BCA测蛋白浓度
Prepared on 24 November 2020
BCA蛋白浓度测定
一. 原理 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。检测浓度下限达到25 微克/毫升，最小检测蛋白量达到微克，待测样品体积为1～20微升。
二. 试剂盒组份 组 份 Cat: KGPBCA （250 assay酶标板/50assay 1mL比色杯） 蛋白标准溶液（0. 5 μg/μL ） 5 mL BCA试剂A 25 mL×2 BCA试剂B 1mL
三. 操作步骤
A． 酶标板操作
1. 标准曲线的绘制：取一块酶标板，按照下表加入试剂 孔号 0 1 2 3 4 5 6 7 蛋白标准溶液（μL） 0 1 2 4 8 12 16 20 去离子水（μL） 20 19 18 16 12 8 4 0 对应蛋白含量（μg） 0
孔号 0 1 2 3 4 5 6 7
蛋白质溶液（μL） 0 1 2 4 8 12 16 20
去离子水（μL） 20 19 18 16 12 8 4 0
相应蛋白质含量（μg） 0 1 2 4 6 8 10
2. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀；
3. 各孔加入200μL BCA工作液；
4. 把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；
5. 稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为20μL，加入BCA工作液200μL，充分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在
BCA蛋白浓度测定试剂盒
产品编号 产品名称 包装 价格
P0012 BCA蛋白浓度测定试剂盒 500次 258.00 元
O 碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测
定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。
O 灵敏度高，检测浓度下限达到25微克/毫升，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积为1-20微升。
O 在50-2000微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。
O BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween
20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低
于1mM。不适用BCA法时建议使用碧云天Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
O BCA蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质详细的兼容性表，参见BCA蛋白浓度测定兼容性表。
O 每个试剂盒可以检测500个样品。
包装清单：
BCA试剂 A 100 ml
BCA试剂 B 3 ml
蛋白标准（5mg/ml BSA） 1 ml
说明书 1 份
保存条件：
BCA试剂A和B室温保存，蛋白标准请-20℃冻存。本试剂盒自订购之日起一年注意事项：
O 需酶标仪一台，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。需96孔板。如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但
是测定蛋白浓度时，需根据测定吸光度的杯子的体积，按比例调整A液,B液和样品的体积。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每
个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
O 如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
O 为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但是切勿过热。
BCA蛋白浓度测定试剂盒 产品编号 产品名称 包装
P0012 BCA蛋白浓度测定试剂盒 500次
产品简介：
¾ BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而
成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。
¾ 灵敏度高，检测浓度下限达到25µg/ml，最小检测蛋白量达到0.5µg，待测样品体积为1-20µl。
¾ 在50-2000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。
¾ BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的
Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，
β-巯基乙醇低于0.01%。不适用BCA法时建议试用碧云天生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒(P0006)。
¾ BCA蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质的详细的兼容性，请参见碧云天如下网页:
/Compatibility Chart For BCA Kit.pdf
¾ 每个试剂盒可以检测500个样品。 包装清单：
产品编号 产品名称 包装
P0012-1 BCA试剂 A 100ml
P0012-2 BCA试剂 B 3ml
P0012-3 蛋白标准(5mg/ml BSA) 1ml
— 说明书 1份
保存条件：
BCA试剂A和B室温保存，蛋白标准请-20℃冻存。本试剂盒自订购之日起一年内有效。
注意事项：
¾ 需酶标仪一台，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。需96孔板。如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测
定，但测定时，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大BCA工作液的用量使不小于最小检测体积，样品和标准品的用
1
BCA法测定蛋白浓度-酶标仪
一、药品
1. BCA蛋白浓度测定试剂盒（P0012，500次酶标仪，碧云天），含以下成分：
a) BCA试剂A（P0012-1，100ml，碧云天），室温保存
b) BCA试剂B（P0012-2，3ml，碧云天），室温保存
c) 蛋白标准（5mg/ml BSA）（P0012-3，1ml，碧云天），-20度保存
二、仪器和试剂
1. 酶标仪（测定波长为540-595nm之间，562nm最佳），水浴锅
2. 96孔单条可拆酶标板（平底）
3. 15 ml 离心管1个（准备BCA工作液用）
4. 1.5 ml 离心管1个（准备蛋白标准品工作液用）
5. 单道移液器和枪头，8道移液器（排枪）和枪头
6. PBS
三、操作步骤
1. 水浴锅调至37℃。
2. 蛋白标准品工作液（1 mg/ml）的配制：将蛋白标准品（5mg/ml）从-20℃冰箱中取出，完全溶解并混匀。取60μl 蛋白标准品（5mg/ml），加入240μl PBS，即稀释5倍，即配成蛋白标准品工作液（1 mg/ml）。
3. 计算BCA工作液总量= 0.2 ml×（样本数+8）×2×1.1（标准品和样本均需测复孔）。BCA工作量按50体积的BCA试剂A加上1体积的BCA试剂B配制（即50:1），需充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。
样本数(n) 1~5 6~7 8~10 11~12 13~14 15~16 17~19 20~21 22~23 24~26
A（ml） 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
B（ml） 0.12 0.14 0.16 0.18 0.2 0.22 0.24 0.26 0.28 0.3
总量(ml) 6.12 7.14 8.16 9.18 10.2 11.22 12.24 13.26 14.28 15.3
4. 按下表配制8个蛋白标准液（S0~S7），充分摇匀。
