细菌鉴定流程

细菌的初步鉴定一、启动条件：1、目地样：同一取样原因，取表现性状相同的任意1—2包进行细菌初步鉴定。

如表现性状不同的，需分别进行鉴定；不同取样原因，需分别取样进行鉴定。

2、随机样：相同时段出现坏包，取表现性状相同的任意1—2包进行细菌初步鉴定；不同时段出现坏包，需分别进行鉴定。

3、坏包产品的包装无明显破损。

4、由微生物污染引起的坏包：酶类及化学反应用不同的查验方式。

二、样品处理准备1、酸包：检测时发现产品感官及PH值有明显变化时，需快速将酸包产品的内容物移入无菌容器内（移入时需用75%的酒精棉对操作员手及开包产品的移出口进行擦试灭菌），并需快速检测。

如不能检测，需冷藏保存2小时内进行检测。

2、胀包：使用75%酒精棉对样品外表面擦试消毒后放于超净台内待检。

检测时，以无菌操作在无横纵封处剪一半圆或三角取样。

三、检测（划线，接种培养）：低酸产品：检测细菌、芽孢、耐热芽孢，必要时检测霉菌、酵母菌。

高酸产品：检测细菌、霉菌、酵母菌。

1、细菌：采用无菌手续取1ml样品接种于培养皿中，使用普通营养琼脂于36±1℃/48小时条件下培养；另采用无菌操作使用接种环于营养琼脂上作划线培养（37℃/48h）2、芽孢、耐热芽孢：以无菌操作取10ml样品于两个小试管中，分别在80℃和100℃的水浴中加热10min。

冷却后使用营养琼脂培养基的无菌操作，分别作芽孢（36±1℃/72h）和耐热芽子包（55±1℃/72h）的接种与划线培养。

80℃10min—杀灭全部未形成孢子的细菌细胞，孢子可存活。

100℃10min--杀灭部分细菌孢子，耐热孢子可存活。

3、霉菌、酵母菌：采用接种环以无菌手续于专用培养基上作划线培养，另采用1ml吸管以无菌操作，接种1ml样品于专用培养基中培养。

（条件25—28℃/5天）四、记录样品：名称、批号、取样原因、时间、样品感官、PH值、酸度、气体形成、包装密封性、凝块、分离等。

细菌鉴定流程细菌鉴定细菌形态学鉴定16S rDNA 鉴定生理生化鉴定一、细菌形态学鉴定1.从-80˚Ϲ冰箱中取出菌株放4˚Ϲ复苏，轻柔混匀后用接种环接一环菌液在培养基平板上划线活化，根据菌株来源选择适宜的培养基。

2.放入培养箱倒置培养，实验室一般采用28˚Ϲ培养，特殊菌株依据该菌最适条件（时间、温度）培养24-48h。

3. 纯化：从活化培养基平板上挑取单菌落继续划板培养。

4. 观察记录菌落形态特征：大小（mm）、形状、干湿、透明度、颜色、边缘整齐还是，，，，，，，形状干湿透明度颜色边缘细菌大小（mm）注意事项：①接种划线应在酒精灯旁边操作②培养时应倒置培养，防止污染二、革兰氏染色1.涂片固定将纯化后的菌株进行革兰氏染色，滴一滴生理盐水于载玻片上，无菌条件下用接种环挑取少量菌落均匀涂布水滴中，使其自然干燥，菌面向上，经火焰固定。

注意事项：菌液涂片时不可过于浓厚，干燥、固定。

固定时通过火焰1~2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。

2.染色一般包括初染、没染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：（1）加上结晶紫后，染色1分钟，水洗。

（2）加上碘液染色1分钟，水洗。

（3）加上95%酒精，摇动玻片，根据涂片厚度，脱色约20~60秒，水洗，吸去水分。

（4）加上蕃红后，染色1分钟，水洗。

（5）吸干或在空气中晾干后，油镜镜检。

3.结果观察：革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。

以均匀分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，都常呈现假阳性。

注意事项：①标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。

若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不再出现紫色为止。

②玻片通过火焰温度不能太高。

③碘液变透明，则不能使用。

④水洗时动作要轻，沿载玻片对角线方向用洗瓶冲洗，以免把菌体冲掉。

三、16S rDNA 鉴定（16S rDNA只能鉴定到属，需进行生理生化、药敏实验等鉴定到种）1. 细菌复苏、活化、纯化同细菌形态学鉴定3. 挑取单菌落至少2-3个接到含有1ml灭菌纯水的1.5ml离心管中混匀。

简述一般细菌鉴定流程下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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革兰氏阳性球菌、革兰氏阴性杆菌、革兰氏阳性杆菌鉴定程序流程图一、临床常见革兰氏阳性球菌的鉴定6.5%NaCL触葡萄糖分群②－ ②+/－ 草 绿色链球 菌D 群 链 球 菌血浆凝固酶DNA 酶肠球菌属 气球菌属 精氨酸＋－革兰氏阳性球菌 需氧培养 溶血溶血溶血 ①OP ①杆菌肽 ①胆汁七叶苷 ②胆汁七叶苷 ②CAMP ②6.5NaCI ③6.5%NaCI ③胆汁七叶苷②－ ②－ ②＋ ③－ ③－ ③＋/－ ①＋②＋③＋均－A 群 B 群 D 群 其他 链球菌肺炎链 草绿色链 D 群链球 球菌气球菌属山梨醇坚忍肠球菌①阿拉伯糖②甘露醇③山梨醇粪肠球菌 屎肠球菌 坚韧肠球菌 表皮葡萄球菌 （新生霉素S ） 腐生葡萄球菌 （新生霉素R ）+非肠球菌属乳糖 甘露醇马肠链球菌二、临床常见革兰氏阴性杆菌鉴定见图观察平板上菌落特征（特殊形态、漫延生长、拉丝、溶血、荧光、色素等）②— 革兰氏阴性杆菌 氧化酶（—） KIA 葡萄糖O/FO/-） 肠杆菌科 动力①苯丙氨酸②VP 试验②－ ②－②麦芽糖迅速分解 ③甘露醇④DNA 酶 （G-球杆菌） （25%氧化酶+）②＋ ②－ ③－ ③+④＋ ④－ 嗜麦芽窄 食单胞菌 洋葱伯克 霍尔德氏菌（93%氧化酶阳性）埃希菌属 变形杆属菌 克雷伯氏菌属志贺氏菌属 （漫延生长） （动力-）沙门氏菌属 普罗威登氏菌属 沙雷氏菌属枸橼酸杆菌属 摩根摩根氏菌 （DNA 酶+） 迟缓爱德华菌 (吲哚+，尿素+， 哈夫尼亚菌属耶尔森氏菌属 糖醇反应差） （蜂房哈夫尼亚）（G-短小杆菌 肠杆菌属37℃动力（—）25℃动力（+）尿素（+）4℃生长 糖醇分解/黄色素阴沟肠杆菌聚团多源菌 产气肠杆菌 板畸肠杆菌革兰氏阴性杆菌氧化酶（+） KIA 葡萄糖O/FO/-） 弧菌科动力①嗜盐试验 ②肌醇 ③O/129敏感试验④TCBS 生长 （端鞭毛）（菌落产生 亮黄色色素）莫拉氏菌 （G-球杆菌，SS 不生长， 菌落细小， 不分解任何糖类）①－ ①－ ①＋/－ ②－ ②＋ ②－ ④－ ④－ ④＋③R ③S/R ③S 气单胞菌属 邻单胞菌属 弧菌属 （76%有β溶血） （无β溶血）（周鞭毛， 蛋白胨肉汤 中PH8.6以上不分解任何糖 类）三、临床常见革兰氏阳性杆菌鉴定革兰氏阳性杆菌 抗酸染色（18℃--20℃有动力，倒伞形，狭窄溶血环,H 202+）李斯特氏菌＋ － ＋/－＋＋ － 普通血平板生长芽胞杆菌梭状 奴卡氏菌 （血平板呈粉末状 生长，菌落不易挑 起，有菌丝）（G+着色不匀，有异染 颗粒，毒力试验阳性， 结合临床症状考虑 是否为白喉棒状杆菌）红斑丹毒丝菌 （G 染色易脱色，H 2S+ 感染特征）丙酸杆菌棒状杆菌红斑丹毒丝菌糖分解/触酶。

细菌鉴定的方法和步骤
细菌鉴定是通过一系列方法和步骤来确定细菌菌种的过程。

以下是常用的细菌鉴定方法和步骤：
1. 收集样品：从目标环境或感染部位收集细菌样品，如血液、尿液、唾液、食物等，以便后续实验。

2. 培养：将细菌样品接种到适当的培养基上，提供足够的营养物质和环境来促进细菌的生长。

3. 纯化：将单个细菌菌落分离出来，并通过连续的传代培养使其得到纯化，以避免不同细菌种类的混杂。

4. 形态观察：观察细菌在固体培养基上的形态特征，如菌落的形状、颜色、大小等，以及在显微镜下的细胞形态，如形状、大小、结构等。

5. 染色：将细菌样品进行染色，如革兰氏染色、抗酸染色等，以便观察不同细菌的染色特征。

6. 生理生化试验：进行一系列生理生化试验，如代谢产物的产生、酶活性、氧需求等，以确定细菌的代谢特征。

7. 耐受性检测：测试细菌对温度、pH值、氧气和抗生素等环境因素的耐受性，以进一步确认鉴定结果。

8. 分子生物学分析：利用分子生物学技术，如PCR、序列分析等，通过对细菌的基因组或特定基因进行分析，来确定细菌的物种。

9. 鉴定结果：根据以上步骤的结果和参考文献，将细菌归类到已知的菌属或菌种中，最终得出细菌的鉴定结果。

需要注意的是，细菌鉴定是一个复杂的过程，通常需要准备鉴别试剂和设备，以及具备相关实验操作的技术和经验。

质谱仪鉴定细菌的流程
使用质谱仪鉴定细菌的流程:(1)菌株分离与筛选：将样品的微生物中进
行培养、筛选，从而获取未知微生物的菌株；(2)DNA提取：将筛选出
的菌株进行扩增或者提取细菌的DNA，以供分子鉴定细菌株；(3)质谱
仪质量分析：将提取的DNA或者RNA分别通过液相、气相色谱，再
利用质谱仪进行质量分析，形成细菌的质量谱；(4)特异性标记与对比：采用特异性标记物，以及细菌库中有关质量谱进行比对；(5)质量谱分
析与结果判断：将质量谱和有关质量谱进行分析，以确定鉴定出的细
菌类型及部分比较；(6)结果验证：将质谱仪鉴定得到的细菌名称和细
菌培养、鉴定的结果进行对比验证，以确保细菌的类型正确性。

使用质谱仪鉴定细菌的流程：
(1)菌株分离与筛选：我们首先从检测样品中分离微生物株，将其培养、杂菌混合等进行筛选，然后获取未知微生物株；
(2) DNA提取：采用扩增或者提取了染色体内的DNA，再进行分子鉴
定菌株，以便质谱仪的质量分析；
(3)质谱仪质量分析：将提取的DNA或RNA经过液相和气相色谱分离，再利用质谱仪进行质量分析，形成待测细菌的质量谱；
(4)特异性标记与对比：利用特异性标记物，与细菌库中有关质量谱进行比对，以辅助对确定待测细菌的种类；
(5)质量谱分析与结果判断：利用微生物种间质量差异特性，考察质量谱，以确定待测细菌类型以及部分比较；
(6)结果验证：通过与细菌培养鉴定的结果对比验证，来确保质谱仪鉴定出的细菌类型是正确的。

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文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!简述细菌种属的分类鉴定流程一、准备工作阶段。

在进行细菌种属的分类鉴定之前，需要进行充分的准备工作。

16S rDNA鉴定细菌的方法细菌16S rDNA鉴定主要分为7个部分：1.提取细菌基因组DNA,2.设计/选择引物进行PCR扩增，电泳检测纯度与大小。

3.琼脂糖凝胶电泳分离4.胶回收目的片段5.目的片段测序。

6.BLAST比对获取相似片段。

7.构建系统进化树试剂：1、培养基：通常选择组分简单且细菌生长良好的培养基（培养基组分过于复杂会影响DNA 的提取效果，也可以在裂解细菌前用TE缓冲液对菌体进行洗涤。

）。

2、1M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)（1L）：121.1g Tris，加浓盐酸约（70ml, 60ml, 42ml），高温高盐灭菌后，室温保存。

冷却到室温后调pH，每升高1℃，pH大约下降0.03个单位。

3、0.5M EDTA（pH8.0）（1L）：186.1g Na2EDTA•2H2O，用NaOH调pH至8.0（约20g）,高温高压灭菌，室温保存。

4、10×TE Buffer(pH7.4，7.6，8.0)（1L）：组分：100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA。

1M Tris-HCl （pH7.4，7.6，8.0）取100ml，0.5M EDTA（pH8.0）取20ml。

高温高压灭菌，室温保存。

1×TE Buffer用10×TE Buffer稀释10倍即可。

5、10%SDS（W/V）：称10g，68℃加热溶解，用浓盐酸调pH至7.2。

室温保存。

用之前在65℃溶解。

配置时要戴口罩。

6、5M NaCl：称292.2gNaCl，高温高压灭菌，4℃保存。

7、CTAB/NaCl（10%CTAB，0.7M NaCl）：溶解4.1g NaCl，加10g CTAB（十六烷基三甲基溴化铵），加热搅拌。

用之前在65℃溶解。

8、氯仿/异戊醇：按氯仿：异戊醇=24：1（V/V）的比例加入异戊醇。

9、酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）：按苯酚与氯仿/异戊醇=1：1的比例混合Tris-HCl平衡苯酚与氯仿/异戊醇。

学习总结各位领导好，从5月25号开始，在周老师的实验室已经进行了十多天的培训，让我学到很多。

现将我在实验室学习的情况总结汇报。

一、细菌鉴定流程：1.表观观察鉴定：培养24h的菌落观察，如：菌落形态（圆形、椭圆形等）、大小（直径多少）、表面光滑度（光滑和粗糙）和隆起情况（扁平，隆起，凸起等）、边缘整齐、菌落的透明度、菌落（菌落颜色及是否产生色素等）及培养基的颜色（培养基是否变色）等菌落的描述。

显微观察，观察单个菌的形态（杆状，圆形，椭圆形，螺旋形等），是否有芽孢，荚膜的情况。

染色观察，革兰氏染色、芽孢染色、荚膜染色。

2.分子鉴定：细菌DNA的提取（试剂盒法）⑴将菌种接在适宜的液体培养基中，进行液体发酵，180rpm/min，24h培养。

⑵将摇瓶发酵的菌液加到1.5ml离心管中，10000rpm离心1min，倒掉上清液。

⑶向菌体沉淀中加入200ul缓冲液GA，震荡，至菌体悬浮。

如果是革兰氏阳性菌，则向菌体中加入120ul的Tris盐酸缓冲液，再加入80ul溶菌酶，37℃，30min以上。

⑷向离心管中加入20ul蛋白酶K溶液，混匀。

⑸加入220ul缓冲液GB，震荡15s，70℃放置10min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

⑹加入220ul无水乙醇，充分震荡混匀15s，可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

⑺将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个离心柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

⑻向吸附柱CB3中加入500ul缓冲液GD，12000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

⑼向吸附柱CB3中加入600ul漂洗液PW，12000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

⑽重复操作步骤⑼。

⑾ 将吸附柱CB3放入收集管中，12000rpm 离心2min ，倒掉废液，将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。