ＩＳＳＮ１００２．．． ． ．．．４ ９．—５６ ＣＮ１１ ２０３４／Ｔ 实验技术与管理 Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ 第２８卷第１期２Ｏ１１年１月 Ｖｏ１．２８ Ｎｏ．１ Ｊａｎ．２０１１
测定种子生活力方法的比较与改进
刘亚丽，赵喜亭
（河南师范大学生命科学学院，河南新乡４５３００７）
摘要：用氯化三苯基四氮唑（ＴＴＣ）法、红墨水法和溴麝香草酚蓝（ＢＴＢ）法测定种子生活力，对实验选用的 种子、浸泡时间、ＴＴＣ的药液配置浓度、红墨水染色法染色时间、ＢＴＢ法加入琼脂浓度及琼脂凝胶层厚度作了 改进。结果表明：缩短了３种方法测定种子生活力的时间，且效果更好，测定的准确率更高；ＴＴＣ染色法红色 更深，红墨水染色法种胚与胚乳更易分辨。 关键词：种子生活力；氯化三苯基四氮唑法；红墨水法；溴麝香草酚蓝法 中图分类号：￥３３９．３ 文献标志码：Ｂ 文章编号：１００２—４９５６（２０１１）０１—００４６—０３
Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｋｉｎｄｓ ｏｆ
ｍｅｔｈｏｄｓ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｓｅｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ
Ｌｉｕ Ｙａｌｉ，Ｚｈａｏ Ｘｉｔｉｎｇ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｉ ｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｈｅｎａｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ ４５３００７，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ２，３，５，一Ｔｒｉｐｈｅｎｙｌ ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ，ｒｅｄ ｉｎｋ ａｎｄ Ｂｒｏｍｏｔｈｙｍｏｌ ｂｌｕｅ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｓｅｅｄ。Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｉｎｇ ｓｅｅｄ，ｔｉｍｅ ｏｆ ｓｏａｋｉｎｇ，ｄｅｓｔｉｎｙ ｏｆ ２，３，５，～Ｔｒｉｐｈｅｎｙｌ ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ｄｅｎｓｉｔｙ ｏｆ Ｂｒｏｍｏｔｈｙｍｏｌ ｂｌｕｅ ｐｕｔ ｉｎ Ａｇａｒ ｐｏｗｄｅｒ，ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ｏｆ ａｇａｒ ｐｏｗｄｅｒ ｗｅｒｅ ｉｍｐｒｏｖｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅ— ｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｔｉｍｅ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｓｅｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｗａｓ ｓｈｏｒｔｅｎｅｄ ａｎｄ ｂｅｎｅｒ ｅｆｆｅｃｔ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ａｃｃｕｒａｃｙ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｓｅｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ；２，３，５，一ｔｒｉｐｈｅｎｙｌ ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ｍｅｔｈｏｄ；ｒｅｄ ｉｎｋ ｍｅｔｈｏｄ；Ｂｒｏｍｏ— ｔｈｙｍｏｌ ｂｌｕｅ ｍｅｔｈｏｄ
肇 庆 学 院
生命科学学院生物科学 系 植物生理学 课实验报告
08 年级 生本 班 B 组 28 实验日期 10.22
姓名 杨丹平 老师评定 ＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿
实验题目 实验五 种子活力的测定
一、实验目的：
掌握种子活力快速测定的几种方法。
二、实验原理：
1、活种子的胚在呼吸作用过程中能进行氧化还原反应，而死种子则无此反应。当TTC渗入活种子胚细胞内作为氢受体而被脱氢辅酶(NADH2或NADPH2)上的氢还原时，无色的TTC转变为红色的三苯基甲（TTF）。
2.、活种子进行呼吸作用呼吸空气中的O2，放出CO2。CO2溶于水成为H2CO3，H2CO3解离为H+和HCO3-，使得种子周围环境的酸度增加。BTB法通过测定酸度的变化来判断种子活性。BTB变色范围为PH6.0—7.6,酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为PH7.1）。色泽差异显著，易于观察。
3红墨水染色法是根据活种子细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的透性，而死种子的胚细胞原生质膜则丧失此性质，于是染料进入死细胞而染色。
三、实验仪器及材料：
1、仪器：电热恒温培养箱、培养皿、烧杯、镊子、单面刀
2、试剂：3%TTC溶液、0.1%BTB溶液、1%BTB琼脂凝胶
3、材料：玉米、绿豆吸胀种子
四、实验步骤：
1．浸种
种子在30—35℃温水中浸种5h
实验十一 植物种子生活力快速测定
一、实验目的
掌握植物种子生活力检测的基本原理及快速鉴定植物种子生活力的方法。
二、实验原理
种子活力是决定种子在发芽和出苗期间的活性强度和种子特性的综合表现（指田间条件下的出苗能力及与此有关的其他特征和指标），种子生活力是指种子的发芽潜在能力和种胚所具有的生命力（通常指一批种子中具有生命力种子数占种子总数的百分率）。种子贮藏过程中必须维持种子是有活力的，因此定期进行生活力和活力的检测是非常重要的。测定种子生活力方法常用发芽率测定法，该法是指在最适宜的条件下，在规定天数内发芽的种子占供试种子的百分数。它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接有关。但是常规方法（直接发芽）测定种子发芽率所需的时间较长，对于处于深休眠状态的种子，几乎难于应用。特别是有时为了应急需要，没有足够的时间来测定种子发芽率，所以有必要根据种子的生理特性建立起一套快速测定种子生活力的方法。
红墨水染色法
凡是生活的活细胞的原生质膜都具有选择吸收能力，它对某些染料不让透过，因此用这类染料(如红墨水、酸性靛蓝等)不能使种胚染色。而死种子的胚细胞原生质膜丧失了选择吸收能力，于是染料进入死细胞，将胚完全染色。因此，可根据种胚或子叶对染料的着色情况判断种子的发芽率。
三、实验材料
小麦种子、大麦种子、籼稻种子、玉米种子、粳稻种子、蚕豆种子、大豆种子。
四、设备与试剂
恒温箱，培养皿，烧杯，镊子，刀片，紫外荧光灯，滤纸（无荧光），琼脂，沸水。
5％ 红墨水：市售红墨水5 mL加95 mL自来水。
五、实验步骤
1．红墨水染色法
将待测种子在30～35℃温水中浸种（小麦、大麦、籼稻种子6～8h；玉米种子5 h 左右；粳稻种子2 h），以增加种胚的呼吸速率，使显色迅速；取吸胀的种子200 粒，沿种子胚的中心线纵切为二半，将其中的一半置于红墨水培养皿中5～10 min；用红墨水染色后，倒去废液，用水冲洗多次，至冲洗液无色为止，并检查种子死活。凡种胚不着色或着色很浅的为活种子，种胚与胚乳着色程度相同的为死种子。也可用沸水杀死的种子作为对照观察。
大小麦种子生活力和发芽率快速测试方法
夏收期间，有些地区会遭受了梅雨、暴雨和特大暴雨袭击，这给夏熟大小麦选留种带来极大困难。因此及时做好麦种速测，做到心中有数，尤为重要。麦种发芽需经过一段休眠期，特别是大麦种子，休眠期长达三个月左右。这主要是种子内脱落酸含量较高，只有当脱落酸含量降低时，麦种才能解除休眠。
一、红墨水快速测定法：
1、常用红墨水稀释1:500倍液，将需测定的大麦种子用刀片纵切，取带有种胚的一半漫于红墨水液中，浸泡半小时左右，用清水冲洗后逐粒检查，凡是有生活力的种胚处无红色反应，仍呈白色，其它部分都染成红色，而无生活力的种子无论胚或胚乳部分都被染红，依据种胚的着色与否判断麦种有无生活力。
2、在采用红墨水测定的过程中，将麦种预先用清水浸泡12小时，再纵切染色，可提高测定效果，浸泡染色时间仅需10分钟。同时由于经过了预先浸泡，经红墨水染色测定后，该半粒种子可继续留下保湿培养，观察其发芽情况，3-4天后就可得出发芽率结果；而且这一方法测定发芽率还不易受霉菌污染。
二、赤霉素快速测定法：
用赤霉素打破种子休眠期，直接速测其发芽率。将市售小包装赤霉素配成20ppm的溶液(即20毫克赤霉素加水1000 毫升)，将备好的大小麦种子浸人药液内，并置于冰箱，在5°C条件下浸泡24小时后，取出按常规发芽方法，每个培养皿放麦种10粒并保湿，在25°C室温下经1-2天后胚根、胚芽萌动，3-4天内就能迅速确定麦种的发芽率。
