绿色荧光蛋白分子量

绿色荧光蛋白的发现与发展:绿色荧光蛋白的论文

编者按：2008年诺贝尔自然科学奖颁布后，相关的介绍与报道铺天盖地。其中一条新闻很有意思，在诺贝尔化学奖得主下村修的出生地日本，养殖在一家水族馆里的一种多管水母也一夜成名，吸引了无数人前来参观，因为下村修正是从这种水母身上发现了后来让他获奖的绿色荧光蛋白。其实下村修本人的经历，也如同这种水母一样：作为绿色荧光蛋白的发现者，、几十年来一直默默无闻，甚至他本人当初都没有预见到该项发现的价值。如果不是后来几位有技术、工程背景的研究人员在基础研究和实际应用之间架起桥梁，这项发现恐怕还淹没在论文堆中。与PCR(聚合酶链反应)技术一样，又一项与生物和生命科学有重要相关的技术获得了诺贝尔化学奖，这给化学家们，尤其是从事基础研究的化学家们带来哪些启示呢?我刊约请中科院理化技术研究所吴世康研究员介绍绿色荧光蛋白及其发现过程。

2008年的诺贝尔化学奖授予了从事有关“绿色荧光蛋白质的发现，表达和发展”并取得重要成就的三位科学家：下村修、马丁・查尔菲和钱永健。

绿色荧光蛋白及其发光机理

绿色荧光蛋白(GreenFluorescent Protein，简称GFP)是一种在美国西北海岸所盛产的水母中所发现的一种蛋白质。这类学名为Aequorea victoria的水母有着美丽的外表，生存历史超过1.6亿年。1962年，下村修正是在这种水母的发光器官内发现天然绿色荧光蛋白。它之所以能够发光，是因在其包含238个氨基酸的序列中，第65至67个氨基酸(丝氨酸―酪氨酸―甘氨酸)残基，可自发地形成一种荧光发色团。

当蛋白质链折叠时，这段被深埋在蛋白质内部的氨基酸片段，得以“亲密接触”，导致经环化形成咪唑酮，并发生脱水反应。但此时还不能发射荧光，只有当有分子氧存在的条件下，发生氧化脱氢，方能导致绿色荧光蛋白发色团的“成熟”，形成可发射荧光的形式。上述绿色荧光蛋白发色团的形成过程，系由几位科学家分别研究完成的。

绿色荧光蛋白GFP综述

生命科学学院 2010级 李积锋 1241410007

【摘要】绿色荧光蛋白(GFP) 是一种最先来源于水母的蛋白质，现已成为在生物化学和细胞生物学中研究和开发应用得最广泛的蛋白质之一。其内源荧光基团在受到紫外光或蓝光激发时小峰可高效发射清晰可见的绿光。它已成为一个监测在完整细胞和组织内基因表达和蛋白质定位的理想标记。在生理指示剂、生物传感器、光化学领域以及生产发光纤维等方面展示了广阔前景。

【关键词】水母 绿色荧光蛋白 生色团 变种

1绿色荧光蛋白简介

绿色荧光蛋白是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白，当受到紫外或蓝光激发时，发射绿色荧光。其独特之处在于：它产生荧光无需底物或辅因子，发色团是其蛋白质一级序列固有的来源于水母的氨基酸残基组成。

水母的绿色荧光蛋白很稳定，无种属限制，已在多种动植物细胞中表达成功并产生荧光。GFP的荧光受外界的影响较小，另外GFP的检测十分方便，而对细胞的伤害极小。由于这些优点，GFP已经成为检测体内基因表达及细胞内蛋白质原位定位的极为重要的报告分子。

2绿色荧光蛋白的表达和成熟

GFP的表达水平受多种因素的影响。在植物细胞中表达GFP时，改变一些原GFP基因的密码子为该植物使用的偏爱密码子，并消除潜在的剪接位点。目前适用于哺乳动物的表达系统不受影响。GFP还可以顺利的在无细胞的体外翻译系统中表达并自发折叠。

用一些小体积的氨基酸残基取代大体积残基可以提高GFP在高温下正确折叠的速度。这些突变位点分布于成熟蛋白质三维结构的各个部位，几乎不能提供如何帮助GFP折叠和成熟的线索。另外，分子伴侣的存在也有助于GFP的折叠，反过来，这个发现也使GFP成为检测分子伴侣功能的一个好底物，因为GFP可以提供一个连续的、无破坏性的检测蛋白折叠成功的分析方法。

3绿色荧光蛋白的应用

3.1报告基因和细胞标记

常见蛋白抗体分子量

IKB-a：39 KD P-IKB-a：40 KD

NF-KB-P65：65KD P-NF-KB-P65：65 KD

ERK：42-45KD P-ERK：42-45 KD

P38：40 KD P-P38：43 KD

IRF-3：45-55 KD P-IRF-3：45-55 KD

IRF-7：65 KD P-IRF-7：65 KD

PI3K3：100 KD P-PI3K3：100 KD

ULK：150KD P-ULK(371) ：140 KD

AMPK-a：62 KD P-AMPK-a：62 KD

JNK：46-51 KD P-JNK：46-51 KD

CMKK2：50-60 KD P-CMKK2：68 KD

P62：60 KD

ACTIN：-42KD

NOX2：60KD

ATG5：55kd

beclin-1:60kd

TUBULIN：-50 KD

GAPDH：-36 KD

LC3B：14-16KD

p-stat1-727：100kd左右

p-stat3-705：100kd左右 p-stat3-727：100kd左右

akt：60kd p-akt：55-70kd之间

parp：70-130kd之间

stat1:70-100kd之间

TR3：55-70kd之间

Caspase-3：

南方医科大学

绿色荧光蛋白的克隆

实验报告

年级专业 2014级 生物技术

姓名 朱旭峰

学号 3147020042

摘 要 细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。各种质粒

都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份，通常情况下可

持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体

上，随着染色体的复制而复制， 并通过细胞分裂传递到后代。

质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子，重要的条件是可获得大量纯化的质粒

DNA分子。目前已有许多方法可用于质粒DNA的提取，下面主要介绍碱裂解法提取

质粒DNA的方法。 Cloning of green fluorescent protein

Abstract： Bacterial plasmid is a kind of double chain, closed-loop DNA, ranging from 1KB to 200kb. All plasmid is present in the cytoplasm, independently from the chromosome of autonomously replicating genetic component, usually under the condition of sustainable and stable in staining in the free state, but under certain conditions will irreversibly integrated into the host chromosome, with the replication of the chromosome replication and by cell split passed on to future generations. Plasmids have become the most commonly used gene cloning vector molecules, the important condition is to obtain a large number of purified plasmid DNA molecules. There are many methods can be used to extract plasmid DNA, the following are mainly introduced the method of extracting plasmid DNA by alkaline lysis method.