高效凝胶色谱法测定角膜接触镜护理液中羟丙甲纤维素含量张莉;文燕;陈靖云;王敏珠;徐萍华【摘要】采用高效凝胶色谱法测定角膜接触镜护理液中有效成分羟丙甲纤维素的含量，探讨护理液中其他润滑成份对测定的影响和评价。
选择市场上含有羟丙甲纤维素的角膜接触镜护理液，以水凝胶色谱柱（TSK-Gelα3000与 TSK-Gelα3000串联）为分离柱，以50 mmol·L-1氯化钠溶液为流动相，流量为0．7 mL·min-1，示差折光检测器测定。
羟丙甲纤维素的质量浓度在0．1～5．0 g·L-1范围内与其峰面积呈线性关系，检出限（3S/N）为0．056 g·L-1。
应用本方法对角膜接触护理液进行加标回收试验，回收率在98．0％～102％之间。
对羟丙甲纤维素标准溶液平行测定6次，测定值的相对标准偏差（n＝6）小于1．5％。
%High performance gel chromatography was applied to the determination of hydroxypropyl methyl cellulose (HPMC)in contact lens care solution,andthe effect of the other lubrication composition in care solution on the measurement was investigated.Contact lens care solutions with HPMC in the market were selected. Hydrogel chromatographic column (TSK-Gelα3000 and TSK-Gel α3000 )was used as stationary phase,with 50 mmol·L-1 NaCl solution as mobile phase and flow rate of 0.7 mL·min-1 .The RI Shimadzu RID-2A detector was used.Linear relationship between values of peak area and mass concentration of HPMC was kept in the range of 0.1-5.0 g·L-1 with detection limit (3S/N)of 0.056 g·L-1 .The proposed method was applied to the analysis of contact lens care solutions,values of recovery found by standard addition method were in the range of 98.0%-102%.Precision of the method was tested in HPMC standard solutions for 6 determination,values of RSD′s (n=6) found were less than 1.5%.【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2014(000)009【总页数】3页(P1139-1141)【关键词】高效凝胶色谱法;羟丙甲纤维素;角膜接触镜护理液【作者】张莉;文燕;陈靖云;王敏珠;徐萍华【作者单位】国家食品药品监督管理局杭州医疗器械质量监督检验中心，杭州310009;国家食品药品监督管理局杭州医疗器械质量监督检验中心，杭州 310009;国家食品药品监督管理局杭州医疗器械质量监督检验中心，杭州 310009;国家食品药品监督管理局杭州医疗器械质量监督检验中心，杭州 310009;国家食品药品监督管理局杭州医疗器械质量监督检验中心，杭州 310009【正文语种】中文【中图分类】O652.63羟丙甲纤维素（HPMC）是一种非离子型纤维混合醚，根据其甲氧基和羟丙基两种取代基含量不同可得到多种型号的产品。
其独特的结构使其具有乳化、增稠、助悬、增黏、黏合、胶凝和成膜[1]等特性，同时羟丙甲纤维素毒性低，刺激性小，生物相容性好，这些特殊功能使其在角膜接触镜护理液中得到广泛的应用，如作为增黏增稠剂和保湿剂等。
羟丙甲纤维素作为其有效成分之一，应明确其在各类隐形眼镜护理液中加入的有效量，并建立准确、快捷和较少干扰因素的分析方法。
但目前市场上使用量最大的多功能护理液是将护理镜片各个步骤所需要的功能成分集合为一体，即各种不同或相似功能的成分混合在一起，导致角膜接触镜护理产品检测困难。
GB19192－2003《角膜接触镜护理液卫生要求》第4条明确提出对角膜接触镜护理液有效成分含量检测的技术要求。
羟丙甲纤维素作为有效成分之一，其含量直接关系到产品质量的安全性，应明确其在各角膜接触镜护理液中加入的有效量。
目前，角膜接触镜护理液中HPMC含量测定尚无标准。
目前已发表文献中采用紫外分光光度法检测HPMC[2－4]，但此方法会受到聚乙烯吡咯烷酮和泊洛沙姆等功能成分的干扰。
本工作根据HPMC本身的理化特性采用凝胶色谱法，以亲水性凝胶色谱柱，示差折光检测器测定护理液中HPMC浓度，排除功能成分海藻糖[5]、聚乙烯吡咯烷酮和泊洛沙姆等干扰，并探讨其是否可作为角膜接触镜护理液中羟丙甲纤维素有效成分质量控制的方法。
1 试验部分1.1 仪器与试剂Waters 2695型高效液相色谱仪（包括四元泵，在线真空脱气机，Waters 2414型示差折光检测器，柱温箱，自动进样器，Millennium?32色谱工作站）；Millipore超纯水系统。
HPMC标准储备溶液：10.0g·L－1，称取干燥至恒重的HPMC对照品1.000 0g，用50mmol·L－1氯化钠溶液溶解、定容至100mL容量瓶中，摇匀，冷藏保存。
使用时用50mmol·L－1氯化钠溶液稀释成所需质量浓度的标准溶液，经0.45μm 滤膜过滤后待测。
氯化钠为分析纯，试验用水为超纯水。
1.2 色谱条件TSK－Gelα3000色谱柱（300mm×7.5mm，10μm），最大流量1.2mL·min－1，最大压力25MPa· cm－2；TSK－Gelα3000（300mm×7.5mm，10μm），最大流量1.2mL·min－1，最大压力25MPa·cm－2；两根凝胶色谱柱串联使用。
柱温30℃；示差折光检测器温度30℃，灵敏度4；流动相为50mmol·L－1氯化钠溶液；流量0.7mL·min－1；进样量20μL。
1.3 试验方法分别取3批含有羟丙甲纤维素的市售角膜接触镜护理液各5mL，加50mmol·L－1氯化钠溶液定容至10mL，摇匀。
经0.45μm滤膜过滤后，滤液按色谱条件进行测定。
2 结果与讨论2.1 色谱行为按色谱条件对1.0g·L－1 HPMC标准溶液进行测定，其色谱图见图1。
图1 HPMC标准溶液的色谱图Fig.1 Chromatogram of HPMC standard solution由图1可知：HPMC的保留时间为14.9min。
2.2 凝胶色谱柱的选择试验考察了Shodex OHpak SB 802.5水凝胶色谱柱、两根TSK－Gelα3000水凝胶色谱柱串联的分离效果。
结果表明：单个 Shodex OHpak SB 802.5水凝胶色谱柱不能同时有效分离HPMC、聚乙烯吡咯烷酮两种物质，两根TSK－Gelα3000水凝胶色谱柱串联则可以有效分离，因此试验选择两根串联的TSK－Gelα3000水凝胶色谱柱作为分析柱。
2.3 流动相的选择水相流动相一般有磷酸盐缓冲溶液、氯化钠缓冲溶液和硝酸钠缓冲溶液。
由于护理液及润滑液都是液体，其本身含有氯化钠成分，因此，选用氯化钠溶液作为流动相可以减小样品溶液谱图中出现的溶剂峰。
经试验，样品中HPMC在50mmo l·L－1氯化钠溶液中分散均匀，峰形对称。
试验选择50mmol·L－1氯化钠溶液作为流动相。
2.4 干扰试验2.4.1 其他辅料的影响文献[1，5]中均报道护理液中海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮及泊洛沙姆对HPMC测定有一定的干扰。
试验按照角膜接触镜多功能护理液配方，配制含10g·L－1海藻糖、2.0g·L－1聚乙烯吡咯烷酮、5.0g·L－1泊洛沙姆及2.0g·L－1 HPMC功能成分的护理液进行干扰试验。
结果显示：HPMC在14.9min附近无干扰峰。
这表明采用此方法分析时，护理液中的其它功能成分：10g·L－1海藻糖（保留时间24.7min）、2.0g·L－1聚乙烯吡咯烷酮（保留时间20min左右）及5.0g·L－1泊洛沙姆（没响应峰）均不干扰羟丙甲纤维素的含量测定。
2.4.2 其它纤维素的影响羧甲基纤维素（CMC）分子结构跟羟丙基甲纤维素比较接近，在分光光度法测定羟丙基甲纤维素含量时会受到很大干扰。
试验按角膜接触镜护理液配方配制含3.0g·L－1羧甲基纤维素及2.0g·L－1羟丙基甲纤维素进行干扰试验。
结果显示：羧甲基纤维素保留时间为22.7min，不干扰羟丙甲纤维素的含量测定。
2.5 标准曲线和检出限按色谱条件对0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，5.0g·L－1的HPMC标准溶液进行测定，以HPMC的质量浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
结果表明：HPMC的质量浓度在0.1～5.0g·L－1范围内与相应的峰面积呈线性关系，线性回归方程为y＝3.625×104 x＋5.001×103，相关系数为0.999 1。
根据3倍信噪比计算得HPMC的检出限（3S／N）为0.056g·L－1。
2.6 精密度试验按试验方法分别对质量浓度为0.58，1.16，5.80g·L－1的HPMC标准溶液进行测定，平行测定6次，计算得其相对标准偏差（n＝6）分别为0.72%，0.92%，1.1%。
2.7 回收试验按试验方法对3批市售角膜接触镜护理液进行测定，并进行加标回收试验，结果见表1。
表1 回收试验结果（n＝6）Tab.1 Results of test for recovery测定值ρ／（g·L －1）加标量ρ／（g·L－1）测定总量ρ／（g·L－1）回收率／%0.69 1.02 1.73 102 0.76 2.04 2.76 98.0 0.81 3.06 3.89 101本工作建立了以水凝胶色谱柱为分离柱，示差折光检测器测定HPMC含量。
