对羟基苯甲酸酯类混合物的反相高效液相色谱分析

反相高效液相色谱法分离分析酯类混合物实验报告
反相高效液相色谱法（RP-HPLC）是一种常用的酯类混合物的分离和分析方法。

以下是一份可能的酯类混合物分离实验报告：
一、实验目的
通过RP-HPLC方法对酯类混合物进行分离和分析。

二、实验原理
RP-HPLC是一种以氢键为主的静相色谱分离技术，适用于分离极性化合物。

对于酯类混合物的分离，采用C18静相色谱柱，以水和有机溶剂混合的流动相进行梯度洗脱，使不同极性的酯类在不同时间内出峰，从而得到纯净的目标酯类。

三、实验步骤
1. 准备样品
将酯类混合物称取 10 mg，溶解于 10 mL 甲醇中，摇匀并过滤得到样品。

2. 准备流动相
以甲酸为 pH 调节剂，加入适量的乙腈，稀释峰前或峰后的混合物，调节 pH 值，加入少量离子对阴离子等物质作为流动相。

3. 调整实验参数
将前体混合物进样器，选择 RP-HPLC 波长进行检测，调整流速为 1 mL/min，小球填充压力 15000 psi。

4. 进行分离分析
将前体混合物注入色谱柱，进行梯度洗脱，收集样品，测定各组分的峰面积。

四、实验结果
经过 RP-HPLC 的分离和分析，可以得到一组明显的峰，代表不同极性的酯类组分。

根据峰面积计算出各个组分的相对含量，并进行定量分析。

五、实验结论
通过反相高效液相色谱法分离和分析酯类混合物，可以得到纯净的目标酯类，为化学分析和应用提供基础数据和参考参量。

实验四高效液相色谱法检测食品中对羟基苯甲酸酯类苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类是食品中常用的防腐剂，广泛存在于酱油、醋、化妆品中。

对羟基苯甲酸酯类有：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸异丁酯。

它们对食品均有防止腐败的作用，苯甲酸的杀菌、抑菌效力随介质的酸度增高而增强，在碱性介质中则失去杀菌、抑菌效力。

山梨酸是使用最多的防腐剂，也是酸性防腐剂。

对羟基苯甲酸酯类以丁酯的防腐作用最好，由于对羟基苯甲酸酯类都难溶于水，所以通常是将它们先溶于乙酸、乙醇、乙腈等强极性溶液中，然后使用，为更好发挥防腐作用，最好是将两种或两种以上的该酯类混合使用。

虽然在限量范围内食用上述防腐剂对人体影响不大，但若大量摄入，则会危害人体健康。

各国都对食品中可以使用的防腐剂种类和用量有严格的要求，如中国的GB2760《食品添加剂使用卫生标准》明确规定了使用范围和最大使用量。

不同商品中的最大限量：苯甲酸0.2-1g/kg（中），山梨酸0.2-1g/kg（中），甲酯1g/kg（中），乙酯0.1-0.25g/kg（中），丙酯0.012-0.2g/kg（中），丁酯0.25g/kg（日），异丁酯0.25g/kg（日）。

本方法可同时检测食品中上述8种防腐剂。

本实验检测溶液中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯。

一、实验目的和要求1、学习高效液相色谱外标法定量定性分析方法；2、熟悉超高压液相色谱的分析操作规程；3、学习高效液相色谱检测食品中的防腐剂的方法。

二、实验原理在对羟基苯甲酸酯类混合物中含有对羟基苯甲酸酯类，它们都是强极性化合物，可采用高效液相色谱进行分析。

以对羟基苯甲酸酯类标样保留时间定性，采用外标法定量对羟基苯甲酸酯类含量。

X=(A2×C)/A1（为样品中对羟基苯甲酸酯类的含量单位为ug/mL，单位；A1为标样对羟基苯甲酸酯类的峰面积；A2为样品中对羟基苯甲酸酯类峰面积；C为对羟基苯甲酸酯类标准液质量浓度。

食品中对羟基苯甲酸酯类的检测摘要：文章采用超声提取-高效液相色谱法同时测定食品中3种对羟基苯甲酸酯（对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯）含量的方法。

对羟基苯甲酸酯类属于防腐剂，按gb/t5009.31-2003国家推荐方法检测[1]，样品提取比较繁琐、费时，且回收效果欠佳。

本文利用较为常见的紫外检测器通过优化条件，摸索出一个简捷、快速、经济、灵敏，又能保证一定精度的测定方法。

本方法加标回收率在86.08%～112.71%之间，线性系数r>0.9998，检出限可达0.10ug/ml，分析时间短，完全能够满足分析要求，可广泛应用于食品中对羟基苯甲酸酯类检测分析。

关键词：对羟基苯甲酸酯类；高效液相色谱法中图分类号：o657.7+2 文献标识码：a 文章编号：1674-0432（2012）-10-0064-21 实验部分1.1 仪器和试剂1.1.1 仪器 shimadzu lc 10vp plus高效液相色谱系统（日本shimadzu公司），配紫外检测器及lc solution色谱工作站；分析天平：感量0.1mg；氮吹仪：美国organomation n-evap112型；均质机：ikar werke t25型均质机；溶剂过滤装置；0.45μm和0.22μm过滤膜和过滤头；milli-q超纯水机。

1.1.2 试剂甲醇、乙腈为hplc级；乙醇为分析纯；水为超纯水。

标准品：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯，纯度为99.0%，美国进口，购于上海安谱。

1.2 标准溶液的配制[2]标准贮备液：精密称取三种标准物质0.05g，用无水乙醇溶解并定容于50ml容量瓶中，配制成浓度为1mg/ml的标准贮备液，贮于4℃冰箱中备用。

标准使用液：用刻度吸管准确吸取三种标准贮备液，根据需要用无水乙醇配制成不同浓度的标准溶液系列，待用。

1.3 色谱条件色谱柱：diamonsil c18，粒度5μm，4.6mm×250mm（id×l）；检测波长：254nm；流速：1.0ml/min；进样量：20 μl；流动相：水-乙腈（体积比为45：55）；柱温：室温。

食品中对羟基苯甲酸酯类的测定高效液相色谱法1 范围本标准适用于酱油、醋、果酱、糕点、腌制品、果酒及饮料等食品中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯。

本标准检出限：对羟基苯甲酸甲酯：1.8 mg/kg；对羟基苯甲酸乙酯：1.2 mg/kg；对羟基苯甲酸丙酯：0.9 mg/kg；对羟基苯甲酸丁酯：1.3 mg/kg。

2 规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。

3 原理试样用乙醇超声波提取，取上清液过滤，以高效液相色谱法分离，二极管或紫外检测器检测，外标法定量。

4 试剂和材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 甲醇（色谱纯）。

4.2 乙酸铵（分析纯）。

4.3 20 mmol/L乙酸铵溶液：准确称取1.54 g乙酸铵（4.2）用水定容至1000 ml，过0.45μm 滤膜。

4.4 无水乙醇（分析纯）。

4.5 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯：99 %以上。

4.6 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯的标准储备溶液：准确称取对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯各0.050 g于50 mL容量瓶中，用甲醇（4.1）稀释至刻度，该溶液每毫升相当于1 mg的对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯。

4.7 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯的标准工作溶液：将混合标准溶液用甲醇（4.1）依次稀释成1.0 μg/ml、10.0 μg/ml、25.0 μg/ml、50.0 μg/ml、100.0 μg/ml的系列标准溶液，使用前配制。

实验报告课程名称：环境监测实验实验类型：综合实验实验项目名称：对羟基苯甲酸酯类物质的测定--HPLC法、GC---白酒中酒精度的测定实验地点：环资B座实验日期：2018年12月06日一、实验目的和要求1.掌握HPLC的保留值定性方法与归一法定量2.熟悉液相色谱仪的操作过程二、实验内容和原理<对羟基苯甲酸酯类物质的测定--HPLC法>1.高效液相色谱HPLC：高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。

高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。

该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。

高效液相色谱法有“四高一广”的特点：高压、高速、高效、高灵敏度、应用范围广。

其组成包含“高压输液泵”、“色谱柱”、“进样器”、“检测器”、“馏分收集器”以及“数据获取与处理系统”等部分。

2.测定原理：在一定的实验条件下，组分的保留值保持恒定，测得的来知物的各纽分保留时间，与已知纯物质各组分的保留时间进行对照，即可确定未知物中各纽分存在与否。

这种利用纯物质对照进行定性的方法，适用于来源已知。

且组分简单的混合物。

3.归一法定量：要求试样中的各个组分都能得到完全分离。

并且在色谱图上应都能出峰，计算公式:c1=fiAi/ΣfiAi*100。

因为对羟基苯甲酸酯类属于同系物，它们在紫外光度检测器上具有相同的校正因子，故上式可简化为: c1=Ai/ΣAi*100< GC---白酒中酒精度的测定 >1. 气相色谱：气相色谱（gas chromatography 简称GC）是指用气体作为流动相的色谱法。

对羟基苯甲酸酯类混合物的液相色谱分析液相色谱分析是一种常用的分离和定量化合物的方法。

在对羟基苯甲酸酯类混合物进行液相色谱分析时，需要选择合适的色谱柱、流动相和检测方法，以实现有效的分离和定量。

首先，选择合适的色谱柱非常重要。

对于羟基苯甲酸酯类混合物的分析，可以选择反相色谱柱。

反相色谱柱具有较好的选择性和分离能力，可以有效分离羟基苯甲酸酯类化合物。

在选择色谱柱时，需要考虑样品的性质、分析目标以及分离需求。

其次，选择合适的流动相也非常重要。

在反相色谱中，流动相通常是由有机溶剂和水组成的混合物。

不同的羟基苯甲酸酯类化合物对流动相的溶解度和解离常数有所不同，因此需要根据样品的特性来选择合适的流动相。

通常情况下，可以通过尝试不同比例的有机溶剂和水来找到合适的流动相条件。

同时，还可以探索其他添加剂如缓冲剂、pH调节剂来改善分离效果。

在液相色谱分析中，还需要选择合适的检测方法。

对羟基苯甲酸酯类混合物的定量分析，常用的检测方法包括UV-Vis吸收检测、荧光检测和电化学检测等。

UV-Vis吸收检测是最常用的检测方法之一，可以通过样品对紫外或可见光的吸收来定量分析。

荧光检测可以增强灵敏度，适用于分析浓度较低的样品。

电化学检测可以通过电化学信号（如电流、电势）来定量分析。

在进行液相色谱分析时，还需要优化一些实验条件来提高分离和定量的准确性和重复性。

例如，需要确定合适的进样量、流速和柱温等实验参数。

还可以采用梯度洗脱方法来进一步改善分离效果。

最后，在分析结束后，对数据进行处理和解释也是非常重要的。

可以使用标准曲线法来定量分析得到的色谱峰，通过峰面积或高度与标准品的浓度进行线性拟合，计算出样品中羟基苯甲酸酯类化合物的含量。

同时，还可以采用质谱联用技术对色谱峰进行鉴定和确认。

总之，对羟基苯甲酸酯类混合物的液相色谱分析需要选择合适的色谱柱、流动相和检测方法，并进行实验参数的优化和数据处理，以获得准确的分离和定量结果。

这些方法可以用于不同范围内的样品检测，如医药、环境和食品等领域的分析研究中。

仪器分析实验讲义实验项目一、醇类混合物的气相色谱分析 (2)二、液相色谱仪的基本操作及对物质的分离、定性鉴定--对羟基苯甲酸酯类混合物的反相高效液相色谱分析... (5)三、酊剂中乙醇含量的气相色谱测定(已知浓度样品对照法) (7)四、乙酸的电位滴定分析及其解离常数的测定.............. . (9)五、氯离子选择性电极测定水中氯含量.............. (11)六、鉴定和识别有机化合物中的电子跃迁类型 (14)七、紫外-可见光谱法测定苯甲酸钠含量.............. .. (19)八、火焰原子吸收光谱法测定自来水中钙、镁的含量.............. . (21)醇类混合物的气相色谱分析一、实验目的（1）了解气相色谱仪的结构、各组成部分的作用及相互关系。

（2）熟悉仪器的一般使用方法，巩固色谱分析实验技术。

（3）了解定性鉴定的依据和方法的原理及方法；（4）熟练掌握微量进样器进样技术。

二、实验原理1、气相色谱仪流程（见下图）：图1 气相色谱仪流程图各种物质在一定的色谱条件(固定相与操作条件等)下有各自确定的保留值，因此保留值在色谱分析中可作为一种定性指标。

对于较简单的多组分混合物，若其中所有待测组分均为已知且它们的色谱峰均能分开，则可将混合物图谱中各个色谱峰的保留值与各相应的标准试样在同一条件下所得的保留值进行对照比较，就能确定各色谱峰所代表的物质，这就是纯物质对照法定性的原理。

该法是色谱分析中最常用的一种定性方法。

本实验即采用纯物质对照法对有机混合物中各组分进行定性鉴定。

三、仪器与试剂1.仪器天美GC-7900气相色谱仪（FID氢火焰离子化检测器）；氢气、空气发生器；氮气瓶，微量进样器(1µL)。

2.试剂甲醇、正丙醇均为分析纯；混和醇样四、仪器操作条件色谱柱：10%PEG-20M填充柱，3m(L)×4mm(OD)×3mm(ID)；进样量：1µL；柱温：140ºC；气化室温度：150ºC ；检测器：FID；检测器温度：200ºC；五、实验步骤1．启动计算机，打开色谱仪主机及空气、氮气发生器开关，打开载气输出压力为0.5Mpa，启动软件，根据分析要求设置柱箱、汽化室和检测器的工作温度。

对羟基苯甲酸酯类混合物的液相色谱分析液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种广泛应用于化学、生命科学以及环境监测等领域的分离和分析技术。

对羟基苯甲酸酯类混合物的液相色谱分析，主要应用高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）进行分离和定量。

高效液相色谱是一种常见的液相色谱方法，通过应用高压将溶液推入柱中进行分离。

在对羟基苯甲酸酯类混合物进行液相色谱分析时，以下是一个可能的实验步骤：1.样品制备：将待分析的羟基苯甲酸酯类混合物溶解在合适的溶剂中，并进行必要的稀释。

2.色谱柱选择：选择适合分离目标化合物的色谱柱。

在HPLC中常用的色谱柱有反相柱、离子交换柱和正相柱等。

3.流动相制备：根据实际需要选择合适的流动相组分。

常用的流动相包括纯有机溶剂、水和其它缓冲液等。

4.色谱条件设置：设置合适的色谱条件，包括流速、柱温和检测器波长等。

这些条件通常需要根据待分析化合物的特性和色谱柱的要求进行优化。

5.样品进样：将样品加入自动进样器中，设定进样量并进行进样。

6.色谱分离：开启色谱仪，控制流速和柱温等条件，进行色谱分离。

在此过程中，目标化合物会在柱中与流动相发生相互作用，并在柱中保留一定的时间。

7.检测和定量：通过连接的检测器获得色谱图谱，并根据峰面积或峰高测定目标化合物的浓度。

选择合适的检测器可以根据化合物的性质来确定，常见的检测器包括紫外可见光检测器、荧光检测器和质谱检测器。

8.数据处理：利用色谱软件对得到的数据进行处理分析，生成峰面积、峰高、保留时间等结果。

需要注意的是，在实际的液相色谱分析中，可能需要对不同的样品进行前处理或者使用不同的溶剂体系进行优化。

同时，还需要注意校准曲线的制备和样品浓度的合理选择，以保证分析结果的准确性和可靠性。

总结起来，液相色谱是一种重要的分离和分析技术，对于对羟基苯甲酸酯类混合物的分析有着广泛的应用。