A G AT AT C
A DNA聚合酶 C
A
DNA连接酶 寻根问底
DNA分子水平 基因重组
定向改变生物性状或获得基因产物
基因工程培育抗虫棉的简要过程：
苏云金芽 孢杆菌
提取
普通棉花(无抗虫特性)
抗虫基因 与运载体DNA拼接 棉花细胞(含抗虫基因)
导入
棉花植株(有抗虫特性)
能否培养出具有抗虫 性状的抗虫棉呢？

DNA 重组技术的基本工具课件

DNA 重组技术的基本工具课件

限制性核酸内切切割DNA的“手术刀——限制 性核酸内切酶
识别DNA特定的序列,使 DNA分子链的固定部位 分开。
.
磷酸
二酯键
限制酶：如何识别特定序列
2、将DNA片段再连接起来的“缝合针” ——DNA连接酶
DNA连接酶—能够 将两条DNA连接 起来的酶。
分类： E·coliDNA连接酶：
3，质粒DNA分子上有特殊的遗传标记基因，如 抗四环素、氨苄青霉素等标记基因，供重组 DNA的鉴定和选择。
总结
DNA重组技术 的三件工具： 限制性内切酶、 DNA连接酶、 质粒。
质粒 目的基因 限制性 内切酶
连接酶
重组质粒
连接黏性末端。 T4连接酶：
连接黏性末端和 平末端。
3、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
“分子运输车”——质粒
质粒：裸露、结构简单、 独立于细菌染色体之 外，具有自我复制能 力的双链环状DNA分 子。
质粒的优点？
1、其分子上至少有一个至多个限制酶切割位点， 供外源DNA片段插入其中。
2、携带外源DNA片段的质粒进入受体细胞后， 停留在细胞中进行自我复制，或整合到染色体 DNA上，随染色体DNA进行同步复制。
抗虫棉
抗虫棉的培育就用 到DNA重组技术。
要将抗病基因导入棉花细胞，就需要对 含有抗病基因的DNA分子进行切割、 改造、修饰和拼接。
要实现这一过程需要三种工具：
• 准确切割DNA的 “手术刀”。
• 将DNA片段再连 接起来的“缝合 针”。
• 将体外重组好的 DNA导入受体细 胞的“运输工 具”。

生物11《DNA重组技术的基本工具》课件(新人教版选修3

生物11《DNA重组技术的基本工具》课件(新人教版选修3

要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物 体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞 内去。能将外源基因送入细胞的工具就是运载体。
1.作用： 将外源基因送入受体细胞。 2.种类：
质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒等。
质粒的特点
质粒是基因工程最常用的载体。 质粒是一种裸露的、结构简单、独 立于细菌染色体（即拟核DNA）之外， 并且具有自我复制能力的双链环状 DNA分子。
Байду номын сангаас
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每天都是美好的一天，新的一天开启 。20.12.3020.12.3017:1717:17:1617:17:16Dec-20
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相信命运，让自己成长，慢慢的长大 。2020年12月30日星 期三5时 17分16秒 Wednesday, December 30, 2020
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爱情，亲情，友情，让人无法割舍。20.12.302020年 12月30日星期 三5时17分16秒20.12.30
选修3 现代生物科技专题
专题1 基因工程
•DNA重组技术的基本工具 •基因工程的基本操作程序
•基因工程应用 •蛋白质工程的崛起
基因工程的概念
是指按照人们的愿望，进行严格的设计， 通过体外DNA重组技术和转基因技术，赋 予生物以新的遗传特性，创造出更符合人 们需要的生物类型和生物产品，由于基因 工程是在DNA分子水平上进行设计和施工 的，因此又叫DNA重组技术；也叫基因拼 接技术。
2、DNA连接酶催化的反应是( )
A．DNA复制时母链与子链之间形成氢键 B．黏性末端碱基之间形成氢键 C．两个DNA片段黏性末端之间的缝隙的连接 D．A、B、C都不正确
3、作为基因的运输工具——载体，必须 具备的条件及理由是( )

DNA重组技术的基本工具人教版高二年级生物课堂PPT学习

DNA重组技术的基本工具人教版高二年级生物课堂PPT学习

绿色荧光水母
DNA重组技术的基本工具
（美）马丁·沙尔菲：建立利用绿色 荧光蛋白研究基因表达的基本方法
（美）钱永健：改造绿色荧光蛋白
绿色荧光水母
绿色荧光小鼠 转基因动物
绿色荧光水母
绿色荧光烟草 转基因植物
2008年诺贝尔化学奖
日 下村修 美 马丁·沙尔菲 美 钱永健
基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过 体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性， 从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外 DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造 出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
基因组DNA （目的基因）
定向改造生物性状
基因组DNA
mRNA
蛋白质 目的基因 mRNA
蛋白质
（体外）
转基因生物
供体细胞
受体细胞
理论依据：DNA是主要遗传物质；各种生物共用一套遗传密码。
受体细胞
基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外 DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造 出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
基因组DNA （目的基因）
基因组DNA
mRNA
蛋白质 目的基因 mRNA
蛋白质
（体外）
转基因生物
供体细胞
受体细胞
理论依据：DNA是主要遗传物质；各种生物共用一套遗传密码。
DNA重组技术的基本工具人教版高二 年级生物课堂PPT学习
年 级：高二年级 学 科：生物（人教版）
一、 DNA重组技术的基本工具 1.简述DNA重组技术所需三种基本工具的作用。 2.认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术 创新。 二、 学习重点和难点 1.学习重点 DNA重组技术所需的三种基本工具的作用。 2.学习难点 限制酶的作用 基因工程载体需要具备的条件。

DNA重组技术的基本工具 课件

DNA重组技术的基本工具 课件
DNA重组技术的基本工具
基因工程概念
基因工程是指按照人们的意愿，进行 严格的设计，并通过体外DNA重组和 转基因等技术，赋予生物以新的遗传特 性，从而创造出更符合人们需要的新的 生物类型和生物产品。
由于基因工程是在DNA分子水平上进 行设计和施工的，因此又叫做DNA重 组技术
定向改造生物啦！
基因工程相关要点
种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部 位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开（切割 DNA分子） 作用结果： 形成平未端（SmaI）及黏性未端（EcoRI）
2.DNA连接酶——“分子缝合针” 1)、种类： E·coli DNA连接酶（黏性末端）
T4 DNA连接酶 （黏性末端和平末端）
2)、作用部位：磷酸二酯键
我复制并稳定存在 具一个或多个限制酶切位点 具标记基因
质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒
基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术
操作环境
生物体外
操作对象
基因
操作水平
DNA分子水平
基本过程 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达
实质
基因重组
结果
新生物类型、生物产品
重难点剖析: 基因工程的“专用工具”
1.限制性核酸内切酶 黏性末端
来Ec源oR：I 主要从原核细黏胞性分末离端 作用：一种限制性内切酶只能识别双链DNA分子的某
DNA连接酶可把平未端或黏性末端之间的缝隙 “缝合”起来，即相当于把梯子两边的扶手的断 口连接起来，这样一个重组DNA分子就形成了。
3.分子运载车——运载体 （1） 作用： 将目的基因送入受体细胞
（2） 具备的条件：
a.能自我复制. b.具有一个或多个酶切位点. c.有标记基因. d.对受体细胞无害. （3）种类： 质粒、噬菌体、动植物病毒

基因工程之DNA重组技术的基本工具(PPT51张)

基因工程之DNA重组技术的基本工具(PPT51张)

DNA
复 制
连接DNA链
DNA连接酶 DNA聚合酶
双链
单链
连接部位
在两DNA片 将单个核苷酸加到 段之间形成 已存在的核酸片段 磷酸二酯键 的末端上，形成磷
酸二酯键
模板
不需要 需要
基因进入受体细胞的载体—“分子运输车”
要让一个从甲生物细胞内取出来的 基因在乙生物体内进行表达，首先得将 这个基因送到乙生物的细胞内去。能将 外源基因送入细胞的工具就是运载体。
可能产生了一些特殊的酶来 防范。可而这种酶能识别外来侵 入的DNA并将其分解，而对自 身的DNA不能起作用。
“分子手术刀”——限 制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶——“分子手术刀”
1.主要来源： 主要从原核生物中分离纯化 2.种类与命名：
现在已经从约300种微生物中分离出了约4000种限制 性内切酶(限制酶)。
思考：转基因技术实现了一种生物的某些性状 在另一种生物中表达。这些性状的表达与我们学 过的基因的什么过程有关？
转录
翻译
DNA(基因)
mRNA
蛋白质(性状)
何实现药物基因在烟草中的表达，提前要做哪些工作？
某种药物蛋白的基因
烟草的DNA
➢准确切割DNA的工具（“分子手术刀”） ——限制性内切酶
➢DNA片段的连接工具（“分子缝合针”） ——DNA连接酶
生物B基因片段
……GAATTC…… ……CTTAAG……
EcoRⅠ 酶切
……G AATTC…… ……CTTAA G……
……G AATTC…… ……CTTAA G……
不同来源的DNA片段混合
……GAATTC…… ……CTTAAG……
……GAATTC…… ……CTTAAG……

DNA重组技术的基本工具 演示文稿.ppt

DNA重组技术的基本工具 演示文稿.ppt

3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” （1）载体具备的条件： ①能在受体细胞中复制并稳定保存。
②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。 ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 （2）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、 独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状 DNA分子。 （3）其它载体： 噬菌体的衍生物、动植物病毒
基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
目的基
基因工程的 “ 因
”
“ ” 指某些小型DNA分子
能够在宿主细胞中复制并稳定地保存
条件：
具有多个限制酶切点（每种限制酶切 点最好只有一个），以便与外源基因
连接
具有标记基因，便于进行筛选
TGCA ACGT
T
GCA
ACG
T
GCA T
T
外源基因
ACG
T GCA ACG T
真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行人 工改造的。
T GCA A C GG
标记基因
抗四环素基因
抗青霉 素基因
四环素
正常生活
重组DNA
பைடு நூலகம்
四环素
不能正常生活
BACK
目的基因获取与基因结构
抗四环素基因
受体细菌
大肠杆菌的质粒
重组 DNA
该受体菌能产生胰岛素吗?
提取人的胰岛素基因(用“鸟枪法”)，能行吗？
不能!因为真核生物的基因编码区中有内含子，到了原 核细胞中的真核基因在表达时是不能完成自动剪切的。 通常采用的是人工合成法，如成熟的mRNA逆转录法、 人工合成DNA法均可，这样合成的基因编码区内是没 有内含子的。原核生物也没有内质网和高尔基体。

DNA重组技术的基本工具PPT课件

DNA重组技术的基本工具PPT课件

随堂达标检测
活页规范训练
基因工程的工具酶
1．限制性核酸内切酶——“分子手术刀”
(1)来源
主要来自于 原核生物
。
(2)特点
① 识 别 双 链 DN特A 定核分苷酸子 的 某 种
序列；
磷酸二酯键
②使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的
断裂。
(3)作用结果
中心轴线两侧
①黏性末端：在所识别序列的
将
DNA的两条链分别切开时形成中的心末轴端线。
课堂互动探究
热点考向示例
随堂达标检测
活页规范训练
基因进入受体细胞的载体—— “分子运输车”
1．载体的种类有 质粒 λ噬、菌体
动植的物衍病生毒物、
等。
2．常用载体——质粒
(1)质粒是一种自裸我露复的制、结构简单双、链独环立状于DN细A 菌拟核DNA之外，
并具有
限制酶切割 能 力 的
分子外。源
(2)质粒DNA分子上有标一记至基多因个
随堂达标检测
活页规范训练
A．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割 B．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割 C．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割 D．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割 思维导图：
课堂互动探究
热点考向示例
随堂达标检测
活页规范训练
SUCCESS
THANK YOU
2024/10/15
课堂互动探究
热点考向示例
随堂达标检测
活页规范训练
3．载体的种类 (1)细菌质粒，它是细菌拟核DNA以外的小型双链环状DNA，有 的细菌只有一个，有的细菌有多个。 (2)λ噬菌体的衍生物和某些动植物病毒的DNA。 一般来说，天然载体往往不能满足人类的所有要求，因此人 们根据不同的目的和需求，对某些天然的载体进行人工改造。

《DNA重组技术的基本工具》课件

《DNA重组技术的基本工具》课件

单链
将游离的脱氧 核苷酸通过磷 酸二酯键连接 起来
思 考 用DNA连接酶连接两个相同的黏性未端要形成几 个磷酸二酯键？ 2个 用限制酶切一个特定基因要切断几个磷酸二酯键？ 4个 外源基因（如抗虫基因）怎样才能运送到受体细胞 （如棉花细胞）？ 需要“分子运输车”——基因进入受体细胞的载体
如果载体上有遗传标记基因，就可 通过标记基因的表达来检测。 如果载体对受体细胞有害将怎样？ 将影响受体细胞新陈代谢，进而使 转入的外源基因也可能无法表达。
运载体的种类：质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒
质粒：裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外， 并具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子。
1.要想获得某个特定性状的目的基因必须要用限制酶切几刀？ 可产生几个黏性(平)末端？
要切两刀，产生四个黏性(平)末端。
2.如果把两种来源不同的DNA用同种限制酶来切割，会怎样？
会产生相同的黏性(平)末端
3.如果把具有相同黏性(平)末端的DNA连接起来，又会怎样呢？
得到重组DNA
G C G A A T T C C C
D ）
2、以下说法正确的是（ C ） A.所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B.质粒是基因工程中唯一的运载体
C.载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶
切点，以便与外源基因连接
D.基因控制的性状都能在后代表现出来
3、人们常选用的细菌质粒分子往往带有一个抗菌
素抗性基因，该抗性基因的主要作用是（ B ）
•DNA双螺旋结构的确立
•遗传信息传递方式(中心法则)的认定 技术保障 • 限制性核酸内切酶 基因工程工具 • DNA连接酶 • 基因载体(如质粒) 的发现和应用
基因工程培育抗虫棉的简要过程

重组DNA技术的基本工具人教版高一年级生物课堂设计PPT

重组DNA技术的基本工具人教版高一年级生物课堂设计PPT

二、外源DNA片段借助载体可在受体细胞内进行复制 1.外源DNA片段进入受体细胞的载体
2.活动:DNA的粗提取和鉴定
【微思考】 天然质粒能直接用于基因工程中吗? 提示 不能,理想的载体需要具备的条件比较严苛。在基因工程操作中,真 正被用作载体的质粒,都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。
自我检测 1.多数外源DNA片段自身很难在受体细胞内成功复制,载体可以将外源 DNA送入受体细胞中进行扩增。判断下列有关载体描述的正误。 (1)质粒是环状双链DNA分子,是基因工程常用的载体。( √ ) (2)载体的作用是携带外源基因并将其导入细胞中,使之稳定存在并表达。
4.下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述,错误的是( ) A.酵母菌和菜花均可作为提取DNA的材料 B.DNA既溶于2 mol/L的NaCl溶液,也溶于蒸馏水 C.向DNA溶液中加入二苯胺试剂,沸水浴加热后变蓝 D.向洋葱研磨液的上清液中加蒸馏水搅拌,可见玻棒上有白色絮状物
答案 D 解析 酵母菌和菜花细胞中均含有DNA,均可作为提取DNA的材料,A项正 确;DNA既溶于2 mol/L的NaCl溶液也溶于蒸馏水,B项正确;利用DNA与二 苯胺在沸水浴加热的条件下呈蓝色的特征,可鉴定DNA,C项正确;向洋葱研 磨液的上清液中加95%的冷酒精搅拌,可见玻璃棒上有白色絮状物,D项错 误。
A.在使用限制酶的同时还需要解旋酶 B.限制酶1和3剪切出的黏性末端相同 C.限制酶1、2、4识别的序列都是由4个脱氧核苷酸组成 D.限制酶1和2切割形成的DNA片段可通过T4 DNA连接酶拼接
答案 D 解析 质粒不只分布于原核生物中,在真核生物(如酵母菌)细胞内也有分 布,A项错误;并不是每个质粒上都有限制酶的切割位点,B项错误;重组质粒 进入受体细胞后,有的在细胞内自我复制,有的整合到宿主细胞染色体 DNA上随染色体DNA复制而复制,C项错误;质粒上的抗性基因常作为标记 基因,便于通过表型鉴别含有载体的细胞,D项正确。
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结束语
谢谢大家聆听！！！
37Leabharlann 23来源？ 特点？ 结果？
（一）限制酶的来源
资料分析：
• 在自然界中有一些生物的 DNA可能进入另一种生 物的细胞中。我们有没有 学过相关的实例？
来源： 主要在原核生物中
（二）限制酶的特点
观察表格、尝试归纳限制性内切酶的特点
识别双链DNA分子中 特定核苷酸序列
切割特定序列中的 特定位点
专一性
拓展 限制酶作用的化学键 氢键
√磷酸
二酯健
（三）限制酶作用的结果 结果
课堂反馈
1、关于限制酶的说法中，正确的是（D）
A、限制酶是一种酶，只识别GAATTC 碱基序列
B、EcoRⅠ切割的是G-A之间的氢键
C、限制酶一般不切割自身的DNA分子、 只切割外源DNA
D、限制酶主要存在于原核生物中
课堂反馈
2、把两种来源不同的DNA进行重 组，应该怎样处理？
阅读课本第5页、及课前发的资料分析、小组讨论归纳答案
DNA连接酶作用的化学键 是什么？
DNA连接酶和DNA聚合酶 有何异同点？
DNA连接酶有哪些种类？ 其来源和特点分别是什么？
（一）DNA连接酶作用的化学键 缝合的是磷酸二酯键
（二）DNA连接酶和DNA聚合酶的异同点
相同点
.
催化两个核 苷酸之间形 成磷酸二酯
2、知识结构框架
本节课主要包含三个方面的内容：
分子手术刀----限制酶 分子缝合针----DNA连接酶 分子运输车----运载体
3、重点、难点
教学重点：DNA重组技术的基本工具的作用 教学难点：运载体应具备的基本条件
知识 与技能
过程 与方法
情感态度 与价值观
知识与技能：
掌握DNA重组技术的基本工具的作用
DNA重组技术的基本工具说课 课件
教材分析 教学目标
学情分析
教法学法
教学流程
板书设计
1、教材地位和作用
本节课选自人教版《生物选修三》专题一第一节 的内容，题为《DNA重组技术的基本工具》，本节内容 是本专题的开篇，是本专题学习的基础，本节课是在 学生对基因工程已基本掌握的前提下来学习的，是对 前面知识的应用和延伸。因此，本节内容有着很重要 的作用。
A、DNA复制时母链与子链之间形成氢 键
B、黏性末端碱基之间形成氢键 C、两个DNA片断黏性末端之间的缝隙
的连接 D、A、B、C都不正确
知识三3 、“分子运输车”—载体
阅读课本第6页、迅速找到种类。
作用
种类
分子 运输车
特点
（一）载体的种类
其他
λ噬菌体衍生物
动植物病毒
化学本质？
质粒
质粒是一种裸露的、结构简单、 独立于细菌染色体之外的 双链环状DNA分子
酶代替DNA连接酶 D、他们不能被反复的利用
巩固提高
• （双选）关于质粒的叙述正确的（A）B • A. 质粒是能够自我复制的环状DNA
分子 • B. 质粒是基因工程常用的载体 • C. 重组质粒是目的基因 • D. 质粒可在宿主外单独复制
作业
• 完成书后的习题 • 认真完成模拟制作----DNA重组制作
G AA TT C
G AA TT C
C TT AA G
C TT AA G
用同种限制酶切割(EcoRⅠ)
G AA TT C C TT AA G
G AA TT C C TT AA G
G AA TT C CTTAA G
G AA TT C C TT AA G
缺口怎么办？
知识2 二、 “分子缝合针”—DNA连接酶
（二）载体的条件
1
假如目的基因导入 受体细胞后不能保 存和复制将怎样？
2
作为载体没有切割 位点将怎样？
条件
3
4
如果载体对受体细胞 有害将怎样？
目的基因是否进入受 体细胞，你如何去
察觉？
（二）载体的条件
1 能自我复制 2 具有多个限制酶切点 3 对受体细胞无害 易分离 4 具有标记基因，便于检测和筛选
D. 能够在宿主细胞中复制并稳定保存，以 便于进行筛选
课堂小结
DNA重组技术的基本工具
限制酶
DNA 连接酶
载体
来源 特点 结果
作用 种类 特点
种类 特点 条件
巩固提高
下列关于限制酶和DNA连接酶的理解正
确的是（A ）
A、其化学本质都是蛋白质 B、DNA连接酶可以恢复DNA中的氢键 C、在基因工程操作中可以用DNA聚合
过程与方法：
培养学生自己动手制作模型的能力 锻炼学生表达能力与综合分析问题的能力
情感态度和价值观：
认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新
学生在学习必修二基因工程的内容的 基础上进行的本节课的学习，已经具备一 定的基础和理解能力。但是想进一步探究 有关基本操作工具的内容，就需要教师充 分挖掘教材，做到浅入深，充分调动学生 学习的主动性，切实可行的培养学生的能 力，增大学生对教学内容理解的深度。
（三）载体的作用
• 携带目的基因进入受体细胞 • 扩增目的基因
课堂反馈
3、作为基因的运输工具——载体，必须
具备的条件及理由是（ A）
A. 能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大 量复制，以便提供大量的目的基因
B. 具有多个限制酶切点，以便于目的基因 的表达
C 具有某些标记基因，以便为目的基因的 表达提供条件
键
不同点
DNA连接酶
.
在两个 DNA片段 之间形成 磷酸二酯
键
DNA聚合酶
.
将单个核苷酸 加到已存在的 核酸片段上， 形成磷酸二酯 键
DNA聚合酶催化DNA的合成
（三）DNA连接酶种类
1
2
E·coli连接酶 T4连接酶
只能连接 黏性末端
既可“缝合 ”黏性末端 ，又可“缝 合”平末端
课堂反馈
3、DNA连接酶催化的反应是（ D ）
结合教育理论、新课标和我校的学生实际， 本着一切为了学生的发展需要，在教法上我 采用了：
• 创设情境教学法； 激发学生学习本节课的兴趣
• 讲授法；
充分发挥教师在引导、分析中的主导作用
• 练习巩固法
加深学生对知识的理解
情境导入
限制酶
DNA连 接酶 运 载体
课堂小结 课堂练习
知
图
互学
识
片
动生
回
导
讲参
顾
入
解与
互
学
动
生
讲
参
解
与
突 出 重 点
完 成 作 业
情景导入
1973--转基因大肠杆菌
1980--转基因小鼠诞生
1983--
转 基 因 烟 草 出 现
情景导入
基因工程常用工具
分子手术刀——限制性内切酶
三大工具
分子缝合针——DNA连接酶
分子运输车——运载体
互动课堂
知识1
1
一、 “分子手术刀”——限制 酶