酵母样真菌药敏试验

酵母样真菌最低抑菌浓度药敏试验的临床价值研究陈佳;陈光福【期刊名称】《基层医学论坛》【年(卷),期】2024(28)5【摘要】目的对酵母样真菌抗真菌药物最低抑菌浓度(minimal inhibit concentration,MIC)进行药敏试验,为临床合理用药提供相关依据。

方法采集铜仁市人民医院从2020年1月—2022年6月根据常规培养方式培养出344株酵母样真菌进行MIC药敏试验,对试验结果进行分析,统计标本来源类型、科室、不同种类酵母样真菌的分布情况,对主要酵母样真菌的药敏性进行分析。

结果培养出的344株酵母样真菌标本来源科室主要为重症医学科(23.55%)、神经外科(15.12%);标本类型主要为尿液标本(56.69%),其次为分泌物标本与切口分泌物标本(均12.21%);酵母样真菌种类主要为白色假丝酵母菌(39.83%),其次为光滑假丝酵母菌(22.97%)、克柔假丝酵母菌(14.83%)、热带假丝酵母菌(9.88%)。

白色假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌对5-氟胞嘧啶、两性霉素B的敏感性较高,克柔假丝酵母菌对两性霉素B、伏立康唑的敏感性较高。

结论应当对重症医学科、神经外科的患者及中老年患者加强酵母样真菌感染的预防,尤其是对尿路感染的预防。

不同种类的酵母样真菌对不同抗真菌药物敏感性有所不同,酵母样真菌MIC药敏试验对临床上合理使用抗真菌药物具有重要的指导价值。

【总页数】4页(P91-94)【作者】陈佳;陈光福【作者单位】铜仁市人民医院【正文语种】中文【中图分类】TS2【相关文献】1.致外阴阴道假丝酵母菌病白假丝酵母菌对9种抗真菌药物最低抑菌浓度测定2.特比萘芬对24株黑酵母样真菌的体外药敏试验研究3.微量液体培养基最低抑菌浓度法与罗氏比例法在结核分枝杆菌药敏试验中的价值比较4.四种中药对临床常见酵母样真菌的抑菌效果5.纸片扩散法检测酵母样真菌对氟康唑药敏试验及临床应用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

临床酵母样真菌感染特点及药敏分析目的通过了解沈阳医学院沈洲医院检验科微生物室收检的各类临床标本中分离到的各类酵母样真菌的菌群分布特点及耐药情况，从而指导临床合理使用抗真菌药物、有效预防真菌感染和耐药性的发生。

方法所有菌株均分离自沈洲医院临床送检的痰液、尿液、粪便、咽拭子、分泌物等。

实验采用贝瑞特公司的沙保弱琼脂培养基分离培养真菌，用法国生物梅里埃公司生产的ATB Expression 微生物半自动鉴定/药敏分析仪进行真菌鉴定和药敏分析。

结果临床酵母样真菌检出率最高的为白假丝酵母菌（65.6%），其次为热带假丝酵母菌（13.9%）、光滑假丝酵母菌（11.1%）、近平滑假丝酵母菌（6.1%）、其他酵母样真菌（3.3%）；180株酵母样真菌对5种抗真菌药物（两性霉素B、5-氟胞嘧啶、伏立康唑、伊曲康唑、氟康唑）的平均耐药率依次为2.1%、5.5%、22.3%、25.6%、39.6%。

结论180株酵母样真菌中，白假丝酵母菌检出率最高，其次为热带酵母菌；标本来源中痰液标本所占比例最高，其次为便和尿液标本；耐药监测中酵母样真菌对两性霉素B耐药性最低，对氟康唑耐药性最高。

标签：酵母样真菌；抗真菌药物；药敏试验；耐药真菌广泛存在于自然界，并寄生于人体皮肤和黏膜，属于条件致病菌。

近年来，由于广谱抗生素、抗肿瘤药物、激素和免疫抑制剂在临床的广泛应用，器官移植及导管技术的开展以及艾滋病和糖尿病发病率的不断上升，真菌感染的发病率呈上升趋势，临床上分离到的酵母样真菌菌株逐年增多，加之抗真菌药物有限，而耐药率有增无减。

因此，加强真菌感染的控制及药物监测，有效防治真菌感染及提高治愈率已成为目前临床医学领域中的一个重要课题。

现将沈洲医院2011年1～12月临床标本中分离到180株的酵母样真菌分布及耐药情况报道如下：1 材料与方法1.1 标本来源180株酵母样真菌均分离自沈洲医院2011年1～12月临床送检的痰液、尿液、粪便、咽拭子、分泌物等。

酵母样真菌ROSCO 法药敏试验标准操作程序1正确进行酵母样真菌 ROSCO 法药敏试验操作，监测耐药性酵母菌的出现及其耐药性变化，为酵母样真菌治疗提供参考依据。

2将含有定量抗真菌药物的药片贴在已接种待测菌的琼脂平板，药片所含药物吸收琼脂上水溶解后向周围区域扩散，形成递减的梯度浓度，待测菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。

抑菌圈的大小反映了待测菌对测定药物的敏感性，根据厂家提供的药敏试验判读标准，判断抗真菌药物的体外敏感性。

33.1 培养基：采用 FMH 琼脂，同时添加氯霉素控制细菌的污染。

厚度严格控制为4cm。

3.2 接种液的配置：3.2.1 接种液的配制中，浓度的控制是最为重要的，接种液过浓会导致比咯类/咪唑类抑菌圈判读困难，而出现假阴性结果。

3.2.2 对于大多数的菌株，接种浓度为 5*105CFU/ml (先配 0.5 麦氏浊度，再用生理盐水1 ：1稀释)；3.2.2.1 对于克柔氏念珠菌(C.krusei)，先配0.5麦氏浊度，再用生理盐水1：10稀释；3.2.2.2 对于隐球菌属(Cryptococcus)，先配1.0麦氏浊度，无需稀释。

3.2.3 接种前，平板先置于 35℃干燥 20-25 分钟。

对于9cm平皿吸 0.5ml接种液，14cm吸1.0ml接种液，倾注于平板表面，涂布均匀，用移液管吸走多余液体。

然后，平板在 35℃干燥10分钟，帖药片。

最终要求，在琼脂表面，菌落恰呈合生长。

3.3 培养条件：在多数情况下，应在 35℃培养 18-24 小时后马上测量抑菌圈，因为培养时间过长会导致假耐药，特别是对于咪唑/吡咯类药物。

即培养过夜后应检查平板，如果抑菌圈清晰，应该马上测量。

如果对于某些菌株在培养过夜未见生长，那么应该再多培养 24 小时。

而对于隐球菌属在 30℃ 培养 42-48 小时。

4严重系统性感染株判读标准注：氟胞嘧啶 10ug 推荐用于黑曲霉试验， 而氟胞嘧啶 1ug 适用于念珠菌和其他酵母菌 55.1.对于多烯类抗真菌药(包括两性霉素 B 和制霉菌素)，测量无可见生长的清晰的抑菌圈，抑菌圈 出现的菌落必须视为耐药突变株；5.2 对于吡咯/咪唑类抗真菌药以及特比奈芬，在正常生长菌落形成的抑菌圈内，可能会出现由较小的部分被抑的菌落形成抑菌圈。

两种酵母菌药敏试验的介绍及比较【摘要】目的：建立一种简便、实用的酵母菌药敏试验方法。

方法：酵母菌纸片扩散法。

结果：38株真菌在M44 P方案平皿和M27 A 方案平皿上对氟康唑的平均抑菌圈直径分别为31.32 mm和31.26 mm，t=0.16，P=0.874>0.05；38株真菌在M44 P方案平皿和M27 A方案平皿上对沃尔康唑的平均抑菌圈直径分别为33.50 mm和33.24 mm，t=1.15，P=0.257>0.05。

结论：M44 P酵母菌纸片扩散法敏感试验方案操作简便、实验结果稳定、可靠。

【关键词】酵母菌药敏试验方法酵母菌纸片扩散法比较随着各种抗真菌药物的相继问世和耐药真菌菌株的出现，真菌药物敏感性试验已越来越受到人们的重视，为此美国临床试验室标准化委员会（NCCLS）于2003年介绍了M44 P酵母菌纸片扩散法敏感试验方案，制定了氟康唑（floconazole）和沃尔康唑（voriconazole）质控株的参考范围及氟康唑的抑菌圈解释标准，研究已证实氟康唑对酵母菌的纸片扩散法敏感试验有很好的重复性，可方便、准确地检测酵母菌对氟康唑的敏感性［1～5］。

我科同时用M44 P方案和M27 A方案酵母菌纸片扩散法敏感试验两种方法对36株临床常见酵母菌及2株质控株进行氟康唑和沃尔康唑纸片扩散法敏感试验进行比较。

1 材料与方法1.1 试验菌株36株临床常见酵母菌来源于临床各科送检的痰液、尿液及阴道拭子等标本，用SDA（沙保弱培养基）分离培养，先经科玛嘉显色培养基初步鉴定，后经API 20C准确鉴定，其中有白色假丝酵母菌19株，热带假丝酵母菌5株，光滑假丝酵母菌4株，克柔假丝酵母菌3株，近平滑假丝酵母菌3株，季也蒙假丝酵母菌2株；质控菌株：白色假丝酵母菌ATCC90028 1株和近平滑假丝酵母菌ATCC22019 1株均为北京协和医院细菌室老师惠赠。

1.2 设备(35±1)℃孵育箱，0.5号麦氏标准比浊管（自配方法：取0.5 ml 0.048 mol/L BaCl2(1.175%W/VBaCl2²2H2O)加入99.5 ml 0.18 mol/ H2SO4溶液中即可获得0.5号麦氏标准比浊管。

酵母菌MIC检测标准操作规程（微量液基稀释法）编号：页数：制订人：（签名）（日期）审核人：（签名）（日期）批准人：（签名）（日期）颁发日期：生效日期1.培养基配置：RPMI 1640 培养液：RPMI1640（Gibco BRL，Invitrogen）10g，NaHCO3 2.0g，吗啉基丙磺酸（morpholinepropanesulfonic acid, MOPS, Sigma）34.5 g（0.165 M），加三蒸水900 ml 溶解，1 M NaOH 调pH 至7.0（25℃），定容至1 000ml，过滤除菌，4℃保存。

沙堡葡萄糖琼脂培养基（sabouraud dextrose agar, SDA）：蛋白胨10g，葡萄糖40g，琼脂18g，加三蒸水900 ml 溶解，加入2 mg/ml 氯霉素水溶液50 ml，调整pH 至7.0，定容至1 000 ml，115℃，高压灭菌，4℃保存。

2.抗真菌化合物的配制：（1）待筛选化合物统一用DMSO溶解，配成6.4mg/ml母液，-70℃保存；（2）药敏板制备前将50μl母液加入到450μl RPMI 1640 培养液中，充分振荡混匀，稀释为640μg/ml 中间浓度备用。

3.药敏板制备：（1）取无菌96 孔板，于每排1 号孔加RPMI 1640培养液200 μl 作空白对照；（2）96孔板每排3～12 号孔各加RPMI 1640培养液100 μl；（3） 2 号孔分别加RPMI 1640培养液180μl 和640μg/ml 抗真菌化合物溶液20 μl，充分混匀；每排为1个待筛选化合物；最后一排为质控氟康唑；（4）2～11 号孔10 级倍比稀释，使各孔的最终药物浓度分别为64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25和0.125 μg/ml，各孔中DMSO 含量均低于1％；12 号孔不含药物，作阳性对照；（5）药敏板配好之后如不立即接种真菌则必须用保险塑料袋封好，储存于-70℃。

酵母菌药敏实验解释标准
酵母菌药敏实验是一种用于测试酵母菌对不同抗生素或抗真菌药物的敏感性的实验。

在这个实验中，酵母菌会被暴露在不同浓度的药物中，然后观察其生长情况，以确定药物对酵母菌的杀菌或抑菌效果。

以下是对酵母菌药敏实验解释的一些标准：
1. 实验步骤，首先需要培养酵母菌，并将其接种到含有不同浓度抗生素或抗真菌药物的琼脂平板上。

然后在一定时间内观察酵母菌的生长情况，比较不同药物对其的影响。

2. 结果解读，根据实验结果，可以判断出酵母菌对不同药物的敏感性。

通常会使用药物最低抑菌浓度（MIC）来表示酵母菌对药物的敏感程度，MIC值越低，表示酵母菌对药物越敏感。

3. 实验条件，在进行酵母菌药敏实验时，需要严格控制实验条件，包括温度、湿度、培养基成分等，以确保实验结果的准确性和可重复性。

4. 应用范围，酵母菌药敏实验通常用于临床医学和科研领域，帮助医生选择最有效的治疗方案，也可用于评估新药物的抗菌或抗
真菌活性。

总的来说，酵母菌药敏实验是一种重要的实验方法，可以帮助人们了解酵母菌对药物的敏感性，为临床治疗和药物研发提供重要参考依据。

酵母样真菌感染的菌群临床分布与药敏分析内容摘要：目的了解临床酵母样真菌的感染类型、分布及其对常用抗真菌药物的敏感性，为临床诊断治疗提供正确的用药依据。

方法采用常规方法分离培养真菌，用法国生物梅里埃公司生产的ATBExpression微生物自动鉴定/药敏分析仪进行真菌鉴定和药敏分析。

结果396株酵母样真菌中，白色假丝酵母菌检出率最高(72．3%)，其次为热带假丝酵母菌(15．91%)，光滑假丝酵母菌(6．82%)。

酵母样真菌对5氟胞嘧啶、两性菌素B、氟康唑、依曲康唑的敏感性分别为98．02%，98．43%，77．38%，77．76%。

结论临床酵母样真菌感染以白色假丝酵母菌为主，对5氟胞嘧啶、两性菌素B敏感性较高，对氟康唑、依曲康唑有不同程度的耐药，因此，药敏监测是非常必要的，临床医生应根据药敏结果合理使用抗真菌药物。

酵母样真菌：感染；抗真菌药物；敏感性近年来，随着广谱抗生素、激素、免疫抑制剂的广泛应用，导管插管、器官移植和其他介入性治疗的普遍开展，以及艾滋病患者的不断增加，由真菌引起的条件致病菌感染日益增多[1]。

患者多数为自身感染，尤以酵母样真菌引起的深部真菌感染最为常见，并且常常成为终期感染。

同时抗真菌药物的使用又使真菌出现了耐药现象，给临床治疗带来了困难。

由于抗真菌药物品种有限，研究真菌的耐药性并控制其耐药性发生，显得尤为重要。

为了解酵母样真菌感染的菌群分布及药敏状况，现对我院1月—12月临床标本中分离出的396株酵母样真菌进行鉴定和药敏分析，从而指导临床合理使用抗真菌药物，有效预防真菌感染和耐药性发生。

1材料与方法1．1标本来源396株酵母样真菌均分离自我院临床送检的痰液、尿液、粪便、咽拭子、分泌物等。

1．2培养鉴定标本接种于沙保罗培养基30℃24h培养，涂片染色确认为酵母菌后，严格按操作说明书接种法国生物梅里埃公司生产的ATBID32C鉴定条，并用ATBExpression鉴定仪进行鉴定。

酵母样真菌鉴定流程及药敏试验方法英文回答：Identification of yeast-like fungi and the methods for antifungal susceptibility testing are essential in clinical laboratories for the diagnosis and treatment of fungal infections. In this response, I will explain the general process of yeast-like fungi identification and the methods used for antifungal susceptibility testing.Yeast-like fungi identification process:1. Specimen collection: The first step is to collect a clinical specimen from the patient, such as blood, urine, or respiratory secretions. The specimen should be collected using aseptic techniques to avoid contamination.2. Microscopic examination: The collected specimen is then examined under a microscope to identify the presence of yeast-like fungi. The characteristic morphology of yeastcells, such as budding or pseudohyphae formation, can help in the initial identification.3. Culture: If yeast-like fungi are observed in the microscopic examination, the specimen is cultured on appropriate agar media, such as Sabouraud dextrose agar or chromogenic media. The culture is incubated at an optimal temperature for yeast growth, typically around 30°C.4. Colony morphology: After incubation, the colonies that grow on the agar media are examined for their macroscopic characteristics, such as color, texture, and size. These characteristics can provide additional clues for identification.5. Biochemical tests: Various biochemical tests are performed to differentiate different species of yeast-like fungi. These tests may include carbohydrate assimilation tests, enzyme production tests, and other metabolic reactions. The results of these tests help in narrowing down the identification to a specific species.6. Molecular methods: In some cases, molecular methods such as polymerase chain reaction (PCR) or DNA sequencing are used for more accurate and rapid identification of yeast-like fungi. These methods can detect specific genetic markers or sequences that are unique to different species.Antifungal susceptibility testing methods:Once the yeast-like fungi are identified to the species level, it is important to determine their susceptibility to antifungal drugs. This helps in selecting the mosteffective treatment for the patient. The two commonly used methods for antifungal susceptibility testing are:1. Disk diffusion method: In this method, paper disks containing different antifungal drugs are placed on an agar plate that has been inoculated with the yeast-like fungi. The plate is incubated, and the zone of inhibition around each disk is measured. A larger zone of inhibitionindicates greater susceptibility to the drug.2. Broth microdilution method: This method involvespreparing a series of dilutions of antifungal drugs in a liquid growth medium. The yeast-like fungi are then added to each well of a microtiter plate containing the drug dilutions. The plate is incubated, and the minimum inhibitory concentration (MIC) of the drug, which is the lowest concentration that inhibits fungal growth, is determined.中文回答：酵母样真菌的鉴定和药敏试验方法对于临床实验室诊断和治疗真菌感染至关重要。