常用荧光染料的激发及发射波长解析

如何选择流式细胞仪测定常用的荧光染料
流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种,我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢？
首先要考虑，他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也不同,选择荧光染料时，必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长做为重点考虑。

发射光波长，如：氩离子气体激光管,它的发射光波488nm；
氦氖离子气体激光管发射光波长633nm；
488nm激光光源常用的荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）；
PE（藻红蛋白）
PI（碘化丙啶）
CY5（化青素）
preCP(叶绿素蛋白)
ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。

激发光和发射光波长，如下：
流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器
流式•细胞仪交流论坛：/forum-181-1.ht ml
荧光染料谱。

常用染料的激发与发射 Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT常用荧光染料的激发和发射波长荧光染料的使用吖啶橙：吖啶橙是最经典的灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光，DNA呈绿色荧光，RNA呈橙红色荧光。

EB:染色DNA和RNA 荧光素双醋酸酯(FDA)：FAD本身无荧光,无极性,可透过完整的原生质膜。

一旦进入原生质体后,由于受到酯酶分解而产生具有荧光的极性物质荧光素。

它不能自由出入原生质膜，因此有活力的细胞能产生荧光,无活力的原生质体不能分解FAD无荧光产生。

5mgFDA溶于1ml丙酮中,避光4℃下贮存,使用时取贮存液加入L甘露醇中.使用时,使最终浓度为%。

荧光染料Ho33342和若丹明123:活细胞双荧光染色观察细胞核和线粒体。

一般的生物染料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后改变了细胞膜的通透性，染料才能进入细胞内。

但有些活体染料能进入活细胞，并对细胞不产生毒性作用。

荧光染料Ho33342和若丹明123都是活体染料。

Ho33342能与细胞中DNA进行特异的结合，若丹明123能与线粒体进行特异的结合。

采用两种荧光染料的混合染液可对一个活细胞的核和线粒体同时染色。

荧光组化实验中应注意的几个问题：1．每种荧光染料，均有自己的最适PH值，此时荧光最强。

当pH改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长将有所改变，因此荧光检测时要在一定的PH值的缓冲液中进行。

2．一放荧光染色在20℃以下时荧光比较稳定，温度升高常出现温度猝灭。

3．在荧光观察中，常因激发光的增强而使样品荧光很快衰竭，造成观察和照相困难。

为此最好用能量小的长波长光进行观察，需照相时再适当增强激发光。

4．一般荧光染液的浓度在万分之一以下，甚至亿万分之一，也能使标本着色。

在一定的限度内，荧光强度可随荧光素的浓度增加而增强，但超过限度，荧光强度反而下降，这是由于荧光分子间的缔合而使自身荧光猝灭所致。

常用荧光染料的激发和发射波长备注：发射波长的颜色及频率荧光染料的使用吖啶橙：吖啶橙是最经典的灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光，DNA呈绿色荧光，RNA呈橙红色荧光。

EB:染色DNA和RNA 荧光素双醋酸酯(FDA)：FAD本身无荧光,无极性,可透过完整的原生质膜。

一旦进入原生质体后,由于受到酯酶分解而产生具有荧光的极性物质荧光素。

它不能自由出入原生质膜，因此有活力的细胞能产生荧光,无活力的原生质体不能分解FAD无荧光产生。

5mgFDA溶于1ml丙酮中,避光4℃下贮存,使用时取贮存液加入L甘露醇中.使用时,使最终浓度为%。

荧光染料Ho33342和若丹明123:活细胞双荧光染色观察细胞核和线粒体。

一般的生物染料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后改变了细胞膜的通透性，染料才能进入细胞内。

但有些活体染料能进入活细胞，并对细胞不产生毒性作用。

荧光染料Ho33342和若丹明123都是活体染料。

Ho33342能与细胞中DNA进行特异的结合，若丹明123能与线粒体进行特异的结合。

采用两种荧光染料的混合染液可对一个活细胞的核和线粒体同时染色。

荧光组化实验中应注意的几个问题：1．每种荧光染料，均有自己的最适PH值，此时荧光最强。

当pH改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长将有所改变，因此荧光检测时要在一定的PH值的缓冲液中进行。

2．一放荧光染色在20℃以下时荧光比较稳定，温度升高常出现温度猝灭。

3．在荧光观察中，常因激发光的增强而使样品荧光很快衰竭，造成观察和照相困难。

为此最好用能量小的长波长光进行观察，需照相时再适当增强激发光。

4．一般荧光染液的浓度在万分之一以下，甚至亿万分之一，也能使标本着色。

在一定的限度内，荧光强度可随荧光素的浓度增加而增强，但超过限度，荧光强度反而下降，这是由于荧光分子间的缔合而使自身荧光猝灭所致。

荧光染料激发波长和发射波长荧光染料激发波长和发射波长荧光染料是一种广泛应用于科学研究和工业领域的物质。

通过受到特定波长光的激发，荧光染料可以发射出具有特定颜色的荧光，并被广泛用于生物医学成像、材料科学、独特效果的光学标记等领域。

在使用荧光染料之前，了解荧光染料的激发波长和发射波长非常重要。

本文将介绍荧光染料激发波长和发射波长的相关知识，并探讨其在生物医学领域的应用。

1. 什么是荧光染料的激发波长和发射波长？荧光染料的激发波长指的是激发荧光染料所需要的波长范围。

每种荧光染料都有其对应的激发波长范围，只有在这个波长范围内的光线照射到荧光染料上才能激发其发光性质。

而荧光染料的发射波长则是指荧光染料在受到激发后所发射出的荧光的波长范围。

荧光染料的激发波长和发射波长往往存在一定的关联性，但并不总是一致的。

2. 为什么了解荧光染料的激发波长和发射波长很重要？了解荧光染料的激发波长和发射波长对于正确选择和使用荧光染料至关重要。

如果不了解荧光染料的激发波长，我们可能会选择错误的激发光源，导致荧光染料无法被激发，从而无法得到准确的实验结果。

同样地，如果不了解荧光染料的发射波长，我们也无法选择合适的检测方法来观察荧光染料发射的荧光。

深入了解荧光染料的激发波长和发射波长可以帮助我们更好地设计和进行实验。

3. 荧光染料激发波长和发射波长的应用荧光染料的激发波长和发射波长在生物医学领域有着广泛的应用。

在生物荧光成像中，选择适合的激发波长可以准确地观察细胞或组织中的特定分子，从而实现对疾病发展或生物过程的研究。

荧光染料的发射波长还可以与其他分子或材料的发射波长相互配合，实现多种荧光信号的同时检测，从而提高实验的灵敏度和准确性。

4. 个人观点和总结荧光染料的激发波长和发射波长是我们在科学研究和实验中必须要考虑的重要因素。

通过了解激发波长和发射波长，我们可以选择合适的实验条件，确保荧光染料可以被有效地激发和检测，并获得准确的实验结果。

CY3.5标记的激发波长和发射波长是细胞荧光染料领域中的重要参数。

在细胞和分子生物学研究中，荧光染料被广泛应用于细胞成像、蛋白质检测、细胞追踪等领域。

CY3.5作为一种常用的荧光染料，其激发波长和发射波长的选择对于实验结果的准确性和可靠性具有重要意义。

1. CY3.5激发波长CY3.5的激发波长一般在550-570nm范围内。

在进行细胞成像或蛋白质检测实验时，我们需要选择适合的激发波长来激发CY3.5荧光染料。

激发波长的选择应考虑到激发效率和对样品的影响。

在实际操作中，我们可以通过激光共聚焦显微镜等设备来选择合适的激发波长，以确保CY3.5荧光的最大激发效果。

还需要注意避免激发波长对细胞和样品产生的热伤害，保证实验结果的准确性。

2. CY3.5发射波长CY3.5的发射波长一般在570-590nm范围内。

选择适当的发射波长可以有效提取荧光信号，从而获得清晰的细胞成像或蛋白质定位结果。

在实验设计中，我们需要根据实际情况选择合适的检测设备和滤光片，以确保有效捕获CY3.5的发射信号。

3. CY3.5激发波长和发射波长的选择意义CY3.5荧光染料作为一种重要的细胞标记物，其激发波长和发射波长的选择直接影响了实验结果的精准度和可靠性。

合理选择激发波长和发射波长可以最大程度地提高CY3.5荧光信号的强度和稳定性，为细胞成像和蛋白质检测提供可靠的数据支持。

个人观点和理解在进行生物荧光实验时，合理选择CY3.5的激发波长和发射波长是非常重要的。

这不仅关系到实验结果的准确性，也关系到对细胞和样品的保护。

对于CY3.5激发波长和发射波长的选择，我们需要深入了解其光学特性和实验条件，以确保实验结果的可靠性。

总结回顾通过本文的介绍，我们了解到CY3.5荧光染料的激发波长和发射波长选择对于生物荧光实验具有重要意义。

合理选择激发波长和发射波长可以有效提高荧光信号的稳定性和强度，从而获得清晰可靠的实验结果。

在进行类似实验时，我们应该注意选择合适的光学设备和滤光片，以确保CY3.5荧光信号的最佳表现。

常用染料的激发与发射公司内部编号：（GOOD-TMMT-MMUT-UUPTY-UUYY-DTTI-常用荧光染料的激发和发射波长荧光染料的使用吖啶橙：吖啶橙是最经典的灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光，DNA呈绿色荧光，RNA呈橙红色荧光。

EB:染色DNA和RNA荧光素双醋酸酯(FDA)：FAD本身无荧光,无极性,可透过完整的原生质膜。

一旦进入原生质体后,由于受到酯酶分解而产生具有荧光的极性物质荧光素。

它不能自由出入原生质膜，因此有活力的细胞能产生荧光,无活力的原生质体不能分解FAD无荧光产生。

5mgFDA溶于1ml丙酮中,避光4℃下贮存,使用时取贮存液加入L 甘露醇中.使用时,使最终浓度为%。

荧光染料Ho33342和若丹明123:活细胞双荧光染色观察细胞核和线粒体。

一般的生物染料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后改变了细胞膜的通透性，染料才能进入细胞内。

但有些活体染料能进入活细胞，并对细胞不产生毒性作用。

荧光染料Ho33342和若丹明123都是活体染料。

Ho33342能与细胞中DNA进行特异的结合，若丹明123能与线粒体进行特异的结合。

采用两种荧光染料的混合染液可对一个活细胞的核和线粒体同时染色。

荧光组化实验中应注意的几个问题：1．每种荧光染料，均有自己的最适PH值，此时荧光最强。

当pH改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长将有所改变，因此荧光检测时要在一定的PH值的缓冲液中进行。

2．一放荧光染色在20℃以下时荧光比较稳定，温度升高常出现温度猝灭。

3．在荧光观察中，常因激发光的增强而使样品荧光很快衰竭，造成观察和照相困难。

为此最好用能量小的长波长光进行观察，需照相时再适当增强激发光。

4．一般荧光染液的浓度在万分之一以下，甚至亿万分之一，也能使标本着色。

在一定的限度内，荧光强度可随荧光素的浓度增加而增强，但超过限度，荧光强度反而下降，这是由于荧光分子间的缔合而使自身荧光猝灭所致。

细胞核常用荧光染料有：吖啶橙（Acridine Orange，AO）、溴化乙锭（Ethidium Bromide，EB）和碘化丙啶（Propidium Iodide，PI），DAPI、Hoechst染料、EthD III、7-AAD、RedDot1、2 等等。

透膜的染料如下：AO：具有膜通透性，能透过细胞膜，将核DNA和RNA分别染成绿色和红色，因此使细胞核呈绿色或黄绿色荧光。

EB：一种高度灵敏的荧光染色剂，在标准302nm处激发出橙红色信号。

DAPI：蓝色一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，其与DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，而与单链DNA结合无荧光的增强。

DAPI对双链DNA的染色灵敏度要高于EB和PI，荧光强度比Hoechst低，但光稳定性高于Hoechst。

Hoechst染料：蓝色一类在显微观察中标记DNA的荧光染料，最常见的两种是Hoechst33342和Hoechst33258。

这两种染料都在紫外350nm处被激发，在461nm处最大发射光附近发射青/蓝色荧光。

与DAPI相比，Hoechst33342加有乙基，具有更强的亲脂性，因此能更好的透过完整的细胞膜，并且细胞毒性更小。

RedDot 1染料：红色，超强的细胞核选择性，其光谱相似于Draq?5 和Draq?7。

RedDot?染料可被几种常见的激光激发并可在远红外区激发荧光。

RedDot? 的红色近红外荧光有效的与其他常用荧光探针区分开来。

不透膜的染料，如下：PI：不同通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。

PI作为红色荧光复染剂首选，PI经常与Calcein-AM或者FDA等荧光探针合用，区分死/活细胞。

EthD III、7-AAD、RedDot 2：不能透过细胞膜，但能将坏死细胞区分开来；更适合凋亡坏死实验的检测；细胞核荧光染料（PI DAPI Hoechst33342）细胞核荧光染料PI碘化丙啶（简称PI）是一种常用的细胞核荧光染色剂。

常用抗体标记荧光染料的特性及其应用1、FITC：激发波长488nm，最大发射波长525nm。

1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；2）在流式细胞仪的FL1通道检测；3）可用于荧光显微镜技术4）荧光强度易受PH值影响，PH值降低时其荧光强度减弱。

2、Alexa Fluor 488：激发波长488nm，最大发射波长519nm。

1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；2）在流式细胞仪的FL1通道检测；3）具有超乎寻常的光稳定性，非常适用于荧光显微镜技术；4）在较宽的PH值范围内保持稳定（PH4～10）。

3、Cy3：激发波长488nm，最大发射波长570nm。

1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；2）在流式细胞仪的FL2通道检测；3）适用于荧光显微镜技术；4）为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于PE。

4、Cy5：激发波长633/635nm，最大发射波长670nm。

1）其标记的抗体适用于所有配备633nm氩离子激光器的流式细胞仪；2）在流式细胞仪的FL4通道检测；3）适用于荧光显微镜技术；4）同样为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于APC。

5）与单核和粒细胞非特异性结合多，易出现假阳性结果。

5、PE：激发波长488nm，最大发射波长575nm。

1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；2）在流式细胞仪的FL2通道检测；3）其荧光泯灭性强，不适用于传统的荧光显微镜技术，但适用于激光共聚焦显微镜技术。

6、PE-TR：激发波长488nm，最大发射波长615nm。

1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL3通道检测；2）可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。

7、PE-Alexa Fluor 610：激发波长488nm，最大发射波长628nm。

荧光素钠的激发波长和发射波长1. 介绍荧光素钠（Sodium fluorescein）是一种常见的荧光染料，广泛应用于生物医学、化学分析和药物研究等领域。

它具有明亮的黄绿色荧光，在激发后能够发射特定的波长。

本文将详细介绍荧光素钠的激发波长和发射波长，帮助读者更好地理解和应用该荧光染料。

2. 荧光素钠的结构荧光素钠是由苯酚环与二苯酮环通过螺旋桥连接而成的复杂有机分子。

它的分子式为C20H10Na2O5，相对分子质量为376.27。

在溶液中，荧光素钠离解为带负电荷的离子形式。

3. 激发波长荧光素钠在可见光区域有较高的吸收度，其最大吸收峰位于约460 nm处。

这意味着在激发荧光素钠时，最好选择波长为460 nm的光源。

这个波长通常被称为荧光素钠的激发波长。

荧光素钠的吸收峰位于蓝色光区域，这是由于其分子结构中存在共轭系统，使得它能够吸收较短波长的光线。

当荧光素钠分子吸收到激发波长的光线后，电子从基态跃迁到激发态，形成激发态的荧光素钠。

4. 发射波长荧光素钠在激发后会发射特定的波长，这个波长通常被称为荧光素钠的发射波长。

荧光素钠的发射波长位于黄绿色区域，最大峰值位于约520 nm处。

当荧光素钠分子从激发态退回到基态时，会释放出能量，并以特定的频率（对应特定的波长）发出黄绿色荧光。

这种发射现象是由于电子在退回过程中释放出能量，并通过辐射转化为可见光。

5. 影响荧光素钠激发和发射的因素5.1 溶液酸碱度荧光素钠的激发和发射受到溶液酸碱度的影响。

在弱酸性或中性条件下，荧光素钠的激发和发射效果较好。

而在强酸性或强碱性条件下，荧光素钠的荧光效果会受到抑制。

5.2 溶液浓度荧光素钠的激发和发射效果也与其溶液浓度有关。

适当调整荧光素钠的浓度可以提高其激发和发射效率。

过高或过低的浓度都可能导致荧光强度减弱。

5.3 温度温度对荧光素钠的激发和发射也有一定影响。

通常情况下，较低的温度有助于增加荧光强度，而较高的温度则可能导致荧光降低。

常用荧光染料的激发和发射波长荧光染料广泛应用于生物医学、材料科学、光电子学等领域，其特点是在受到激发后会发出可见光，具有较高的荧光量子产率和灵敏度。

在实际应用中，荧光染料的激发和发射波长显得尤为重要，因此本文将整理常用荧光染料的激发和发射波长，方便读者在实验或研究中的选择。

常用荧光染料1. FITC （荧光同型素-异硫氰酸酯）FITC是一种广泛应用于生物学实验的荧光染料，常用于标记蛋白质、抗体、药物等分子，其最大吸收波长和最大发射波长分别为495 nm和519 nm。

FITC的分子量小，荧光量子产率高，这使得它成为一种理想的荧光标记分子。

2. Rhodamine 123Rhodamine 123是一种阳离子荧光染料，可在细胞中标记线粒体，同时也可在许多生物学应用中标定其他细胞器。

Rhodamine 123的最大吸收波长和最大发射波长分别为507 nm和529 nm，其荧光量子产率高，荧光亮度高。

3. Texas RedTexas Red是一种常用的激发波长长达596 nm的荧光染料，在荧光共振能量转移等实验中被广泛应用。

Texas Red的最大发射波长在610 nm左右，其在荧光共振能量转移实验中能够提供强烈的荧光标记。

4. PE （腺苷酸酰基酯）PE是一种被广泛用于流式细胞仪实验中的荧光染料，其最大激发波长为488 nm，最大发射波长在575 nm左右。

PE作为一种非常亮的荧光染料，可用于标记和鉴定特定类型的细胞。

荧光染料的选择在实验或研究中，需要根据具体的情况选择合适的荧光染料。

对于激发波长和发射波长的选择，一些因素应该被考虑，如：•研究对象的荧光信号贡献；•其他染料的交叉激发和发射波长；•激发和发射波长的设备可用范围。

一般来说，应选择滤光片相对集中并且有较高吸收的荧光染料，以确保设备需要的能量和检测返回信号的量达到最大程度。

总结本文简要介绍了几种常用的荧光染料及其特性，这些荧光染料可以分别从不同角度用于生物学、光学、材料学等领域的研究和实验中。

生物荧光染料波长荧光染料是一种能够吸收特定波长的光并发射出不同波长的光的化合物。

它们在生物科学研究、医学诊断、药物开发等领域中起着重要作用。

本文将介绍几种常见的生物荧光染料及其波长特性。

一、荧光染料的波长定义荧光染料的波长通常由其吸收峰和发射峰决定。

吸收峰是指荧光染料能够吸收的最大波长，而发射峰则是指荧光染料在受到激发后发射的最大波长。

二、常见的荧光染料及其波长特性1. Alexa Fluor 488（波长：495 nm/519 nm）Alexa Fluor 488是一种常用的荧光染料，其吸收峰位于495 nm，发射峰位于519 nm。

它在细胞免疫荧光染色、蛋白质定位研究等方面广泛应用。

2. Cy3（波长：550 nm/570 nm）Cy3是一种红色荧光染料，其吸收峰位于550 nm，发射峰位于570 nm。

它常用于DNA、RNA等核酸的荧光标记，也可用于蛋白质荧光标记。

3. Texas Red（波长：595 nm/615 nm）Texas Red是一种红色荧光染料，其吸收峰位于595 nm，发射峰位于615 nm。

它在细胞荧光染色、分子探针等方面有广泛应用，常用于免疫荧光标记和显微镜观察。

4. FITC（波长：492 nm/520 nm）FITC是一种绿色荧光染料，其吸收峰位于492 nm，发射峰位于520 nm。

它常用于细胞免疫荧光染色、蛋白质标记等研究中。

5. Rhodamine B（波长：554 nm/576 nm）Rhodamine B是一种橙红色荧光染料，其吸收峰位于554 nm，发射峰位于576 nm。

它在细胞荧光染色、荧光显微镜观察等方面有广泛应用。

6. DAPI（波长：358 nm/461 nm）DAPI是一种蓝色荧光染料，其吸收峰位于358 nm，发射峰位于461 nm。

它可用于染色体核型分析、细胞核染色等。

三、荧光染料的应用领域荧光染料在生物科学领域中有着广泛的应用。

它们可以被用于细胞荧光染色、蛋白质定位、基因表达分析、药物荧光标记等方面。

sybr gold是一种常用的荧光染料，广泛应用于生物医学研究、生物工程领域。

sybr gold的激发波长和发射波长对于其在实验中的应用至关重要，下面我们将对sybr gold的激发波长和发射波长进行详细的解读。

一、sybr gold的激发波长1.1 sybr gold是一种DNA染料，其激发波长在约495纳米至505纳米之间。

在这一范围内的光波作用下，sybr gold分子会发生能级跃迁，从而激发出荧光信号。

1.2 由于sybr gold的激发波长较窄，在进行实验时需要选择合适的激发光源，以确保sybr gold能够充分受激发并发出荧光信号。

1.3 实验中常用的激发光源包括紫外光、蓝光等，研究人员可以根据实验需求选择合适的激发光源来激活sybr gold。

1.4 正确的激发波长对于实验结果的准确性和可重复性具有重要意义，因此在进行实验前需要对激发波长进行严格的控制和调节。

二、sybr gold的发射波长2.1 sybr gold的发射波长在约520纳米至530纳米之间，当受到激发光源激发后，sybr gold分子会发出这一范围内的荧光信号。

2.2 发射波长的测定可以通过荧光分光光度计等专业仪器进行，研究人员可以根据实验需求对sybr gold的发射波长进行精确测定。

2.3 sybr gold的发射波长是衡量其荧光强度和稳定性的重要指标，研究人员在选择sybr gold作为实验染料时需要对其发射波长进行充分的了解和考量。

2.4 合理的发射波长选择能够提高实验结果的准确性和可靠性，因此在实验设计中需要充分考虑sybr gold的发射波长及其特性。

三、sybr gold激发波长和发射波长的匹配3.1 sybr gold的激发波长和发射波长的匹配关系直接影响着其在实验中的应用效果，研究人员需要对此进行深入的研究和探讨。

3.2 当激发波长与sybr gold的激发波长匹配良好时，sybr gold分子会受到充分激发并发出较强的荧光信号，从而提高实验结果的灵敏度和准确性。

常用染料的激发与发射 IMB standardization office【IMB 5AB- IMBK 08- IMB 2C】常用荧光染料的激发和发射波长荧光染料的使用吖啶橙：吖啶橙是最经典的灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光，DNA呈绿色荧光，RNA呈橙红色荧光。

EB:染色DNA和RNA荧光素双醋酸酯(FDA)：FAD?本身无荧光,无极性,可透过完整的原生质膜。

一旦进入原生质体后,由于受到酯酶分解而产生具有荧光的极性物质荧光素。

它不能自由出入原生质膜，因此有活力的细胞能产生荧光,无活力的原生质体不能分解FAD无荧光产生。

5mgFDA溶于1ml丙酮中,避光4℃下贮存,使用时取贮存液加入L甘露醇中.使用时,使最终浓度为%。

荧光染料Ho33342和若丹明123:活细胞双荧光染色观察细胞核和线粒体。

一般的生物染料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后改变了细胞膜的通透性，染料才能进入细胞内。

但有些活体染料能进入活细胞，并对细胞不产生毒性作用。

荧光染料Ho33342和若丹明123都是活体染料。

Ho33342能与细胞中DNA进行特异的结合，若丹明123能与线粒体进行特异的结合。

采用两种荧光染料的混合染液可对一个活细胞的核和线粒体同时染色。

荧光组化实验中应注意的几个问题：1．每种荧光染料，均有自己的最适PH值，此时荧光最强。

当pH改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长将有所改变，因此荧光检测时要在一定的PH值的缓冲液中进行。

2．一放荧光染色在20℃以下时荧光比较稳定，温度升高常出现温度猝灭。

3．在荧光观察中，常因激发光的增强而使样品荧光很快衰竭，造成观察和照相困难。

为此最好用能量小的长波长光进行观察，需照相时再适当增强激发光。

4．一般荧光染液的浓度在万分之一以下，甚至亿万分之一，也能使标本着色。

在一定的限度内，荧光强度可随荧光素的浓度增加而增强，但超过限度，荧光强度反而下降，这是由于荧光分子间的缔合而使自身荧光猝灭所致。

三维荧光发射波长和激发波长一、背景介绍三维荧光成像技术是一种将样品置于荧光显微镜下，利用激发光源激发样品中的荧光染料，再通过荧光滤镜将不同波长的荧光信号分离并记录下来的技术。

在该技术中，波长是一个十分重要的参数，其中包括激发波长和发射波长。

二、激发波长1. 概念定义激发波长是指在三维荧光成像中所使用的激发光源的波长。

不同的荧光染料对于不同的激发波长都有其特定的吸收峰值，因此选择合适的激发波长能够使得样品中目标物质吸收最大量的能量。

2. 常见范围常见的三维荧光成像仪器所使用的激发波长范围一般为300nm到800nm之间。

在这个范围内，可以涵盖大部分常用荧光染料所需要的吸收峰值。

3. 选择原则在选择合适的激发波长时需要考虑以下因素：（1）荧光染料的吸收峰值；（2）样品的自发荧光程度；（3）激发光源的功率和稳定性。

三、发射波长1. 概念定义发射波长是指在三维荧光成像中所记录下来的荧光信号的波长。

不同的荧光染料对于不同的发射波长都有其特定的荧光峰值，因此选择合适的发射波长能够使得样品中目标物质发出最大量的荧光信号。

2. 常见范围常见的三维荧光成像仪器所使用的发射波长范围一般为400nm到800nm之间。

在这个范围内，可以涵盖大部分常用荧光染料所需要的荧光峰值。

3. 选择原则在选择合适的发射波长时需要考虑以下因素：（1）荧光染料的荧光峰值；（2）样品背景杂质对于信号检测和分离效果；（3）检测器灵敏度和动态范围。

四、激发波长和发射波长之间关系1. 影响因素激发波长和发射波长之间的关系受到以下因素的影响：（1）荧光染料的吸收和荧光光谱；（2）样品中其他化合物对于荧光信号的干扰程度；（3）仪器检测器的灵敏度和动态范围。

2. 关系解释激发波长和发射波长之间存在着一定的关系。

一般来说，如果选择了合适的激发波长，能够使得样品中目标物质吸收最大量的能量，从而产生最强的荧光信号。

同时，如果选择了合适的发射波长，能够使得样品中目标物质发出最大量的荧光信号，并且减少背景杂质对于信号检测和分离效果的影响。