标准的PCR实验室简介
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pcr实验室建设要求
PCR实验室,又称为临床基因扩增实验室,是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的实验室。
在建设上,需要遵循以下规范:
1. 实验室布局应合理、紧凑,符合实际使用需求。
为避免交叉污染,各区域之间应相互独立。
此外,根据《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》的要求,PCR实验室一般由试剂储备区、标本制备区、扩增区、扩增分析区4个区域组成。
2. 实验室设备的选择十分关键,应优先考虑高品质、高可靠性的品牌和型号,且满足实际使用需求。
3. 考虑到实验室的安全性,建筑结构应稳固,能够承受可能的振动和冲击。
同时,材料选择上,应使用不燃或难燃的材料,并符合相应的防火和防爆要求。
4. 对于实验室的装修,耐腐蚀、易清洁的材料如瓷砖、玻璃等更为合适。
5. 除了上述要素,还需要考虑到环境安全,例如通过独立区域设计和压差控制等方式来保证实验室的安全独立性。
综上所述,PCR实验室的建设不仅需要考虑功能性和实用性,还需兼顾安全和舒适性。
在实际建设过程中,还需要根据具体需求和规范进行细致的规划和设计。
pcr实验室设计标准
PCR实验室设计的标准通常包括以下几个方面:
1. 空间分配:实验室空间应考虑到PCR反应的敏感性,避免
受到外界环境的干扰。
实验室应划分为不同的区域,如样品处理区、试剂准备区、PCR反应区、电泳分析区等,以避免交
叉污染。
2. 生物安全:PCR实验室需要具备生物安全级别,按照不同
的实验需求,可分为不同的生物安全级别实验室,如BSL-1、BSL-2等。
必要时需要采取措施,如为实验室设置生物安全柜、密封门、气流控制等,以确保实验人员和环境的安全。
3. 温度控制:PCR反应对温度的控制要求较高,因此实验室
应具备稳定的温度控制设备,如恒温干燥箱、恒温水浴等,能够提供所需的温度范围,并能保持温度的稳定性。
4. 洁净度要求:PCR实验中需要避免DNA污染,因此实验室
应具备洁净的条件,并保持无尘、无菌的环境。
实验室内的工作台、仪器、耗材等应经过适当的消毒处理。
5. 通风系统:PCR实验室应具备良好的通风系统,以保持空
气的流动和新鲜,减少实验室内可能存在的污染风险。
6. 实验室设备:PCR实验室应具备必要的设备,如PCR仪、
电泳装置、显微镜、离心机等,并根据实验需求选择合适的设备型号和规格。
7. 安全措施:为了保护实验人员和实验室环境的安全,需要设置相应的安全措施,如个人防护用品、紧急处理设施、紧急灭火装置等。
总之,PCR实验室的设计应考虑实验的特殊要求,如温度控制、生物安全和洁净度要求,并采取相应的措施保障实验质量和人员安全。
同时,根据实验规模和需求,适当选择合适的设备和器材,提高实验效率和可靠性。
pcr实验室设计标准PCR实验室设计标准是保证PCR实验室正常运行和实验结果准确可靠的基础。
PCR(聚合酶链反应)是一种基因分析技术,广泛应用于分子生物学、医学诊断、犯罪侦查等领域。
为了确保PCR实验的可靠性和重复性,合理设计PCR实验室的空间布局、设备配置、环境条件等是至关重要的。
本文将从空间布局、设备配置和环境条件三个方面,详细探讨PCR实验室设计标准。
一、空间布局PCR实验室的空间布局应充分考虑操作流程和安全要求。
首先,应将整个实验流程划分为不同区域,包括样本处理区、试剂配制区、反应体系制备区和扩增反应区等。
各个区域之间要有明确的界限,避免交叉污染。
其次,在样本处理区设置洗手池,并配备充足的洗手液和纸巾供使用者清洁双手。
此外,在试剂配制区设置专用台面,并配备必要的试剂瓶架和称量设备,保证试剂配制过程无误差。
为了确保PCR实验的准确性,反应体系制备区应与样本处理区和试剂配制区隔离开,以避免样本和试剂的交叉污染。
反应体系制备区应配备必要的实验仪器,如电动移液器、离心机等。
同时,为了减少实验误差,反应体系制备区内要保持整洁,并定期清理和消毒。
扩增反应区是PCR实验室的核心区域。
为了保证扩增反应的准确性和可重复性,扩增反应区要与其他实验室设备隔离开,并且在温度、湿度等环境条件上进行严格控制。
在扩增反应区内设置PCR仪器,并配备必要的试剂、耗材等。
二、设备配置PCR实验室的设备配置是保证实验结果准确可靠的重要保障。
首先,PCR仪是PCR实验室不可或缺的核心设备之一。
在选择PCR仪时,需要考虑其温度控制精度、均匀性以及操作便捷性等因素。
其次,在样本处理和试剂配制过程中需要使用电动移液器、离心机等常规分析仪器。
为了避免交叉污染,PCR实验室应配置专用的试剂瓶架、试剂瓶盖、移液枪等。
试剂瓶架应具备防滴漏功能,避免试剂的外泄。
移液枪应具备可调节容量的功能,以满足不同实验需求。
此外,PCR实验室还需要配备必要的消毒设备和生物安全柜。
pcr实验室国家标准PCR(聚合酶链反应)是一种在生物科学研究和医学诊断中广泛应用的技术。
为了确保PCR实验室的操作安全、实验结果的准确性和重复性,制定了PCR实验室国家标准。
本文将详细介绍PCR实验室国家标准的主要内容,以及对实验室运营的指导意义。
1. 实验室环境与设备1.1 实验室环境要求PCR实验室应位于独立的房间或隔离区,以防止杂交污染。
实验室应具备良好的通风系统,以保持空气流通并排除可能的有害气体。
实验室内温度和湿度应符合实验要求,避免对PCR反应产生影响。
1.2 实验设备要求PCR实验室应配备干净的台面和实验室用具,如PCR扩增仪、电脑、离心机、冷冻设备等。
所有设备应定期检修和维护,确保其正常运行并避免故障对实验结果的干扰。
2. 人员要求与操作规范2.1 实验人员要求PCR实验室的工作人员应具备相关的生命科学或医学背景,并接受PCR实验的专业培训。
实验人员应了解PCR实验的原理、方法和常见问题处理,掌握实验操作的规范和安全要求。
2.2 实验操作规范PCR实验室应制定实验操作规范和操作程序,明确实验步骤、操作顺序和使用的试剂、仪器。
实验人员在操作前应戴上实验手套、穿戴实验服,并按照规定的实验室行为规范进行操作。
实验完成后,实验室应及时清洁和消毒,保持实验环境的卫生。
3. 试剂与储存管理3.1 试剂采购与管理PCR实验室应从正规渠道购买试剂,并保证试剂的质量和纯度,以避免对PCR反应结果的影响。
实验室应建立试剂的进货、使用和库存管理制度,确保试剂的有效期和保存条件符合要求。
3.2 试剂储存管理PCR试剂应按照厂家规定的保存条件储存,避免温度过高或过低、光照等因素对试剂稳定性的影响。
试剂的存储应分类,并标注名称、批号、有效期等信息,以便实验人员快速找到所需试剂。
同时,实验室应定期对试剂进行检查和更新,避免使用过期或质量受损的试剂。
4. 实验质量控制与数据分析4.1 实验质量控制PCR实验室应建立质量控制制度,包括检测PCR反应的阴性对照和阳性对照,并按照设定的标准进行质量控制样品的处理和记录。
pcr实验室标准PCR实验室标准。
PCR(聚合酶链式反应)是一种常用的分子生物学技术,广泛应用于基因克隆、基因表达分析、疾病诊断等领域。
在PCR实验室中,严格遵循一系列标准操作程序对实验室环境、试剂、设备和操作人员进行管理,对PCR实验的准确性和可靠性至关重要。
本文将介绍PCR实验室的标准操作流程,帮助实验室工作人员规范实验操作,提高实验效率和结果可靠性。
实验室环境管理。
PCR实验室应具备良好的实验环境,包括洁净、无菌、无尘、无霉、无细菌等特点。
实验室内空气应保持流通,避免气味、异物等对实验产生干扰。
实验室内的工作台面、仪器设备、试剂瓶等应定期进行清洁消毒,保持干净整洁。
试剂管理。
PCR实验室应建立完善的试剂管理制度,对试剂的储存、使用、保管和报废进行严格管理。
试剂的储存温度和有效期应进行标注,避免使用过期试剂进行实验。
在使用试剂时,应按照操作规程准确称量、混合和稀释,避免试剂误用或交叉污染。
设备管理。
PCR实验室的设备应定期进行检测和维护,确保设备的正常运行和准确性。
在使用设备前,应进行预热、平衡和校准,避免设备误差对实验结果产生影响。
实验室应建立设备使用记录,及时发现设备故障并进行维修或更换。
操作人员管理。
PCR实验室的操作人员应接受相关的培训和考核,熟悉实验操作流程和安全注意事项。
在进行实验操作时,应严格按照操作规程进行,避免个人操作失误对实验结果产生影响。
操作人员应穿戴实验服、手套、口罩等个人防护用品,避免人为污染对实验产生影响。
实验操作流程。
PCR实验操作流程包括样品处理、反应体系配置、PCR扩增、扩增产物分析等步骤。
在进行实验操作时,应按照标准操作程序进行,避免操作失误对实验结果产生影响。
在每一步操作后,应及时记录实验数据和结果,以备后续分析和验证。
实验结果分析。
PCR实验结果的分析应准确、可靠、重复性好。
在进行实验结果分析时,应对实验数据进行统计和比对,排除实验误差和干扰因素,确保实验结果的准确性和可靠性。
pcr实验室设计标准及规范PCR实验室设计标准及规范。
PCR实验室是进行聚合酶链式反应(PCR)实验的重要场所,其设计标准和规范对实验室工作的顺利进行具有重要意义。
本文将就PCR实验室的设计标准及规范进行详细介绍,以期为相关工作提供参考和指导。
首先,PCR实验室的设计应符合相关的安全规范和实验室设计标准。
实验室内部应设置有足够的通风设施,以确保实验室内空气的流通和清洁。
此外,实验室内应设置紫外线消毒设备,以对实验室进行定期消毒和清洁,保证实验室内部的卫生安全。
其次,PCR实验室的设计应考虑实验室的使用需求和实验流程。
实验室内部应设置有充足的实验台和工作区域,以满足实验操作的需要。
实验室内部的设施和设备应按照实验流程进行合理布局,以提高实验的效率和准确性。
此外,实验室内应设置有充足的储存设施,以存放实验所需的试剂和材料。
另外,PCR实验室的设计应考虑实验室的安全性和实验操作的规范性。
实验室内部应设置有相关的安全警示标识,以提醒实验人员注意实验操作的安全性。
实验室内部应设置有相关的实验操作规范,以规范实验人员的操作行为,确保实验操作的规范性和准确性。
最后,PCR实验室的设计应考虑实验室的管理和维护。
实验室内部应设置有相关的管理制度和管理人员,以确保实验室的管理和维护工作得到有效的开展。
实验室内部的设施和设备应定期进行检查和维护,以确保实验室设施和设备的正常使用和安全性。
综上所述,PCR实验室的设计标准及规范对实验室工作的顺利进行具有重要意义。
实验室的设计应符合相关的安全规范和实验室设计标准,考虑实验室的使用需求和实验流程,确保实验室的安全性和实验操作的规范性,以及管理和维护实验室。
希望本文对PCR实验室的设计提供了一定的参考和指导,为相关工作的开展提供了有益的帮助。
PCR实验室设计说明PCR实验室分为四个区域,进入各工作区域必须严格按照单一方向进行,不同的工作区域使用不同的工作服(例如不同的颜色)。
工作人员离开各工作区域时,不得将工作服带出,四区域分别为:1.试剂配制区n2.样品处理区n3.核酸扩增区n4.产物分析区n如使用全自动分析仪,区域可适当合并, 三四区可合并为扩增产物分析。
各区的功能是:1.1. 1 试剂准备区:扩增试剂的配制、分装和保存。
1.1. 2 样品处理区:样品登记、分装;核酸提取、保存和加样。
1.1.3扩增产物分析区:扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。
1.2 扩增前区与扩增后区应严格分开,须使用不同的房间,两区之间最好有一定的间隔。
1.3 使用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂配制。
1.4 在满足下列操作和清洁处理要求的前提下样品处理区和试剂准备区可设在同一房间内1.4. 1 在生物安全柜内操作。
1.4. 2 每个实验人员、实验组分别使用各自的试剂及耗材。
1.4. 3 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。
1.4.4用有效的方法对操作区域和共享器具在实验前后进行清洁及消毒。
设计要求:PCR实验室可以是分散形式,也可以是组合形式,现要主要是以组合形式为主流。
完成一组PCR实验,通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程,若实验工艺需要,还应增加样品粉碎过程。
一、分散形式PCR实验室所谓分散形式PCR实验室,是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远,呈分散布置形式。
对于这种布置形式的PCF实验室,由于各个实验之间不易相互干扰,因此无需特殊条件要求。
二、组合形式PCF实验室所谓组合形式PCR实验室,是指完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置,组成独立实验区域的形式。
对于组合形式PCF实验室,由于各个实验间集中布置,容易造成相互干扰,因此,对总体布局以及屏障系统具有一定的要求。
各室在入口处设缓冲间,以减少室内外空气交换。
PCR实验室介绍引言:PCR(Polymerase Chain Reaction)是一种被广泛应用于分子生物学研究的技术,它可以在较短时间内从一小段DNA片段扩增出大量的复制品。
PCR实验室是进行PCR实验的专门实验室,本文将介绍PCR实验室的设备、工作流程和安全措施等方面的内容。
设备介绍:除了PCR仪,实验室还需要细胞培养箱和离心机。
细胞培养箱用于创建和维持生长细胞的理想环境,以供后续的PCR实验使用。
离心机则是在PCR实验过程中常用的实验设备之一,用于将液体样品离心,以分离DNA、RNA和蛋白质等。
此外,PCR实验室还配备聚丙烯酰胺凝胶电泳系统,用于检测PCR反应产物,并确定扩增的DNA片段大小。
在PCR实验室中还常见的设备有微量分光光度计,用于定量分析PCR反应体系中的核酸。
工作流程:首先,实验者需要进行实验计划,确定实验目的、设计引物、选择合适的模板DNA和引物。
在计划阶段,还需要考虑质量控制措施和实验室安全措施。
接下来,实验者需要准备样品。
这涉及到从生物体中收集并提取DNA。
实验者需要根据实验需求,采用适当的方法提取纯度高、浓度适当的DNA样品。
在样品准备完成后,实验者需要准备PCR反应体系。
PCR反应体系一般由模板DNA、引物、dNTP、缓冲液、酶和辅助添加剂等组成。
组装反应体系时,需要严格按照实验方案中的要求和浓度比例来配置反应体系。
实验者在配置PCR反应体系后,将其转移到PCR仪中进行扩增反应。
PCR反应具有多个循环的过程,每个循环通常包括三个步骤:变性、退火和延伸。
PCR仪将按照预设的温度参数控制循环反应的过程,持续进行若干个循环。
完成PCR反应后,实验者需要将PCR产物进行分离和检测。
这一步骤通常涉及到聚丙烯酰胺凝胶电泳,以测定PCR反应产物的大小和纯度。
分离和检测之后,实验结果可以用于后续的分析和实验目的。
安全措施:为了确保实验的安全进行,PCR实验室需要采取一系列安全措施。
PCR实验室目录什么是PCR实验室开展pcr实验室应具备的条件pcr实验室的功能怎样建立pcr实验室编辑本段什么是PCR实验室Pcr实验室又叫基因扩增实验室..PCR是聚合酶链式反应Polymerase Chain Reaction的简称..是一种分子生物学技术;用于放大特定的DNA片段;可看作生物体外的特殊DNA复制..通过DNA基因追踪系统;能迅速掌握患者体内的病毒含量;其精确度高达纳米级别;精确检测乙肝病毒在患者体内存在的数量、是否复制、是否传染、传染性有多强、是否必要服药、肝功能有否异常改变能及时判断病人最适合使用哪类抗病毒药物、判断药物疗效如何、给临床治疗提供了可靠的检验依据编辑本段开展pcr实验室应具备的条件1、必须拥有标准的的PCR荧光实验室; 实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃;而且与常规PCR相比;它有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点;目前已得到广泛应用..本文试就其定量原理、方法及参照问题作一介绍2、检测设备必须符合标准PCR荧光实验室设置要求; 荧光定量PCR仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+自动分析软件;构成PCR-DNA/RNA实时荧光定量检测系统..3、必须通过国家临床检验中心的验收和认证;4、检测人员必须通过国家临检中心业务培训并取得合格证书; PCR实验室内工作人员必须参加由国家卫生部或各省临床检验中心举办的临床基因扩增培训班;并持证上岗..PCR实验室通过验收;实验室至少必须应有两个以上持有“临床基因检测上岗证”..PCR实验室必须建立严格的实验室管理制度、建立标准化操作程序SOP、建立系列质量管理文件等;确保实验室日常运行符合国家卫生部的要求;确保检测结果准确、确保实验室卫生安全;确保实验室长期稳定运行5、必须在无菌无尘环境下进行操作编辑本段pcr实验室的功能PCR实验室认证证书1能够对患者病情进行科学、准确、实时的掌控;并结合抗HBV与T细胞免疫来打破免疫耐受;阻断肝病病毒复制的疗法、有效的分解肝炎病毒;解决了乙肝病毒易变异、耐药;病毒复制模板难以治疗;人体免疫耐受状态不易打破等医学难题;能迅速消除临床症状;而且有效抑制乙肝病毒复制;明显加快e抗原、抗体的血清转换速度;杀灭血液及肝细胞内的病毒;为防止再感染提供了长期保护;有效阻断和逆转肝纤维化、肝硬化进程..编辑本段怎样建立pcr实验室1、建立样品准备区这个区域专门用作样品的准备;在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施:⑴PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作..⑵组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理;以根据应用的需要提取DNA或RNA..⑶用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具;也不能用作操作靶序列..⑷DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作;以防止在吸取样品时有气溶胶遗留..⑸大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取..⑹管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生;而且管子不能用力崩开;这样会产生气溶胶..⑺任何时候都应该穿实验服和带手套;手套要经常更换;尤其在抽提过程中每一步之间都要更换..实验服要专门用于样品准备间;经常清洗..2、样品准备和RNA-PCR RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作;这样增加了样品之间污染的机会..为了避免这一问题;反转录一步可以在样品准备区进行..在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道..3、建立前PCR区.. 该去专门用于准备各种反应;这个区域必须保持干净;而且没有来自克隆和样品准备的污染..前PCR区必须要有试剂和准备;特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管.. 4、PCR实验室试剂的操作.. ⑴所用的所有溶液都应该没有核酸和或核酸酶DNase 和RNase污染..⑵所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水;用0.22μm过滤的;并且是高压灭菌..⑶在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂;在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应..⑷所用试剂都应该以大体积配制;实验一下看试剂是否满意;然后分装成仅够一次使用的量进行贮存..⑸所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子..⑹新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验..⑺样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存.. 5、在前PCR区建立PCR混合物..⑴可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃;在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用..⑵如果你的实验室使用多套引物;以致于配制包括所有试剂的单一反应混合物不够经济;可以考虑分装保存够一天的PCR成分..⑶作为一个规则;应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来分析样品配制和PCR前过程的效率和洁净程度..而且;你也希望通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物..⑷阴性样品要与每组样品同时做;以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产物的污染;阴性对照应该包括核酸以外的所有试剂..⑸当做阳性对照时;有两个理由决定了应该使用最少数量的核酸..⑹由于必须有对照反应;对照模板的特点应该予以考虑.. 6、控制污染的方法.. 已设计出很有力的酶学方法用来消除一种形式的污染—使用UNG;这一技术能有效地消除由PCR产物引起的污染..另一种控制污染的方法是使用紫外线;这种方法不能完全消除污染问题;但可以将污染降低几个数量级.. 7、后PCR区PCR完成以后;需要分析样品并解释数据;应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方..后PCR活动中使用的所用试剂、一次性耗材和仪器都必须是专门用于这一目的;决不能把实验室这一区域的试剂或仪器用于任何前PCR活动。
标准的P C R实验室简介 Company Document number:WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998标准的PCR实验室简介1、主体结构:主体为彩钢板、铝合金型材。
室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝,从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。
结构牢固,线条简明,美观大方,密封性好。
2、标准的三区分隔和气压调节:将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区。
整个区域有一个整体缓冲走廊。
每个独立实验区设置有缓冲区,同时各区通过气压调节,使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。
可打开缓冲区Ⅰ,缓冲区Ⅱ和PCR扩增区的排风扇往外排气,在实验区的外墙上和各扇门上都安装有风量可调的回风口,空气通过回风口向室内换气。
3、消毒:在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯,供消毒用。
在试剂准备区和标本制备区还设置移动紫外线灯,对实验桌进行局部消毒。
4、机械连锁不锈钢传递窗:试剂和标本通过机械连锁不锈钢(不建议使用电子连锁方式)传递窗传递,保证试剂和标本在传递过程中不受污染(人物分流)。
5、地面地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面,整体性好。
便于进行清扫,耐腐蚀。
没有条件的也可采用水磨石地面,或大块的瓷砖(至少800mm×800mm)接缝需要小于2mm。
6、照明灯具要选用净化灯具,能达到便于清洗、不积尘的特点。
标准的PCR实验室在建设的过程中应注意:●规范的安装流程和全面的服务流程。
●严格按照规范科学设计的安装流程。
●安装前需要确定以下安装条件,如:电源电压,电源进线位置,电话网络线进线位置,进水水压,最小安装空间,地面平整度,通风孔、进水管和下水管的位置等,理想状态的空间尺寸和通风口尺寸。
PCR实验室基本要求PCR 实验室依据所使用的方法可分为试剂准备、标本制备、扩增、产物分析等三或四个区域。
只是使用实时荧光PCR仪、HIV病毒载量测定仪的PCR实验室,有上述前面三个区域即可。
各区域应完全独立分隔,不应有任何的空气直通。
标准的PCR实验室产物分析区或三个区域的最后一个区域(即扩增及产物分析区),空气流向应由室外向室内,可通过在室内设置通风橱、排风扇或其他排风系统达到空气流由室外向室内流动的要求。
PCR实验室各区域仪器设备配备通常如下:标准的PCR实验室试剂准备区:仪器设备主要应有加样器、冰箱、天平、低速离心机、混匀器、可移动紫外灯等。
可使用超净工作台作为试剂配制操作台面。
标准的PCR实验室标本制备区仪器设备主要应有生物安全柜(最好为B2, 可避免提取核酸在柜内反复循环,造成标本间交叉“污染”,出现假阳性结果。
此外还应配备加样器、台式高速离心机(冷冻及常温)、台式低速离心机、恒温设备(水浴和/或干浴仪)、冰箱、混匀器和可移动紫外灯等。
标准的PCR实验室扩增区主要仪器就是核酸扩增热循环仪(PCR仪,实时荧光或普通的)。
热循环仪的电源应专用,并配备一个稳压电源或UPS,以防止由于电压的波动对扩增测定的影响。
此外,根据工作需要,还可配备加样器、超净台等。
标准的PCR实验室产物分析区:本区所使用的仪器设备可能有加样器、电泳仪(槽)、电转印仪、杂交炉或杂交箱、水浴箱、DNA测序仪、酶标仪和洗板机等。
在理想情况下,PCR实验室试剂准备、标本制备、扩增三个区域可设置缓冲间。
在缓冲间内,可设置正压,使室内空气不流向室外,室外空气不流向室内。
PCR实验室平面布置示意图一般实验室间隔材料分:彩钢板,不锈钢板,理化板等,价格依次而上,主要考虑不产尘,不滋菌,容易清理就行一般实验室间隔材料分:彩钢板,不锈钢板,理化板等,价格依次而上,主要考虑不产尘,不滋菌,容易清理就行**卫生部PCR研究员李金明(卫生部临床检验中心临床免疫室主任,研究员)的PCR建设方案再说吧!国外的资料不一定是最好。
个人觉得李金明的实验室区正压(扩增分析区因为没有缓冲,所以为负压),缓冲间负压的作法可以更好的防止气体的外泄及防止试剂准备区、标本制备区、产物扩增区、扩增分析区四区之间的气体相互渗漏。
PCR实验室也可以分为三个区,即第三、四区合为一区,必须设立缓冲间。
有条件建设实验室采用三十万级的标准来建设。
空调系统采用制冷剂各区独立循环,可以防止气流交叉。
**疾病预防控制中心实验室建设之PCR 实验室基本要求:PCR实验室可以是分散形式,也可以是组合形式。
完成一组PCR实验,通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程,若实验工艺需要,还应增加样品粉碎过程。
一、分散形式PCR实验室所谓分散形式PCR实验室,是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远,呈分散布置形式。
对于这种布置形式的PCR实验室,由于各个实验之间不易相互干扰,因此无需特殊条件要求。
二、组合形式PCR实验室所谓组合形式PCR实验室, 是指完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置,组成独立实验区域的形式。
对于组合形式PCR实验室,由于各个实验间集中布置,容易造成相互干扰,因此,对总体布局以及屏障系统具有一定的要求。
各室在入口处设缓冲间,以减少室内外空气交换。
试剂配制室及样品处理室宜呈微正压,以防外界含核酸气溶胶的空气进入,造成污染;核酸扩增室及产物分析室应呈微负压,以防含核酸的气溶胶扩散出去污染试剂与样品。
如果使用荧光PCR仪,扩增室和产物分析室可以合并。
若房间进深允许,可设PCR内部专用走廊。
需要指出的是在减少室内外空气交换方面,缓冲间比专用走廊更有意义。
**PCR实验区的设置,几个要注意的问题:1、几个区域的大小设置情况,应该是试剂准备区、产物扩增区、扩增分析区,要小一些。
标本制备区应大一些。
因为,标本制备室要放置一个生物安全柜为一个低温冰箱。
2、试剂准备区、标本制备区就设立紧急洗眼器,以备不时之需。
3、PCR实验室的洁净度可以根据用户的实际使用情况和资金的投入来设计。
**临床基因扩增检验实验室基本设置标准根据《临床检验扩增检验实验室管理暂行办法》,制定本标准一、临床基因扩增检验实验室区域设置原则(一)临床基因扩增检验实验室区域设置原则1、试剂储存和准备区2、标本制备区3、扩增反应混合物配制和扩增区4、扩增产物分析区如使用全自动分析仪,区域可适当合并。
(二)各工作区域必须有明确的标记,避免不同工作区域内的设备、物品混用。
(三)进入各工作区域必须严格按照单一方向进行,即试剂储存和准备区—>标本制备区—>扩增反应混合物配制和扩增区—>扩增产物分析区。
(四)不同的工作区域使用不同的工作服(例如不同的颜色)。
工作人员离开各工作区域时,不得将工作服带出。
二、工作区域仪器设备配置标准(一)试剂储存和准备区1、2-8C和-15C冰箱2、混匀器3、微量加样器(覆盖1-1000ul)4、移动紫外灯(近工作台面)5、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤心)6、专用工作服和工作鞋7、专用办公用品(二)标本制备区1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱2、高速台式冷冻离心机3、混允器4、水浴箱或加热模块5、微量加样器(覆盖1-1000ul)6、可移动紫外灯(近工作台面)7、超净工作台8、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤心)9、专用工作服和工作鞋10、专用办公用品如需处理大分子DNA,应具有超声波水浴仪。
(三)扩增反应混合物配制和扩增区1、核酸扩增仪2、微量加样器(覆盖1-1000ul)3、可移动紫外灯(近工作台面)4、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤心)5、专用工作服和工作鞋6、专用办公用品(四)扩增产物分析区视检验方法不同而定。
基本仪器设备如下:1、微量加样器(覆盖1-1000ul)2、可移动紫外灯(近工作台面)3、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、加样器吸头(带滤心)4、专用工作服和工作鞋5、专用办公用品为了对以个特定序列进行PCR做重复检测,需要三个不同的区域,每一个区域的具体技术操作和试剂在下面详细列出.1、样品准备区这个区域专门用作样品的准备,在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施:1)PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。
2)组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理,以根据应用的需要提取DNA或RNA。
3)用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。
4)DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作,以防止在吸取样品时有气溶胶遗留。
5)大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取。
6)管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生,而且管子不能用力崩开,这样会产生气溶胶。
7)任何时候都应该穿实验服和带手套,手套要经常更换,尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。
实验服要专门用于样品准备间,经常清洗。
2、样品准备和RNA-PCRRNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作,这样增加了样品之间污染的机会。
为了避免这一问题,反转录一步可以在样品准备区进行。
在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道。
3、前PCR区必须有专门用于准备各种反应的区域,这个区域必须保持干净,而且没有来自克隆和样品准备的污染。
前PCR区必须要有试剂和准备,特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管。
4、PCR实验室试剂的操作1)所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。
2)所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水,用μm过滤的,并且是高压灭菌。
3)在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂,在扩增试剂或样品制备试剂中加入%的叠氮钠不抑制扩增反应。
4)所用试剂都应该以大体积配制,实验一下看试剂是否满意,然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。
5)所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。
6)新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。
7)样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。
5、在前PCR区建立PCR混合物1)可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃,在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。
2)如果你的实验室使用多套引物,以致于配制包括所有试剂的单一反应混合物不够经济,可以考虑分装保存够一天的PCR成分。
3)作为一个规则,应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来分析样品配制和PCR前过程的效率和洁净程度。
而且,你也希望通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物。
4)阴性样品要与每组样品同时做,以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产物的污染,阴性对照应该包括核酸以外的所有试剂。