仪器分析练习题（二）——高效液相色谱法部分
一、选择题
1. 分离一组高聚物（分子量>2000）时最宜采用的色谱方法是（ D ）
A. 气固色谱 B. 反相键合相色谱
C. 离子交换色谱 D. 凝胶色谱
2. Si-O-Si-C型的18烷基固定相可用于（ B ）
A. 正相色谱 B. 反相色谱
C．离子交换色谱 D. 空间排阻色谱
3. 反相离子对色谱法分离试样组分时，随着对离子浓度的增大，组分的保留时间（ A ）。
A. 增大 B. 减小
C. 不变 D. 不能确定
4. 下列试剂中可作为正相色谱流动相的是（ C D ）。
A. 水 B. 甲醇
C．乙腈 D. 正已烷
5. 在惰性担体表面健合上基团－SO3ˉ后的离子交换树脂称为（ B ）。
A．强碱性阳离子交换树脂 B. 强酸性阳离子交换树脂
C．强碱性阴离子交换树脂 D. 强酸性阴离子交换树脂
6. 分离一组高沸点的物质时最宜而是采用的色谱方法是（ D ）。
A. 气液色谱 B. 气固色谱
C. 毛细管气相色谱 D. 液相色谱
7. 应用正相色谱法分析一组组分时，组分的出峰顺序为（ A ）。
A. 极性小的组分先出峰 B. 极性大的组分先出峰
C. 分子量小的先出峰 D. 分子量大的先出峰
高效液相色谱法
高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信号。
1.对仪器的一般要求和色谱条件 高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。色谱柱的内径一般为3.9～4.6mm，填充剂粒径为3～10um。超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2um）填充剂的耐超高压、小进样器、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。
（1）色谱柱
反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂而成的色谱柱。常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反向色谱。
手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
色谱柱的内径与长度，填充剂的性状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
温度影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不超过60℃。
残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相的pH值一般应在2～8之间。残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值得检验操作规程 - 2 -
流动相，适合于pH值小于2或大于8的流动相。
高效液相色谱法习题
一、思考题
1．从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相色谱及液相色谱的异同点。
2．液相色谱中影响色谱峰展宽的因素有哪些? 与气相色谱相比较, 有哪些主要不同之处?
5．液-液分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？
6．液-固分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？
7．化学键合色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？
8．离子交换色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？
9．离子对色谱的保留机理是什么?这种类型的色谱在分析应用中,最适宜分离的物质是什么?
10．空间排阻色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？
11．在液-液分配色谱中，为什么可分为正相色谱及反相色谱？
12．何谓化学键合固定相？它有什么突出的优点？
14．何谓梯度洗提？它与气相色谱中的程序升温有何异同之处？
15．高效液相色谱进样技术与气相色谱进样技术有和不同之处？
16．以液相色谱进行制备有什么优点？
二、选择题
1．液相色谱适宜的分析对象是（ ）。
A 低沸点小分子有机化合物 B 高沸点大分子有机化合物
C 所有有机化合物 D 所有化合物
4．液相色谱定量分析时，不要求混合物中每一个组分都出峰的是＿。
A 外标标准曲线法 B 内标法
C 面积归一化法 D 外标法
5．在液相色谱中，为了改善分离的选择性，下列措施（ ）是有效的？ A 改变流动相种类 B 改变固定相类型
C 增加流速 D 改变填料的粒度
7．分离结构异构体，在下述四种方法中最适当的选择是（ ）。
高效液相色谱法
1 简述
高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵人装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离侧定的色谱方法。注人的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进人检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
1.1 对仪器的一般要求
所用的仪器为高效液相色谱仪，由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成，仪器应按现行国家技术监督局“液相色谱仪检定规程”定期检定并符合有关规定。色谱柱内径一般为3.9～4.6μm，填充剂粒径为3～10μm。超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度的高效液相色谱仪。
1.1.1 色谱柱
反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常见的载体有硅胶、聚合物符合硅胶和聚合物等；常见的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。
离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
色谱柱的内径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。 最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶(如氛基键合硅烷和氨基键合硅烷等)也有使用。正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换色谱系统使用离子交换填充剂;分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂;对映异构体的分离通常使用手性填充剂。
