下丘脑背内侧核神经肽Y表达缺失对大鼠脂肪组织脂代谢的影响研究
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谷氨酸钠诱导大鼠肥胖对下丘脑弓状核NPY、ObR表达的影响作者:张连双王希锋张洪芹赵伟李雅娜时彦【摘要】目的探讨谷氨酸钠诱导大鼠肥胖后对下丘脑弓状核神经肽Y(NPY)、瘦素受体(Ob R)表达的影响。
方法给新出生雌性Wistar大鼠皮下注射谷氨酸钠,连续5 d,以建立肥胖模型。
动物存活至90日龄时,经左心室升主动脉插管,行4%多聚甲醛灌注固定,取下丘脑进行冰冻切片并行ABC法免疫组织化学染色,观察NPY、Ob R在其下丘脑弓状核的表达情况。
结果80%的注射谷氨酸钠大鼠呈能量失衡致肥胖状态;下丘脑弓状核NPY表达较对照组增强(P <0.05),而Ob R表达较对照组减弱(P<0.05)。
结论谷氨酸钠诱导大鼠肥胖可引起下丘脑弓状核NPY表达上调,而Ob R表达下调。
【关键词】神经肽Y;Ob R;谷氨酸钠; 弓状核; 大鼠【Abstract】Objective To investigate the effects on expression of NPY and Ob R in arcuate nucleus of hypothalamus of rat obesity induced by glutamic sodium.Methods Subcutaneous injection of glutamic sodium to rats for 5 continuing days to create model of obesity. The hypothalamus was taken and made into frozen sections and stained under the same condition. Using specific NPY antibody (1∶200) and Ob R antibody (1∶200) by ABC immunohistochemistry method. To observe the expressions of NPY and leptin receptor in arcuate nucleus of hypothalamus.Results 80% rats induced by glutamic sodium showed over weight, the expression of NPY in arcuate nucleus of hypothalamus was significantly higher (P<0.05)than that of control group, however, the expression of leptin receptor and GnRH was very low (P<0.05).Conclusion Obesity induced by injection of glutamic sodium can cause up regulation of NPY and down regulation of Ob R in arcuate nucleus of hypothalamus.【Key words】NPY,Ob R,glutamic sodium,arcuate nucleus,rats瘦素(leptin)是ob基因的表达产物,由脂肪组织分泌,含167个氨基酸残基,通过作用于其受体发挥作用。
神经肽Y在杏仁中央核内对禁食大鼠摄食的调节方式朱永香;王倩;王爽;于玮;南瑛;曹健【期刊名称】《吉林大学学报(医学版)》【年(卷),期】2013(039)004【摘要】目的:观察神经肽Y(NPY)在杏仁中央核(CeA)内对禁食大鼠摄食的调节方式,并探讨其可能的作用机制.方法:选择雄性SD大鼠34只,将其中10只大鼠随机分为正常摄食组与禁食24 h组,每组5只,取大鼠脑组织,应用免疫组织化学方法检测大鼠CeA内NPY及其Y1受体的表达;剩余24只大鼠行CeA内套管植入术,术后12只大鼠随机分为2组,1组CeA内注射NPY,另1组CeA内注射生理盐水(对照1组),1、2及4h后分别观察大鼠摄食量;另12只术后大鼠随机分为2组,1组CeA内注射Y1受体阻断剂,另1组CeA内注射生理盐水(对照2组),1、2及4h 后分别观察大鼠摄食量.结果:与正常摄食组比较,禁食24 h组大鼠CeA内NPY表达显著增多(P<0.05),其Y1受体表达显著减少(P<0.05);与对照1组比较,大鼠CeA内注射NPY后1h内摄食量明显增加(P<0.05);与对照2组比较,大鼠CeA 内注射NPY的Y1受体阻断剂后1h内摄食量明显减少(P<0.05).结论:NPY在CeA内对禁食大鼠的摄食具有促进作用,其机制可能是通过Y1受体调节.【总页数】6页(P667-671,后插1)【作者】朱永香;王倩;王爽;于玮;南瑛;曹健【作者单位】西安医学院生理学教研室,陕西西安710021;西安医学院生理学教研室,陕西西安710021;西安医学院病理生理学教研室,陕西西安710021;西安医学院生理学教研室,陕西西安710021;西安医学院生理学教研室,陕西西安710021;西安医学院生理学教研室,陕西西安710021【正文语种】中文【中图分类】R338.2【相关文献】1.Ghrelin在杏仁中央核内对大鼠摄食的调节 [J], 朱永香;王倩;王爽;于玮;南瑛;曹健2.神经肽Y在杏仁中央核内对甜味觉的调节及其机制 [J], 朱永香;王倩;王爽;于玮;南瑛;曹健3.杏仁中央核内注射NMDA型谷氨酸受体激动剂NMDA及拮抗剂D-AP-5引起摄水量而不是摄食量的改变 [J], 闫君宝;宋琳;魏晓静;闫剑群;李金容;陈坷;孙慧玲;张嫄;赵小林;孙波;赵师儒4.电解毁损杏仁基底外侧核或杏仁中央核对大鼠摄食和体质量的影响 [J], 吕波;闫剑群5.大鼠杏仁中央核内微量注射催乳素释放肽抑制摄食 [J], 樊红琨;王志举;乔鹏;王书春;闫剑群因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
下丘脑Hypocretin神经肽在大鼠缰核对睡眠-觉醒调节中的作用孟德欣;牟丽;黄民;章北林;赵华【期刊名称】《吉林大学学报(医学版)》【年(卷),期】2009(35)2【摘要】目的:研究下丘脑Hypocretin神经肽在缰核(Hb)对睡眠一觉醒调节中的作用,为探讨Hb在睡眠-觉醒调节中的作用提供理论依据.方法:成年雄性Wistar大鼠20只,随机分为实验组(n=10)和对照组(n=10),实验组灌胃给予催眠药唑吡坦5 mg·kg-1,对照组给予等量生理盐水,待唑吡坦药效达峰值时,将大鼠断头处死,取出Hb组织,提取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Hb中HcrtR2 mRNA的表达水平.另取大鼠(n=5)单侧Hb微量注射霍乱毒素b亚单位(CTb),采用CTb逆行追踪法观察下丘脑内是否有免疫阳性神经元存在.结果:经RT-PCR检测,实验组和对照组Hb中HcrtR2 mRNA的表达水平(相对平均灰度值分别为0.13±0.03和0.26±0.04)比较差异有显著性(P<O.05).免疫组织化学染色显示,在大鼠下丘脑外侧区(LHA)、外侧视前区(LPO)和弓状核(ARC)都可见CTb标记免疫阳性神经元.结论:下丘脑Hypocretin神经肽及其受体参与Hb对睡眠一觉醒调节的作用,且Hb接受下丘脑内睡眠相关结构LHA、LPO、ARC的纤维投射.【总页数】4页(P214-217)【作者】孟德欣;牟丽;黄民;章北林;赵华【作者单位】吉林大学基础医学院生理学教研室,吉林,长春,130021;吉林大学基础医学院生理学教研室,吉林,长春,130021;吉林大学基础医学院生理学教研室,吉林,长春,130021;吉林大学基础医学院生理学教研室,吉林,长春,130021;吉林大学基础医学院生理学教研室,吉林,长春,130021【正文语种】中文【中图分类】R338.27;R-332【相关文献】1.丝胶对糖尿病大鼠下丘脑神经肽Y和瘦素表达的调节作用 [J], 付秀美;杨海艳;付文亮;薛景凤;陈志宏2.基底外侧杏仁核对大鼠睡眠和行为的调节作用及机制研究 [J], 施蕾3.缰核对促睡眠区视前区-下丘脑前部的调节作用 [J], 牟丽;曾丽玲;张小虎;黄民;赵华4.基底外侧杏仁核对睡眠-觉醒的调节作用 [J], 朱国庆;钟明奎;张景行;赵乐章;柯道平;王敏;施蕾5.大鼠中脑腹侧被盖区在睡眠-觉醒调节中的作用 [J], 张文慧;钱朝霞;江海宏;蔡葵;林殷利因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
MC4R基因研究进展左北瑶;钱宏光【摘要】MC4R was a class of peptide secreted by the hypothalamic ventromedial nucleus,and one of 5 subtypes of the melanocortin receptor family(MC1 -5R). In mammals,MC4R could mediate the leptin,and it was an important signaling molecule that might regulate the balance of energy and energy-homeostasis,and combined with melanocortin or agouti protein and agouti related protein,it played a key role in controlling the appetite and body weight steady-state.Thus,MC4R was given much attention as an important regulator in human obesity research.Recent studies have shown that back fat thickness of the sheep are associated with G→A mutation in 1 232 point of MC4R, and AG type and AA type have higher back fat thickness than GG type.%黑素皮质素受体-4( melanocortin-4 receptor,MC4R)是下丘脑腹内侧核分泌的一类肽类物质,为黑素皮质素受体家族5个亚型(MC1-5R)之一.在哺乳动物中,MC4R具有介导瘦蛋白(leptin)的功能,是一个调节能量平衡与能量动态平衡的重要信号分子,可与其内源性配体黑素皮质素激素(melanocortin,MC)或刺鼠色蛋白(agouti protein,agouti蛋白)和agouti相关蛋白(agouti related protein,AGRP)相结合,从而在控制食欲和体重稳态中起关键作用.因此,MC4R在人类肥胖研究中作为重要的调节因子倍受关注.最近有研究表明:MC4R的1232位点的G→A的突变与绵羊背膘厚度间存在关联,AG和AA型较GG型具有较高的背膘厚度.【期刊名称】《中国草食动物科学》【年(卷),期】2011(031)005【总页数】6页(P45-50)【关键词】黑素皮质素受体-4( MC4R);MC4R基因多态性;肥胖调节因子;背膘厚度【作者】左北瑶;钱宏光【作者单位】新疆巴州畜牧工作站,库尔勒841000;内蒙古自治区农牧业科学院【正文语种】中文【中图分类】Q953MC4R(melanocortin-4 receptor,黑素皮质素受体-4)是下丘脑腹内侧核分泌的一类肽类物质[1],为黑素皮质素受体家族5个亚型(MC1-5R)之一。
下丘脑内侧基底部神经元HIFl a缺失对小鼠体重和糖代谢的影响艾孜买提•肉孜江”单玮碧2*郭海3姚巧玲11.新疆医科大学基础医学院生理学教研室,新疆乌鲁木齐830011;2.新疆医科大学第一附属医院麻醉科,新疆乌鲁木齐830011;3.新疆医科大学第一附属医院皮肤科,新疆乌鲁木齐830011[摘要]目的探讨下丘脑内侧基底部(MBH)神经元缺氧诱导因子1a(HIF1a)对小鼠体重和血糖代谢的影响遥方法选用30只HIF1ag血雄性小鼠,将体重相近的两只小鼠随机分在实验组与对照组,每组15只。
两组小鼠平均体重相差不大于2g遥实验组小鼠MBH注射cre腺相关病毒AAV-hSyn-cre-GFP,选择性敲除MBH神经元中的HIF1a;对照组小鼠注射AAV-hSyn-GFP。
两组注射部位均为MBH神经元[前囟-1.5,中线±0.5(两侧),背腹5.8 (颅骨表面)]。
每侧注射浓度为1.45E+13v.g./mL的病毒0.5滋L遥注射后每天称量小鼠的体重和进食量,4周后检测小鼠血清中葡萄糖及胰岛素的含量。
结果整体分析小鼠体重发现,组间比较、时间点比较及交互作用差异均有统计学意义(P<0.05)遥组内比较:两组小鼠第15、25、28天的体重均高于第5天,差异均有统计学意义(均P< 0.05);组间比较:实验组第15、25、28天的体重高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)遥整体分析小鼠进食量发现,组间比较、时间点比较及交互作用差异有统计学意义(P<0.05)遥组内比较:对照组第15、25、28天与第5天进食量比较,差异无统计学意义(P>0.05),实验组第15、25、28天的进食量均高于第5天;差异均有统计学意义(均P<0.05);组间比较:实验组第15、25、28天的进食量高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)遥两组小鼠空腹血糖水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)遥与对照组比较,实验组血清胰岛素含量升高,差异有统计学意义(P<0.05)遥相关性分析结果显示,实验组小鼠血清中胰岛素含量与体重呈正相关(r=0.660,P<0.05)遥结论常氧下小鼠下丘脑神经元HIF1a在体重平衡的调节中起重要作用。
中链脂肪酸的生物学特性及其在动物生产中的应用王建军;王恬【摘要】中链脂肪酸(medium-chain fatty acids,MCFAs)具有一些有别于长链脂肪酸(longchain fatty acids,LCFAs)的代谢特点.它具有一些特殊的生物学功能,可以降低脂肪沉积、改善胰岛素敏感性、调节能量代谢,同时还具有抑菌效果.本文综述了MCFAs的代谢特点、生物学功能及其在动物生产中的应用.%Medium-chain fatty acids (MCFAs) possess some properties which are different to long-chain fatty acids. MCFAs have some specific bio-functions, such as reducing body fat accumulation, benefiting to insulin sensitivity, regulating energy metabolism, and anti-microbial effects. This paper mainly focuses on the metabolism characteristic and bio-function of MCFAs and their application in animal production.【期刊名称】《动物营养学报》【年(卷),期】2011(023)007【总页数】6页(P1073-1078)【关键词】中链脂肪酸;代谢特点;生物学功能;动物生产;应用【作者】王建军;王恬【作者单位】南京农业大学动物科技学院,南京,210095;南京农业大学动物科技学院,南京,210095【正文语种】中文【中图分类】S816.7随着经济的发展以及生活水平的提高,人们的消费观念发生了很大的变化,健康、安全和绿色的畜禽产品逐渐成为消费者的首选食品。
针药并用对单纯性肥胖大鼠血清瘦素及下丘脑NPY基因表达的影响韩海荣;刘德全【期刊名称】《针灸临床杂志》【年(卷),期】2012(028)005【摘要】目的:观察针灸配合中药石连饮对肥胖大鼠血清瘦素、神经肽Y含量和下丘脑神经肽Y基因表达的影响,探讨针药并用治疗单纯性肥胖的机制.方法:Wistar 雄性大鼠120只,随机分为普食组及高脂组,高脂组用高脂饲料喂养16周制作肥胖大鼠模型.将造模成功的60只大鼠按随机化原则分为:针药组、西药组、模型组.针药组针刺大鼠“后三里”和“中脘”穴,接通电针仪,并灌喂中药石连饮15 g/kg,每日1次,连续治疗14天.每10天测体重、体长并计算LeeS指数.放射免疫法检测血浆NPY、血清瘦素含量;免疫组织化学法检测下丘脑瘦素受体表达.结果:与模型组比较,针药组血清瘦素含量降低(P<0.01),下丘脑瘦素受体表达增加(P<0.01);针药组血清NPY含量和下丘脑NPY基因表达比模型组降低(P<0.01).结论:肥胖大鼠NPY含量及其基因表达的改善是针药并用减肥的作用机制之一.针药并用对肥胖机体下丘脑和血清中lePtin良性调节作用是改善瘦素抵抗以及调节异常内分泌代谢的作用机制之一.【总页数】3页(P71-73)【作者】韩海荣;刘德全【作者单位】济宁医学院,山东济宁272067;徐州医学院,江苏徐州235100【正文语种】中文【中图分类】R246.1【相关文献】1.针刺对单纯性肥胖大鼠血清瘦素含量和下丘脑瘦素受体表达的影响 [J], 杨春壮;马英;徐永良;王羽;王莹;张大伟2.体针与电针对实验性肥胖大鼠血清和下丘脑NPY的影响 [J], 孙立虹;李文丽;肖红玲;赵志国;吴中秋;张书义;梁玉磊;马红利;葛建军3.针药并用对单纯性肥胖大鼠瘦素含量及瘦素受体表达的影响 [J], 韩海荣4.针刺对单纯性肥胖大鼠血清NPY含量和下丘脑NPY表达的影响 [J], 杨春壮;郭艳芹;腾诚毅;刘长发;马英;徐永良;王羽;赵微5.低频电针对雌雄两性肥胖大鼠血清和下丘脑NPY的影响 [J], 吴中秋;孙立虹;梁玉磊;张书义;肖红玲;孙东云;李文丽;李新华;马红利因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
下丘脑背内侧核神经肽Y表达缺失对肥胖导致的胰岛素抵抗的影响研究背景目前,肥胖的发病率越来越高,己经成为世界范围内的公共卫生问题。
肥胖在病理学上主要表现为脂肪变性,即脂肪细胞的增多和体积的增大,而且与2型糖尿病、心脑血管疾病、高血压、骨质疏松等代谢性综合征的发生密切相关,甚至其炎症因子的副效应使自身免疫性疾病进一步恶化。
追根溯源,胰岛素抵抗是这些代谢综合征的根本原因,传统的观念认为肌肉、脂肪和肝脏是胰岛素作用的经典靶点。
但有证据表明在下丘脑-脂肪组织间存在相互联系的神经、激素信号通路,成为干预肥胖发生、发展以及胰岛素作用的潜在靶点。
下丘脑含有多种脑肠肽及脂肪因子受体,是保证摄食和能量平衡的重要部位。
NPY是中枢最丰富的神经介质之一,其神经元主要分布在弓状核及背内侧核,是重要的促食欲信号。
研究表明,下丘脑的神经肽Y过表达可以造成大鼠肥胖表型,而低表达则促进能量代谢,有助于减轻体重和维持机体血糖稳态,促使白色脂肪向棕色脂肪转化,阻止代谢性疾病的发生发展。
在胰岛素作用的外周组织,胰岛素通过PI3K/Akt和MAPK/Erk两条途径来调节机体能量平衡和血糖稳态。
在中枢系统,胰岛素通过上调IRS-PI3K/Akt促进Foxo-1的磷酸化,使下丘脑内ARC内的Ag RP和NPY(促食欲肽)分泌减少,同时增加POMC(抑食欲肽)的分泌,从而达到摄食减少、体重减轻。
有研究指出NPY表达缺失能够改善胰岛素抵抗,那么NPY是否通过PI3K/Akt来改善胰岛素抵抗,值得我们研究。
同时有实验表明,NPY主要通过Y1、Y5受体调节机体能量稳态,而Y5受体更是在组织代谢方面较Y1受体表现了更强的控制能力,那么,神经肽Y表达缺失是否通过Y5受体改善胰岛素抵抗,以上问题值得进一步研究。
目的通过体构建神经肽Y(NPY)表达缺失的大鼠模型,观察是否通过PI3K/Akt/GSK-3β改善脂肪组织的胰岛素抵抗。
同时观察NPY表达缺失对3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖消耗和摄取的影响,并进一步探讨Y5受体激动剂(S-2367)及抑制剂(L-152,804)是否参与的脂肪细胞代谢紊乱的机制。
营养性肥胖大鼠的脂代谢紊乱与下丘脑中增食欲素A的表达分析赵玉红;吴丽霞;关心;王伟;赵玉岩【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2011(027)005【摘要】目的:研究营养性肥胖大鼠下丘脑中增食欲素(orexin A)表达与脂代谢紊乱的规律.方法:高脂饮食诱导并评估营养性肥胖大鼠动物模型;采用化学发光免疫分析法和生化酶法测定大鼠血清胰岛素(Ins)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC);应用实时定量PCR检测下丘脑组织中orexin A mRNA的表达规律.结果:大鼠高脂膳食饲养8周后,营养性肥胖大鼠的体重、体脂含量和Lee′s指数均高于对照组,血清Ins 增加约50%,TG和TC分别增加约94%和43%(P<0.05);营养性肥胖大鼠下丘脑中orexin A的mRNA表达减少约57 % (P<0.05),且orexin A的表达量与Lee′s指数、Ins、TG、TC呈显著负相关,相关系数分别为r=-0.798 (P<0.05)、r=-0.868(P<0.05)、r=-0.981(P<0.05)和r=-0.815(P<0.05).结论:在大鼠高脂膳食诱导的营养性肥胖过程中,下丘脑orexin A的低表达和脂代谢紊乱均与营养性肥胖的发生密切相关.【总页数】3页(P1000-1002)【作者】赵玉红;吴丽霞;关心;王伟;赵玉岩【作者单位】沈阳医学院沈洲医院检验科,辽宁,沈阳,110002;沈阳医学院沈洲医院检验科,辽宁,沈阳,110002;沈阳医学院沈洲医院检验科,辽宁,沈阳,110002;沈阳医学院沈洲医院检验科,辽宁,沈阳,110002;中国医科大学附属第一医院内分泌科,辽宁,沈阳,110001【正文语种】中文【中图分类】R459.52【相关文献】1.肥胖大鼠下丘脑前增食欲素原表达降低 [J], 廖丽萍;陈洲;刘晓红;刘礼斌2.盐酸西布曲明对高脂肥胖大鼠下丘脑增食欲素系统的影响 [J], 陈洲;廖丽萍;刘礼斌3.胰岛素抵抗肥胖大鼠体内增食欲素A与丝氨酸蛋白酶抑制剂及脂代谢的相关性研究 [J], 马丽娜;赵玉岩;常晓岑4.增食欲素受体1在营养性肥胖大鼠肾上腺皮质中的表达及意义 [J], 王露;赵玉岩;马冬杰;田雷;郑德禄;杜瑞伶5.下丘脑中增食欲素在大鼠急性低血糖应激中的表达研究 [J], 赵玉岩;郭磊;都健;刘国良因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
下丘脑背内侧核神经肽Y表达缺失对大鼠脂肪组织脂代谢的影
响研究
研究背景肥胖及肥胖相关性疾病严重威胁着人类健康,已成为全世界亟待解决的课题。
人类和哺乳动物体内,白色脂肪组织(white adipose tissue,WAT)主要司储存能量,棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)增强非战栗性产热、增加胰岛素敏感性,改善胰岛素抵抗。
成年啮齿类动物体内肩胛间区存在棕色脂肪组织,而腹股沟区、附睾、内脏脂肪组织则为白色脂肪组织。
在一定干预条件下,白色脂肪组织可以发生棕色样改变。
PR结构域家族的第16个成员PRDM16(PRD1-BF1-RIZ1 homologous domain containing 16)是BAT中高表达的一种转录调节因子,在棕色脂肪细胞分化过程中起正向调节作用,参与诱导细胞线粒体数量增多和功能增强,增强线粒体氧化磷酸化,加速能量消耗和热量生成。
Ⅱ型脱碘酶(TypeⅡiodothyronine deiodinase,Dio-2)是棕色脂肪组织的分子标志之一,在棕色脂肪细胞可通过与解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)的基因特异位点结合启动转录,促进能量代谢。
下丘脑在维持能量稳态中发挥重要作用。
神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)是一种重要的促食欲肽,对摄食的调节多依赖于下丘脑中的NPY神经元,在下丘脑,NPY存在于弓状核、背内侧核等区域,以弓状核含量最丰富。
研究显示,特异性敲除高脂饮食诱导的肥胖大鼠下丘脑弓状核NPY基因可改善肥胖大鼠的能量代谢。
成纤维细胞生长因子-21(fibroblast growth
factor-21,FGF21)可表达于肝脏、脂肪组织和胰腺等器官和组织(啮齿类动物),
通过形成FGF21/b-Klotho/FGFR复合体发挥多种生物学效应,改善糖脂代谢。
FGF21经交感神经系统诱导WAT中出现米色或棕色脂肪细胞。
而下丘脑背内侧核神经肽Y表达缺失与脂肪组织内脂代谢相关基因的表达水平(如PRDM16、Dio-2、FGF21)的关系,尚未见明确报道。
目的建立下丘脑背内侧核神经肽Y表达缺失的大鼠动物模型,并给予高脂饮食干预,探讨大鼠的体重改变和脂肪组织脂代谢相关基因PRDM16、Dio-2和FGF21表达变化。
实验方法建立动物模型:4-5周龄雄性清洁级SD大鼠80只,其中体重为270-300g的大鼠20只,体重为130-150g的大鼠60只。
适应性喂养1周后,构建腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的带有荧光标记的RNAi(RNA interference)重组转运体(AAVsh NPY及AAVsh CTL),病毒滴度为1×109particles/site。
其中AAVsh NPY导致表达缺失,AAVsh CTL 是作为对照的空载体。
用270-300g的大鼠验证建模是否成功,根据Paxinos和Watson大鼠脑图谱定位DMH的位置。
随机选取15只分别接受双侧DMH的AAVsh NPY注射,并在注射病毒的1、2和4周后(每周随机选取5只)处死,再随机选取5只分别接受双侧DMH的AAVsh CTL注射,注射4周后处死。
处死后迅速取下丘脑,一部分置于液氮中保存,制作冰冻切片观察转染位置,一部分制作石蜡切片应用荧光原位杂交技术检测DMH NPY m RNA的表达,确定病毒重组体能够敲除DMH NPY即建模成功;将余60只大鼠随机均分为两组,根据Paxinos和Watson大鼠脑图谱定位DMH的位置。
上述两组分别接受双侧DMH的AAVsh NPY(AAVsh NPY组)及AAVsh CTL空载体(AAVsh CTL组)注射,完成动物模型的建立。
每周1次于固定时间对各组大鼠进行称重并记录。
实验1~4周所有大鼠给予常规饮食(regular chow,RC),第5周再从AAVsh NPY组及AAVsh CTL组各自随机选取一半大鼠给予高脂饮食(high fat diet,HF),其余大鼠仍给予常规饮食,此时所有大鼠被分为AAVsh NPY HF组、AAVsh NPY RC组、AAVsh CTL HF组、AAVsh CTL RC组。
注射病毒16周后处死大鼠,采集腹股沟区和附睾脂肪组织,液氮保存。
实时荧光定量PCR(Real time PCR)法测定大鼠腹股沟区和附睾脂肪组织FGF21m RNA、PRDM16m RNA、Dio-2 m RNA的表达。
蛋白质印迹法(Western blot,WB)测定大鼠腹股沟区和附睾脂肪组织中PRDM16蛋白表达水平。
结果1成功建立下丘脑背内侧核NPY表达缺失的动物模型携带红色荧光的病毒成功注入下丘脑背内侧核,注射后,AAVsh NPY组的NPY m RNA表达水平低于AAVsh CTL组,分别将注射1、2、4周后AAVsh NPY组与AAVsh CTL组比较,均有显著差异(P(27)0.05)。
2大鼠体重增加量第5周添加高脂饮食前AAVsh NPY组与AAVsh CTL组比较,有显著差异(P(27)0.05),提示DMH NPY缺失已开始导致体重增速减缓;第16周末:与常规饮食组大鼠相比,高脂饮食组大鼠体重增加显著,差异有统计学意义
(P(27)0.01),提示高脂饮食诱导大鼠体重增长迅速;与AAVsh CTL组相比,AAVsh NPY组体重增长量明显较低,有显著差异(P(27)0.01),提示DMH NPY缺失可引起体重增长缓慢。
3实时荧光定量PCR结果腹股沟区和附睾脂肪组织FGF21m RNA 的表达均呈现以下特征:AAVsh CTL组与AAVsh NPY组比较,差异无统计学意义(P(29)0.05),提示DMH NPY敲除对脂肪组织FGF21表达无影响;与RC组相比,HF 组大鼠均呈现低表达,差异有统计学意义(P(27)0.01),提示高脂饮食降低脂肪组
织FGF21的表达。
各组大鼠附睾脂肪组织中PRDM16和Dio-2 m RNA的表达水平均较低,两者的组间两两比较提示差异无统计学意义(P(29)0.05)。
提示DMH NPY表达缺失和高脂饮食对附睾脂肪组织PRDM16、Dio-2 m RNA的表达均无影响。
腹股沟区脂肪组织PRDM16和Dio-2 m RNA的表达一致,如下:与AAVsh CTL 相比,AAVsh NPY组的表达水平显著升高,差异有统计学意义(P(27)0.01),提示DMH NPY敲除引起PRDM16和Dio-2 m RNA高表达;与RC组相比,HF组表达水平下调,差异有统计学意义(P(27)0.01),提示高脂饮食诱导PRDM16和Dio-2 m RNA
表达下降。
4 Western blot结果与AAVsh CTL高脂饮食组相比,AAVsh NPY高脂饮食组腹股沟区脂肪组织PRDM16蛋白高表达,差异有统计学意义(P(27)0.01);与AAVsh CTL常规饮食组相比,AAVsh CTL高脂饮食组腹股沟区脂肪组织PRDM16蛋白低表达,差异有统计学意义(P(27)0.01)。
而附睾脂肪组织中,组间比较,差异无统计学意义(P(29)0.05)。
与RT-PCR
检测结果一致。
结论1.下丘脑背内侧核神经肽Y表达缺失能上调大鼠腹股沟区脂肪组织棕色脂肪相关基因PRDM16和Dio-2的表达,改善脂代谢,缓解高脂饮食诱导的肥胖。
2.高脂饮食可引起大鼠脂肪组织FGF21的表达下调,且敲除下丘脑背内侧核神经肽Y对FGF21的表达无调控作用。