动物血清样品的采集方法课件
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畜禽血液样品的采集、制备与保存方法血液不断地在全身流动,参与机体的各种功能活动,对动物的新陈代谢以及维持内环境和保持与外界环境间的平衡起着重要的作用。
当血液发生病理变化时,常常会影响全身的组织和器官,而组织和器官的病变又可以引起血液成分的变化,因此,血液的检验在疾病的诊断中起到十分重要的作用;临床检验采用的血液样品分为全血、血清和血浆。
全血主要用于血细胞成分的检验,血清和血浆主要用于大部分临床化学检查和免疫学检验。
血液样品的采集、制备与保存是重要的前期工作,是保证正确诊断的基本条件。
1.采集部位与方法畜禽血液样品的采集部位和方法,与种类、检测项目、试验方法及用血量有关,视实际情况而定。
1.1鸡的采血技术1.1.1翅静脉采血:是常用的采血部位,翅静脉在肘关节腹侧的表面,清晰地暴露于皮肤之下,肉眼可见。
采血时先拔去该部位的羽毛,抽血时,动作轻柔缓慢,防止血管塌陷不回流,采血后略移动皮肤轻压即可止血;由于鸡的皮肤游离性大,采血后容易形成血肿。
1.1.2心脏采血:此方法多用于进行尸体剖检前的血液采集检验。
将鸡仰卧保定,针头从V型锁骨前端刺入,或者在靠近心脏的胸侧壁刺入;心脏采血过程中,如果操作不慎,易损伤肺脏,更有慎者,引起大出血死亡。
1.1.3颈静脉采血:鸡的左侧颈静脉很细,通常右侧颈静脉采血。
在皮肤上的一个无毛的沟正好是右侧颈静脉所处的位置。
颈静脉游离性大,皮肤松弛,采血后易于形成血肿。
1.2猪采血技术1.2.1前腔静脉采血:猪前腔静脉是由左右两侧的颈静脉与腋静脉至第一对肋骨间的胸骨柄汇合形成。
采血时,针头刺入部位在与耳根和对侧肩胛骨上缘连线垂直线的胸骨端处,大猪采用站立保定,小猪可以采用仰卧保定法。
左侧靠近膈神经,故以右侧采血为宜。
1.2.2耳静脉采血:一般用于体格较大的猪。
保定后,耳部消毒灭菌,以手指压迫近心端耳部静脉,使血管努张,针头刺入血管后,动作要轻柔,采血要缓慢,否则血液不回流使静脉瘪陷。
2020年第04期样品采集是基层实验室工作人员应当具备的一项基本技能,在疫情监测与疾病诊断工作中,经常需要采集畜禽的血液样品,进行常规监测和疫病诊断。
样品的好坏会直接影响实验检测结果,掌握正确的血液采集、分离、保存方法和运送,对实验检测具有非常重要的作用。
1采样前的准备工作采样人员开展采样工作前应接受生物安全相关知识培训,做好个人防护。
因采样过程中,可能会造成管子和针头的损坏与废弃,为了不影响完成效率,避免影响采集样品的完成数量和拖延时间,器具应准备充足。
保温箱、酒精棉、棉签、根据采样数量准备规格5mL 和10mL 的一次性采样真空管、插管底座、规格为0.7(21G )和0.9(20G )的一次性采样针头等。
记号笔、采样单、消毒药、保定绳、棉手套等。
一次性防护手套、一次性口罩、一次性防护帽、胶靴等。
2颈静脉血液采集方法和采集注意事项牛、羊、等大家畜2.2.1采样工具的选择采集牛、羊血液时,根据监测血清的需要量,来选择采样工具,县级实验室采集血液一般都是用来开展春秋防集中监测,要求血清量应不少于2mL ,选择使用5ml 的真空采样管,而与科研单位合作项目,要求采集的血清量较多,为保证血清量的充足,选择使用10mL 采样管,采集样品时,牛搭配0.9(20G )针头,而羊选择0.7(21G )为宜。
2.2.2牛、羊的保定方法做好动物保定是保证采样工作顺利进行的前提,牛羊采血部位及方法介绍如下:(1)牛保定:选择比较结实的柱子,将牛拴在柱子上,用手使劲拉紧穿在牛敏感部位的鼻绳子,牛将动弹不得,注意保定时应将牛头偏向左或右牛斜上方,才能将牛颈静脉充分暴露出来,方便采血操作。
保定的人员应戴上厚棉手套,避免长时间保定,手部被绳子勒伤。
(2)羊保定:我县主要以黑山羊养殖为主,黑山羊个体不算太大,比较容易保定,一般不用绳子,由保定人员两手抓住羊角,两腿间一夹、羊头稍偏向左右方向一侧,向上一提,充分暴露颈静脉血管即可,注意一定要使羊的前肢离开地面,这样羊才能得到很好的保定。
大小鼠血清采集一、仪器耗材(一)共用低温恒温离心机、-20℃冰箱、4℃冰箱、鼠笼、无害化冰箱、50ml离心管、500ml血清瓶、一次性橡胶手套、移液器(0.1~1ml、1~5ml)及配套吸头、废弃吸头存储盒、75%酒精。
(二)小鼠1.5ml EP管、无盖离心管盒、弯头镊、眼科剪。
(三)大鼠麻醉剂(3%戊巴比妥钠)、5ml无菌注射器、大鼠解剖台、手术剪、利器盒、止血钳、弯头镊、10ml无抗凝剂真空采血管(含一次性采血针)、止血纱布、电子天平(精度0.1~1g即可)。
二、操作方法(一)小鼠血清的采集1、摘除眼球采血(1)使小鼠爬伸在笼盒上,左手拇、食指抓取小鼠双耳及颈后皮肤,小指固定尾部,用眼科剪减去小鼠待摘眼球脸部胡须;(2)中指将小鼠左侧前肢轻压在胸骨心脏部位,无名指按在腹部,捻动拇指,轻压取血侧眼部皮肤,使眼球充血突出;(3)用弯头镊夹取眼球;(4)根据需要捻动拇指与食指的方向,使血液从眼眶内以不同速度垂直流入1.5ml EP管中;(5)同时用左手中指轻按小鼠心脏部位,以加快心脏泵血速度;(6)当血液流尽时,用脱臼法处死小鼠。
2、分离血清(1)将EP管中的血室温静置2小时;(2)再置于4℃冰箱内3~4小时或过夜;(3)待血液凝固血块收缩后,4℃ 3500rpm离心10分钟;(4)使用移液器吸取上清液置于干净的50ml离心管中4℃冰箱暂存,待所有动物血清收集完成后,再次离心转移到500nl血清瓶中,保存于-20℃冰箱。
3、注意事项(1)采血场所有充足的光线,室温夏季保持在25~28℃,冬季保持在15~20℃为宜;(2)防止血液浸入眼部周围毛发,否则会造成污染和溶血;(3)按压心脏时,用力一定要适度,若用力过度,一是会造成动物采血中途死亡,使采血不完全,二是有可能引起溶血现象发生,影响血清质量;(4)采血用的器材和试管必须保持清洁干燥;(5)采血时要防止小鼠挣扎,否则会损失比较多的血液;(6)若一边眼球摘除后眼部发生凝血,无法继续采血时,可将另一侧眼球摘除,用相同的方法继续采血;(7)血液凝固后不宜在4℃放置过久,否则会溶血;(8)移液器吸取上清液时注意不要将血凝块吸取出来。