实验四 种子生活力测定
一、实验目的和要求
了解测定种子生活力的基本原理，并学会其操作程序。
种子生活力：种子潜在的发芽能力。
二、测定原理
四唑：2,3,5－三苯基氯(溴)化四唑（C19H15N4Cl(Br)）的简称为，为白色粉末，水溶液无色。
染色原理：种胚活细胞中的脱氢酶产生氢，与浸入种胚内的四唑发生作用，产生红色稳定而不扩散的三苯基甲（TPF）。
判断标准：凡种胚染成红色者表示有生活力，不染色的种子为无生活力的种子；不染色的部位为坏死的部位，根据坏死组织出现的部位及其分布可以判断种子的生活力。
三、材料及器具
材料：刺槐
器具及药品：烧杯、解剖刀、解剖针、镊子、培养皿、量筒、滤纸、手持放大镜、玻璃棒、取样匙、1%四唑等
四、方法及步骤
1. 测定样品的提取
从净度测定后的纯净种子中随机提取50粒种子（四分法）。3次重复。同时准备部分种子作为后备。
2. 种子预处理（浸种，同发芽测定）
3. 溶液配制 溶液A：9.078g KH2PO4溶于1000mL水；
溶液B：11.876g Na2HPO4·2H2O溶于1000mL水；
缓冲液配制：溶液A：溶液B以2:3比例混合;
1%的四唑溶液配制：称取四唑1g溶于100mL的缓冲溶液，现配现用。
4. 取种胚、染色处理
剥除外种皮和内种皮，取出种胚后放入盛有清水的玻璃皿；
记录空粒、腐烂粒及病虫害感染种粒。如取胚时由于人为因素而破坏种胚，可从后备种子中补取；
种胚剥取结束后一起放入四唑溶液，使溶液淹没种仁，上浮者要压沉。置黑暗处，保持30～35℃染色2～3h。
5. 结果鉴定
经过染色的种子分组放在潮湿的滤纸上，借助于手持放大镜或实体显微镜逐粒观察。
有生活力：种胚和胚乳完全着色；
无生活力：种胚和胚乳完全不着色；
根据种胚或胚乳上未着色的斑块的位置和大小判断种子有无生活力（种胚不染色的最大面积不超过1/4子叶末端）。
6. 种子生活力计算
种子生活力快速测定
一、实验原理
通过本实验，掌握种子生活力快速测定的原理和方法。
二、实验原理
（1）活细胞染色：脱氢辅酶（NADH或NAFPH)存在于活的细胞内，当TTC渗透进入细胞内作为受体被脱氢辅酶上的氢还原，便由无色的TTC变为红色的三苯基甲（TTE)。当细胞死亡后，NADH会迅速被降解，不会发生相应的颜色反应，故TTC染色法可显示细胞是否存活。
（2）死细胞染色：有生命力的细胞膜是一个半透性膜，因此对内渗透的物质有选择性；而无生命力的细胞，其细胞膜已经消失，因此有的有色物质（如品红）不能进入活的细胞内，但可以进入已经死亡的细胞，从而使细胞内出现该有色成分特有的颜色，故可以据此鉴别细胞是否死亡。
三、实验材料、药品和器具
1、实验材料：花生、黄豆
2、实验药品和器具：品红、TTC、培养皿、吸水纸、镊子、解剖针、刀片等
四、试验方法
1、分别取10颗红豆和黄豆的种子，沿种子的培从中切成两半，将带胚的部分放入培养皿中，加入TTC培养1h左右，观察胚染色的情况。胚被染色的为有活力种子，未被染色的为无活力的种子。
2、别取10颗红豆和黄豆的种子，沿种子的培从中切成两半，将带胚的部分放入培养皿中，加入品红培养10-20min，倒掉品红溶液，冲洗数次，观察胚染色的情况。胚被染色的为无活力种子，未被染色的为有活力的种子。
五、实验结果
品种 测定方法 测定种子总数 有生活力种子粒数 无生活力种子粒数 种子生活率
花生 TTC 30 28 2 93%
品红 30 28 2 93%
黄豆 TTC 30 30 0 100%
品红 30 29 1 97%
实验结果可以得出选用TTC染色和品红染色得出的结果存在差异，用TTC染色得出的结果高于品红染色法。
结果分析：可能的原因是在清洗品红时没有清洗干净，品红粘在胚上，影响实验的观察，导致结果差异。
六、注意事项
1、选取种子的时候，要尽量选取未发芽的种子，避免影响测定。
ＩＳＳＮ１００２．．． ． ．．．４ ９．—５６ ＣＮ１１ ２０３４／Ｔ 实验技术与管理 Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ 第２８卷第１期２Ｏ１１年１月 Ｖｏ１．２８ Ｎｏ．１ Ｊａｎ．２０１１
测定种子生活力方法的比较与改进
刘亚丽，赵喜亭
（河南师范大学生命科学学院，河南新乡４５３００７）
摘要：用氯化三苯基四氮唑（ＴＴＣ）法、红墨水法和溴麝香草酚蓝（ＢＴＢ）法测定种子生活力，对实验选用的 种子、浸泡时间、ＴＴＣ的药液配置浓度、红墨水染色法染色时间、ＢＴＢ法加入琼脂浓度及琼脂凝胶层厚度作了 改进。结果表明：缩短了３种方法测定种子生活力的时间，且效果更好，测定的准确率更高；ＴＴＣ染色法红色 更深，红墨水染色法种胚与胚乳更易分辨。 关键词：种子生活力；氯化三苯基四氮唑法；红墨水法；溴麝香草酚蓝法 中图分类号：￥３３９．３ 文献标志码：Ｂ 文章编号：１００２—４９５６（２０１１）０１—００４６—０３
Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｋｉｎｄｓ ｏｆ
ｍｅｔｈｏｄｓ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｓｅｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ
Ｌｉｕ Ｙａｌｉ，Ｚｈａｏ Ｘｉｔｉｎｇ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｉ ｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｈｅｎａｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ ４５３００７，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ２，３，５，一Ｔｒｉｐｈｅｎｙｌ ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ，ｒｅｄ ｉｎｋ ａｎｄ Ｂｒｏｍｏｔｈｙｍｏｌ ｂｌｕｅ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｓｅｅｄ。Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｉｎｇ ｓｅｅｄ，ｔｉｍｅ ｏｆ ｓｏａｋｉｎｇ，ｄｅｓｔｉｎｙ ｏｆ ２，３，５，～Ｔｒｉｐｈｅｎｙｌ ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ｄｅｎｓｉｔｙ ｏｆ Ｂｒｏｍｏｔｈｙｍｏｌ ｂｌｕｅ ｐｕｔ ｉｎ Ａｇａｒ ｐｏｗｄｅｒ，ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ｏｆ ａｇａｒ ｐｏｗｄｅｒ ｗｅｒｅ ｉｍｐｒｏｖｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅ— ｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｔｉｍｅ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｓｅｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｗａｓ ｓｈｏｒｔｅｎｅｄ ａｎｄ ｂｅｎｅｒ ｅｆｆｅｃｔ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ａｃｃｕｒａｃｙ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｓｅｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ；２，３，５，一ｔｒｉｐｈｅｎｙｌ ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ｍｅｔｈｏｄ；ｒｅｄ ｉｎｋ ｍｅｔｈｏｄ；Ｂｒｏｍｏ— ｔｈｙｍｏｌ ｂｌｕｅ ｍｅｔｈｏｄ
实验 17 种子生活力的快速测定
种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接有关。测定种子生活力常采用发芽实验，即在适宜条件下，让种子吸水萌发，在规定天数内统计发芽的种子占供试种子的百分数。但是常规方法（直接发芽）测定种子生活力所需时间较长，特别是有时为了应急需要，没有足够的时间来测定发芽率，遇到休眠种子也无法知道。而采用以下的化学方法，则能在较短时间内获得结果。
Ⅰ 氯化三苯基四氮唑法（ TTC 法）
一、原理
凡有生命活力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，在呼吸代谢途径中由脱氢酶催化所脱下来的氢可以将无色的 TTC 还原为红色、不溶性三苯基甲 （ TTF ），而且种子的生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深。死亡的种子由于没有呼吸作用，因而不会将 TTC 还原为红色。种胚生活力衰退或部分丧失生活力，则染色较浅或局部被染色。因此，可以根据种胚染色的部位以及染色的深浅程度来判定种子的生活力。
二、实验材料、试剂与仪器设备
（一）实验材料
玉米、小麦等种子。
（二）试剂
0.5% TTC 溶液：称取 0.5 gTTC 放在烧杯中，加入少许 95% 乙醇使其溶解，然后用蒸馏水稀释至 100 mL 。溶液避光保存，若变红色，即不能再用。
（三）仪器设备
恒温箱，培养皿，刀片，烧杯，镊子，天平。
三、实验步骤
1. 浸种 将待测种子在 30 ～ 35 ℃温水中浸种（大麦、小麦 6 小时，玉米 5 小时左右），以增强种胚的呼吸作用。
2. 显色 取吸胀的种子 200 粒，用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半，将其中的一半置于 2
只培养皿中，每皿 100 个半粒，加入适量的 0.5% TTC 溶液，以覆盖种子为度。然后置于 30 ℃恒温箱中 1 h 。观察结果，凡胚被染为红色的是活种子。
