烟草叶盘诱导不定芽实验报告

烟草叶片愈伤组织诱导摘要用不同成分培养基，附加0.8%琼脂，3%蔗糖，调pH5.8—6.0，取烟草叶片作为外植体进行愈伤组织诱导培养，计算污染率、诱导率以及诱导情况，观察愈伤组织的发生情况。

实验表明，养分较高的培养基，外植体生长情况较好。

当细胞分裂素高于生长素的浓度时，有利于分化出芽；细胞分裂素低于生长素的浓度时，有利于分化出根；当细胞分裂素及生长素的浓度适合时，愈伤组织不分化，但是生长旺盛。

关键词：烟草叶片愈伤组织诱导前言烟草（Nicotiana tabacum）又名草烟，属茄科烟草属的一年生草本植物，本属约有60种，原产于美洲和大洋洲[1]。

烟草是重要的经济作物和工业原料作物，其体内所含的烟碱等生物碱是非常宝贵的医药及化工原料[2]。

有报道烟草细胞悬浮培养物获得细胞分裂素类物质，因此很有必要对烟草的组培快繁进行研究，以获得更有效的方法提高产率和产量。

柯善强综述植物细胞的遗传全能性与组织培养形态发生控制[3]，戴冕进行了烟草叶肉原生质体再生植株的研究[4] ,徐瑞娟等通过烟草花序苞叶的离体培养分化出花芽[5],战淑敏用烟草叶组织培养直接获得再生植株[6]。

本实验以烟草叶片组织为外植体进行组织培养，诱导愈伤组织，观察愈伤组织诱导情况。

1.材料与方法1.1 配置培养基母液，每2人为一个小组，配置以下培养基，并分装，灭菌，然后室温下放置一周。

1.2 取烟草叶片取烟草的嫩叶片作外植体。

先用自来水冲洗干净，再用蒸馏水洗2次后，置于超净台上，于无菌条件下先用75%的酒精浸泡30秒，然后置于无菌瓶中用10%次氯酸钠溶液浸泡20分钟至30分钟，再用无菌水冲洗4次，最后在无菌培养皿中将嫩叶片切成1cm见方小块，接种在培养基中。

1.3.1 观察污染情况：观察是否有细菌性污染（菌斑呈粘液状,接种后1-2天出现）和真菌性污染（出现不同颜色霉菌,接种后3-10天出现），并计数。

计算污染率。

污染率(%)=污染的材料数/总接种材料数×100%[7]1.3.2 观察各培养基中的外植体产生愈伤组织的情况，愈伤组织出现时间和愈伤组织形态特征（颜色和质地等），计数形成愈伤组织的材料数，并计算诱导率。

姓名：肖峰学号： B0704002班级： 07生物技术（1）班指导老师：莫廷辉时间： 2009年11月目录实验一、培养基母液的配制实验二、培养基的配制与灭菌实验三、香蕉吸芽的组织培养实验四、烟草叶片的组织培养实验五、柱花草的组织培养实验六、木薯的组织培养实验七、桉树的组织培养实验八、玉米不成熟胚的培养实验九、花生成熟胚培养实验十、水稻盾片的培养实验十一、芦荟的组织培养（自选材料实验）实验一、培养基母液的配制一、实验目的掌握培养基母液的配制。

在配置培养基之前，为了方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。

当配置培养基时，只需按预先计算好的量吸取母液。

二、实验原理培养基是植物细胞、组织和器官吸取营养的场所。

在植物细胞的分裂和分化过程中，需要各种营养物质，这些营养物质包括无机营养成分、有机营养成分、植物生长调节物质等。

在对植物的器官、组织和细胞进行离体培养时，只是切取植物体的一小部分，它们无法象整体植株那样合成生长发育所需的全部物质。

而自然界的植物千差万别，每一种植物都有自己独特的生理代谢过程和各自的营养需求，没有哪一种培养基能够适用于所有植物。

因此，对培养基组成成分的筛选是非常重要和必不可少的程序。

目前对植物进行组培时，人们所使用的培养基只几十种，其中MS培养基应用最为广泛。

说明MS 培养基的无机盐成分对许多植物种均是适宜的，它的无机盐含量较高，微量元素种类较全，浓度也较高。

三、实验试剂与仪器设备1、药品试剂：母液、蔗糖、卡拉胶（或琼脂）、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA、IAA、2，4-D等。

2、仪器设备：电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。

四、实验内容（一）母液的配制MS培养基母液方案配制如下表：具体配制步骤如下：1、大量元素母液的配制无机盐中大量元素母液，按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大20倍，用感量为0.01g的扭力天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解.溶解时在每只烧杯中加入30-40mL重蒸馏水，置于酒精灯上,加热使其溶解(注意温度不可过高，60-70℃)。

叶盘法转基因烟草技术实验目的：学习并了解叶盘法转基因烟草的技术流程。

二. 实验原理：土壤中的农杆菌是一种革兰氏阴性菌，能够感染植物的受伤部位。

农杆菌中有一种环形的Ti质粒，Ti质粒最重要的两个区域为T-DNA区和毒性区，T-DNA是Ti质粒上唯一能够整合到植物染色体上的序列，而毒性区上一系列则帮助T-DNA区整合到植物的染色体上。

土壤农杆菌转化植物的常用方法是叶盘法。

这种转基因方法十分简单，一般是将植物的叶片切成小圆片，用农杆菌感染后共培养2-4天，而后转移到加有选择压的分化培养基上分化出芽，在MS培养基上生根后，再生出完整的植株。

三. 试剂及设备1.试剂：MS培养基：配方见“植物的组织培养技术”实验指导Kan：卡那霉素Cb：羧苄青霉素NAA：萘乙酸6-BA：细胞分裂素T1培养基：MS培养基T2培养基：MS培养基+6-BA2.0mg/L+NAA0.5 mg/L+Kan100 mg/L+Cb500 mg/LT3培养基：MS培养基+ Kan100 mg/L+Cb500 mg/L（T2：生长培养基；T3：生根培养基）2.仪器：光照培养箱，恒温摇床，超净工作台，接种器械等四.实验步骤：1 农杆菌培养1）从平板上挑取含有目的基因的单菌落，接种到3 ml YEB 液体培养基中（Str 25 μg/ml、Rif 50 μg/ml、Kan 80 μg/ml）于恒温摇床上27℃，180 rpm 摇培过夜至OD 600 为0.6-0.8。

2）摇培过夜的菌液按1%-2%的比例，转入新配置的无抗生素的YEB 培养基中，在与上述相同的条件下培养6 h左右，OD600 为0.2-0.5 时即可用于转化。

或：将按上述方法培养的OD 600 为0.6-0.8 的菌液，转入无菌离心管中，于室温条件下，5000 rpm 离心10 min，去掉上清液，菌体用1/2 MS液体（pH 5.4-5.8）培养基重悬，稀释至OD600 为0.2 左右，用于转化。

烟草叶片愈伤组织诱导分化实验1. 实验目的（1）通过诱导植物（烟草叶片、水稻种子）愈伤组织和器官发生，分析生长素和细胞分裂素对烟草叶片离体培养的作用。

（2）了解植物组织在离体培养条件下脱分化和再分化的特点。

2. 实验原理外植体形成愈伤组织大致要经历三个时期：启动期、分裂期和形成期。

启动期主要通过激素以及环境因素的诱导使外植体细胞代谢增强，大量蛋白质与核酸形成为细胞分裂做准备；分裂期时外植体细胞在激素诱导下脱分化并不断增殖，形成结构疏松的组织块；形成期时，由于不同植物生长激素的诱导使愈伤组织形成根、芽等形态分化。

烟草为常见模式植物之一，常用于植物组织培养，是研究细胞脱分化和再分化的理想材料。

在愈伤组织诱导及分化过程中，光照条件起到的作用是促使愈伤组织进行光合作用生成糖类，促使代谢活动进行。

6-BA、NAA均为植物生长调节剂，6-BA属于细胞分裂素，可诱导愈伤组织发生并促进牙的形成；NAA属于细胞分裂素，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根。

根据Skoog和Miller提出的生长素和细胞分裂素相对浓度调节器管分化的概念，相对高的生长素有利于细胞增殖和不定根的分化，而相对高的细胞分裂素浓度有利于不定芽的分化。

通过改变激素的种类和浓度，有效地调节培养组织的器官分化，已经在许多植物的组织培养中得到证实，甚至在一些低等植物中也得到了证实。

3. 实验材料与操作方法3.1 实验材料3.1.1 材料选择：烟草By-2，滤纸片，枪头3.1.2 实验试剂：（1）植物生长调节剂（超净台过滤灭菌，1.5 mLEP管分装后-20℃贮存）6-BA 0.5mg/mL（1mol/L NaOH溶解再用蒸馏水定容）NAA 0.5mg/mL（1 mol/L NaOH溶解再用蒸馏水定容）（2）抗生素（超净台过滤灭菌，1.5 mLEP管分装后-20℃贮存）卡那霉素50 mg/mL（蒸馏水定容）利福平15 mg/mL（无水乙醇溶解再用蒸馏水定容）链霉素30 mg/mL（蒸馏水定容）羧苄青霉素100 mg/mL（蒸馏水定容）（3）实验用培养基MS大量元素储存母液（50×，蒸馏水定容）：1650mg/L NH4NO3+1900mg/L KNO3+370mg/L MgSO4·7H2O+170mg/L KH2PO4+440mg/LCaCl2·2H2O（CaCl2·2H2O在配制过程中不易溶解，可单独配成储液存放）MS微量元素储存母液（100×，蒸馏水定容）：0.83mg/L KI+6.2mg/L H3BO3+22.3mg/L MnSO4·4H2O+8.6mg/L ZnSO4·7H2O+ 0.25mg/L Na2MoO4·2H2O+0.025mg/L CuSO4·5H2O+0.025mg/L CoCl2·6H2O +27.8mg/LFeSO4·7H2O +37.3 mg/L Na2-EDTA·2H2O（FeSO4·7H2O 和Na2-EDTA·2H2O两个试剂配制成100×溶液4℃冰箱避光储存）MS有机成分储存母液（100×，蒸馏水定容）：3mg/L甘氨酸+0.5mg/L烟酸（维生素B5）+0.5mg/L盐酸吡哆醇（维生素B6）+0.1mg/L盐酸硫胺素（维生素B1）+100mg/L肌醇（肌醇难溶解，一般独自配成浓缩液储存）MS培养基（NaOH调节至pH 5.8，蒸馏水定容）：1×大量元素+1×微量元素+1×有机成分+30g/L蔗糖+0.8%琼脂+不同比例生长素（6-BA+IAA）3.1.3 实验仪器：超净工作台，烧杯，锥形瓶，培养皿，枪形镊子，眼科剪，移液枪，酒精灯，光照培养室，3.2 操作方法取幼嫩烟草叶片约5片（选择幼年的外植体较好，如分生组织、维管束、形成层组织、静止的薄壁组织），用自来水清洗晾干。

烟草实验情况汇报
本次烟草实验旨在探究不同环境条件对烟草生长的影响，以及对烟草质量和产
量的影响。

我们选择了室内和室外两种不同的环境条件进行实验，以期获得更全面的数据和结论。

首先，我们在室内设置了温度恒定、湿度适宜的环境条件，对烟草进行种植和
观察。

在这种条件下，我们发现烟草生长速度较快，叶片颜色较为鲜绿，但是烟草的高度和叶片数量相对较少。

同时，室内环境下的烟草产量也较低，质量略有下降。

其次，我们在室外选择了阳光充足、气候适宜的环境条件进行烟草种植实验。

在这种条件下，烟草生长速度较慢，但是烟草的高度和叶片数量明显增加，叶片颜色也更加饱满。

与室内环境相比，室外环境下的烟草产量明显提高，质量也有所增加。

综合实验结果，我们可以得出以下结论，不同环境条件对烟草生长和产量有着
明显的影响。

温度恒定、湿度适宜的室内环境有利于烟草的生长，但产量和质量相对较低；而阳光充足、气候适宜的室外环境则能够提高烟草的产量和质量，但生长速度较慢。

在今后的研究中，我们将进一步探究不同养分供给、灌溉条件对烟草生长的影响，以及烟草在不同环境条件下的适应性和生长规律。

希望通过这些研究，能够为烟草种植提供更科学、更有效的栽培技术和管理方法，为烟草产业的发展做出贡献。

总的来说，本次实验取得了一定的成果，但是也存在一些不足之处，需要在今
后的研究中加以改进和完善。

我们将继续努力，不断深化研究，为烟草生产和种植提供更多有益的信息和数据。

感谢各位的支持和关注，期待在未来能够取得更加丰硕的成果。

烟草育种学实习报告（推荐五篇）第一篇：烟草育种学实习报告烟草育种生产实习报告一、实习目的：通过烟草育种生产实习，进一步了解烟草的生长习性，将理论知识渗透到实践中。

强化理论和实践相结合，提高自身对现代烟草育种的理解和基本技能；提高和培养理论联系实际、独立分析和解决问题的能力，懂得根据市场需求变化来组织管理和经营农业生产。

二、实习时间：2012年3月10日到2012年9月30日三、实习内容：不论是直播还是催芽播种，烟草在播种之前要对种子进行处理。

通过种子处理，清除种子中的夹杂物，淘汰不饱满的种子，对提高种子的发芽势和发芽率有着显著作用。

同时通过药剂处理可以杀灭种皮上附着的病菌和病毒，有效地地减轻苗床期烟草病害的发生。

播前烟草种子处理主要包括以下几方面内容：（1）种子精选：目的是清除种子的夹杂物，淘汰不饱满的种子。

生产上多采用水选法。

将种子倒入盛有清水的小缸或其他器皿内。

烟草种子粒小而轻，比重明显比水小（烟籽比重约为0.9，水比重为1），初放入时种子到多漂浮在水面，应搅拌，使之浸泡均匀。

放置4-6小时后，饱满的种子下沉，不好的种子及夹杂物漂浮在水面，将漂浮物捞出，选留沉下去的种子。

水选后的种子晒干备用或随即消毒催芽。

（2）晒种：水选后的种子含水比较多，第一天要晒干种子表面水分，以手抓能松散为宜，在15-20℃下晒2-3天即可。

若气温超过20℃，采用间歇晒种方法，即每次晒几小时收藏起来，第二天再晒几小时，连晒2-3天。

（3）灭菌：清毒利用药剂杀灭烟种皮上附着的病菌和病毒。

常用药剂是稀释一千倍的硝酸银溶液，或稀释一百倍的硫酸铜溶液，或稀释五十倍的福尔马林溶液。

将需消毒的种子装入纱布袋内，浸入上述浓度的药液（温度为20℃左右）中，浸泡十五分钟。

浸泡时，将种子袋药液提出药液，再放入，重复几次，以使袋内种子充分接促药液。

取出种子袋占用清水充分冲洗净。

否则，易发生药害。

（4）催芽：催芽方法有布袋催芽和盆钵催芽。

布袋催芽要求装入种子的数量约为袋子容量的一半，布袋以能装0.25-0.5公斤干种大小为宜。

烟叶生产实验报告总结
本次烟叶生产实验旨在探究不同处理方式对烟叶生长的影响，并分析其对烟叶品质的影响。

实验中，我们将烟叶种植在相同的土壤条件下，分为三组进行处理。

第一组为对照组，不进行任何处理；第二组为施加化肥处理组；第三组为施加生物菌剂处理组。

通过长期观察，我们发现施加化肥处理组的烟叶生长速度较快，株高较高，叶片颜色较为鲜绿。

与对照组相比，该组烟叶产量明显提高，但品质方面表现出来的差异较小。

而施加生物菌剂处理组的烟叶生长情况也较好，生长速度和株高接近施肥组，但叶片颜色相对较浅。

然而，与对照组相比，该组烟叶产量有一定提高，且品质方面有明显改善。

烟叶的香气更加浓郁，质地更加饱满，烟叶口感也更加柔和。

综上所述，本次实验结果表明施肥处理能够提高烟叶的产量，而施加生物菌剂处理则能够提高烟叶的品质。

根据实验结果，我们可以针对具体需要，选择相应的处理方式，从而优化烟叶的生产和品质。

烟草叶片愈伤组织诱导与分化试验设计方案班第组一、实验目的：诱导烟草叶片长出愈伤组织（或根或者芽）二、实验用具：超净工作台、镊子、手术剪、酒精灯、培养皿、广口瓶、高压灭菌锅等。

三、实验材料与试剂1．实验材料烟草叶片2．试剂 MS培养基、75%酒精、0.1%升汞、无菌水、IAA(0.1mg/mL)、6BA( 0.1mg/mL)等四、实验方法与步骤1．培养基的制备与灭菌按配制培养基的方法配制MS基本培养基250mL。

根据实验目的，采用培养基配方为MS+6BA( mg/L) +NAA( mg/L)。

所有培养基均附加30g/L蔗糖，4g/L琼脂粉。

在高压灭菌前将pH用1mol/LNaOH调至5.8，然后分装到三角瓶，每瓶分装培养基大约40-50mL。

2．试剂、无菌水及培养皿的准备配制75%的酒精、0.1%升汞；将蒸馏水装入三角瓶或广口瓶，每瓶装50-60 mL，按照培养基灭菌的方法灭菌30min，即可获得无菌水；将剪裁好的滤纸放入洗净的培养皿中，每培养皿放3层，加少量蒸馏水润湿后，用牛皮纸或两层报纸将培养皿包严，高压灭菌30 min后备用。

3．接种室准备首先，用纱布蘸取75%酒精擦拭工作台台面，将接种用具、无菌蒸馏水、培养基等置于工作台上，打开工作台开关和紫外线灯，确认工作台正常送风后，开机30 min。

然后，用喷雾器向接种室空中喷洒75%酒精或打开接种室内的紫外线灯，进行空气灭菌。

4. 培养材料的表面灭菌从盆栽烟草植株上选取鲜绿、肥厚且充分展开的叶子，先用自来水冲洗30 min，用蒸馏水漂洗3次，然后在无菌条件下将其剪成适宜大小，放入广口瓶中。

先倒入75%酒精，摇动两三下（10s），立即将酒精倒出，然后加入0.1%升汞溶液，浸泡7min。

注意加入的升汞溶液应浸过叶片，浸泡过程中要不断摇动。

最后，将升汞倾出，加入无菌水摇动20-30 s倒出，重复用无菌水冲洗5次，备用。

5. 接种将经过表面灭菌的叶片按照无菌操作的要求取出，放入打开的无菌培养皿内。

烟草组织培养实验方案摘要本实验通过配制四种培养基来实现烟草种子萌发，种子苗叶片诱导、分化及植株再生，从而获得课题所需要的基因受体植株。

关键词烟草组织培养前言组织培养不仅是一种植物快速繁殖的手段,同时也是植物改良、种质保存和次生物质生产的理想途径。

烟草是典型的基因工程模式植物,易于进行组织培养,容易得到再生的转化植株。

一实验植物：华烟6号二实验材料：华烟6号种子三实验方法与步骤1．培养基的配制本次实验使用（1）种子萌发培养基：MS培养基+GA30.7mg/L；（2）愈伤组织诱导及其幼芽分化培养基:MS+2,4-D 0.5 mg/L +6-BA 1.0 mg/L；（3）幼芽增殖培养基：MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L；（4）生根培养基：MS+NAA 0.2 mg/L。

上述培养基均附加3%蔗糖，0.8%琼脂，pH5.8，培养温度25±2℃，光照强度2 000 lx。

2. 培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）3. 无菌苗的获得把烟草种子用市售丝袜（或纱布）包好，先分别用75%乙醇或无菌水浸泡30 s，用无菌水洗净表面抑制种子萌发的药物，待洗涤的水清澈透明，然后将烟草种子用70%酒精浸泡1 min, 10%NaClO消毒10 min,经无菌水漂洗后，在超净工作台处（紫外灭菌20～30min）接种于以配置好的（1）培养基,放入(27±1)℃的光照培养架中培养。

光照周期为10 h(8:00~18:00)光照,12 h暗培养。

种子苗具4~5叶时继代扩繁备用。

4. 烟草叶片愈伤诱导及不定芽分化在超净工作台上取上述烟草无菌苗幼嫩叶片1~2片于无菌培养皿中，将叶片切成1.0～1.5平方厘米的小方块，接入（2）中培养。

约2～3d后，叶片外植体卷曲、增厚、膨胀，15d后外植体脱分化形成疏松絮状浅黄绿色的愈伤组织，愈伤组织诱导率为100%。

30d后，从叶片外植体产生的疏松愈伤组织上分化出许多浅黄绿色芽点。

实验名称：烟叶生产实验实验时间：2023年X月X日实验地点：XX农业大学烟草试验田实验目的：1. 掌握烟叶生产的全过程，了解不同栽培技术对烟叶品质的影响。

2. 通过实验，验证不同施肥、灌溉、病虫害防治等管理措施对烟叶产量和品质的影响。

3. 提高烟草种植技术水平，为我国烟草产业提供科学依据。

实验材料：1. 烟草种子：品种为XX2. 土壤：肥沃、透气性好的沙壤土3. 肥料：氮、磷、钾复合肥4. 水源：无污染的自来水5. 病虫害防治药剂实验方法：1. 实验地选择：选择肥沃、透气性好的沙壤土作为实验地，要求地势平坦，排水良好。

2. 种植密度：按照每亩种植1200株烟苗的密度进行种植。

3. 肥料施用：底肥每亩施用氮、磷、钾复合肥100公斤，追肥分别在移栽后30天、60天、90天各施用一次，每次施用量为底肥的1/3。

4. 灌溉：根据天气和土壤墒情，适时灌溉，保持土壤湿润。

5. 病虫害防治：根据病虫害发生情况，及时喷施药剂进行防治。

6. 收获与品质测定：在烟叶成熟期进行收获，对烟叶进行外观品质、内在品质和化学成分的测定。

实验结果与分析：一、外观品质实验结果显示，不同管理措施对烟叶外观品质有显著影响。

施肥充足的烟叶叶片颜色鲜绿，叶片厚实，叶脉明显；而施肥不足的烟叶叶片颜色暗淡，叶片薄，叶脉不明显。

灌溉充足和病虫害防治及时的烟叶叶片整齐，无病虫害痕迹，而灌溉不足和病虫害严重的烟叶叶片扭曲，有病虫害痕迹。

二、内在品质通过化学成分测定，发现施肥充足的烟叶尼古丁、烟碱、总糖等成分含量较高，而施肥不足的烟叶含量较低。

灌溉充足和病虫害防治及时的烟叶香气浓郁，口感醇厚，而灌溉不足和病虫害严重的烟叶香气淡薄，口感较差。

三、产量实验结果表明，施肥充足、灌溉及时、病虫害防治良好的烟叶产量最高，平均每亩产量可达200公斤；而施肥不足、灌溉不足、病虫害严重的烟叶产量最低，平均每亩产量仅为100公斤。

结论：1. 施肥、灌溉、病虫害防治等管理措施对烟叶产量和品质有显著影响。

烟叶唇柱苣苔不定芽的诱导因子摘要：以烟叶唇柱苣苔无菌叶片为试验材料，研究培养基pH值、无机盐浓度、蔗糖浓度、植物生长调节剂种类及配比等对不定芽诱导的影响，以期筛选出最佳诱导培养基。

结果表明：不定芽诱导的最佳培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L，灭菌前pH值为6.0，40d不定芽诱导率为100%，不定芽数平均为9.58个/张，生长势好。

关键词：烟叶唇柱苣苔；叶片；不定芽；组织培养苦苣苔科植物具有极重要的生物学价值和分类意义[1]，其种类繁多，全世界约有150属3000余种，我国有58属约463种[2]，其中海南省约有13属21种1变种，而特有种10种[3]。

苦苣苔科植物中许多种类是重要的观赏植物、药用植物和特种蔬菜。

烟叶唇柱苣苔（Chiritaheterotricha）是苦苣苔科唇柱苣苔属多年生草本植物，生于海拔约430m的山谷林中或溪边石上，是海南特有的野生花卉，其花冠淡紫色或白色，极为优雅，而且花期长，四季长绿，适合观赏和园艺。

此外，唇柱苣苔属植物具有广泛的适应性[4]，因而烟叶唇柱苣苔具有极大的开发潜力。

目前，烟叶唇柱苣苔仍处于野生状态，未进行商品化开发。

由于人类活动的干扰、生态环境恶化以及自身的原因，烟叶唇柱苣苔资源逐渐减少，因此极有必要进行组织培养研究，以满足烟叶唇柱苣苔的保护和开发利用的需要。

本试验以烟叶唇柱苣苔无菌叶片作为材料，较系统地研究叶片分化不定芽过程中的若干影响因素，以期筛选出最佳的不定芽诱导培养条件，快速建立烟叶唇柱苣苔组培技术体系。

1材料与方法1.1试验材料植株采自海南省保亭县。

取幼叶进行表面消毒后培养获得的无菌叶片作为试验材料。

1.2试验方法在基本培养基中添加不同种类和浓度的植物生长调节剂，除试验项目以外，所有处理中的基本培养基中含食用蔗糖30g/L、卡拉胶9g/L，灭菌前pH值为6.0，光照强度1500lx，光照时间9h/d，培养温度（26±2）℃。

利用植物生长调节剂诱导烟草器官分化的基础教学实验李玉明, 王洪钟, 谢莉萍, 张贵友【摘要】摘要：在MS培养基中加入植物生长调节剂,诱导无菌烟草叶片的生长与分化,其中:2,4-D 可以诱导叶片生成愈伤组织；NAA与6-BA浓度比为5∶1时,可以诱导叶片生成不定根；NAA与6-BA浓度比为1∶5时,可以诱导叶片生成不定芽。

【期刊名称】实验技术与管理【年(卷),期】2016(000)001【总页数】4【关键词】基础实验; 组织培养；诱导分化; 2,4-D ；NAA； 6-BA实验技术与方法有关植物生长调节剂诱导植物生长分化的研究十分普遍, 其中NAA和6-BA两种生长调节剂对不同种植物诱导分化出根和芽的相关研究较多[1-9]，但尚未见NAA和6-BA对模式植物烟草叶片的诱导结果。

因此,经过设计不同浓度、不同比例的NAA和6-BA,找到最为符合诱导根、芽分化的浓度比。

该实验使学生在掌握植物组织培养技术的同时还学习到有关植物细胞全能性和生长调节剂的相关知识。

植物细胞的全能性,即植物体的每个细胞携带着一套完整的基因组,并具有发育成完整植株的潜在能力。

因为每个细胞都来自受精卵,所以带有与受精卵相同的遗传信息。

细胞分化完成后,就受到所在环境的束缚,相对稳定,但一旦脱离原来所在的环境、成为离体状态时,在适宜的营养和外界条件下,就会表现出全能性,生长发育成完整的植株[10]。

植物组织培养是指在无菌条件下,分离并在培养基中培养离体植物组织(器官或细胞)[11]。

当烟草叶片被剪成1 cm2大小的外植体后,叶片边缘创伤部位失去原有的叶的表皮、叶肉等组织结构。

在2,4-D诱导的作用下,退回到没有分化的无组织的细胞团或愈伤组织,这个过程也叫脱分化；在不同比例的NAA和6-BA 的诱导作用下,叶片边缘创伤部位还能分化出不定根或不定芽。

1 实验1.1 实验材料与仪器实验材料:烟草Nicotiana tabacum。

实验仪器:超净工作台、高压灭菌锅、人工气候箱、电子天平、pH计、移液器、剪刀、枪形镊、烧杯、量筒、药勺、玻璃棒、平皿、组织培养瓶等。

烟草化学抑芽剂田间药效试验摘要：为了筛选对烤烟腋芽有明显抑制效果的抑芽剂，对止芽素、仲丁灵、氟节胺三种药剂的抑芽效果进行了比较试验。

结果表明，三种药剂对烤烟腋芽均有一定的抑芽作用，其中以仲丁灵的抑芽效果最好。

关键词：烟草；抑芽剂；腋芽烟草每个叶腋都有腋芽，所有腋芽都能萌发成枝、开花，但是只有打顶后，顶端优势解除，腋芽才会快速萌发，并消耗大量的养分，影响到烟叶的产量和品质，［1～2］因此，打顶抹芽是提高烟叶产量和产值的重要措施。

［3］但是人工抹芽既费工又麻烦，且不及时、不彻底，易造成烟杈丛生、烟花满田，也易传染病害。

世界各国都在研究和推广化学药剂抑制烟草腋芽。

研究结果表明，化学除芽具有省时省工、增产提质等优点，我国各烟区也正在大力研究推广化学抑芽的方法，［4～6］为了筛选出对烤烟腋芽有明显抑制效果的抑芽剂，2009年在陕西洛南烟区进行了几种烟草抑芽剂田间药效试验。

1材料与方法1.1试验地点及品种试验地点设在洛南县景村镇刘涧村，试验田土壤黄壤，土层深厚，肥力中上等，地面平整，光照充足，排灌方便，交通便利。

前茬作物为烤烟，供试烟草品种为秦烟96。

1.2供试药剂供试药剂为：绿士止芽素（山东省绿士农药有限公司）、仲丁灵（山东鸿汇烟草用药有限公司）、氟节胺（浙江禾田化工有限公司）。

1.3试验设计试验设7个处理，每小区100株（60 m2）。

各小区田间随机区组排列。

施肥方案为2009年洛南县平衡施肥方案。

表1施肥方案处理号药剂浓度施药方法1 绿士止芽素 100倍液涂抹2 绿士止芽素 100倍液杯淋3 仲丁灵100倍液涂抹4 仲丁灵100倍液杯淋5 氟节胺350倍涂抹6 氟节胺350倍杯淋7 手工抹芽（CK）——各处理在顶叶长度达20 cm以上，烟田50%烟株中心花开放时打顶抹芽，并在24 h内用药（药后24 h内无降雨）。

杯淋法处理，每株用药液量为20 mL；涂抹法处理，用毛笔将配制成的药液涂抹在每一个腋芽上；手工抹芽处理，每调查一次抹芽一次。

细胞工程学实验报告专业：_ 09级生物技术一班__ 姓名：___ __ 学号：____ _ _实验一实验室的设计及基本设备一、实验室的设计1、实验室设计的原因：植物细胞工程实验室的流程是：清洗玻璃器皿、配制培养基、高压气灭菌、无菌操作、培养室培养植物、植物材料的检测。

因此实验室需要有清洁器皿和配制培养基的准备室，无菌操作室或超净工作台，供培养材料用的培养室，检查培养情况并做记录的实验室。

一般在设计上，每个组分最好按工作的自然程序连续排列，如：准备室、灭菌室、无菌操作室、植物材料培养室、检测室。

实验室的安排应合理简洁，并要求无尘、灭菌、光洁、清净。

2、实验室的布局要求：（1）准备室准备室可以是一大间或几小间，主要用于进行一切与实验有关的准备工作：完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、器脿醮涤、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养材料的预处理等。

必要的设备有:准备室应具备实验台、药品柜、水池、仪器、药品、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器等。

洗涤灭菌区功能：完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等。

要求：洗涤灭菌室根据工作量的大小决定其大小，一般面积控制在30-50m2。

在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽，用来清洗玻璃器皿。

中央实验台还应配置2个水槽，用于清洗小型玻璃器皿。

如果工作量大，可以购置一台洗瓶机。

准备1-2个洗液缸，专门用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿，地面应耐湿并排水良好。

设备：水池、落水架、中央实验台、高压灭菌锅、超声波清洗器、干燥灭菌器（如烘箱）等。

（2）无菌室（接种室）进行植物细胞、组织培养操作的关键是无菌条件。

室内的墙壁要求光滑平整；地面为光洁的水磨石，平坦无缝，避免灰尘积累，便于清扫。

紫外灯一般在3到4平方米内安装1到2只；在工作台下安置紫外灯紫外灯可使灭菌彻底。

同时，工作台上方安装平板玻璃，以防操作时落灰。

条件不好时，用无菌箱代替无菌室，箱内用紫外灯灭菌。

烟草叶外植体不定芽的诱导王万军;王文芳;张宝;阎福秀;白守信【期刊名称】《西北植物学报》【年(卷),期】1993(13)4【摘要】烟草花药单倍体试管植株Nc89、Nc82、6186,取其完全展开之叶片,切成5mm×5mm大小的叶块,将之接种于补加BA(2mg/L)、蔗糖(5%)、琼脂(0.55%),pH5.8的MS培养基中,然后将其置于23—25℃、12h/d光照的培养间中培养,大致经过14—18天后,在叶外植体边缘部分出现了肉眼可见的绿色小芽,待芽长至约5mm大小时,将其从外植体上分离并置于含1/2 MS大量元素、全量MS 微量元素、铁盐及有机物质,并补加KH_2PO_4(50mg/L)、IAA(1mg/L)、蔗糖(3%)、琼脂(0.55%),pH5.8的过渡生根培养基中,待3个星期后芽已长出了3片小叶时再将之转移到含1/2 MS大量元素、MS全量铁盐,并补加IAA(1 mg/L)、蔗糖(1%)、琼脂(0.55%),pH5.8的生根培养基上,5—6天后芽上基部有小根出现,再经过两个星期,试管苗长出了较发达的根系。

待其长至3cm—4cm高时,移栽入土,移栽后试管苗成活率高,苗长势很好。

【总页数】4页(P308-311)【关键词】烟草;不定芽;组织培养;培养基【作者】王万军;王文芳;张宝;阎福秀;白守信【作者单位】陕西省中国科学院西北植物研究所【正文语种】中文【中图分类】S572.01【相关文献】1.银杏不同外植体的细胞学观察——体胚发生不定芽诱导及不定根的发生过程 [J], 盛丽莉;陈颖;汪南阳;徐彩平;曹福亮2.垂枝樱花外植体灭菌及不定芽的诱导研究 [J], 王红梅;李园莉;李洪光;董晓辉3.灵宝大枣无菌外植体的建立及茎段不定芽的诱导 [J], 王小国4.‘金都一号’火龙果组织培养之外植体处理优化及不定芽诱导 [J], 洪青梅;胡文斌;李洪立;汪琴琴;何云;濮文辉;李琼5.外植体预处理对胡桃楸成熟胚不定芽的诱导 [J], 张建瑛;殷东生;葛文志;田新华;李京;祁永会因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。