乙型肝炎病毒表面抗原确认试验的临床应用

乙型肝炎病毒表面抗原定量检测及临床意义分析

摘要】目的 对乙型肝炎病毒表面抗原定量检测及其临床意义进行分析和探讨。方法 选择2013 年4 月至2014 年7 月厦门三院收治的200 例乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）阳性标本作为研究对象，分别对其做HBsAg 定量检测、HBV-DNA 检测及血清学标志检测，根据测得的HBsAg 含量多少，将其分成五组，并分析各组的HBV-DNA 阳性率。结果 HBsAg 含量的增高，其HBV-DNA 阳性率也随着增高。结论 HBsAg含量与乙型肝炎病毒具有相关性，HBsAg 含量的多少可以清晰地反映出HBV 的阳性率及动态变化，因此乙型肝炎病毒表面抗原定量检测在一定程度上可以有效反应出乙型肝炎病毒情况，为临床治疗提供了有效的诊断依据，该检测具有较为积极的临床意义，值得在实践过程中，大力借鉴和推广。

【关键词】HBsAg；HBV-DNA；HBV；检测；临床意义【中图分类号】R134+.4【文献标识码】A【文章编号】1276-7808（2015）-03-111-01

患者在感染乙型肝炎病毒后的4～7 天，在进行血清检验时，会出现乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg），HBsAg 是HBV 的外膜蛋白，是病毒感染肝细胞的重要物质[1]。近年来，相关的临床资料表明，对乙型肝炎病毒患者进行早期HBsAg

检测，具有重要的临床意义，可以对HBV 情况进行有效了解，为患者进行治疗提供重要的临床依据[2]。

本研究就乙型肝炎病毒表面抗原定量检测及临床意义进行了分析和探讨，现报告如下，供大家研究和参考。

1 一般资料和方法

1.1 一般资料选择2013 年4 月至2014 年7 月厦门三院收治的200 例乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）阳性标本作为研究对象，分别对其做HBsAg定量检测和HBV-DNA 检测，血清学标志检测，根据测得的HBsAg含量多少，将其分成五组，并分析各组的HBV-DNA 阳性率。经确认，本次研究的所有标本均确定为HBsAg 阳性标本，且所有标本活性均未被破坏，符合本次研究的基本条件，不会对研究结果造成影响。

乙型病毒标志物检测指标的临床意义分析

1.乙型肝炎病毒表面抗原检测

乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)是存在于小球形颗粒、大球形颗粒和Dane颗粒外层的糖蛋白，其基因位于双链DNA的S区。

1.1 标本采集、处理及检验方法采静脉血(自凝)，用酶联免疫吸附试

验、发光免疫技术检测。

1.2 临床意义乙型肝炎病毒表面抗原是机体感染乙型肝炎的标志

之一，见于急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝硬化或无症状携带者。

2.乙型肝炎病毒表面抗体检测

乙型肝炎病毒表面抗体(抗－HBs)是患者对乙型肝炎病毒表面抗原所产生的一种抗体，对乙型肝炎病毒表面抗原有一定的中和作用。乙型肝炎病毒表面抗体一般在发病后3～6 个月出现，可持续多年。

2.1 标本采集、处理及检验方法采静脉血(自凝)，用酶联免疫吸附试

验、发光免疫技术检测。

2.2 临床意义乙型肝炎病毒表面抗体是机体感染乙型肝炎病毒后

主要的保护性抗体， 可阻止乙型肝炎病毒穿过细胞膜进入肝细胞，

表明机体对乙型肝炎病毒有一定的免疫力。它的出现说明病毒基本

清除，是乙型肝炎痊愈的临床标志。注射乙肝疫苗或抗－HBs免疫球

蛋白者，乙型肝炎病毒表面抗体可呈阳性。

3.乙型肝炎病毒e抗原检测 乙型肝炎病毒e 抗原(HBeAg)是乙型肝炎病毒核心颗粒中的一种可溶性蛋白质，由前C 基因编码产生。乙型肝炎病毒e抗原的消长与病毒体及DNA多聚酶的消长基本一致。

3.1 标本采集、处理及检验方法采静脉血(自凝)，用酶联免疫吸附试

验、发光免疫技术检测。

3.2 临床意义乙型肝炎病毒e 抗原阳性表明乙型肝炎病毒处于活

动期，并有较强的传染性。检测乙型肝炎病毒e抗原有助于判断乙型

肝炎病毒携带者传染性的强弱、母婴传播的危险率及急性乙型肝炎

的预后等。孕妇乙型肝炎病毒e抗原阳性可引起垂直传播。乙型肝炎

病毒e抗原持续阳性，表明肝细胞损害较重，并有可能转为慢性乙型

肝炎或肝硬化。

4.乙型肝炎病毒e 抗体检测

乙型肝炎病毒表面抗原ELISA法检测程序

1检验目的及原理

1.1检验目的：乙型肝炎病毒表面抗原是乙型肝炎病毒感染的最主要免疫指标，乙型肝炎肝病毒的感染带来了严重的公共卫生问题。母婴传播、性传播和血液传播是最主要的传播途径。尽早的发现感染可以有效减少疾病的传播。

1.2检验原理：两步双抗体夹抗原ELISA试验

用于检测HBsAg的酶免疫检测法，是在1971年，首先由Engvall，Perimann1，VanWeemen以及Schuurs进行描述的。在1976和1977年，建立了固相“夹心”酶免疫检测法。HBsAg在包被有多克隆抗体（Anti-HBsAg）的固相上被捕获，随后由酶标Anti-HBs进行检测显示。在二十世纪80年代早期，开发了基于单克隆Anti-HBs的HBsAg检测法。

本实验采用单克隆Anti-HBs的两步夹心ELISA试验，微孔板上所包被及酶结合物所用分别为针对表面抗原不同位点的抗体。如果被检测血清中存在表面抗原，则可通过双抗体夹心的桥联将辣根过氧化物酶（HRP）连接到微孔板上，使TMB呈色。

2 方法性能参数

2.1两步双抗体夹抗原ELISA试验

(1)敏感性：

样品中HBsAg浓度达到0.5ng／m1，即可得到阳性结果。

(2)特异性：

使用血浆、被检测者因各种病理因素而使血液中含有过高纤维蛋白原或者异嗜性抗体时，可能引起检测结果的假阳性。

3 标本

3.1乙型肝炎病毒表面抗原的适宜检材为新鲜血液样本分离出的血清，不适合于混合血清、血浆或其他体液样本，特殊检材的要求及结果判断见其具体要求，不适用本程序。

3.2血液标本用不含添加剂的干燥洁净试管采集，采集后在37℃孵育1.5～2小时，2000 RPM以上离心5分钟，分离血清。

3.3采用含有分离胶和促凝剂的试管采集的血液样本，采集后在37℃孵育0.5～1小时，2000

RPM以上离心5分钟，分离血清。

3.4严重脂血、严重溶血原则上不会影响检测结果，但洗涤一定要彻底、干净。

丙型肝炎病毒核心抗原酶标抗体的制备及ELISA检测方法的建立

将抗丙型肝炎病毒核心抗原抗体（Anti-HCV Core protein）应用过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶（HRP），制备抗丙型肝炎病毒核心抗原酶标抗体，根据酶联免疫操作步骤，应用美国Ortho公司试剂盒的其它组分，建立一种丙型肝炎病毒核心抗原双抗夹心检测法，并对比市场上的试剂盒进行检测。

标签：丙型肝炎病毒核心抗原；辣根过氧化物酶；标记；临床

0 引言

丙型病毒性肝炎，简称为丙型肝炎、丙肝，是一种由丙型肝炎病毒（HCV）感染引起的病毒性肝炎，主要经输血、针刺、吸毒等传播。

本实验通过用辣根过氧化物酶（HRP），对抗丙肝核心抗原抗体进行标记，利用美国ortho公司成品试剂盒的其他组分，组装形成丙型肝炎核心抗原检测试剂盒，验证自制试剂盒的准确性、特异性以及与ortho公司产品的相关性。

1 材料和方法

1.1 材料

（1）实验试剂。辣根过氧化物酶（sigma）；过碘酸钠（百灵威科技有限公司）；抗HCV-cAg单克隆抗体（美国赛莱克斯cellex公司）；丙型肝炎核心抗原检测试剂盒（美国0rtho公司）；0.2mol/L，pH5.6醋酸盐缓冲液；0.01mol/L，pH7.4

磷酸盐缓冲液；1.0mol/L， pH9.5 碳酸盐缓冲液。（2）主要仪器。BIOBASE8001全自动酶免工作站，山东博科生物产业有限公司；BIOBASE洗板机，山东博科生物产业有限公司；DHP-260恒温培养箱，常州中捷实验仪器制造有限公司；微孔板恒温振荡器，上海岛韩实业有限公司；高速冷冻离心机，中科中佳

HC-3018R。

1.2 实验方法

（1）试剂盒的应用及检测实际操作。（2）样品排布。利用自产的试剂盒与美国ortho公司的对照，检测临床42个样本，对阴阳性符合率进行验证。每个样本先用ortho公司的检测。（3）试剂盒的特异性。选取临床上的病理样本，分别为27例类风湿因子（RF）阳性样本，25例免疫球蛋白阳性样本，18例自身抗体阳性样本（上述样本抗HCV和HCV均为阴性），用自配制的酶标抗体和ortho公司的酶标抗体各检测一次，验证试剂盒的特异性。（4）相关性。选择临床上丙型肝炎病毒核心抗原强阳性样本，对该样本进行等比稀释。