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浙江工业大学药学院生物化学实验论文2013 年12 月13日啤酒酵母蔗糖酶的提取、提纯及测定研究论文摘要：为了了解蔗糖酶的性质，我们用啤酒酵母做了一系列的实验，它们主要是以下内容：（1），蔗糖酶的提取与初提纯：a、先将酵母自溶，再两次离心得初提液A；b、接着调PH并加热、离心得热提取液B；c、用乙醇沉淀离心得提取液C。
（2），蔗糖酶的纯化—Q Sepharose 柱沉析法：先装柱，再安装盐度梯度发生器与柱的平衡，接着加样并洗脱，最后处理结果与交换剂的再生并得到提取液D。
（3），蔗糖酶活力的测定：第一人做葡萄糖标曲，第二人测定各提取液反应后的值，得各提取液的酶活力与回收率。
（4），蔗糖酶蛋白质含量的测定及活力OD540计算：遇上一个实验相反，第二人做标曲，第一个人测与各提取液相对应的OD660值，再对比得到各提取液的总蛋白、比活力、蛋白回收率、酶活回收率与纯化倍数。
(5),微量凯氏定氮法（以B为样品）：先将样品B消化得消化液，洗涤定氮仪，再将消化液蒸馏，用HCl滴定馏出液，计算蛋白质含量。
（6），SDS-PAGE测定蛋白质的相对分子质量：首先制备分离胶并使之凝固，再制备浓缩胶使之在分离胶之上凝固，加处理后的样品和标准液，接着电泳，最后染色和脱色，确定样品相对分子质量。
关键词：蔗糖酶；蛋白质；提取；纯化；酶活力测定；Folin-酚试剂；微量凯式定氮；SDS-聚丙烯胺凝胶;标曲；电泳；正文：文献综述蔗糖酶(Sucrase,EC 3.2.1.26)又称转化酶(Invertase)，可作用于β21,2糖苷键,将蔗糖水解为D2葡萄糖和D2果糖，广泛存在于动植物和微生物中，主要从酵母中得到。
蔗糖酶的最适温度为45℃-50℃，最适ph为4.0-4.5.实验原理、试剂与器材、操作方法、结果与分析、注意事项、认识与体会1 蔗糖酶的提取及初步提纯1.1实验原理酵母中含有蔗糖酶，而蔗糖酶属于胞内酶，所以常将细胞壁破碎后进行提取。
实验八蔗糖酶各级分活性及蛋白质含量的测定一、实验目的掌握蔗糖酶活性的测定方法，进一步熟悉蛋白质含量测定的操作。
二、实验原理为了评价分离纯化出的蔗糖酶，必须测定各极分酶活性和比活。
酸性条件下，蔗糖酶催化蔗糖水解生成一分子葡萄糖和一分子果糖。
用测定生成还原糖（葡萄糖和果糖）的量来测定蔗糖水解的速度。
蔗糖酶的活力单位指在一定条件下反应5min，每产生1毫克葡萄糖所需酶量。
蔗糖酶是一种蛋白质，在蛋白质浓度一定时，酶活力是随纯度的提高而升高。
比活力为每毫克蛋白质的活力单位数（活力单位/mg蛋白）。
三、实验器材与试剂1．试剂3，5-二硝基水杨酸试剂、标准葡萄糖溶液、0.2mol/L蔗糖、0.2mol/L，pH4.9乙酸溶液、标准牛血清蛋白溶液、考马斯亮兰G-250试剂。
2．器材分光光度计、水浴锅、试管、保鲜膜、秒表。
四、操作步骤1．各级分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ蔗糖酶活性测定A酶液的稀释用0.2mol/L ，pH4.9乙酸缓冲液稀释各级分酶液，测定酶活合适的稀释倍数：Ⅰ：1000-10000倍Ⅱ：1000-10000倍Ⅲ：100-1000倍以上倍数仅供参考。
B葡萄糖标准曲线的制作：以A520nm为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标，绘制葡萄糖浓度的标准曲线。
C酶活力的测定将10%的蔗糖溶液稀释成pH4.5的6.5%（0.2mol/L）的溶液，取此溶液5ml置试管中（两支），将其放入25℃水浴保温5min，然后在一试管内加蔗糖酶液1.0ml，立即混匀，记时，反应5min，在加入0.1mol/LNaOH溶液终止反应；另一管先加入终止液再加入酶液，作为对照管。
取三支试管，在1，2管中分别加入上述反应液0.5ml二硝基水杨酸溶液，保鲜膜封口，沸水浴煮10min，取出后自来水冷却3min，加蒸馏水4ml，混匀，以第三管调零，于520nm处测定消光值（A520nm），以测定管的消光值减去对照管的消光值，以此值从标准曲线上求得相应的葡萄糖浓度，并乘以11，即为每ml酶溶液的活力。
论文论文题目：蔗糖酶的提取纯化及蛋白质含量测定研究作者姓名周柱林指导教师钟莉学科专业食品科学与工程1102所在学院生物与环境工程学院提交日期2013年12月蔗糖酶的提取纯化及蛋白质含量测定研究周柱林生物与环境工程学院食品科学与工程1102班摘要：对啤酒酵母蔗糖酶的相关性质进行研究讨论，实验采用酵母自溶法初步得到粗蔗糖酶，离心除杂质法得到初提取液A，接着制备热提取液B，接着制备乙醇沉淀提取液C，接着采用QSepharose-柱层析法得到纯度较高的D液，然后用DNS法、标准曲线法和分光光度法测定蔗糖酶的活力，用Folin-酚法测定蔗糖酶蛋白质含量及计算比活力，用微量凯氏定氮法测定总蛋白含量，最后用SDS-PAGE 法测定蛋白质的相对分子质量，并对其基本性质进行了研究。
实验测定结果A、B、C提取液的酶回收率（％）分别为100、128.5、56.6，蛋白回收率（％）分别为100、98.15、4.29，比活力分别为17.4、22.8、230.1，纯化倍数分别为1、1.31、13.22，SDS-PAGE测定酵母蔗糖酶相对分子质量为A:99150、45000；B：10140；C：92200、65660.关键词：蔗糖酶、提取、纯化、酶活力、蛋白质含量、比活力、相对分子质量1.前言（文献综述）：啤酒酵母也叫营养酵母，可以从其中提取蔗糖酶，蔗糖酶又称为转化酶，属于水解酶类，蔗糖在蔗糖酶的催化下，水解为两种还原糖D一葡萄糖和D一果糖。
蔗糖酶在植物的运输贮藏、碳水化合物代谢中发挥主要作用，并在渗透调节、抗逆性生长繁殖、以及信号传导方面也发挥着重要的作用。
按水解蔗糖的方式，蔗糖酶可分为从果糖末端切开蔗糖的β-D-呋喃果糖苷酶（β-D-frutofuranosidases,EC 3.2.1.26)和从葡萄糖末端切开蔗糖的α-D-葡萄糖苷酶（α-D-glucosidases,EC 3.2.1.20)。
前者存在于酵母中，后者存在于霉菌中。
（一）蔗糖酶的提取与部分纯化一、实验目的：学习酶的纯化方法，并为动力学实验提供一定量的蔗糖酶。
二、试剂：1. 啤酒酵母2. 二氧化硅3. 甲苯（使用前预冷到0℃以下）4. 去离子水（使用前冷至4℃左右）5. 冰块、食盐6. 1N乙酸7. 95%乙醇三、仪器：1. 研钵1个2. 离心管3个3. 滴管3个4. 量筒50ml 1个5. 水浴锅1个6. 恒温水浴7. 烧杯100ml 2个8. 广泛pH试纸9. 高速冷冻离心机四、操作步骤：1. 提取（1）准备一个冰浴，将研钵稳妥放入冰浴中。
（2）称取5g干啤酒酵母和20g湿啤酒酵母，称20mg蜗牛酶及适量（约10g）二氧化硅，放入研钵中。
二氧化硅要予先研细。
（3）量取预冷的甲苯30ml缓慢加入酵母中，边加边研磨成糊状，约需60分钟。
研磨时用显微镜检查研磨的效果，至酵母细胞大部分研碎。
（4）缓慢加入预冷的40ml去离子水，每次加2ml左右，边加边研磨，至少用30分钟。
以便将蔗糖酶充分转入水相。
（5）将混合物转入两个离心管中，平衡后，用高速冷离心机离心，4℃，10000rpm，10min。
如果中间白色的脂肪层厚，说明研磨效果良好。
用滴管吸出上层有机相。
（6）用滴管小心地取出脂肪层下面的水相，转入另一个清洁的离心管中，4℃，10000rpm，离心10min。
（7）将清液转入量筒，量出体积，留出1.5ml测定酶活力及蛋白含量。
剩余部分转入清洁离心管中。
（8）用广泛pH试纸检查清液pH，用1N乙酸将pH调至5.0，称为“粗级分I”。
2. 热处理（1）予先将恒温水浴调到50℃，将盛有粗级分I的离心管稳妥地放入水浴中，50℃下保温30分钟，在保温过程中不断轻摇离心管。
（2）取出离心管，于冰浴中迅速冷却，用4℃，10000rpm，离心10min。
（3）将上清液转入量筒，量出体积，留出1.5ml测定酶活力及蛋白质含量（称为“热级分II”）。
3. 乙醇沉淀将热级分II转入小烧杯中，放入冰盐浴（没有水的碎冰撒入少量食盐），逐滴加入等体积预冷至－20℃的95%乙醇，同时轻轻搅拌，共需30分钟，再在冰盐浴中放置10分钟，以沉淀完全。
酵母蔗糖酶的提取及其性质的研究一、蔗糖酶的制备1、提取称取14.997g干酵母粉于250ml小烧杯中，少量多次地加入50ml蒸馏水，搅拌均匀。
成糊状后加入1.499g乙酸钠、25ml乙酸乙酯，搅匀。
再于35℃恒温水浴中搅拌30min，然后补加30ml蒸馏水，搅匀，盖好，于35℃恒温过夜。
之后，1000r/min离心10min，抽取酯层后再次离心，得到无细胞提取液。
用1M HCl将其PH调至5.0，即可得到级分Ⅰ。
（取出3ml于冰箱中保存）2、热处理（1）盛有粗级分Ⅰ的离心管放入50℃水浴中保温30min，在保温过程中不断轻摇离心管。
（2）取出离心管，于冰浴中迅速冷却，用4℃，1000r/min离心10min。
（3）上清液即为热级分Ⅱ。
（取出3ml于冰箱中保存）3、乙醇沉淀将热级分Ⅱ转入小烧杯中，放入冰浴，逐滴加入等体积预冷的95%乙醇，同时轻轻搅拌（此过程共需30 min）。
然后在冰浴中静置10 min，以沉淀完全。
然后4℃，1000r/min离心10min。
倾去上清，并滴干。
将沉淀保存于离心管中，冷冻保存，此即级分Ⅲ。
二、蔗糖酶的纯化将3ml级分Ⅲ加入洗脱柱中进行梯度洗脱。
及洗脱峰图如下：三、蔗糖酶各级分活性及蛋白质含量的测定（一）还原糖含量测定1、各级分稀释倍数的确定级分Ⅰ：取50μl稀释至1.5ml（30倍）级分Ⅱ：取50μl稀释至1.5ml（30倍）级分Ⅲ：取50μl稀释至15ml（300倍）取20μl稀释至2ml（100倍）释100倍。
在上述表格中，Glu含量是由标准曲线求得的，E'=Glu含量*稀释倍数/（10 min*0.6 ml）Units=0.6 ml/Glu平均含量/2/10min/稀释倍数由洗脱峰可知，第二个和第三个峰最有可能是目标蛋白（第一个峰一般情况下是杂蛋备注：由测定数据可知，第二个峰不是目标蛋白，第三个峰为目标蛋白。
（二）蛋白质含量测定1、各级分稀释倍数的确定由以上数据可知，级分Ⅰ和级分Ⅱ不需稀释，级分Ⅲ需稀释5倍。
啤酒酵母的蔗糖酶的提取、提纯及测定浙江工业大学药学院生物化学实验论文2021 年12 月 13日啤酒酵母蔗糖酶的提取、提纯及测定研究论文摘要：为了了解蔗糖酶的性质，我们用啤酒酵母做了一系列的实验，它们主要是以下内容：（1），蔗糖酶的提取与初提纯：a、先将酵母自溶，再两次离心得初提液A；b、接着调PH并加热、离心得热提取液B；c、用乙醇沉淀离心得提取液C。
（2），蔗糖酶的纯化—Q Sepharose 柱沉析法：先装柱，再安装盐度梯度发生器与柱的平衡，接着加样并洗脱，最后处理结果与交换剂的再生并得到提取液D。
（3），蔗糖酶活力的测定：第一人做葡萄糖标曲，第二人测定各提取液反应后的OD540值，得各提取液的酶活力与回收率。
（4），蔗糖酶蛋白质含量的测定及活力计算：遇上一个实验相反，第二人做标曲，第一个人测与各提取液相对应的OD660值，再对比得到各提取液的总蛋白、比活力、蛋白回收率、酶活回收率与纯化倍数。
(5),微量凯氏定氮法（以B为样品）：先将样品B消化得消化液，洗涤定氮仪，再将消化液蒸馏，用HCl滴定馏出液，计算蛋白质含量。
（6），SDS-PAGE测定蛋白质的相对分子质量：首先制备分离胶并使之凝固，再制备浓缩胶使之在分离胶之上凝固，加处理后的样品和标准液，接着电泳，最后染色和脱色，确定样品相对分子质量。
关键词：蔗糖酶；蛋白质；提取；纯化；酶活力测定；Folin-酚试剂；微量凯式定氮；SDS-聚丙烯胺凝胶;标曲；电泳；正文：文献综述蔗糖酶(Sucrase,EC 3.2.1.26)又称转化酶(Invertase)，可作用于β21,2糖苷键,将蔗糖水解为D2葡萄糖和D2果糖，广泛存在于动植物和微生物中，主要从酵母中得到。
蔗糖酶的最适温度为45℃-50℃，最适ph为4.0-4.5.实验原理、试剂与器材、操作方法、结果与分析、注意事项、认识与体会 1 蔗糖酶的提取及初步提纯1.1实验原理酵母中含有蔗糖酶，而蔗糖酶属于胞内酶，所以常将细胞壁破碎后进行提取。
论文论文题目：蔗糖酶的提取纯化及蛋白质含量测定研究作者姓名周柱林指导教师钟莉学科专业食品科学与工程1102所在学院生物与环境工程学院提交日期2013年12月蔗糖酶的提取纯化及蛋白质含量测定研究周柱林生物与环境工程学院食品科学与工程1102班摘要：对啤酒酵母蔗糖酶的相关性质进行研究讨论，实验采用酵母自溶法初步得到粗蔗糖酶，离心除杂质法得到初提取液A，接着制备热提取液B，接着制备乙醇沉淀提取液C，接着采用Q Sepharose-柱层析法得到纯度较高的D液，然后用DNS法、标准曲线法和分光光度法测定蔗糖酶的活力，用Folin-酚法测定蔗糖酶蛋白质含量及计算比活力，用微量凯氏定氮法测定总蛋白含量，最后用SDS-PAGE法测定蛋白质的相对分子质量，并对其基本性质进行了研究。
实验测定结果A、B、C提取液的酶回收率（％）分别为100、128.5、56.6，蛋白回收率（％）分别为100、98.15、4.29，比活力分别为17.4、22.8、230.1，纯化倍数分别为1、1.31、13.22，SDS-PAGE测定酵母蔗糖酶相对分子质量为A:99150、45000；B：10140；C：92200、65660.关键词：蔗糖酶、提取、纯化、酶活力、蛋白质含量、比活力、相对分子质量1.前言（文献综述）：啤酒酵母也叫营养酵母，可以从其中提取蔗糖酶，蔗糖酶又称为转化酶，属于水解酶类，蔗糖在蔗糖酶的催化下，水解为两种还原糖D一葡萄糖和D一果糖。
蔗糖酶在植物的运输贮藏、碳水化合物代谢中发挥主要作用，并在渗透调节、抗逆性生长繁殖、以及信号传导方面也发挥着重要的作用。
按水解蔗糖的方式，蔗糖酶可分为从果糖末端切开蔗糖的β-D-呋喃果糖苷酶（β-D-frutofuranosidases,EC 3.2.1.26)和从葡萄糖末端切开蔗糖的α-D-葡萄糖苷酶（α-D-glucosidases,EC 3.2.1.20)。
前者存在于酵母中，后者存在于霉菌中。
工业上多从酵母中提取。
目前关于酵母中蔗糖酶提取纯化方面的研究较多 , 有SDS抽提法，正交法等等，其中以甲苯自溶法最为常见。
本实验采用此自溶法从啤酒酵母中提取蔗糖酶，利用有机溶剂将胞内蔗糖酶释放，经过初提取的离心去杂和等电位沉淀，制得的粗酶经醇沉后，采用Q Sepharose-柱层析法纯化，利用DNS法测定其酶活力，利用Folin-酚法测定蛋白质的含量及比活力，利用微量凯氏定氮法测总蛋白氮，以及用SDS-PAGE测定蛋白质的相对分子质量，并对其基本性质进行了研究，也为酵母蔗糖酶在食品工业中的应用和蔗糖酶基因工程产品的技术开发提供了实验依据。
本实验目的在于用自溶法提取酵母蔗糖酶的过程中，测定各步的总蛋白、总活力，并据此计算比活、回收率和纯化倍数。
2.材料与方法2.1 材料：啤酒酵母2.2 试剂与仪器2.2.1 试剂：醋酸钠；甲苯；95%乙醇；0.5mol/L Tris-HCl pH7.3缓冲液；4mol/L 醋酸；0.05mol/L Tris-HCl pH7.3缓冲液；1mol/L NaCl 的0.05mol/L Tris-HCl pH7.3缓冲液；0.5mol/L NaOH; Q-Sepharose；DNS；葡萄糖标准溶液；0.2mol/L pH4.6 醋酸缓冲液；2mol/L NaOH; 5% 蔗糖；试剂A（碱性铜试剂）；试剂B（酚试剂）；标准浓度牛血清白蛋白溶液；浓硫酸；硫酸钾3份与硫酸铜1份（质量分数）混合粉末；30%NaOH； 2%硼酸溶液；混合指示剂； 0.01mol/L HCl标准溶液；30%丙烯酰胺贮液；10%过硫酸铵溶液；分离胶缓冲液贮液；浓缩胶缓冲液贮液； 2*SDS-样品缓冲液；SDS-电极缓冲液贮存液；染色液；脱色液。
2.2.2 仪器:恒温水浴锅,恒温培养箱,高速冷冻离心机、磁力搅拌器或梯度混合器，搅拌子层析柱、梯度发生器及搅拌子、紫外分光光度计、点滴板,电炉,恒温水浴锅,分光光度计721分光光度计,刻度吸管0.5ml（*1），2ml*2， 5ml*1,试管1.5cm*15cm（ *8）,恒温水浴槽,改良式凯氏定氮仪,DYY-60型电泳仪。
2.3实验过程及方法2.3.1 蔗糖酶提取及初提纯a.酵母的自溶在250ml锥形瓶中加入鲜酵母20g、醋酸钠1.6g，加入1.5ml 甲苯用滤布加牛皮纸将瓶口塞住，摇匀10min，放入37℃培养箱保温60h，使酵母自溶。
b.制备初提液A 在培养箱中取出装有已自通酵母的锥形瓶，加入10ml蒸馏水，摇匀，倒入塑料离心管中，平衡后用高速冷冻离心机4℃、15000r/min离心10min。
小心取出离心后中间层的液体，重新倒入离心管中，4℃、15000r/min，取出3ml保存。
离心10min。
仔细倒出上层清液，测出体积为VAc.制备热提取液B 预先将水浴加热到50℃，将初提液A倒入50ml的锥形瓶中，加4mol/L醋酸3.2ml左右，摇匀，水浴保温20min，在保温过程中不断摇动锥形瓶，取出后迅速在冰浴中冷却，冷却液于4℃、15000r/min离心10min。
测出上层清液，取出3ml保存。
的体积记为VBd. 制备乙醇沉淀提取液C将热提取液B倒入100ml烧杯中，把烧杯放入冰浴中，轻轻搅拌并慢慢加入95%乙醇溶液，体积与热提取液B 相同。
整个过程不少于20min，再继续搅拌5min，将烧杯内的液体全部移入离心管中，杯底白色固体保留待用，4℃、15000r/min离心10min。
仔细地倒掉上层清液，用5ml0.05mol/LTris-HClpH7.3缓冲液把烧杯中的白色固体溶解，倒入离心管搅拌使离心管内的白色固体溶解，4℃、15000r/min离心10min。
测量上层清液体积V，全部保存。
C2.3.2 蔗糖酶的纯化Q Sepharose -柱层析法A 离子交换柱的填充B 缓冲液盐度梯度发生器的安装C 柱的平衡：交换剂成为相应的交换型①在小烧杯中加入15毫升Tris HCl②恒流泵进口插入烧杯液面下③恒流泵出水管一端连接柱子④放松夹子⑤打开恒流泵⑥用Tris HCl冲洗⑦直到缓冲液面与交换剂相切D 加样及洗穿透峰①夹紧下端夹子, 在烧杯加入15毫升Tris HCl②从上部缓慢加入0.5ml提取液C，放松夹子③样品全部刚好进入交换剂内，相切，夹紧夹子⑤先打开恒流泵，再放开夹子，⑥用量筒收集全部流出液体，每管收集3ml⑦直到液面相切E 洗脱①将梯度发生器出口与恒流泵相连②恒流泵与柱相连③打开搅拌器，打开连通器旋钮，打开恒流泵④用20 毫升Tris HCl 缓冲液配制的1摩尔/升 NaCl20 毫升溶液开始梯度洗脱打开夹子⑤用量筒收集3 毫升/管，直到全部缓冲液流出F 离子交换剂的再生烧杯加入15 毫升 NaCl洗脱→不用收集→凝胶冲到小烧杯→全部凝胶回收G 测吸光度,酶活力测试,取酶活力最高的2管为柱分离液D。
2.3.3 蔗糖酶活力的测定2.3.3.1葡萄糖标准曲线制作：烧水，不要太多，进行DNS反应：注意振荡混匀，移液管对应，要及时清洗2.3.3.2 酶活力测定A，稀释样品，浓度从低到高，即C→B→A，防止污染。
2.3.4 蔗糖酶蛋白质含量测定及比活力计算2.3.4.1蛋白质含量标准曲线绘制 :Folin-酚反应试管号0 1 2 3 4 5标准牛血清蛋白液0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 /ml蒸馏水/ml 4.5 4.3 4.1 3.9 3.7 3.5 试剂A/ml 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.00.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 试剂B/ml 第一次0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2第二次总体积/ml 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0 A660 0 0.181 0.323 0.457 0.576 0.703 2.3.4.2 未知蛋白质浓度测定A 样品稀释2.3.5 微量凯氏定氮法测总蛋白氮将0.04ml B样液与3ml浓硫酸、20mg硫酸钾-硫酸铜混合物加热消化。
洗涤微量凯氏定氮仪时，用装有10ml 2%硼酸溶液和4滴混合指示剂的锥形瓶检测，变绿则重新洗涤。
将消化液定容至50ml，取5ml于反应室，同时加入10ml30% NaOH，用少量水洗涤漏斗后水封。
等到颜色变绿后计时3min，再蒸馏1min，滴定。
六次滴定消耗HCl的体积（ml）分别为：0.48、0.55、0.52、0.45、0.50、0.50 。
2.3.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量2.3.6.1 分离胶制备①配分离胶成分：12%分离胶②各成分加入小烧杯，加入每一种应立即用塑料吸管抽吸慢慢混匀，不要有过多气泡③TEMED最后加入，马上灌胶④用塑料吸管从一边加入玻璃板之间，防止气泡，不要全部挤入（2/3高度，梳子下端距分离胶上边缘 1.5cm ⑤加水覆盖，加满水，出现界面，再次出现界面聚合完成，⑥倒出水，用滤纸条吸出表面的水⑦聚合30~60 min2.3.6.2 浓缩胶制备①用滤纸吸干水层②配制5%浓缩胶：5% ③各成分加入小烧杯，加入每一种应立即用塑料吸管抽吸慢慢混匀，不要有过多气泡④ TEMED最后加入，马上灌胶⑤用塑料吸管从一边加入玻璃板之间，混匀加入在分离胶上层⑥插入梳子，不要插反⑦聚合⑧取出梳子（注意用力平衡，不要左右摇摆）⑨用滤纸条除去样品槽内的水分。
⑩撕去胶条，玻璃板方向：凹槽向内，不要用力压2.3.6.3 加样品：加入样品和marker，进行电泳。
电泳结束后，染色4h，然后用脱色液脱色三次。
以maker中标准蛋白质相对分子量的对数（lgMW）为纵坐标，相对迁移距离为横坐标作图，得到标准曲线。
然后根据样品蛋白质分子的相对迁移距离，从标准曲线上查出其相对分子质量。
3.结果与分析3.1 蔗糖酶的提取及初提纯，蔗糖酶的纯化——Q Sepharose-柱层析法3.1.1 实验结果V A=18.8ml V B=18.5ml V c=5.8ml V D=5.8mlV A总= V A =18.8mlV B总=V B·[V A/（V A-3）]= 18.5·[18.8/（18.8-3）]=22.01mlV c总=V c·[V A/（V A-3）]·[V B/（V B-3）]=V C·[V B总/（V B-3）] = 5.8·[22.01/（18.5-3）]=8.34mlV D总=V D·V C总/V样=5.8*8.8/0.5=96.75ml3.1.2 结果分析A. VB较大是因为在离心前平衡时加入了较多的蒸馏水是V B增大。
B、在同一温度下，溶液中各物质的量不同，所以溶解度不同，对蔗糖酶进行纯化。
