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1.2.2 微生物的选择培养和计数题组一微生物的选择培养1.稀释涂布平板法是分离菌种常用的方法，下列相关叙述不恰当的是（）A.固体培养基灭菌后，应冷却至50 ℃左右时倒平板B.倒好的平板需立即使用，以免表面干燥，影响菌的生长C.稀释涂布平板分离到的单菌落需进一步划线纯化D.稀释涂布平板法既可用于微生物的分离，也可用于微生物的计数2.营养缺陷型菌株是野生型菌株经过人工诱变或自发突变失去合成某种成长因子的能力，只能在补充了相应的生长因子的基本培养基中才能正常生长的变异菌株。
某研究小组对酵母菌用紫外线照射后将其接种到甲培养皿的培养基上，一段时间后将甲培养皿的菌落影印接种（不改变菌落位置）到乙、丙两培养皿的培养基中，进一步培养得到如下图所示结果。
下列分析正确的是（）A.接种到甲培养皿采用的是平板划线法B.甲、丙两培养皿中的培养基是基本培养基C.甲培养皿中菌落数有可能比接种的酵母菌数少D.甲、乙、丙三个培养皿都可能存在营养缺陷型菌落3.“筛选”是分离和培养生物新类型常用的手段，下列有关技术中不能筛选成功的是（）A.在牛肉膏蛋白胨培养基中，筛选大肠杆菌B.在以尿素为唯一氮源的固体培养基中，筛选能够分解尿素的微生物C.用纤维素为唯一碳源的培养基，筛选能分解纤维素的微生物D.在培养基中加入不同浓度的氯化钠，筛选抗盐突变体植物题组二微生物的分离和计数4.下列关于细菌分离、培养的叙述中，正确的是（）A.不同种类细菌的生长均需要相同碳源B.常用液体培养基分离获得细菌单菌落C.用含尿素的培养基可选择分离出能分解利用尿素的细菌D.含有机磷农药的培养基可分离出降解有机磷农药的细菌5.某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示，①为土壤样品悬液。
下列相关叙述错误的是（）A.图中②培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为唯一碳源B.如果要测定②中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法C.若图中④为对照实验，则其中应含除苯酚外的其他碳源D.⑥上菌落分布均匀，是用平板划线法获得的单菌落6.在对自然样品（如土壤）中微生物细胞数进行评估时，显微镜直接计数法得到的菌体数远远大于平板计数法得出的菌体数。
微生物的培养、分离、计数专题
掌握程度参考
本考试大纲中
的：
二、考试的能力
要求
2.实验与探究
能力
一、微生物培养的基本程序
二、分离微生物纯种的方法
1.平板划线法：
线的末端菌液逐渐稀释
若线的末端没有出现单菌落，其可能的可能原因？2。
稀释涂布(平板）法
3。
利用选择培养基进行分离
如利用只含尿素为氮源的选择培养基分离尿素分解菌
如利用只含纤维素为碳源的选择培养基分离纤维素分解菌
4。
利用鉴别培养基进行鉴别后分离
三、微生物的计数
1.液体稀释涂布（平板）法
2。
显微观察法：用血球计数板计数
计数室(中央大方格）的长、宽和高分别为：
1 mm 、1 mm和 0.1mm
计数室的容积：0.1mm3（万分之一毫升）
取样：稀释一定倍数的菌液
3.比浊法记数
微生物细胞数目多→培养液浊度大→发生散射光线多→分光光度计测得的
吸光值增加。
1.2.2 微生物的选择培养和计数一、选择题1.在培养基中加入10%酚可以抑制细菌和霉菌；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长。
利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分离出（）A.放线菌、霉菌、固氮细菌B.放线菌、金黄色葡萄球菌、固氮细菌C.放线菌、大肠杆菌、固氮细菌D.放线菌、乳酸菌、金黄色葡萄球菌2.某同学将1mL土壤样液稀释100倍，在3个平板上用稀释涂布平板法分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、57和58。
下列叙述错误的是（）A.可得出土壤样液中活菌数大约为5.7×107个/LB.此方法统计的菌落数往往比实际的活菌数目低C.一般选择菌落数在30—300的平板进行计数D.显微镜直接计数法统计的都是稀释液中活菌数3.血细胞计数板是对细胞进行计数的重要工具下列叙述正确的是（）A.每块血细胞计数板的正中央有1个计数室B.计数室的容积为1mm×1mm×0.1mmC.盖盖玻片之前，应用吸管直接向计数室滴加样液D.计数时，不应统计压在小方格角上的细胞4.下列有关分解纤维素的微生物的分离的叙述，说法错误的是（）A.纤维素酶中的C1酶和C X酶可以将纤维素分解为纤维二糖B.分离纤维素分解菌时，可在倒平板时加入刚果红染色，然后接种分解菌C.纤维素酶的发酵方法有液体发酵法和固体发酵法D.要增加纤维素分解菌的浓度，应使用固体培养基进行选择培养5.某生物兴趣小组尝试对土壤中分解尿素的细菌进行分离并计数，相关叙述正确的是（）A.制备选择培养基时，需加入尿素、琼脂、葡萄糖、硝酸盐等物质B.用活菌计数法统计结果，活菌的实际数目往往比统计的菌落数低C.脲酶将尿素分解成氨使培养基的pH降低，加入酚红指示剂后变红D.每克样品中的菌株数=（C÷V）×M，C为某一稀释度下平板上的平均菌落数6.（不定项）地衣芽孢杆菌具有调节动物肠道微生态平衡，增加动物机体抗病力的功能。
1.2.2微生物的选择培养与计数教学设计-2023-2024学年高二下学期生物人教版选择性必修3课题：科目：班级：课时：计划3课时教师：单位：一、课程基本信息1.课程名称：微生物的选择培养与计数2.教学年级和班级：2023-2024学年高二下学期生物3.授课时间：第16周，星期二下午第3节4.教学时数：1课时二、教学目标1. 知识与技能目标：(1) 了解微生物的分离和纯化过程，掌握选择培养基的配制方法。
(2) 掌握稀释涂布平板法、稀释液稀释涂布平板法和稀释液稀释涂布平板法等微生物计数方法，并能运用这些方法进行微生物的计数。
(3) 能够运用微生物的选择培养和计数方法，解决实际问题。
2. 过程与方法目标：(1) 通过实验操作，培养学生的观察、分析和解决问题的能力。
(2) 学会使用显微镜和计数工具，提高学生的实验技能。
(3) 通过小组合作，培养学生的团队合作能力和交流能力。
3. 情感态度与价值观目标：(1) 激发学生对微生物世界的兴趣，培养对生命科学的热爱。
(2) 培养学生对实验操作的严谨态度，提高学生的科学素养。
(3) 通过微生物的选择培养和计数，让学生了解微生物在自然界和人类生活中的重要作用，培养学生的社会责任感和环保意识。
三、学习者分析1.课程名称：微生物的选择培养与计数2.教学年级和班级：2023-2024学年高二下学期生物3.授课时间：第16周，星期二下午第3节4.教学时数：1课时二、教学目标1. 知识与技能目标：(1) 了解微生物的分离和纯化过程，掌握选择培养基的配制方法。
(2) 掌握稀释涂布平板法、稀释液稀释涂布平板法和稀释液稀释涂布平板法等微生物计数方法，并能运用这些方法进行微生物的计数。
(3) 能够运用微生物的选择培养和计数方法，解决实际问题。
2. 过程与方法目标：(1) 通过实验操作，培养学生的观察、分析和解决问题的能力。
(2) 学会使用显微镜和计数工具，提高学生的实验技能。
(3) 通过小组合作，培养学生的团队合作能力和交流能力。
第2课时微生物的选择培养和计数新课标核心素养1.能够运用生物与环境相适应的观点来理解选择培养的原理。
2.学会通过调整培养基的配方来有目的地培养某种微生物。
3.掌握测定微生物数量的常用方法。
1.科学思维：根据微生物的代谢特征配制选择培养基。
2.科学探究：设计实验分离土壤中的尿素分解菌，并对实验结果进行分析与评价。
知识点(一)选择培养基及微生物的选择培养1．实验室中微生物筛选的原理人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度和pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。
2．选择培养基在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
3．微生物的选择培养(稀释涂布平板法)(1)系列稀释(梯度稀释)操作：(2)涂布平板操作：①取菌液：取0.1 mL菌液滴加到培养基表面。
②涂布器灭菌：将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。
再将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽，涂布器冷却后，再进行涂布。
③涂布过程：用涂布器将菌液圴匀地涂布在培养基表面。
涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。
④培养分离：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37_℃的恒温培养箱中培养1～2 d。
在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。
(1)选择培养基能使特定种类的微生物生长(√)(2)微生物常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法(√)(3)取1 mL稀释后的菌液，滴加到培养基表面进行涂布(×)(4)将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽后，立即进行涂布(×)1．(科学思维)筛选分解尿素的细菌的选择培养基的配方如表所示：组分含量KH2PO4 1.4 gNa2HPO4 2.1 gMgSO4·7H2O 0.2 g葡萄糖10.0 g尿素 1.0 g琼脂15.0 gH2O 定容至1 000 mL(1)在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？提示：碳源是葡萄糖，氮源是尿素。
《微生物的选择培养与计数》学历案一、学习目标1、理解微生物选择培养的原理和方法。
2、掌握稀释涂布平板法和显微镜直接计数法的操作过程和适用范围。
3、学会根据研究目的设计微生物选择培养的实验方案。
4、培养科学探究的思维和实验操作能力。
二、学习重难点1、重点（1）微生物选择培养的原理和方法。
（2）稀释涂布平板法和显微镜直接计数法的操作过程。
2、难点（1）设计微生物选择培养的实验方案。
（2）分析实验结果，得出合理的结论。
三、学习过程（一）知识回顾1、什么是微生物？微生物包括哪些类群？2、微生物培养的基本条件有哪些？3、培养基的种类有哪些？它们的用途分别是什么？（二）新课导入在自然界中，微生物的种类繁多，但在某些特定的环境中，只有特定的微生物能够生长繁殖。
例如，在含有纤维素的环境中，能够分解纤维素的微生物就会大量繁殖。
那么，如何从复杂的微生物群落中分离出我们所需要的特定微生物呢？这就需要用到微生物的选择培养技术。
（三）微生物的选择培养1、选择培养基选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物生长。
例如，在以纤维素为唯一碳源的培养基中，只有能够分解纤维素的微生物才能生长，而其他不能分解纤维素的微生物则不能生长。
2、选择培养的方法（1）富集培养将样品接种到含有特定营养物质的培养基中，在适宜的条件下培养一段时间，使目的微生物在数量上占优势。
（2）平板划线分离法通过在平板上划线，将微生物逐步稀释，最终得到单个菌落，从而分离出目的微生物。
（3）稀释涂布平板法将样品进行一系列稀释，然后将不同稀释度的样品涂布到培养基表面，培养后形成单个菌落，进而分离出目的微生物。
（四）微生物的计数1、显微镜直接计数法（1）原理：利用血细胞计数板，在显微镜下直接计数。
（2）优点：快速、直观。
（3）缺点：不能区分死菌和活菌，计数结果往往偏高。
2、稀释涂布平板法（1）原理：当样品稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品中的一个活菌。
微生物的培养、分离、计数专题
【考试说明对微生物培养、分离和计数部分的要求】
微生物的培养、分离、计数
要求
（1）微生物的分离和培养
（2）某种微生物数量的测定
（3）培养基对微生物的选择
利用
掌握程度参考本
考试大纲中的：
二、考试的能力要
求
2.实验与探究能
力
一、微生物培养的基本程序
二、分离微生物纯种的方法
1.平板划线法：
线的末端菌液逐渐稀释
若线的末端没有出现单菌落，其可能的可能原因？
2.稀释涂布（平板）法
3.利用选择培养基进行分离
如利用只含尿素为氮源的选择培养基分离尿素分解菌
如利用只含纤维素为碳源的选择培养基分离纤维素分解菌
4.利用鉴别培养基进行鉴别后分离
三、微生物的计数
1.液体稀释涂布（平板）法
2.显微观察法：用血球计数板计数
计数室（中央大方格）的长、宽和高分别为：1 mm 、1 mm和0.1mm
计数室的容积：0.1mm3（万分之一毫升）
取样：稀释一定倍数的菌液
3.比浊法记数
微生物细胞数目多→培养液浊度大→发生散射光线多→分光光度计测得的吸光值增加。
2024年高中生物新教材同步选择性必修第三册第1章第2节第2课时微生物的选择培养和计数含答案第2课时微生物的选择培养和计数[学习目标] 1.阐明微生物选择培养的原理。
2.进行土壤中分解尿素的细菌的分离和计数。
一、选择培养基、微生物的选择培养和数量测定1．选择培养基(1)自然界中目的菌的筛选①实例：聚合酶链式反应(PCR)中用到的耐高温的DNA聚合酶，就是从热泉中筛选出的水生栖热菌中提取出来的。
②依据：水生栖热菌能在70～80 ℃的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。
(2)实验室中目的菌的筛选①原理：人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度和pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。
②方法：利用选择培养基分离。
选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
2．微生物的选择培养(1)方法：对样品进行充分稀释，然后将菌液涂布到制备好的选择培养基上。
(2)稀释涂布平板法的操作过程①系列稀释操作a．编号为1×102～1×107试管中分别盛有9 mL无菌水。
b．将10 g土样加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。
c．取1 mL上清液加入盛有9 mL无菌水的试管中，依次等比稀释。
②涂布平板操作取菌液：取0.1 mL 菌液，滴加到培养基表面|↓涂布器消毒：将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中|↓涂布器灭菌：将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后， 再进行涂布|↓涂布平板：用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。
涂布时可转动培养皿，使涂布均匀(3)培养：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37 ℃的恒温培养箱中培养1～2 d 。
3．微生物的数量测定 (1)稀释涂布平板法①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②计数原则：一般选择菌落数为30～300的平板进行计数。
【选修1第一轮复习导学案】
专题2 微生物的培养与应用
课题2 微生物的筛选和计数
【考点1】、筛选菌种（菌株）研究思路
1、自然筛选
原理：筛选目的菌种时，要根据它对的要求，到相应环境中去寻找。
2、实验室筛选
原理：人为提供有利于目的菌种的条件（包括营养、温度、PH等），同时其他微生物。
思考：我家菜园中有如下菌种：硝化细菌、酵母菌、分解纤维素细菌等微生物。
培养基中加入可以筛选（分离）出酵母菌。
培养基中加入可以筛选（分离）出硝化细菌。
培养基中加入可以筛选（分离）出分解纤维素细菌。
注意：以上培养基的其他营养成分完整。
3、培养基
（1）、功能（作用）：培养基；
①、定义：将允许特定种类的微生物生长，同时其他微生物生长的培养基。
②、如何证明选择培养基具有选择作用？
实验思路（方案）：将相同品种和数量的菌种接种到普通培养基和选择培养基上，然后都放到37℃的恒温箱中培养1-2天后，观察两组培养基上菌落数量；
若普通培养基上菌落数量选择培养基上菌落数量，则说明选择培养基具有选择作用。
若普通培养基上菌落数量选择培养基上菌落数量，则说明选择培养基不具有选择作用。
（2）、物理：培养基；
【考点2】、土壤中分解尿素的细菌的分离
1、分离的原理
（1）、土壤中存在分解尿素的细菌，它们能合成，在把尿素分解成无机物的过程中起到作用。
反应式：
（2）、选择培养基：满足水、无机盐、碳源、但只能以为唯一氮源。
2、实验流程
（1）、土壤取样在富含的土壤表层取样。
（2）、接种方法：稀释涂布平板法
（3）、培养细菌一般在℃的温度下培养1-2天。
（4）、鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解为，它会使培养基的碱性增强，因此，在培养基中加入指示剂，则会在分解尿素菌落周围出现色的圆圈。
【考点2】、细菌的计数
（1）、间接计数
稀释涂布平板法
①、原理： 1个菌落→1个活菌
②、操作方法：稀释菌液--﹥涂布平板→统计菌落数
③、统计原则：选 30∼300 个菌落的平板统计；每个稀释度取3个平板取其平均值
计算公式：每克样品中的菌株数=（C/V)* M
C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；
V:所用稀释液的体积； M:稀释倍数
滤膜计数法：（以大肠杆菌为例）
①、方法：将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。
②、结果：在该培养基上计数出现黑色菌落的数目即计算出大肠杆菌的数量
（2）、显微镜直接计数
原理:利用血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量
优点：能准确统计微生物的实际数目。
缺点：不能区分死菌和活菌、不适于对运动细菌的计数、需要相对高的细菌浓度、个体小的细菌不容易在显微镜下观察计数
【考点3】、土壤中分解纤维素微生物的分离
1、分离原理
土壤中某些微生物分解纤维素，这是因为它们能产生纤维素酶，它是一种复合酶，它至少含有三种组分，即。
反应式：纤维素（——————————→）纤维二糖（——————————→）葡萄糖2、鉴定原理
与纤维素形成红色复合物，当分解纤维素微生物把纤维素分解，则培养基上会出现以纤维素分解菌为中心的。
3、分离过程
【高考题模拟】 专题二 微生物的培养与应用
课题2 微生物的筛选和计数
1、要将能分解纤维素的细菌从土壤中分离出来，应将它们接种在( )
A ．加入指示剂的鉴别培养基上
B ．含有蛋白胨的固体培养基上
C ．只含纤维素粉而无其他碳源的选择培养基上
D ．含四大营养要素的培养基上
2、用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是( ) A ．未接种的选择培养基 B ．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基
C ．接种菌种的牛肉膏蛋白胨培养基
D ．接种菌种的选择培养基
3、某同学对101、102、103
倍稀释液计数的平均菌落数分别是2760、295和16，则菌落总数为(所用稀释液体积为0.1 mL)( )
A ．2.76×104个/mL
B ．2.95×105个/mL
C ．4.6×104个/mL
D ．3.775×104个/mL
4、纤维素酶的测定方法一般是( )
A ．对纤维素进行定量测定
B ．对纤维素酶分解纤维素后所产生的葡萄糖量进行测定
C ．对纤维素酶分解纤维素后所产生的纤维二糖进行定量测定
D ．对纤维素分解菌进行定量测定
5、下列关于纤维素酶的叙述，错误的是( )
A ．纤维素可被纤维素酶水解成葡萄糖，为微生物提供营养物质
B ．纤维素酶是一种复合酶，至少包括
C 1、C x 和葡萄糖苷酶三种
C ．纤维素酶和纤维素基本单位相同
D ．分解纤维素的细菌、真菌、放线菌，都是通过产生纤维素酶来分解纤维素的
6、利用农作物秸秆为原料可生产乙醇，生产过程中可采用微生物将秸秆水解或用酶水解，其主要技术流程如下图所示，下列相关说法错误的是( )
秸秆―→秸秆碎屑――→①反应罐水解――→②压滤出渣――→③酒精发酵――→④真空分馏
A ．可用刚果红染色法筛选过程①所需的纤维素分解菌
B ．过程①加入的纤维素酶是葡萄糖苷酶
C ．酒精发酵接种的酵母菌需在无氧条件下发酵
D ．酒精发酵前需对培养基进行高压蒸汽灭菌
7、某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，设计实验步骤如下，请给予合理的补充。
(1)、采样与培养：将采集的土样混匀后称取 1 g ，置于经过高压蒸汽灭菌法灭菌处理的________(填“固体”或“液体”)培养基中，28 ℃振荡培养。
(2)、接种与选择：为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行________处理。
之后，将菌
液涂布接种于以________为唯一碳源的固体培养基上，30 ℃条件下培养。
为避免污染，需将培养皿呈________状态放置。
此外，为排除其他因素的影响，提高实验可信度，本步骤需设计________________________作为空白对照。
(3)、筛选与纯化：将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围的现象是________________，则说明此种菌能够____________________________。
从平板中挑取实验效果明显的目的菌株，采用____________法接种于新的培养基平板上，可对菌株进行进一步的纯化。
8、尿素是一种重要的农业氮肥，不能直接被农作物吸收，只有当土壤中的微生物将尿素分解后才能被植物吸收利用。
因此，对土壤中分解尿素的微生物进行分离和鉴定具有重要意义。
回答下列问题：
(1)、对土壤中分解尿素的微生物的分离过程如下：
第一步：土壤取样。
取土样用的工具和盛土样的信封等在使用前都需要__________(填“消毒”或“灭菌”)。
第二步：样品稀释。
通常分离不同种类的微生物要采用不同的稀释度，原因是__________________________________________________。
第三步：微生物的培养与观察。
将一定稀释度的样品接种在以尿素为唯一氮源的培养基上，并在适宜的条件下培养。
分解尿素的微生物能在该培养基上生长繁殖，而_________________则不能生长繁殖。
(2)、若对土壤悬液进行梯度稀释时，未经振荡而直接取上层悬液进行梯度稀释，用稀释倍数为104的样液涂布到平板上进行培养和计数，统计出的菌落数往往比正确操作统计出的菌落数________。
(3)、若要对上述初步筛选出的分解尿素的微生物作进一步的鉴定，需在如表所示培养基配方中添加的物质是____________、____________。
若分离得到的是尿素分解菌，则培养基中pH升高使酚红指示剂变为红色，pH升高的原因是___________________________________________ 。
