蒽酮比色法测定可溶性糖

引言可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖等单糖和双糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的植物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。

对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。

因此，可溶性糖的定量研究对植物的品质育种、储藏、加工特性等具有重要意义。

而且可溶性糖广泛存在于植物的根、茎块和种子中，是人体热量的最最主要来源，具有较高的营养价值。

本文重点介绍蒽酮比色法、铜还原碘量法、费林试剂法、原子吸收法、气相色谱法、液相色谱-蒸发光散射法，及连续流动法这几种实验如何定量测定可溶性糖含量。

1 蒽酮比色法1.1 原理糖在硫酸作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成绿色络合物，颜色的深浅与糖含量有关。

在625 nm波长下的OD值与糖含量成正比。

由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化，故必须在反应后立即在同一时间内比色。

1.2 仪器与材料1.2.1实验仪器分光光度计，电炉，铝锅，电子天平，20ml刻度试管，刻度吸管5ml 1支、1ml 2支，漏斗。

1.2.2实验试剂（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。

（2）浓硫酸（比重1.84）。

1.2.3实验材料植物叶片。

1.3 实验方法1.3.1标准曲线的制作取20ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表24-1加入溶液和水。

然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入5ml浓硫酸，摇匀。

比色液总体积为8ml，在恒温下放置30min，显色。

然后以空白为参比，在485nm 波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。

按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。

实验九蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶和性糖的含量一、实验目的掌握蒽酮法测定总糖和可溶性糖含量的原理和方法二、实验原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。

酸可使糖类（如已糖基，戊醛糖及已糖醛酸）脱水生成糠醛，生成的糠醛或烃甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大光吸收值。

在10~100ug范围内其他颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。

当存在含有较多色氨酸蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。

而对于上述特定的糖类物质，反映较稳定。

多糖和寡糖可用酸水解成单塘和蒽酮试剂反应，因此利用蒽酮法可测组织中总糖和可溶性糖。

这一种方法具有很高的灵敏度，糖含量在30ug左右时就能侧进行测定，所以可作为微量测糖之用。

一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。

三、仪器，试剂和材料1、仪器（1）分光光度计； (6)漏斗，漏斗架个6个（2）电子天平；（7）容量瓶：50ml2个；（3）三角瓶：50ml2个（8）移液管；（4）刻度具塞试管；10ml13支；（9）水浴锅。

（5）试管架，试管夹各2个；2、试剂（1）葡萄糖标准液：100ug/ml；（2）浓硫酸；（2）蒽酮试剂：0.2g蒽酮，溶于100ml浓流酸中，现当日配制使用。

3、材料小麦幼苗分蕖节或其植物的幼嫩组织（红薯）。

四、操作步骤1、葡萄糖标准曲线的制作取7支试管，按下表配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液；管号 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖标准液/mL 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 蒸馏水/mL 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.7 0.8 葡萄糖含量/ug 0 10 20 30 40 50 60 在每支试管中，加入蒽酮试剂4.0ml，迅速浸入冰水浴中冷却。

各加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。

自水浴重新煮沸起，准确煮沸10min取出，用流水冷却，室温放置10min，在620nm波长下比色。

蒽酮比色法‎测糖一目的掌握蒽酮比‎色法测糖的‎原理和方法‎二原理蒽酮比色法‎是一个快速‎而简便的定‎糖方法。

蒽酮可以与‎游离的已糖‎或多糖中的‎已糖基、戊糖基及已糖醛‎酸起反应，反应后溶液‎呈蓝绿色，在620n‎m处有最大‎吸收。

本法多用于‎测定糖原的‎含量，也可用于测‎定葡萄糖的‎含量。

三实验器材及‎试剂马铃薯干粉‎、可调试移液‎器或移液管‎、可见分光光‎度计（723型）、电子分析天‎平、水浴锅、电炉子蒽酮试剂：取2g蒽酮‎溶解到80‎%H2SO4‎中，以80%H2SO4‎定容到10‎00ml，当日配制使‎用。

标准葡萄糖‎溶液（0.1mg/ml）：100mg‎葡萄糖溶解‎到蒸馏水中‎，定容到10‎00ml备‎用。

葡萄糖标准‎溶液：称取已在8‎0℃烘箱中烘至‎恒重的葡萄‎糖100m‎g，配制成50‎0ml溶液‎，即得每ml‎含糖为20‎0μg的标‎准溶液。

蒽酮试剂：称取1g经‎过纯化的蒽‎酮，溶解于10‎00ml稀‎硫酸中即得‎。

硫酸溶液由‎760m l‎浓硫酸（比重1.84)稀释成10‎00ml而‎成。

2g/L蒽酮试剂‎：溶解2g蒽‎酮于1L浓‎硫酸（98%的浓硫酸）中，当日配制使‎用。

四、操作1．可溶性糖的‎提取称取重约5‎g的新鲜植‎物叶子，于研钵中乙‎醚少许，仔细研磨成‎均匀的浆状‎物，倒入烧杯中‎，用70℃热水洗涤研‎钵，洗液并入烧‎杯中，再加蒸镏水‎30─40ml。

将烧杯放在‎水浴锅中加‎热，保持温度7‎0─80℃约半小时，冷却后1滴‎1滴地加入‎饱和中性醋‎酸铅，以除去蛋白‎质，直至加入醋‎酸铅时不再‎形成白色沉‎淀为止。

然后将此混‎合物连同残‎渣一并洗入‎100ml‎容量瓶中，加水至刻度‎，充分振荡。

以干燥漏斗‎将滤液过滤‎于一干燥的‎三角烧瓶中‎，瓶中事先放‎有少量（约0.2─0.4g）草酸钠粉末‎，以除去滤液‎中过量的醋‎酸铅，使生成草酸‎铅沉淀，再行过滤，所得的透明‎滤液即为可‎溶性糖提取‎液。

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量之南宫帮珍创作一. 实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。

该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

该法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定。

二. 试剂器材蒽酮试剂：精密称取蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀。

当日配制使用；葡萄糖尺度液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。

三. 操纵步调葡萄糖尺度曲线的制作取7支具塞试管，按下表数据精密配制一系列分歧浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2-3个重复：管号0 1 2 3 4 5 6 尺度葡萄糖溶液/mL 0 0.4 0.6 0.8蒸馏水/mL在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min。

在625nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。

以尺度葡萄糖含量(g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制尺度曲线。

样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。

在625nm波长下迅速测定各管吸光值。

根据葡萄糖含量的尺度曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。

四. 注意事项该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不单可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包含淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。

植物可溶性糖(soluble sugar)测定:蒽酮比色法糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物。

在低浓度时，625nm的OD值与糖含量成正相关。

该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。

实验用品721型分光光度计，分析天平，研钵，恒温水浴锅，烧杯，刻度试管，大试管，移液管，漏斗，玻璃棒，试管架，吸耳球，滤纸试剂：活性炭，酒精（80%）葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200μg的标准溶液。

蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。

稀硫酸溶液由760mL 浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。

实验步骤1.可溶性糖的提取：称取0.5g的新鲜植物叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80℃水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。

在上清液中加0.5g活性炭，80℃水浴脱色30min，定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。

2.显色及比色：吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。

从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。

3.绘制标准曲线：取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、30、60、90、120、150、180μg。

按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625－糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。

试剂（ml) 管号1 2 3 4 5 6 7葡萄糖标准液 0 0.15 0.3 0.45 0.6 0.75 0.980%酒精 1.0 0.85 0.7 0.55 0.4 0.25 0.1蒽酮-硫酸试剂 5 5 5 5 5 5 5葡萄糖浓度（ul/ml) 0 30 60 90 120 150 180 样品中含糖量％：设V为植物样品稀释后的体积（m L）；C为提取液的含糖量(μg/ m L)；W为植物组织鲜重(g)可溶性糖含量％＝( C×V)/(W×106) ×100%可溶性糖(SS) 含量的测定: 根据赵世杰[20 ] 的方法。

可溶性糖含量测定实验的改进可溶性糖含量测定在许多领域都具有重要意义，如植物生理学、食品科学、医学等。

通过对可溶性糖含量的测定，可以了解植物的生理状态、食品的品质和加工工艺，以及人体血液中血糖的水平等。

因此，对可溶性糖含量测定实验的改进就显得尤为重要。

可溶性糖含量测定主要基于糖类的水解和还原性质。

在碱性环境中，糖类可以被碘化钾氧化，同时生成可滴定的碘。

通过测定消耗的硫代硫酸钠标准溶液的体积，可以计算出可溶性糖的含量。

实验所需材料和设备包括：新鲜植物叶片、氢氧化钠、盐酸、无水乙醇、丙酮、酚酞指示剂、1 mol/L硫代硫酸钠标准溶液、容量瓶、滴定管等。

样品制备：将新鲜植物叶片剪成小段，称取一定质量，加入50 mL 80%乙醇，在80℃下加热10 min，然后过滤得到提取液。

蒸馏：将提取液倒入蒸馏瓶中，加入5 mL浓盐酸，蒸馏至100 mL。

萃取：向蒸馏液中加入10 mL丙酮，用力摇动后静置分层，弃去水层。

滴定：向丙酮层中加入3滴酚酞指示剂，用1 mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定至粉红色。

计算：根据硫代硫酸钠标准溶液的用量和实验条件，计算可溶性糖的含量。

称取样品时要保证叶片的质量和大小基本一致，以保证实验结果的准确性。

在加入盐酸进行蒸馏时要注意安全，避免烫伤。

在萃取步骤中要保证丙酮完全覆盖水层，以确保糖类物质被完全萃取。

在滴定过程中要保证滴定管洁净，避免残留物对实验结果的影响。

每个样品需做至少3个平行实验，以保证实验结果的可靠性。

通过实验，我们得到了不同样品中可溶性糖的含量（表1）。

从表中可以看出，不同样品中可溶性糖的含量存在较大的差异。

通过对不同样品中可溶性糖含量的测定，我们可以发现不同样品之间的糖含量存在差异。

这种差异可能是由于植物生长环境、品种等因素造成的。

实验过程中也需要注意操作细节，如称样量的控制、萃取时丙酮的使用量等，这些因素都会对实验结果产生影响。

因此，需要对实验操作进行精确控制，以提高实验结果的准确性。

实验1 可溶性糖的测定一、实验目的1．学习蒽酮比色定糖法的原理和方法。

2．学习721型分光光度计的原理和操作方法。

二、实验原理总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。

蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。

其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糖醛衍生物后与蒽酮（C14H10O）缩合成蓝色化合物。

溶液含糖量在150μg /ml以内，与蒽酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。

蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接作用，样品不必经过水解。

三、实验器材1．试管（或具塞试管）2. 吸量管及试管架（1 ml、10 ml）3．沸水浴 4. 冰浴5．721型分光光度计6．蒽酮试剂称取100 mg蒽酮溶于100 ml 98%硫酸溶液（A.R）中，用时配制。

7．葡萄糖标准溶液（100 μg/ml）200 ml精确称取100 mg干燥葡萄糖，用蒸馏水定容至1000 ml。

8．样品溶液200 ml 可自选待测物制成样品溶液。

举例：称取500 g市售白薯（或淀粉），洗净切碎后用多功能食品加工机磨成浆，4层纱布压滤、弃滤液溜渣，将渣放于烘箱内80～85℃烘干后，再用植物粉碎机（微型）研细，过筛，取100目筛下物为待测样品。

取样品在烘箱内105℃烘干，恒重后，精确称取1～5 g，置于锥形瓶中，加入80 ml沸蒸馏水，放入沸水浴。

不时摇动，提取0.5 h。

取出立即过滤，残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤，合并滤液。

冷却至室温，用蒸馏水定容至100 ml。

9．白薯。

四、实验步骤：每管加入葡萄糖标准液和水后立即混匀，迅速置于冰浴中，待各管都加入蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7 min，立即取出置冰浴中迅速冷却。

待各管溶液达室温后，用1 cm厚度的比色皿，以第一管为空白，迅速测其余各管的光吸收值。

然后以第2～7管溶液含糖量μg为横坐标，吸光度（OD620）为纵坐标，画出含糖量与OD620值的相关标准曲1要在冰浴条件下加入蒽酮，以防止发热，影响颜色反应。

引言可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖等单糖和双糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的植物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。

对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。

因此，可溶性糖的定量研究对植物的品质育种、储藏、加工特性等具有重要意义。

而且可溶性糖广泛存在于植物的根、茎块和种子中，是人体热量的最最主要来源，具有较高的营养价值。

本文重点介绍蒽酮比色法、铜还原碘量法、费林试剂法、原子吸收法、气相色谱法、液相色谱-蒸发光散射法，及连续流动法这几种实验如何定量测定可溶性糖含量。

1 蒽酮比色法1.1 原理糖在硫酸作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成绿色络合物，颜色的深浅与糖含量有关。

在625 nm波长下的OD值与糖含量成正比。

由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化，故必须在反应后立即在同一时间内比色。

1.2 仪器与材料1.2.1实验仪器分光光度计，电炉，铝锅，电子天平，20ml刻度试管，刻度吸管5ml 1支、1ml 2支，漏斗。

1.2.2实验试剂（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。

（2）浓硫酸（比重1.84）。

1.2.3实验材料植物叶片。

1.3 实验方法1.3.1标准曲线的制作取20ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表24-1加入溶液和水。

然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入5ml浓硫酸，摇匀。

比色液总体积为8ml，在恒温下放置30min，显色。

然后以空白为参比，在485nm 波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。

按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。