重组牛肠激酶试剂

牛小肠碱性磷酸酶检测试剂盒,人牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)ELISA试剂盒kit试剂盒：ELISA试剂盒、检测试剂盒、免疫组化试剂盒、放免试剂盒、分子生物学试剂盒、金标检测试剂盒、Omega试剂盒、细胞凋亡试剂盒、生化试剂盒。

各种动物血清：内皮细胞专用血清、Hyclone、GIBCO胎牛血清。

抗体：进口原装抗体、进口分装抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、单标抗体、双标抗体、多标抗体、一抗、二抗；免疫组化抗体、免疫荧光抗体、流式细胞抗体、免疫细胞化学抗体。

细胞：原装进口细胞、肿瘤细胞、正常细胞、肿瘤耐药细胞。

耗材：细胞培养耗材、普通实验耗材。

生化试剂：原装进口生化试剂、进口分装生化试剂。

The experimental principle:This kit using double antibody sandwich enzyme immune analysis determination of CCK level in the specimen. Package is microporous plate with purified antibody, made from solid phase antibody, the package in the sheet resistance of the microporous, in turn, add CCK antigen, biotinylated anti CCK antibody, HRP labeled avidin, thoroughly wash after using the substrate TMB show. TMB under the catalysis of peroxidase into blue, and under the action of acid into the yellow. The depth of the yan and CCK in the samples were positively correlated. Enzyme standard instrument under 640 nm wavelength determination of absorbance (OD value), calculate the sample concentration.性状：试剂盒kit(含试剂+酶联板+覆膜等)特异性：本ELISA试剂盒可同时检测天然或重组的，且与其他相关蛋白无交叉反应。

人生长调节致癌基因α/黑素瘤生长刺激因子ELISA试剂盒,人（GROα/CXCL1/MGSA）酶联分析检测ELISA试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆上海乔羽生物专业供应：使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本生长调节致癌基因α/黑素瘤生长刺激因子（GROα/CXCL1/MGSA）含量。

试验原理：GROα/CXCL1/MGSA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知GROα/CXCL1/MGSA浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。

先将GROα/CXCL1/MGSA和生物素标记的抗体同时温育。

洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。

再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。

产生颜色。

颜色的深浅和样品中GROα/CXCL1/MGSA的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型生物素标记的抗GROα/CXCL1/MGSA抗体亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自备材料1．蒸馏水。

2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3．振荡器及磁力搅拌器等。

安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。

上海雅心生物技术有限公司上海雅心生物技术有限公司2017重组肠激酶Cat.No.:REK08CAS:9017-74-8EC:3.4.21.9来源：牛肠激酶，重组大肠杆菌表达1.简介雅心重组牛肠激酶是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段。

该酶经HPLC 纯化，纯度高，特异性高，并且不含其他蛋白酶。

肠激酶是一个特定的蛋白酶，它可以切割前面含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端位点：天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-赖氨酸。

肠激酶可去除位于蛋白质N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签。

2.优势1）特定的蛋白酶，切割前面含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端位点：天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-赖氨酸(DDDDK)。

2）不含其他蛋白酶,无非特异性切割。

3.酶切条件按照酶活性定义，酶切条件举例：25mM Tris-HCl8.0体系中：融合蛋白浓度0.1-1mg/ml（蛋白总量50-100µg）重组EK用量0.1-0.2U温度25℃过夜酶切，或完全酶切需要16h左右。

4.常见影响肠激酶活性的因素在＞200mM咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影响。

可参照以下推荐方法进行酶切：1）为获得理想酶切结果，请将样品透析到25mM Tris-HCl8.0缓冲液中，再进行酶切。

2）若不便透析，可将样品稀释，咪唑含量在100mM以下，NaCl浓度在50mM以下，甘油浓度小于5%以下进行酶切，酶的用量与蛋白的比例不变（即1U酶切500µg蛋白）。

3）如果样品溶液中含有上述成分中的一种或多种，且不便去除，此时适当增加酶量或延长酶切时间，也可达到较好酶切效果。

5.特性重组大肠杆菌分子量25,850Da活性1U定义为在25℃，12h~16h之内，将500µg保存于25mM Tris-HCl8.0缓冲液中的融合蛋白切割95%所需的酶量储存-20℃稳定性可以在常温下运输，在25℃可稳定保存一周。

牛的牛小肠碱性磷酸酶()酶联免疫分析（）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定牛血清，血浆及相关液体样本中类牛小肠碱性磷酸酶()的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛的牛小肠碱性磷酸酶()水平。

用纯化的牛的牛小肠碱性磷酸酶()抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入类牛小肠碱性磷酸酶()，再与标记的类牛小肠碱性磷酸酶()抗体结合，形成抗体抗原酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物显色。

在酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的类牛小肠碱性磷酸酶()呈正相关。

用酶标仪在波长下测定吸光度（值），通过标准曲线计算样品中牛的牛小肠碱性磷酸酶()浓度。

试剂盒组成：试剂盒组成孔配置孔配置保存说明书份份封板膜片（）片（）密封袋个个酶标包被板××℃保存标准品：×瓶×瓶℃保存标准品稀释液×瓶×瓶℃保存酶标试剂×瓶×瓶℃保存样品稀释液×瓶×瓶℃保存显色剂液×瓶×瓶℃保存显色剂液×瓶×瓶℃保存终止液×瓶×瓶℃保存浓缩洗涤液（×倍）×瓶（×倍）×瓶℃保存样本处理及要求：. 血清：室温血液自然凝固分钟，离心分钟左右（转分）。

仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

. 血浆：应根据标本的要求选择或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合分钟后，离心分钟左右（转分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

. 尿液：用无菌管收集，离心分钟左右（转分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照实行。

. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。

离心分钟左右（转分）。

仔细收集上清。

检测细胞内的成份时，用（）稀释细胞悬液，细胞浓度达到万左右。

利用his-tag纯化和复性基因工程产物肠激酶顾玮彦;黄磊;徐志南;岑沛霖【期刊名称】《食品与生物技术学报》【年(卷),期】2006(025)006【摘要】构建了融合表达肠激酶轻链(EKLC)的基因工程大肠杆菌,将该菌于37℃在含30 mg/L卡那霉素的LB培养基中培养,当细胞密度(OD600)达到0.5～0.6时加入最终浓度为0.4 mmol/L的IPTG并降温至26℃进行诱导表达,4 h后目的蛋白质的表达量可达茵体总蛋白质的40%以上,但所表达的重组产物大多以包涵体形式存在于茵体中.利用产物N端携带6个组氨酸标签与金属螯合层析介质中镍离子的亲和性,应用镍离子金属螯和层析对样品包涵体进行了纯化和复性研究.实验结果表明,在变性条件下纯化的样品在柱上不经洗脱,直接用复性液洗涤6 h,可以使EKLC 在得到提纯的同时实现复性,得到了电泳纯度为96%的具有生物活性的EKLC,最高活性为712 U.【总页数】5页(P18-22)【作者】顾玮彦;黄磊;徐志南;岑沛霖【作者单位】浙江大学,生物工程研究所,浙江,杭州,310027;浙江大学,生物工程研究所,浙江,杭州,310027;浙江大学,生物工程研究所,浙江,杭州,310027;浙江大学,生物工程研究所,浙江,杭州,310027【正文语种】中文【中图分类】Q819【相关文献】1.包含体表达基因工程牛生长激素提取、变复性及纯化的研究 [J], 于瑞嵩;沈世缘;董世娟;朱于敏;李震2.融合牛肠激酶轻链EKL包涵体蛋白的复性纯化 [J], 易进华;张元兴3.人干扰素—γ基因工程大肠杆菌的培养及其产物的纯化与复性 [J], 张耀东;张丽华4.重组人骨形成蛋白-2基因工程菌株的构建及蛋白复性纯化 [J], 张秀华; 刘飞; 刘英梅; 陈勉; 刘霞; 刘金明; 凌沛学; 王凤山5.牛肠激酶基因工程菌的构建、高密度发酵、纯化及活性鉴定 [J], 李德华;苟兴华;胡海洋;徐琦;刘忠荣;吴洽庆;余晓东因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

重组肠激酶使用说明货号：E8350规格：100U保存：-20℃保存。

可在常温下运输，25℃可稳定保存一周。

产品简介：肠激酶是一种高纯度的重组牛肠激酶。

该酶经HPLC纯化，纯度高，特异性高，并且不含其他蛋白酶。

肠激酶（EC3.4.21.9）是一个特定的蛋白酶，它可以切割前面含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端位点：天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-赖氨酸。

肠激酶可去除位于蛋白质N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签。

来源：重组大肠杆菌理论MW：25,850Da活性：1U定义为在25℃，12h~16h之内，将0.5mg融合蛋白在25mM Tris-HCl pH8.0缓冲液中的切割95%所需的酶量。

产品优势：高纯度：高特异性1）特定的蛋白酶，切割前面含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端位点：天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-赖氨酸(DDDDK)。

2）不含其他蛋白酶,无非特异性切割。

图一：SDS-PAGE检测结果，纯化的肠激酶一个单一的主带。

图二：0.1U的EK作用于50μg底物0min,10min,20min,30min,40min,50min,60min后的SDS-PAGE分析。

酶切条件：按照酶活性定义，重组EK酶切条件举例：25mM Tris-HCl pH8.0体系中：融合蛋白浓度0.1-1mg/ml（蛋白总量0.5-1.0mg）重组EK用量1-2U温度25℃过夜酶切，或完全酶切需12h-16h。

常见影响肠激酶活性的因素:在＞200mM咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影响。

可参照以下推荐方法进行酶切：1）为获得理想酶切结果，请将样品透析到25mM Tris-HCl pH8.0缓冲液中，再进行酶切。

2）若不便透析，可将样品稀释，咪唑含量在100mM以下，NaCl浓度在50mM以下，甘油浓度小于5%以下进行酶切，酶的用量与蛋白的比例不变（即1U酶切0.5mg蛋白）。

3）如果样品溶液中含有上述成分中的一种或多种，且不便去除，此时适当增加酶量或延长酶切时间，也可达到较好酶切效果。

一种重组肠激酶的制备方法与流程【实用版3篇】目录（篇1）1.引言2.重组肠激酶的概述3.制备方法与流程3.1 菌株选择与构建3.2 表达宿主菌的培养3.3 蛋白提取与纯化3.4 酶活性检测3.5 结论正文（篇1）【引言】随着生物技术的发展，重组酶在医药、食品和生物能源等领域的应用越来越广泛。

其中，重组肠激酶（Recombinant Enterokinase，rEK）是一种重要的消化酶，具有较高的工业应用价值。

本文主要介绍了一种重组肠激酶的制备方法与流程。

【重组肠激酶的概述】重组肠激酶是由肠道杆菌产生的一种分泌性酶，具有分解蛋白质和多肽的能力。

在食品工业中，重组肠激酶可用于肉类嫩化、乳制品处理等方面；在医药领域，重组肠激酶可用于药物载体的制备等。

目前，研究者已成功构建了多种表达重组肠激酶的工程菌，并探索了不同的制备方法。

【制备方法与流程】【3.1 菌株选择与构建】首先，需要选择适合表达重组肠激酶的宿主菌，并构建相应的表达载体。

常用的宿主菌有大肠杆菌、酵母菌等。

构建表达载体时，需要将肠激酶基因与启动子、终止子等元件组合，以确保目的基因在宿主菌中高效表达。

【3.2 表达宿主菌的培养】将构建好的表达载体转化到宿主菌中，进行菌株的培养。

培养过程中需要优化温度、pH、营养物质等条件，以获得高表达水平的重组肠激酶。

此外，为了防止表达产物的降解，还需在培养基中添加蛋白酶抑制剂。

【3.3 蛋白提取与纯化】菌株培养后，需要对菌体进行破碎，提取其中的重组肠激酶。

常用的提取方法有超声波法、离心法等。

提取到的蛋白质需要进行纯化，常用的纯化方法有凝胶过滤、离子交换层析等。

纯化过程中需要注意避免蛋白质的降解和活性损失。

【3.4 酶活性检测】对纯化后的重组肠激酶进行酶活性检测，以评价制备方法的有效性。

常用的检测方法有比色法、荧光法等。

根据检测结果，可以进一步优化制备流程，提高重组肠激酶的产率和纯度。

【3.5 结论】本文介绍了一种重组肠激酶的制备方法与流程，包括菌株选择与构建、表达宿主菌的培养、蛋白提取与纯化以及酶活性检测等步骤。

重组肠激酶Cat.No.:REK08CAS:9017-74-8EC :3.4.21.9储存温度：-20℃或以下来源：重组牛肠激酶，大肠杆菌表达蛋白序列：氨基酸序列与牛肠激酶轻链一致。

1.产品简介雅心重组牛肠激酶是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段。

该酶经HPLC 纯化，纯度高，特异性高，不含其他蛋白酶。

肠激酶可以切割含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端肽键：天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-赖氨酸（DDDDK ）。

可以在较宽pH 范围（4.5-9.5）和较宽温度范围内有效切割融合蛋白。

肠激酶可去除位于蛋白质N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签。

2.产品特性单位定义：1U 定义为在25℃，12h~16h 之内，将0.5mg 保存于25mM Tris-HCl 8.0缓冲液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。

3.推荐使用方法1）25℃酶切条件：按照酶活性定义，酶切条件举例：25mM Tris-HCl 8.0体系中：融合蛋白0.1-1mg/ml （蛋白总量50-100µg ）重组EK 0.1-0.2U25℃过夜酶切，或完全酶切需12-16h ，用SDS-PAGE检测酶切效果。

2）4℃低温酶切条件：4℃能对底物进行有效酶切，但需要将酶切时间延长至48-64h ，或增加2-3倍酶量。

3）酶切优化和放大优化：可以对酶切条件进行优化，例如缓冲液pH ，融合蛋白浓度，EK 的量，以及酶切时间，使融合蛋白能在稳定条件下被酶切，用SDS-PAGE 检测酶切效果。

放大：选择优化后的反应条件，按该条件等比例放大，用SDS-PAGE 检测酶切效果。

4）去除重组肠激酶的方法：使用胰蛋白酶抑制剂亲和层析（例如sigma T0637）去除重组肠激酶。

5）注意：不建议37℃条件下酶切，可能会有非特异性酶切出现。

来源重组大肠杆菌外观澄清、无色至淡黄色液体活性≥5.0U/µl 纯度（蛋白电泳）单一主条带电泳（分子量）25.8±2.58kDa4.常见影响肠激酶活性的因素在＞200mM咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影响。