种子生活力测定实验报告

实验三 种子和根系生活力的测定

一、种子活力的测定

种子是裸子和被植物的延存器官，种子质量和活力是农林业生产的基础。

（一）氯化三苯基四氮唑（TTC）法

【原理】 

TTC（2，3，5－氯化三苯基四氮唑）的氧化态是无色的，可被氢还原成不溶性的红色

三苯基甲月朁（TTF）。具有活力的组织和细胞在呼吸作用中，脱氢酶催化底物氧化脱氢产

生NADH、NADPH 等还原性物质，当TTC渗入组织或细胞时呼吸过程产生的还原物质可将

其还原成TTF（红色），组织或细胞被染成红色。死细胞无呼吸，不发生这样的氧化还原反

应。应用这一原理，可根据组织或细胞染色情况来检测种子、花粉根系等的活力。

应用TTC的水溶液浸泡种子，使之渗入种胚的细胞内，如果种胚具有生命力，其中的脱

氢酶就可以将TTC作为受氢体使之还原成为三苯基甲月朁 而呈红色， 如果种胚死亡便不能

染色，种胚生命力衰退或部分丧失生活力则染色较浅或局部被染色，因此，可以根据种胚染

色的部位或染色的深浅程度来鉴定种子的生命力。

【仪器设备】 

1．小烧杯； 

2．刀片； 

3．镊子； 

4．温箱； 

5．培养皿； 

6． 棕色试剂瓶； 

7． 解剖针； 

8． pH试纸。

【试剂】 

0.1 %TTC溶液：0.1 g TTC溶于100 mL pH 7.0的磷酸缓冲液中。

【材料】 贮藏不同时间种子和死种子。

【方法步骤】

1． 将新种子、陈种子或死种子，用温水（约30 ℃）浸泡2～6 h，使种子充分吸胀。 

2． 随机取种子两份，每份50粒。豆类种子要去皮，然后沿种胚中央准确切开，取其一

半备用。 

3． 将准备好的种子分别放在培养皿中，加入TTC溶液，以浸没种子为度。 

4． 将种子置于30 ℃～35 ℃的恒温箱中保温30 min染色。也可在20 ℃左右的室温下

放置40～60 min。 

5． 染色结束后要立即进行鉴定，因放久会褪色。倒出TTC溶液，再用清水将种子冲洗 

2～3次，逐个观察种胚被染色的情况，判断种子有无生活力。凡种胚全部或大部分被染成红

实验 17 种子生活力的快速测定

种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接有关。测定种子生活力常采用发芽实验，即在适宜条件下，让种子吸水萌发，在规定天数内统计发芽的种子占供试种子的百分数。但是常规方法（直接发芽）测定种子生活力所需时间较长，特别是有时为了应急需要，没有足够的时间来测定发芽率，遇到休眠种子也无法知道。而采用以下的化学方法，则能在较短时间内获得结果。

Ⅰ 氯化三苯基四氮唑法（ TTC 法）

一、原理

凡有生命活力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，在呼吸代谢途径中由脱氢酶催化所脱下来的氢可以将无色的 TTC 还原为红色、不溶性三苯基甲 （ TTF ），而且种子的生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深。死亡的种子由于没有呼吸作用，因而不会将 TTC 还原为红色。种胚生活力衰退或部分丧失生活力，则染色较浅或局部被染色。因此，可以根据种胚染色的部位以及染色的深浅程度来判定种子的生活力。

二、实验材料、试剂与仪器设备

（一）实验材料

玉米、小麦等种子。

（二）试剂

0.5% TTC 溶液：称取 0.5 gTTC 放在烧杯中，加入少许 95% 乙醇使其溶解，然后用蒸馏水稀释至 100 mL 。溶液避光保存，若变红色，即不能再用。

（三）仪器设备

恒温箱，培养皿，刀片，烧杯，镊子，天平。

三、实验步骤

1. 浸种 将待测种子在 30 ～ 35 ℃温水中浸种（大麦、小麦 6 小时，玉米 5 小时左右），以增强种胚的呼吸作用。

2. 显色 取吸胀的种子 200 粒，用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半，将其中的一半置于 2

只培养皿中，每皿 100 个半粒，加入适量的 0.5% TTC 溶液，以覆盖种子为度。然后置于 30 ℃恒温箱中 1 h 。观察结果，凡胚被染为红色的是活种子。

实验四 种子生活力测定

一、目的要求

应用化学药剂处理和生物化学法快速测定体眠种子生活力并比较不同方法的效果。

二、材料用具

（一）材料：水稻和玉米种子

（二）药品：2．3—5一氯化三苯基四氮唑和红墨水等。

三、方法步骤

（一）四唑盐类法：

1．在洁净的水稻种子中，随机数取试样2份，各100粒剥去谷壳，浸入30℃的水中6－8小时。

2．用2．3．5－氯化三苯基四氮唑配制成的溶液，装在棕色玻璃瓶里，保存在黑暗中。

3．将已剥去壳的软化的米粒沿种胚纵切，取其一半浸于已配好的药液中，放于暗处（最好用棕色发芽皿盛放），经24小时可观察结果，如果提高温度可以缩短处理时间（40℃1小时）。

4．观察结果：凡种胚的主要构造染成深红色者为有生活力的种子，凡种胚的主要构造染成浅红色或不染色者为无生活力的种子。

5．具体种子具体做法：

取水稻种子样品200粒，去壳，放纸间或水中30℃预湿12h，沿种子侧面胚纵切，放入0.1%四唑溶液35℃染色1-2h，凡是胚的主要构造染成正常鲜红色，或胚根尖端2/3不染色而其他部分正常染色的种子为有生活力种子。

（二）红墨水染色法：

1．从洁净玉米种子随机数取试样二，各100粒，于30℃温水中浸2-3小时。

2．配制红墨水溶液，用红墨水加水配成1：60的溶液。

3．取出软化过的种子，沿胚切成对半，取其半粒种子。

4．浸入红墨水溶液，15分钟后取出，用清水冲洗。

5．观察结果：凡种胚的主要构造不染色或染色浅者为有生活力的种子，凡种胚染色者为无生活力的种子。 四、结果表示与报告

计算各个重复中有生活力的种子数，重复间最大容许差距不得超过附表（生活力测定重复间的最大容许差距）的规定，平均百分率计算到最近似的整数。

平均生活力百分率% 重复间容许的最大差距

1 2 4次重复 3次重复 2次重复

99 2 5 - -

98 3 6 5 -

97 4 7 6 6

96 5 8 7 6

实验四 种子生活力测定

一、实验目的和要求 了解测定种子生活力的基本原理，并学会其操作程序。

种子生活力：种子潜在的发芽能力。 二、测定原理

四唑：2,3,5－三苯基氯(溴)化四唑（C19H15N4Cl(Br)）的简称为，

为白色粉末，水溶液无色。 染色原理：种胚活细胞中的脱氢酶产生氢，与浸入种胚内的四唑

发生作用，产生红色稳定而不扩散的三苯基甲（TPF）。 判断标准：凡种胚染成红色者表示有生活力，不染色的种子为无

生活力的种子；不染色的部位为坏死的部位，根据坏死组织出现的部

位及其分布可以判断种子的生活力。 三、材料及器具

材料：刺槐 器具及药品：烧杯、解剖刀、解剖针、镊子、培养皿、量筒、滤纸、

手持放大镜、玻璃棒、取样匙、1%四唑等

四、方法及步骤 1. 测定样品的提取

从净度测定后的纯净种子中随机提取50粒种子（四分法）。3次重复。同时准备部分种子作为后备。

2. 种子预处理（浸种，同发芽测定）

3. 溶液配制 溶液A：9.078g KH2PO4溶于1000mL水；

溶液B：11.876g Na2HPO4·2H2O溶于1000mL水； 缓冲液配制：溶液A：溶液B以2:3比例混合;

1%的四唑溶液配制：称取四唑1g溶于100mL的缓冲溶液，现

配现用。

4. 取种胚、染色处理

剥除外种皮和内种皮，取出种胚后放入盛有清水的玻璃皿； 记录空粒、腐烂粒及病虫害感染种粒。如取胚时由于人为因素而

破坏种胚，可从后备种子中补取； 种胚剥取结束后一起放入四唑溶液，使溶液淹没种仁，上浮者要

压沉。置黑暗处，保持30～35℃染色2～3h。

5. 结果鉴定

经过染色的种子分组放在潮湿的滤纸上，借助于手持放大镜或实

体显微镜逐粒观察。  有生活力：种胚和胚乳完全着色；

 无生活力：种胚和胚乳完全不着色；

 根据种胚或胚乳上未着色的斑块的位置和大小判断种子有无生

活力（种胚不染色的最大面积不超过1/4子叶末端）。

6. 种子生活力计算