血小板的检测PPT课件
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在医学技术不断发展的今天,血液分析仪的灵敏度和准确度也有了空前提高,血液分析仪的简便、快捷、高效、高重复性的特点使得血常规检查在临床诊断中起来越发挥出极其重要的作用,但是在实际操作中,血小板检测结果的不稳定也是比较突出的一个问题,现将多年临床检验工作中所了解的关于影响血小板检测的因素进行如下探讨。
1 方法学的缺陷
目前血液分析血小板大多数采用电阻抗法进行计数,也有光散射法或其他方法,其原理大都是根据细胞的大小、形态进行区分和计数。这种检测原理决定了对于血小板数量和形态正常的标本,结果比较可靠,但是对于血小板明显减少或形态异常者,结果误差就比较大。正常人的血小板体积平均分布是2~30fl,体积分布直方图明显地向右延伸,不对称,即都存在一定数量的大血小板。在病理情况下,大血小板会更多增加,由于大部分血液分析仪不能将大血小板与小红细胞进行区分,致使许多大血小板被当成小红细胞计数导致血小板计数结果偏低。
2 抗凝剂因素
ICSH推荐使用EDTA盐抗凝,含量规定为115~210mg/ml,即115~210mg的EDTA-2K抗凝1ml的全血可以抑制血小板聚集,从而达到抗凝的目的。工作中常用的是EDTA-2K的能抗凝2ml全血真空采血管,这就要求采血时尽量准确到2ml,采血量过多或过少都会影响检测结果。如血液比例过高则抗凝剂相对不足,标本会出现微凝块阻塞仪器检测孔;抗凝剂比例偏高血液相对不足,血小板会肿胀崩解,产生正常血小板大小的碎片而无法得出正确的结果[1]。还有极少数人的血小板在用EDTA抗凝时出现血小板聚集,这种情况可能与血浆中存在的某些自身抗体有关,多发生在肿瘤患者自身。
3 仪器、试剂的因素
血液分析仪是精密电子仪器,由于测量的脉冲讯号非常小,容易受到各种因素的干扰,所以仪器应安置在一个不受振荡、不受磁场、电场、噪声干扰、防潮、防尘,始终保持室温的环境中。仪器液路的定期维护清洗也至关重要,计数管路的不清洁会造成血小板数量明显升高。试剂的质量对血小板结果也有着直接的影响,必须使用与仪器相配套的试剂[2,3],进口试剂价格较贵,因此使用合格的国产试剂是避免试剂因素影响血小板计数的关键。
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取得良好的效果,其术式具有如下特点:①采用腹部横切口. 损伤少,术野暴露好,对肠管干扰小,术后排气快。②宫颈筋
膜内荷包缝合,既能封闭死腔,减少出血,又能使形成的实性
假宫颈加强对盆底的支撑力,防止盆腔脏器的脱垂 。③同时
切除了宫颈癌的好发部位——鳞柱状上皮交界区.可防止宫
颈癌的发生 。④返折腹膜采用间断缝合,减少患者术后盆腔
牵拉痛的发生。⑤术后患者的阴道解剖结构未发生变化.残
端出血、息肉的发生率明显降低,故建议选择筋膜内全子宫 切除术为佳
2.2.2子宫肌瘤剔除术:对要求保留生育功能的妇女,应选
择子宫肌瘤剔除术,术时在子宫局部注射缩宫素10 U.同时
静脉点滴缩宫素10 U,可以减少肌瘤剔除时的出血。效果较 好。对剖宫产术中子宫肌瘤的处理意见不一。剖宫产时剔除
肌瘤的主要顾虑是足月妊娠子宫高度充血,肌瘤增大变软,
手术可能出现无法控制的出血5l。而赞同剔除肌瘤者认为,随 着剖宫产率的上升,剖宫产手术中发现合并肌瘤增多,产后
子宫肌瘤的存在,必然影响子宫的复旧。增加产后盆腔感染
及出血机会。也可导致以后月经异常.增加再次手术的机会
和不必要的经济负担[6]。我院在处理剖宫产术中子宫肌瘤的
经验是:对于浆膜下子宫肌瘤、肌壁间子宫肌瘤≤3 cm者,可
在剖宫产同时行子宫肌瘤剔除术,而肌瘤较大的肌壁间肌
瘤,在剔除时易造成大出血,需慎重考虑。随着微创手术的发
展,腹腔镜、宫腔镜下处理子宫肌瘤已成为手术发展的方向,
具有创伤出血少、恢复快的特点。
2.2.3腹腔镜子宫肌瘤剔除术:子宫肌瘤剔除术是否适合用 腹腔镜完成,应视肌瘤的类型、位置、大小及是否有合并症而
定。腹腔镜子宫肌瘤剔除术的手术适应证为:肌瘤部位为浆
膜下或肌壁间肌瘤,肌瘤的数目≤3个,子宫肌瘤最大直径≤
7 em。289例手术病例中,有23例行腹腔镜,占8.0%。该手术
血小板抗体测定操作规程
【检测原理】
反应板中已包被抗血小板单克隆抗体,血小板悬液经离心洗涤后可在反应孔底部形成血小板单层。加入血清或血浆,在孔中经过孵育后,若该血清或血浆中含有血小板抗体,则该抗体与反应孔中的血小板单层结合,未结合的成分通过洗涤被去除。加入抗人及人致敏红细胞(指示红细胞),经离心后指示红细胞通过抗人的桥连与血小板单层上的血小板抗体结合,因此阳性反应为指示红细胞平铺在反应孔底部表面。而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反应孔底部中央。
【试剂组成】
1、反映板 2、低离子强度溶液
3、抗人IgG 4、25×浓缩洗涤液
5、阴阳性对照 6、指示红细胞
7、冻干血小板 8、生理盐水
【样本要求】
新鲜血清或血浆样本,4℃可保存7天,若需长期保存应-20℃冻存。样本检测前经离心5分钟后,取上清液进行检测。 【实验前准备】
1将试剂盒平衡至室温(18-25°C)
2、25×浓缩洗涤液用纯化水按1:24体积比稀释成洗涤工作液。
【适用仪器】
平板式离心机。离心力和离心转数的换算公式为Rcf(g)=1.119×10-5×r×(rpm)2(r为离心半径,单位cm)。
【检测步骤】
(一)抗体检测
1、制备血小板悬液:可将商品化的冻干血小板稀释后直接使用;也可自己制备三人份等比例混合型血小板悬液(将有效期内机采血小板用生理盐水进行5-10倍稀释后混合;或采血当天8小时内或枸橼酸钠抗凝全血经离心10分钟,取上层2/3富血小板血浆混合)。血小板悬液应贮于塑料容器中,保存并在8小时内进行检测。
2、根据检测量出反应板条,标记患者、阳性对照及阴性对照孔,未使用的板条应储存于自封袋中,加入干燥剂密封后,2-8℃储存。
3向反应孔中加入1滴(50ul)上述血小板悬液,轻摇反应板约10秒钟。 4、用平板离心机将反应板以50g离心5分钟,使血小板固定在反映孔底部。
血小板抗体检测项目(固相凝集法)
一、 基本原理:
血小板抗体检测是检测患者血清中是否存在针对血小板的免疫性抗体,包括三类:1.ABO血型系统和HLA系统产生的血小板相关抗体,2.血小板特异性抗原(HPA)产生的特异性抗体,3.药物所致的血小板抗体
二、血小板抗体检测的临床应用
(一)在临床辅助诊断中的作用
1、特发性血小板减少性紫癜(ITP):ITP的临床症状很重要,但仍为排除性诊断。如结合血小板抗体检测,则对ITP的确诊有重要价值。
2、血液系统疾病辅助诊断:对白血病、再生障碍性贫血、骨髓异常增生综合症、溶血性贫血、新生儿血小板减少症有辅助诊断意义。
3、孕期流产风险评估:血小板抗体筛查可对孕期流产风险做出评估,尤其适用于有多次妊娠史、习惯性流产史以及不孕不育情况查因。
(二)在临床输血治疗中的应用
1、预防红细胞输注中非溶血性发热反应:血小板抗体阳性患者输注红细胞悬液后发生非溶血性发热反应明显高于阴性者,对于血小板抗体阳性采取干预措施后非溶血性发热反应明显降低,极大提高了输血的安全性。
2、预防血小板输注无效:血小板抗体是引起免疫性血小板输注无效最重要的原因,特别是多次输血后出现的血小板输注无效。检测血小板抗体对提高血小板治疗效率和保证输血安全有重要意义。
三、 血小板抗体检查的筛查对象
1、血液肿瘤科病人:评价患者体内血小板抗体水平,辅助诊断血液系统疾病:如白血病、再障、溶血性贫血、血小板减少性疾病、骨髓异常增生综合症。
2、需治疗性输注血小板患者:特别是需多次输注血小板患者,建议提前筛查血小板抗体,防止血小板输注无效。
3、妇产科孕检:评价孕期流产风险,尤其适用于有多次流产史患者查因。
四、血小板抗体在临床病例中的验证