实 验 考 核 复方乙酰水杨酸中咖啡因的含量测定

《药物分析》实验指导书一、前言药物分析实验是整个药物分析课的重要组成部分。

其主要目的是：1.通过试验，检验在课堂上所学的理论知识。

使学生对理性知识的理解更加深入，掌握得更加牢固。

2.通过试验，训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，使学生获得从事药物分析科研工作的基本训练。

在实验中，重点是要加强对学生基本操作技能的训练。

二、实验须知在药物分析实验中，所用的药品多数是挥发性、易燃、有毒、有腐蚀性、刺激性、甚至爆炸性药品，试验操作又常在加温加压等情况下进行，需要各种热源、电器或其他仪器，操作不慎易造成火灾、爆炸、中毒、触电等事故。

但只要加强爱护国家财产和保障人民生民安全的责任心，提高警惕，消除隐患，注意实验规则，事故是可以避免的。

三、实验规则1.试验前必须预习实验内容，了解原理和操作规程。

随时记录试验应记的项目，以作正式报告。

2.试验前应清点并检查仪器是否完整，装置是否正确，合格后方可进行试验。

试验时不准做无关的事情，严禁吸烟，不得擅自离开，并应随时注意反应情况，仪器有否漏气，破裂等。

3.药品仪器都是国家财产，须节约爱护使用，公用物品，用完后立即放回原处。

不可调错瓶塞，以免污染，仪器要洗刷干净。

4.操作易燃性有机溶剂，回流、蒸馏、减压蒸馏时，不能明火直接加热，要放沸石或一端封死的毛细管，若在加热时发现无沸石则应冷却后再加，防止爆沸冲出。

减压系统应装有安全瓶。

加液时应停火或远离火源，一般无漏气开口，冷凝水要通畅。

起封易挥发溶剂瓶盖时，脸面要避免开瓶口慢慢启开，以防气体冲脸上。

5.有毒具腐蚀药品应妥善保管，操作后要立即洗手。

勿粘及五官和创口，以免中毒。

6.实验中，有毒气或腐蚀性气体发生适应在通风橱中进行操作。

必要时可戴好防护用具进行工作。

7.若将玻管插入塞中时，可在塞孔中涂些水和甘油等润滑剂，用布包住波管使其旋转而入，防止折断割伤。

8.试验台上不放无用的药品、仪器，在实验时要做到水槽、仪器、桌面、地上清洁整齐。

实验三复方对乙酰氨基酚片的含量测定、目的要求1、掌握复方片剂中各成分含量测定的基本原理和操作方法。

2、掌握复方片剂的分析特点。

二、基本原理复方对乙酰氨基酚片中含有对乙酰氨基酚、乙酰水杨酸和咖啡因三种主成分。

各成分之间性质差异大。

乙酰水杨酸为芳酸类药物，具酸性，K a =3.27X 10-4,可用酸量法测定；对乙酰氨基酚为芳酰胺类药物，具酰胺基，呈中性，但具潜在芳伯氨基，可将其在酸性条件下水解后用重氮化法测定；咖啡因为黄嘌呤类生物碱，碱性极弱，K b =0.7X 10-14,不能采用一般生物碱的含量测定方法，但可将其与碘发生定量沉淀以后，剩余的碘用硫代硫酸钠滴定从而求得咖啡因的含量。

反应式表示如下： 1、乙酰水杨酸的测定原理等当点时,由于生成物水杨酸钠的水解,溶液呈微碱性,所以选用碱性区域变色的指示剂--酚酞。

2、对乙酰氨基酚的测定原理COOHOOC +NaOH CH 3 3 COONa O +H 2O OCCH 3 33、咖啡因的测定原理O CH3H 3CNH 3CN 3N ＋2I+KI+H 2SO 4NO N N OCH 33 I 2（剩余）+2Na 2s 2O 32NaI+Na 2s 4O 6三、实验方法取本品20片，精密称定，研细备用。

（一）乙酰水杨酸的含量测定药典规定每片检品中含乙酰水杨酸应为0.219g 〜0.242g 。

精密称取上述细粉适量（约相当于乙酰水杨酸0.4g ）,置分液漏斗中，加水15ml ,摇匀，用氯仿振摇提取4次（20ml ,10ml ,10ml ,10ml ）,提取氯仿液用同一分水10ml 洗涤，合并氯仿洗液，置水浴上蒸干，残渣加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml 溶解后，加酚酞指示液3滴，用0.1mol/L 氢氧化钠液滴定，即得。

每1ml0.1mol/L 氢氧化钠液相当于18.02mg 的C 9H 804。

按下式计算每片含乙酰水杨酸的克数g /片=T ".f xWW 平均片重称样量其中：T 一为滴定度；V —消耗滴定液体积；f-为滴定液浓度校正因子酣战指示液取酶酰1外加乙醉100ml 使溶解，即得付变色池围仅无色》红人（二）对乙酰氨基酚的含量测定CH 3N HII 4+KHs04 CH 3 3COOH碘与淀粉作用，变蓝OII—C-CHj 终点时4HCI+2Kl +2KCL+2Mme1+2 +NaNO 2——AHO药典规定每片检品中含对乙酰氨基酚应为0.120g〜0.132g。

CPA矩阵法测定复方乙酰水杨酸片中三组分的含量黄喜茹;刘伟娜;张振华;唐双强;付超美【摘要】目的建立复方乙酰水杨酸片含量测定的新方法.方法采用CPA-矩阵法,不经分离直接测定复方乙酰水杨酸片中三组分的含量.计算程序采用BASIC语言编制.结果乙酰水杨酸、咖啡因、非那西丁的平均回收率和相对标准偏差分别为101.7 %,0.26 %;101.3 %,0.21 %和97.60 %,0.67 %.结论本法可不经分离,直接测定复方乙酰水杨酸片的含量.【期刊名称】《河北医科大学学报》【年(卷),期】1999(020)005【总页数】2页(P290-291)【关键词】复方合剂/分析;分光光度法/仪器和设备;阿斯匹林/投药和剂量;咖啡因/投药和剂量;非那西丁/投药和剂量【作者】黄喜茹;刘伟娜;张振华;唐双强;付超美【作者单位】河北医科大学药学院,石家庄,050017;河北医科大学药学院,石家庄,050017;河北医科大学药学院,石家庄,050017;河北医科大学药学院;河北医科大学药学院,石家庄,050017【正文语种】中文【中图分类】R927.2MeSHedrug combinations/anal; spectrophotometry/instrum; aspirin/admin; caffeine/ admin; phenacetin/admin复方乙酰水杨酸片为乙酰水杨酸(阿斯匹林)、咖啡因和非那西丁的复方制剂,是临床上广泛应用的解热镇痛药。

测定三组分的含量,中华人民共和国药典〔1〕规定用氯仿提取分离后用重氮化法测定。

操作烦琐费时,误差较大。

据报道复方乙酰水杨酸片中三组分的含量测定有系数倍率法〔2〕、零交导数与多波长系数分光光度法〔3〕、多元逐步回归分光光度法〔4〕、共轭梯度法〔5〕、PLS(偏最小二乘法)-紫外法〔6〕等。

本文采用CPA-矩阵法,用BASIC语言编制程序〔7〕,测定其三组分的含量,方法简便快速,结果满意。

ＨＰＬＣ测定痛宁胶囊中乙酰水杨酸和咖啡因的含量建立同时测定痛宁胶囊中乙酰水杨酸和咖啡因含量的方法。

方法采用ODS 柱，流动相：乙腈－水－甲酸（20∶30∶1），流速1.0ml/min，检测波长276nm，外标法计算。

结果：线性范围分别是：乙酰水杨酸0.3～3.0mg·ml-1,r=0.9999；咖啡因0.03～0.28mg·ml-1,r=0.9999，RSD分别为0.8%、1.2%。

结论：本法操作简便，结果准确，可以有效地控制质量。

标签：高效液相色谱法；乙酰水杨酸；咖啡因1仪器与试药Waters1525高效液相色谱仪，2487检测器（均为美国Waters公司）；乙酰水杨酸对照品、咖啡因对照品（均由中国药品生物制品检定所提供）；乙腈为色谱纯，痛宁胶囊（贵州圣都制药有限公司，批号06121028、07021005、07021006）。

2方法与结果2.1溶液的配制（1）精密称取105℃干燥至恒重的乙酰水杨酸和咖啡因对照品适量，用流动相作溶剂分别稀释至50ml制成含乙酰水杨酸6mg/ml和咖啡因0.7mg/ml的浓溶液备用；（2）分别取上述浓溶液各2ml,稀释至10ml制成含乙酰水杨酸1.2mg/ml的对照溶液①（见下图）、含咖啡因0.14mg/ml的对照溶液②（见下图）及含上述浓度的乙酰水杨酸+咖啡因混合对照溶液③（见下图）备用；（3）按样品相同处方配制空白辅料，按上述方法处理后制成空白对照溶液④（见下图），备用。

2.2色谱条件与系统适用性试验色谱柱：C18柱（4.6×250nm），流动相：乙腈-水-甲酸（20∶30∶1），流速：1.0ml·min-1，柱温：30℃，进样量：10μl，检测波长：276nm。

分离图谱及保留时间的确定：分别取2.1.2下对照溶液①②③（见下图）和空白对照溶液，分别进样，记录色谱图。

结果表明，乙酰水杨酸和咖啡因分离良好，分离度大于9，拖尾因子分别为0.89和0.88；溶剂及辅料不干扰测定。

实验三 复方对乙酰氨基酚片的含量测定一、目的要求1、掌握复方片剂中各成分含量测定的基本原理和操作方法。

2、掌握复方片剂的分析特点。

二、基本原理复方对乙酰氨基酚片中含有对乙酰氨基酚、乙酰水杨酸和咖啡因三种主成分。

各成分之间性质差异大。

乙酰水杨酸为芳酸类药物，具酸性，K a ＝3.27×10-4，可用酸量法测定；对乙酰氨基酚为芳酰胺类药物，具酰胺基，呈中性，但具潜在芳伯氨基，可将其在酸性条件下水解后用重氮化法测定；咖啡因为黄嘌呤类生物碱，碱性极弱，K b ＝0.7×10-14，不能采用一般生物碱的含量测定方法，但可将其与碘发生定量沉淀以后，剩余的碘用硫代硫酸钠滴定从而求得咖啡因的含量。

反应式表示如下：1、乙酰水杨酸的测定原理 COOH O C OCH 3+NaOH COONa O C O CH 3+H 2O等当点时，由于生成物水杨酸钠的水解，溶液呈微碱性，所以选用碱性区域变色的指示剂--酚酞。

2、对乙酰氨基酚的测定原理3、咖啡因的测定原理NNOOH3CCH3NN＋2I+KI+H2SO4NNOOH3CCH3NCH3NHI I4+KHSO4CH3I2(剩余)+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6三、实验方法取本品20片，精密称定，研细备用。

（一）乙酰水杨酸的含量测定药典规定每片检品中含乙酰水杨酸应为0.219 g～0.242 g。

精密称取上述细粉适量（约相当于乙酰水杨酸0.4g），置分液漏斗中，加水15ml，摇匀，用氯仿振摇提取4次（20 ml，10 ml，10 ml，10ml），提取氯仿液用同一分水10ml洗涤，合并氯仿洗液，置水浴上蒸干，残渣加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用0.1mol/L氢氧化钠液滴定，即得。

每1ml 0.1mol/L氢氧化钠液相当于18.02mg的C9H8O4。

按下式计算每片含乙酰水杨酸的克数平均片重称样量片＝WT/⨯⋅⋅WfVg其中：T－为滴定度；V－消耗滴定液体积；f-为滴定液浓度校正因子（二）对乙酰氨基酚的含量测定药典规定每片检品中含对乙酰氨基酚应为0.120 g ～0.132 g 。

使用高效液相色谱法测定复方乙酰水杨酸片组分含量的实践作者：张艳来源：《商情》2019年第28期【摘要】为了测定复方乙酰水杨酸片组分中的含量，笔者创新性的采用高效液相色谱法对其进行测定，其结果准确可靠，并可大大缩减检验步骤，并能及时提供检验数据。

【关键词】高效液相色谱 ;复方乙酰水杨酸片 ;含量 ;测定复方乙酰水杨酸片，属于水杨酸类药，可用于发热、头痛、神经痛、牙痛、月经痛、肌肉痛、关节痛。

当复方乙酰水杨酸片药出厂之前，医药企业必需对其中的成分进行合格性检测，以确保人们用药的有效性及安全性。

测定复方乙酰水杨酸片组分含量的常规方法是采用部颁标准化学药品及制剂第一册（WS1-65（B）-89）规定的化学方法，这种方法测定的数据准确可靠，但检验步骤繁琐，耗时长，偶尔也会引起检验结果的假性偏高。

由于复方乙酰水杨酸片组分与复方对乙酰氨基酚片组分接近，参考复方对乙酰氨基酚片组分的测定方法。

笔者创新性的采用高效液相色谱法来测定复方乙酰水杨酸片组分的含量。

其检验结果准确度更高，大大缩短了检验周期。

其具体方法如下：一、仪器、试药及色谱条件（1）所用的仪器：日本岛津高效液相色谱仪、万分之一的电子天平、超声波清洗仪。

（2）所用的试剂：四氢呋喃、甲醇、磷酸、三乙胺。

（3）色谱条件。

流速1.0ml/min，检测波长为254nm，柱温为25°C，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱分析柱（4.6*250），流动相为四氢呋喃-甲醇-磷酸（0.01mol/L）-三乙胺（1：43：56：0.1）。

二、使用高效液相色谱法测定复方乙酰水杨酸片组分含量的实践（一）各组分峰面积与浓度线性试验精密称取乙酰水杨酸0.1g于100ml容量瓶中，加乙醇5ml，溶解后加水稀释至刻度。

再取0.5ml、1ml、2ml、4ml、8ml于10ml容量瓶中用水稀释至刻度，得到浓度为0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml的溶液。

实验考核：复方乙酰水杨酸中咖啡因的含量测定
10药本班考核老师：
备注：
一操作
1. 空白是否与样品同样操作（取另一容量瓶同法操作，同法过滤）
2. 过滤操作：滤器与滤渣是否洗涤，合并（2分）三靠（滤纸贴着漏斗壁，玻璃棒靠滤纸引流，漏斗下部尖嘴靠容量瓶壁）（4分）弃去初滤液（2分），滤纸上沿应底于漏斗边缘。

（2分）
3. 容量瓶；调节刻度时的操作（2分），刻度线是否与眼睛同一水平（2分），振摇的操作（1分）
4.移液管：用待吸溶液润洗2—3次（3分），调好刻度（3分），管的外壁下端的液滴要擦干（2分）
5.滴定管：检查是否漏水，洗涤和润洗（2分），赶气泡，手握住活塞的方法（2分），调刻度，初读的记录（2分），读数时是否从铁架台拿下来垂直读数，滴定过程（4分）
6.计算结果：数据是否会处理（4分）
二合作
实验态度：保持操作环境整齐，干净，合作精神。

（10分）
1。