蛋白质组学研究进展_百替生物
- 格式:pdf
- 大小:150.92 KB
- 文档页数:2
蛋白质组学研究进展及其应用前景第一章:引言蛋白质是生命体系中最重要的分子之一,它们扮演着多种生理和生化功能。
随着科技的进步,研究人员越来越关注蛋白质的研究。
蛋白质组学作为一门新兴的学科,不断为生物医学领域带来新的科学突破。
本文将介绍蛋白质组学的研究进展及其应用前景。
第二章:蛋白质组学的研究进展1. 蛋白质组学的概念蛋白质组学是指利用各种现代高通量技术手段,系统地研究生物体内所包含的所有蛋白质的表达、定位、相互作用、代谢过程等,从而揭示蛋白质组在细胞、组织、生理、病理等层面上的功能及其与疾病的关系。
2. 蛋白质组学的技术手段蛋白质组学的技术手段主要包括:二维凝胶电泳、液相色谱-质谱联用技术、蛋白质芯片技术、分子成像等。
3. 蛋白质组学在疾病研究中的应用蛋白质组学可以对疾病发生发展及治疗过程进行深入的研究。
通过分析病人及对照组的蛋白质组差异,可以筛选出与疾病有关的蛋白质标记,从而帮助临床医生进行早期诊断、病因探究及治疗评估等方面的工作。
第三章:蛋白质组学在不同领域中的应用1. 蛋白质组学在药物研发中的应用蛋白质组学对药物的研发有着重要的作用。
通过蛋白质组分析,可以研究靶标蛋白的结构、生理功能及其与药物的作用机制,从而为药物研究提供有力的支持。
2. 蛋白质组学在食品安全中的应用蛋白质组学可以对食品中的蛋白质成分进行分析,快速寻找致敏、毒性等有害成分,从而为食品质量控制提供重要的科学支持。
3. 蛋白质组学在植物研究中的应用蛋白质组学可以研究植物的生长发育过程、各器官的特定蛋白质、产量和品质等方面,从而为农业生产提供重要的技术支持。
第四章:结论蛋白质组学的研究进展及其应用前景十分广阔。
未来,随着蛋白质组学技术的不断进步,该领域的应用范围必将不断扩大,为生命科学领域带来更多新的科学育成。
蛋白质组学研究方法及应用的研究进展谭伟,黄莉,谢芝勋(广西壮族自治区兽医研究所,广西畜禽疫苗新技术重点实验室,广西南宁 530001)摘要:蛋白质是细胞生理功能的具体执行者,并常以蛋白复合体或与核酸相互作用的形式来发挥作用。
蛋白质组代表在一定时间和特定条件下,1个细胞、组织或生物个体所表达的全部蛋白,因此蛋白质组会随着时间和空间的改变而发生动态变化。
蛋白质组学从整体水平研究蛋白质组的结构、功能、表达模式及其相互作用的方式。
根据研究内容的不同,蛋白质组学可分为表达蛋白质组学、结构蛋白质组学和功能蛋白质组学等。
研究蛋白质组学有助于了解蛋白的结构、细胞的功能、生命的本质及活动规律,为疾病的诊断、治疗、疫苗及新药开发提供科学依据。
研究蛋白质组学的常用手段主要有:双向聚丙烯酰胺凝胶电泳、质谱、酵母双杂交系统及蛋白芯片法等,文章将对蛋白质组学常用的技术方法及应用进行综述。
关键词:蛋白质组学;双向凝胶电泳;质谱;蛋白质分析中图分类号:Q51 文献标识码:A 文章编号:1671-7236(2014)09-0040-07 随着21世纪初人类基因组序列测定的完成,科学家们对人类基因组的结构有了更清晰和全面的了解。
人类基因与其蛋白表达产物之间并非总是一对收稿日期:2014-05-07作者简介:谭伟(1956—),男,北京人,博士,研究方向:病毒分子生物学。
通信作者:谢芝勋(1963—),男,研究员,主要从事畜禽传染病分子生物学研究。
E-mail:xiezhixun@126.com基金项目:国家自然科学基金(31160512);广西特聘专家专项基金(2011B020);广西科技重大专项(1222003-2-4)。
一的关系,有的基因可表达2种或2种以上的蛋白,而且mRNA的表达水平也不一定能十分准确地反映出细胞内相应蛋白的含量(Gygi等,1999;Ander-son等,1997),因此,仅仅研究基因的核苷酸序列不足以充分了解其表达蛋白的结构、功能及翻译后加工修饰状态等。
生物医学中的蛋白质组学研究进展近年来,生物医学研究中的蛋白质组学已受到广泛关注。
蛋白质组学是一种高通量技术,可以对大量的蛋白质进行分析,从而为研究生物学、生物化学、医学、药学等领域提供更深入的了解和新的解决方案。
蛋白质组学研究是一种把人体中的所有蛋白质进行系统分析的科学方法。
通过蛋白质组学研究,可以加深人们对蛋白质的认识,探讨蛋白质在复杂生物学基础上的功能以及与疾病的关系。
这一方法已经极大地推动了生物学、生命科学和生物医学的发展。
近年来,许多科学家已经把研究重心转向蛋白质组学,在这一领域里取得了许多进展。
现在,蛋白质组学已经成为医学诊疗和新药研发的重要方法。
一、蛋白质组学技术蛋白质组学技术是指将蛋白质从生物样品中提取出来,并通过分离和鉴定来确定其种类、数量、结构和功能等的技术。
具体包括质谱技术、二维凝胶电泳、蛋白质芯片、蛋白质相互作用技术等。
1.质谱技术质谱技术最为成熟,在蛋白质组学中得到广泛应用。
分析前,蛋白质需要经过某些步骤,如消化、分离、富集,最后才能进入质谱仪。
2.二维凝胶电泳二维凝胶电泳分离、定量、鉴定和分析蛋白质是蛋白质组学中最经典和传统的方法之一。
这种技术可以将复杂的蛋白质混合物分离成数千个不同的蛋白质,对于大量蛋白质的鉴定具有非常大的优势。
3.蛋白质芯片蛋白质芯片被认为是蛋白质组学领域中非常有前途的技术之一,即将大量不同的蛋白质在几张平凡玻片或其他基材上通过特殊的技术进行分析。
蛋白质芯片具有高通量、高精度、高效性和可重复性,对于筛选药物靶点、发现新的蛋白质以及蛋白质相互作用等方面都具有很强的优势。
4.蛋白质相互作用技术蛋白质相互作用技术通过探测不同蛋白质之间的相互作用,能够解决许多疾病发生的分子机制问题。
蛋白质相互作用技术已经成为细胞生物学、医学等领域的研究重点。
二、蛋白质组学在疾病的研究中的应用蛋白质组学关注蛋白质的表达、定量、亚细胞位点定位、翻译后修饰等,在生物医学研究中,已经广泛地应用于疾病的诊断、治疗和预防等方面。
蛋白质组学的研究方法和进展蛋白质是细胞中最重要的一类生物大分子,不仅构成生物体的大部分物质,而且参与多种生物过程。
在生物学的研究中,蛋白质组学就是广泛用于研究蛋白质及其解析结构、功能和相互作用的一种技术。
蛋白质组学技术的不断发展,为科学家们提供了更广阔的研究领域和更深入的认识和理解。
一、蛋白质分离技术蛋白质在细胞中有着多种不同的类型和数量,分离这些蛋白质对于进一步的研究至关重要。
凝胶电泳是一种最早应用于蛋白质分离的技术,在这一技术中,蛋白质被分离到一条凝胶条中,并且能够根据其分子量进行鉴定。
近年来,液相色谱技术得到快速发展,以逆相高效液相色谱(RP-HPLC)为主的技术广泛应用于蛋白质的分离、富集和纯化中。
二、蛋白质鉴定技术现代蛋白质组学技术的特点是高通量、高分辨率、高灵敏度和准确率。
鉴定样品中的所有蛋白质非常复杂,多组学技术的整合在蛋白质组学的研究中显得尤为重要。
代表性的鉴定技术是质谱法,可将蛋白质析出后离线或在线进行鉴定。
其中,MALDI-TOF 质谱技术是蛋白质鉴定中的重要方法之一,该技术使用激光脱附离子化(MALDI)策略以减少化学修饰和分离过程对蛋白质结构的影响。
三、蛋白质表达技术从DNA转录到蛋白质翻译的过程,是生物体逐步实现功能的一个重要环节。
蛋白质表达技术是在外部体系中重现这一过程的有效方法,在研究中应用极为广泛。
常见的蛋白质表达系统有大肠杆菌、酵母、哺乳动物等,其中,大肠杆菌是最常用的单细胞表达体系。
近年来,蛋白质表达与修饰的转化药学已经成为一个热门领域,各种新型表达体系也层出不穷。
四、蛋白质数据分析鉴定蛋白质,只是蛋白质组学研究的第一步,有关数据分析和解释的关键环节,对于进一步的研究显得尤为重要。
目前,由于蛋白质比较庞大并且互相之间联系复杂,因此数据分析技术的不断发展就格外重要了。
从最初的数据搜索和标识,到后来的蛋白质序列分析、结构预测、功能预测和网络分析等,蛋白质数据分析技术已经成为蛋白质组学研究的重要环节。
蛋白质组学研究的现状和未来随着科学技术的不断发展,各个领域也越来越得到人们的重视。
其中,生命科学领域的研究成果对医学、生物学等领域都有着深刻的影响。
而蛋白质组学作为一种较为新兴的技术,其研究也受到了越来越多的关注。
本篇文章将介绍蛋白质组学研究的现状和未来。
一、蛋白质组学研究的背景蛋白质是生命体中最为重要的分子之一,它们负责调节生命体内的许多关键过程,如催化化学反应、支持细胞结构和传递信号等。
蛋白质组学研究的目的就是发现、识别、定量、分析和模拟生物体中所有蛋白质在特定时间和环境下的表达、结构、功能、相互作用和调节。
与其它技术不同的是,蛋白质组学通过综合分析其它多种技术获得的大量数据,从而全面认识生物体中蛋白质在宏观和微观层面上的作用机制。
二、蛋白质组学研究的核心技术蛋白质组学是一种综合的技术,并需要多种技术的有机结合才能实现从样本中获得大量有关蛋白质的信息。
在这个过程中,其中最主要的技术是质谱技术和蛋白质芯片技术。
1、质谱技术质谱技术是一种分析技术,通过质谱仪将大分子物质分解成其成分离子,并对这些离子的分子质量进行质量测定、分析和鉴定。
应用到蛋白质组学研究中,它可以通过肽段质谱和蛋白质质谱分析等手段,对蛋白质进行鉴定和定量的工作。
同时,质谱技术作为高通量研究中的核心技术之一,也可通过基于“表征-鉴别-定量”策略从样本中高效地获得大量的蛋白质。
在高通量蛋白质组学研究中,质谱技术所扮演的角色越来越重要,其自动化、灵敏度、精度、准确度和高通量检测能力甚至被认为是蛋白质组学研究的“金标准”。
2、蛋白质芯片技术蛋白质芯片技术是以蛋白质为基质,类似于DNA芯片的方法检测和解析蛋白质功能。
与质谱技术所使用的方法不同,蛋白质芯片技术则基于蛋白质本身对于化学环境、温度、酸碱性、电场等因素的变化反应产生的行为,检测和解析蛋白质的性质和功能。
对于蛋白质芯片技术的发展实现,一方面这种技术可针对某些单一蛋白质的研究,另一方面也可针对高通量蛋白质研究。
NR4A2基因与关节炎研究进展林坚伟医学院06本硕二班学号:200671045指导教师:吴炳礼李恩民指导教师点评:该生能阅读较多的外文文献,对该基因以及关节炎的关系作出较为全面、深入的阐述,在说明疾病的原因中,将目的基因与其他因素联系在一起,较为合理的解释了目的基因与关节炎的关系。
摘要:锌指蛋白(zinc finger protein)通常由一系列锌指组成。
具有重复结构的氨基酸模式,相隔特定距离的胱氨酸结合锌指,能与某些RNA/DNA结合。
转录因子(transcription factor)是起正调控作用的反式作用因子。
转录因子是转录起始过程中RNA聚合酶所需的辅助因子。
NR4A2基因编码一个能结合DNA的锌指蛋白,在关节炎的发生和发展中起着一定的作用。
NR4A2的官方全称为细胞核受体第四亚科,A组,第二成员。
它的原始来源于HGNC:7981。
NR4A2的别称有NOT;RNR1;HZF-3;NURR1;TINUR,它的基因定位于2q22-q23。
NR4A2这个基因编码类固醇——甲状腺荷尔蒙——类维生素A受体。
这个编码蛋白可能充担转录因子的角色。
基因突变与病症德关系主要归因于多巴胺能的机能障碍,包括帕金森病,精神分裂症和躁狂忧郁。
基因的误调节可能与风湿性关节炎相关联。
虽然它们被描述为能可选择性接合转录物的变异体,但是它们的生物学有效性一直到现在还没有确定下来。
1.NR4A2的官方全称细胞核受体第四亚科,A组,第二成员2.NR4A2别称的符号相关的核受体:NURR1T细胞的核受体:NOT诱导信使核糖核酸形成的受体:TINUR3.NR4A2的基因定位NR4A2的基因定位于2q22-q23﹙如图1)图14.NR4A2遗传基因的结构通过普通的顺序的分析,Ichinose及其科研小组和Torii及其科研小组认为单拷贝NR4A2遗传因子包括了8个外显子和跨越8.3kb的距离﹙见图2)。
他们记录了其在遗传基因中潜在的调节区,并一致同意将其定为NFKB,CREB,和SP1结合位点[1-2]。
蛋白质组学的应用与发展趋势1. 简介蛋白质组学是研究蛋白质的组成、结构和功能的一门科学,是基因组学和转录组学的重要补充和延伸,也是生物学研究中的关键部分之一。
随着技术的进步和方法的不断发展,蛋白质组学在生命科学的研究中扮演着越来越重要的角色。
本文将介绍蛋白质组学的应用及其未来的发展趋势。
2. 蛋白质组学的应用蛋白质组学在生命科学研究中具有广泛的应用。
以下是几个主要的应用领域:2.1 蛋白质组学在疾病研究中的应用蛋白质组学在疾病研究中发挥着重要的作用。
通过比较疾病组织与正常组织的蛋白质组,可以发现与疾病相关的蛋白质表达的差异。
这些差异可以帮助我们了解疾病的发病机制,发现新的治疗靶点,并开发新的药物。
例如,通过蛋白质组学的研究,科学家们在癌症研究中发现了许多与肿瘤相关的蛋白质,为癌症的早期诊断和治疗提供了新的思路和方法。
2.2 蛋白质组学在药物研发中的应用蛋白质组学在药物研发中也扮演着重要的角色。
通过蛋白质组学的研究,可以对药物与蛋白质之间的相互作用进行全面的了解。
这有助于发现新的潜在药物靶点,优化已有药物的结构,提高药物的疗效和安全性。
蛋白质组学还可以用于药物的代谢和毒性研究,帮助提前筛选出具有潜在不良反应的药物候选分子,减少对动物模型的依赖,加快药物的研发进程。
2.3 蛋白质组学在农业科学中的应用蛋白质组学在农业科学中也有重要的应用价值。
通过研究作物的蛋白质组,可以了解作物的生长发育过程,优化农业生产技术,提高农作物的产量和品质。
此外,蛋白质组学还可以帮助鉴定抗虫抗病的作物品种,并研究其抗虫、抗病的分子机制,为农业病虫害的防治提供新的思路和方法。
3. 蛋白质组学的发展趋势蛋白质组学的发展趋势可以从以下几个方面来进行预测:3.1 新技术的不断涌现随着科技的进步,新的蛋白质组学技术将不断涌现。
目前已有的蛋白质组学技术主要包括二维凝胶电泳、质谱和高通量测序等。
然而,这些技术都存在一定的局限性,如分辨率、检测灵敏度和通量等方面的限制。
蛋白质组学的研究方法和进展蛋白质组学的研究方法主要包括样品制备、质谱分析以及数据分析三个阶段。
在样品制备阶段,研究人员需要选择合适的方法来提取和纯化蛋白质。
常用的方法包括差凝蛋白法、电泳法、柱层析法等。
质谱分析是蛋白质组学的核心技术,主要有两种方法:质谱图谱分析和质谱定量分析。
质谱图谱分析可以通过比对已知蛋白质的质谱图数据库来鉴定未知蛋白质;质谱定量分析可以测定样品中各个蛋白质的数量变化。
数据分析是蛋白质组学研究的关键环节,用于解读大量的质谱数据。
近年来,蛋白质组学的研究取得了诸多重要进展。
首先,高通量质谱技术的发展使得大规模蛋白质组学研究成为可能。
比如,液相色谱和质谱联用技术(LC-MS/MS)可以同时检测数千种蛋白质,大大提高了鉴定和定量蛋白质的效率和准确性。
其次,全蛋白质组学的研究范围不断拓展。
除了研究细胞蛋白质组,研究人员还开始探索组织蛋白质组和生物体蛋白质组等更高层次的组学研究。
通过研究这些复杂组织中蛋白质的种类和功能,可以深入了解细胞和生物体的复杂生理和病理过程。
此外,蛋白质组学也开始向单细胞水平的研究发展,可能为研究细胞发育、疾病药物靶点等方面提供新的突破口。
蛋白质组学在医学和生命科学领域有着广泛的应用前景。
通过深入了解蛋白质组的变化和相互作用,可以揭示细胞和生物体的生理和病理过程,为疾病的早期检测和诊断提供重要依据。
蛋白质组学也可以用于发现新的疾病标志物、筛选新药靶点以及评估药物的疗效和安全性。
此外,蛋白质组学还可以用于研究生命起源、进化以及各种生物学过程的分子机制。
总之,蛋白质组学的发展必将为生命科学研究带来更多的突破和进展。
第章蛋白质组学第一节蛋白质组学的产生背景人类基因组计划已经告一段落,对人类基因组的测序工作已经完成。
基因组学取得的成果是非常令人振奋的,但是也随之产生了新问题。
大量涌出的新基因数据迫使我们不得不考虑这些基因编码的蛋白质有什么功能这个问题。
不仅如此,在细胞合成蛋白质之后,这些蛋白质往往还要经历翻译后的加工修饰。
也就是说,一个基因对应的不是一种蛋白质而可能是几种甚至是数十种。
包容了数千甚至数万种蛋白质的细胞是如何运转的?或者说这些蛋白质在细胞内是怎样工作、如何相互作用、相互协调的?这些问题远不是基因组研究所能回答得了的。
正是在此背景下,蛋白质组学(proteomics)应运而生。
蛋白质组(proteome)一词是马克.威尔金斯(Marc Wilkins)最先提出来的,最早见诸于1995年7月的“Electrophoresis”杂志上,它是指一个有机体在特定时期的全部蛋白质组成及其活动方式。
蛋白质组研究虽然尚处于初始阶段,但已经取得了一些重要进展。
当前蛋白质组学的主要内容是,在建立和发展蛋白质组研究的技术方法的同时,进行蛋白质组分析。
对蛋白质组的分析工作大致有两个方面。
一方面,通过二维凝胶电泳得到正常生理条件下的机体、组织或细胞的全部蛋白质的图谱,相关数据将作为待检测机体、组织或细胞的二维参考图谱和数据库。
一系列这样的二维参考图谱和数据库已经建立并且可通过互联网检索。
二维参考图谱建立的意义在于为进一步的分析工作提供基础。
蛋白质组分析的另一方面,是比较分析在变化了的生理条件下蛋白质组所发生的变化。
如蛋白质表达量的变化,翻译后修饰的变化,或者可能的条件下分析蛋白质在亚细胞水平上的定位的改变等。
为此,需要借助一些高通量、快速、准确、自动化程度高的技术和手段对研究对象进行处理,如激光显微切割技术、双色红外荧光检测技术、高通量全自动蛋白纯化及分析系统以及蛋白芯片技术等。
细胞或组织的蛋白质不是杂乱无章的混合物,蛋白质间的相互作用、相互协调是细胞进行一切代谢活动的基础。
蛋白质组学研究进展
一、蛋白质组学的概念
随着人类基因组图谱的绘制完成,生命科学研究进入后基因组时代。
后基因组时代生命科学的中心任务就是阐明基因组所表达的真正执行生命活动的全部蛋白质的表达规律和生物功能,即生命科学的研究重心将从基因组学转移到蛋白质组学。
蛋白质组这一概念是在1994年由澳大利亚学者Wilkins和Willian等人提出的。
蛋白质组指的是由一个细胞或一个组织的基因所表达的全部相应的蛋白质。
它与基因组相对应,也是一个整体的概念。
基因组是静态的,一个生物体的基因组在其一生中基本上是稳定不变的。
但基因组内各个基因表达的条件和程序则是随时间、地点和环境条件而变的,因而它表达的产物的种类和数量随时间、地点和环境条件而变化。
所以说蛋白质组是一个动态的概念,它是在人类基因组计划研究发展的基础上形成的新兴学科。
蛋白质组学随着蛋白质组的提出而自然孕育产生,但目前对蛋白质组学仍无明确定义。
一般认为它是研究蛋白质组或应用大规模蛋白质分离和识别技术研究蛋白质组的一门学科,是对基因组所表达的整套蛋白质的分析。
蛋白质组的概念从提出以来,也在不断地演变和深化。
较早的概念是指全部可能的蛋白质,而较新提出的一种概念则比较注重强调蛋白质的类型与数量在不同种类、不同时间和条件下的动态本质,即蛋白质与基因组相比是高度活跃的动态的。
因此蛋白质组学就是以细胞或组织不同时间、环境的所有蛋白质为研究对象,从总体上研究其蛋白质的种类、相互作用以及功能结构的新兴学科。
二、蛋白质组学的研究内容和方法
现阶段蛋白质组学的研究内容不仅包括对各种蛋白质的识别和定量化,还包括确定它们在细胞内外的定位、修饰、相互反应、活性和最终确定它们的功能。
大致可以分为两大类:即结构蛋白质组学和功能蛋白质组学。
前者的主要研究方向包括蛋白质氨基酸序列及三维结构的解析、种类分析及数量确定;后者则以蛋白质的功能和相互作用为主要研究目标。
由于对全部蛋白质的研究是非常困难的,因此科学家提出了两种截然不同的研究策略。
一种可称为“竭泽法”,即采用高通量的蛋白质组研究技术分析生物体尽可能多甚至接近所有蛋白质,这是一个符合蛋白质组学本质的策略,但具体实施困难太大。
另一种策略可称为“功能法”,即研究不同时期细胞蛋白质组成的变化,如蛋白质在不同环境下的差异表达,以发现有差异蛋白质种类为主要目标。
后一观点更倾向于把蛋白质组学作为研究生命现象的手段和方法。
目前蛋白质组学的主要方法可按结构蛋白质组学和功能蛋白质组学分为两大类。
结构蛋白质组学方面主要有:(1)蛋白质结构测定主要以X-光衍射为主要研究手段;(2)分析测定蛋白质种类及数量还是以双向电泳为主要手段,现在一张双向电泳图谱可辨出5000个~10000个蛋白质斑点;(3)质谱是对蛋白质鉴定的基本手段。
在功能蛋白质组学方面,比较常用的研究方法有酵母双杂交系统(及衍生出的单杂交系统、三杂交系统)和反向杂交系统、免疫共沉淀技术、表面等离子技术、荧光能量转移技术等。
三、蛋白质组学研究的意义
蛋白质是生理功能的执行者,是生命现象的直接体现者,对蛋白质结构和功能研究将直接阐明生命在生理或病理条件下的变化机制。
蛋白质本身的存在形式和活动规律,如翻译后修饰、蛋白质间相互作用以及蛋白质结构等问题,必须要依赖于对蛋白质组学的研究来解决。
蛋白质组学使我们从综合的和总体的角度,在分子水平上来研究和把握生命现象,这对于理解生命现象的本质,对于生命科学的每一个分支都将起到强有力的推动作用。
几乎所有的生理和病理过程,以及药物和环境因子的作用都依赖于蛋白质,并引起蛋白质的变化。
反之,对蛋白质组变化的分析也能提供对上述过程或结果的重要信息。
任何一种疾病在表现出可察觉的症状之前,就已经有一些蛋白质发生了变化。
因此寻找各种疾病的关键蛋白和标志蛋白,对于疾病
的诊断、病理的研究和药物的筛选都具有重要意义。
另外,蛋白质组学的研究手段也可以应用于农业研究、环境保护等。
蛋白质组学的研究对象已涵盖了原核生物、真核生物、动物、植物等,但由于微生物个体蛋白质种类少,已成为蛋白质组学研究的突破口,并已取得了很大进展,同时提出了亚蛋白质组学、比较蛋白质组学、定量蛋白质组学等新概念,推动了蛋白质组学的发展。
随着蛋白质组学研究的继续深入,将会出现更多的生命科学新学科,其研究成果的广泛应用也将会给人类的生活带来巨大的变化。
资源来源《中学生物教学》2003.03。