2017/1/20
1高效液相色谱法测定饲料中TRP的含量仪器分析实验2017/1/20
2主要内容
1 实验目的2 实验原理3 实验意义4 实验步骤5 讨论6 注意事项2017/1/20
3实验目的
掌握高效液相色谱前处理方法即Trp的前处理方法
熟练掌握根据保留值用已知物对照定性的分析方法。
了解高效液相色谱仪的原理、分类和测定范围
掌握高效液相色谱的组成部分及各部分的作用
熟练掌握高效液相色谱仪的操作流程，基本具备独立操作的能力2017/1/20
4实验原理
1 高效液相色谱仪的原理、分类和测定范围色谱法:利用混合物中不同组分有着不同的物理性质，如吸附，溶解，亲和，阻滞等作用不同，实现混合物分离及分析。原理：混合物进入流动相及固定相两相共存的系统内，由于不同组分分子固有的特性不同，他们随流动相移动时，在两相间有不同的分配。各组分在固定相中移动一定距离的时间是它定性分析的标志。2017/1/20
5实验原理
色谱分类：按流动相的状态：气相色谱（GC）:以气体为流动相;液相色谱（LC）:以液体为流动相.按样品组分在两相间的分离机理分：吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱法、凝胶色谱法及超临界色谱法。按固定相的形式分：柱色谱法、纸色谱法、薄层色谱法。2017/1/20
6实验原理
测定范围:HPLC几乎在所有学科领域都有广泛应用，可以用于绝大多数物质成分的分离分析，大约占有机物的80%左右。它和气相色谱都是应用最广泛的仪器分析技术。例如：环境中有机氯农药残留量分析、稠环芳烃的分析、抗生素的分析、维生素的分析等等。2017/1/20
7实验原理
2 高效液相色谱的组成部分及各部分的作用2017/1/20
8实验原理
贮液瓶：提供液相色谱分离的流动相高压泵：将流动相打到色谱柱进样器：将样品通过六通阀
进入到色谱柱分离柱：根据组分在两相中的不同的作用方式将组分分离检测器：检测分离出的组分，并给出信号记录仪：记录并处理数据2017/1/20
高效液相色谱习题及参考答案
一、单项选择题
1. 在液相色谱法中，按分离原理分类，液固色谱法属于（ ）。
A、分配色谱法 B、排阻色谱法 C、离子交换色谱法 D、吸附色谱法2. 在高效液相色谱流程中，试样混合物在（ ）中被分离。
A、检测器 B、记录器 C、色谱柱 D、进样器
3. 液相色谱流动相过滤必须使用何种粒径的过滤膜？
A、0.5μm B、0.45μm C、0.6μm D、0.55μm
4. 在液相色谱中，为了改变色谱柱的选择性，可以进行如下哪些操作？
A、改变流动相的种类或柱子 B、改变固定相的种类或柱长
C、改变固定相的种类和流动相的种类 D、改变填料的粒度和柱长
5. 一般评价烷基键合相色谱柱时所用的流动相为（ ）
A、甲醇/水（83/17） B、甲醇/水（57/43）
C、正庚烷/异丙醇（93/7） D、乙腈/水（1.5/98.5）
6. 下列用于高效液相色谱的检测器，（ ）检测器不能使用梯度洗脱。
A、紫外检测器 B、荧光检测器
C、蒸发光散射检测器 D、示差折光检测器
7. 在高效液相色谱中，色谱柱的长度一般在（ ）范围内。
A 、10～30cm B、 20～50m C 、1～2m D、2～5m
8. 在液相色谱中, 某组分的保留值大小实际反映了哪些部分的分子间作用力（ ）
A、组分与流动相 B、组分与固定相
C、组分与流动相和固定相 D、组分与组分
9. 在液相色谱中，为了改变柱子的选择性，可以进行（ ）的操作
化学与材料工程学院
环境监测分析实验报告
实验名称： 高效液相色谱分析苯-甲苯混合物
专业班级： 应化13
学 号： 150313135
姓 名： 朱建南
指导教师： 翟春
实验地点： 敬行楼A210
实验日期： 2016年 11月 28日
高效液相色谱实验
一、 实验目的
1． 了解HPLC仪器的基本构造和工作原理，掌握HPLC的基本操作；
2． 学习苯-甲苯混合物的定性分析方法；
3． 评价色谱柱柱效；
4． 了解色谱定量操作的主要方法以及各自特点；
5． 学习未知样品的定量分析方法。
二、 实验原理
不同组分因在互不相溶的流动相与固定相中的分配比不同，当两相做相对运动时，组分在两相之间反复进行多次分配，最终实现不同组分的分离。
色谱仪器的构成：包括高压输液系统、进样系统、分离系统，检测系统等
1．色谱定性分析方法
a保留时间定性 b 峰高增量定性
2．色谱定量分析方法
a 归一化法,要求所有组分必须全部出峰。
b 标准曲线法（外标法）。简单、方便, 结果受到操作技术因素以及具体色谱条件影响较大。
三、 仪器与试剂
LC-1602A型高效液相色谱仪、甲醇(色谱纯) 、苯、甲苯、苯－甲苯
四、 高效液相色谱仪操作步骤
1. 流动相的预处理
甲醇溶液，用0.45μm 有机滤膜过滤，超声波清洗器脱气10～20 min，装入流动相贮液瓶。
2. 准备苯-甲苯混合试样和苯、甲苯标样
3. 高效液相色谱仪操作
a 依次高压输液泵和检测器电源开关；
b 打开色谱工作站，在仪器控制面板中，设置波长，并开灯；
c打开三通阀，在仪器控制面板中，设置流速为5ml/min, 启动高压泵，排除流路中的气泡。排气结束后，点击停止按钮，停止高压泵。
高效液相色谱试题
部门 姓名 得分
一、选择题
1.在液相色谱法中，按分离原理分类，液固色谱法属于（ ）
A.分配色谱法 B排阻色谱法 C.离子交换色谱法 D.吸附色谱法
2.在高效液相色谱流程中，试样混合物在（ ）中被分离。
A. 检测器 B. 记录器 C.色谱柱 D. 进样器
3.液相色谱流动相过滤必须使用何种粒径的过滤膜？（ ）
A.0.5μm B.0.45μm C.0.6μm D.0.55μm
4. 在高固定液含量色谱柱的情况下，为了使柱效能提高，可选用 ( )
A.适当提高柱温 B.增加固定液含量 C.增大载体颗粒直径 D.增加柱
5. 在液相色谱中, 为了提高分离效率, 缩短分析时间, 应采用的装置是 ( )
A. 高压泵 B. 梯度淋洗 C. 贮液器 D. 加温
6. 下列用于高效液相色谱的检测器，（ ）检测器不能使用梯度洗脱。
A. 紫外检测器 B. 荧光检测器
C. 蒸发光散射检测器 D. 示差折光检测器
7. 在高效液相色谱中, 色谱柱的长度一般在( )范围内。
A.10-30cm B.20-50cm C.1-2cm D.2-5cm
8. 在液相色谱中, 为了获得较高柱效能, 常用的色谱柱是 ( )
A.直形填充柱 B.毛细管柱 C.Ｕ形柱 D.螺旋形柱
9. 纸色谱的分离原理, 与下列哪种方法相似？ ( )
A.毛细管扩散作用 B.萃取分离 C.液-液离子交换 D.液-固吸附
10.高效液相色谱仪与气相色谱仪比较增加了（ ）
A.恒温箱 B.进样装置 C.程序升温 D.梯度淋洗装置
