浅述酶底物法快速测定地表水中总大肠菌群与大肠埃希氏菌

一、填空题1．采用固定底物技术酶底物法定性测定总大肠菌群和大肠埃希氏菌(粪大肠菌群)时，需要取 ml水样，在±℃培养 h。

①②答案：100 36 1 242．采用固定底物技术酶底物法定性测定总大肠菌群，水样加入培养基后经过适当温度及时间培养后，呈现色为阳性。

①答案：黄3．采用固定底物技术酶底物法定性测定大肠埃希氏菌，水样加入培养基后经过适当温度及时间培养后，将呈现——色的水样在暗处用波长为__ ___nm的紫外灯光照射，如果有产生则表示有大肠埃希氏菌存在。

②答案：黄 366 蓝色荧光4．采用固定底物技术酶底物法定量测定总大肠菌群和大肠埃希氏菌时，水样加入培养基摇匀后，需倒入51孔或97孔无菌定量盘内，以手抚平定量盘背面以，然后用封口。

①②答案:赶除孔穴内气泡程控定量封口机二、判断题1．总大肠菌群酶底物法是指在选择性培养基上能产生乒半乳糖苷酶的细菌群组，该细菌群组能分解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，以此技术来检测水中总大肠菌群的方法。

( )①答案：正确2．采用固定底物技术酶底物法测定总大肠菌群和大肠埃希氏菌可以定性测量，也可以定量测量。

( )①②答案：正确3．采用固定底物技术酶底物法可在48h判断水样中是否含有总大肠菌群和大肠埃希氏菌及含有的总大肠菌群和大肠埃希氏菌的最可能数值。

( )①②答案：错误正确答案为：应该是24h。

三、问答题采用固定底物技术酶底物法定量测定大肠埃希氏菌时，采用正确步骤培养后的样品，怎样判断大肠埃希氏菌的数值?②答案：采用固定底物技术酶底物法定量测定大肠埃希氏菌，采用正确步骤培养后的样品，观察51孔或97孔无菌定量盘，将变成黄色的水样的定量盘在暗处用波长为366nm的紫外灯光照射，如果有蓝色荧光产生则表示该定量盘孔穴中有大肠埃希氏菌存在，计算有荧光反映的孔穴数，对照MPN表即可查出大肠埃希氏菌最大可能数(MPN)，结果以MPN／100m1表示；如所有孔未产生荧光，则可报告为大肠埃希氏菌未检出。

基于两种方法对水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌检测的对比论述摘要：本文围绕两种方法对水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌检测的对比问题展开分析与探讨，首先阐述试验材料仪器准备以及试验操作方法，然后从适用性、灵敏度、稳定性以及均一性四个方面入手，对实验结果进行总结与讨论，仅供参考。

关键词：总大肠菌群；大肠埃希氏菌；检测1 材料与方法1.1 材料与仪器实验所需材料包括：MMO-MUG培养基（由美国DEXX公司提供）；乳糖蛋白胨培养基（由青岛海博生物技术有限公司提供）；EC-MUG培养基（由青岛海博生物技术有限公司提供）。

实验所需仪器包括：培养箱（工作温度区间为36.0±1.0℃，44.5±0.5℃）；紫外灯照射仪（工作波长为366.0nm）。

1.2 方法利用MMO-MUG培养基以及乳糖蛋白胨培养基对水中总大肠菌群进行检测，利用MMO-MUG培养基以及EC-MUG培养基对水中大肠埃希氏菌进行检测。

准备侵袭性大肠埃希氏菌培养物、加标水样、含菌水样、适用性菌株（包括宋内氏志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、以及奇异变形杆菌）、MMO-MUG培养基粉末（称取剂量2.7±0.4g）的，根据要求制备乳糖蛋白胨培养液以及EC-MUG培养基。

1.2.1 适用性实验取前期制作备用MMO-MUG培养液、乳糖蛋白胨培养液以及EC-MUG培养液，称取剂量为10.0mL/管，分别注入试验菌混悬液。

MMO-MUG培养液以及乳糖蛋白胨培养液在36.0±1.0℃培养箱内进行培养，维持24.0h后对培养结果进行观察；EC+-MUG培养液在44.5±0.5℃培养箱内进行培养，维持24.0h后对培养结果进行观察。

1.2.2 灵敏度实验侵袭性大肠埃希氏菌培养物经24.0h培养后制备为0.5麦氏度菌液，经10倍梯度稀释处理，在菌量1500.0MPN/100mL~1.0MPN/100mL区间范围内进行试验，平行试验2次对结果进行统计，以观察不同细菌浓度条件下两种检测方法在灵敏度方面的差异。

粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分,主要来自粪便。

在44.5℃温度下能生长并发酵乳糖产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。

用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开,使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群,从而更准确地反映出水质受粪便污染的情况。

现阶段,粪大肠菌群检测最常用的方法是多管发酵法和滤膜法。

但是这两种方法测定的时间都很长,至少需要48h ,步骤繁琐,需要验证试验,同时无菌操作对实验室硬件设施的要求非常高。

而固定底物酶底物法分析1个样品在实验室内操作的时间仅需要1min ,培养时间也缩短为24h ,在普通实验室内就能进行。

酶底物法能抑制200万个异样细菌,精确检测到每100mL 样品中的1个粪大肠菌群。

1实验部分1.1仪器与试剂主要仪器与试剂详见表1。

表1主要仪器与试剂一览表酶底物法快速测定地表水中粪大肠菌群实验研究敬小兰,文丽娜,库永刚(庆阳市环境监测站,甘肃庆阳745000)摘要：采用酶底物法测定地表水中的粪大肠菌群具有操作简便,快速,结果稳定,与多管发酵法相比,两种方法具有强相关性,无统计学意义上的差异,满足环境监测技术要求。

关键词：酶底物法;快速测定;粪大肠菌群中图分类号：X830.2文献标识码：A文章编号：(甘)LK000067(2019)01-06-08-03Rapid determination of fecal coliform in surface water by enzymeJing Xiaolan ,Wen Lina ,Ku Yonggang(Qingyang Environmental Monitoring Station,Qingyang 745000,China)Abstract:Enzyme substrate method for the determination of fecal coliform bacteria in surface wateris simple,rapid and pared with multiple -tube fermentation method,these two methods have strong correlation but no statistical difference,and meets the technical requirements of environmental monitoring.Key words 院enzyme substrate method;rapiddetermination;fecal coliforms收稿日期：2018-11-07作者简介：敬小兰(1977—),女,甘肃省庆阳市环县人,工程师,从事环境监测及监测质量管理工作。

西安立科环保科技有限公司水质大肠菌群酶底物法检测系统介绍一、检测用途：酶底物法测定用途：用于检测水中总大肠菌群粪大肠菌群（耐热大肠菌群）和大肠埃希氏菌。

可用于检测水的类型：饮用水、水源水、废水、食品水、地表水、地下水、海水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、畜牧用水、医疗用水等。

二、检测原理：酶底物法采用ONPG 和MUG 两种营养指示剂，这两种试剂分别可以被大肠菌群的β-半乳糖苷酶和大肠杆菌的β-葡糖醛酸酶分解代谢。

当大肠菌群在酶底物检测试剂中生长时，其使用β-半乳糖苷酶分解代谢ONPG，并使样品从无色变为黄色。

大肠杆菌使用β-葡糖醛酸酶分解代谢MUG 时，能够发出荧光。

三、优势特点：酶底物法为GB5750-2006收录的用于大肠杆菌检测标准方法，酶底物法是目前水中大肠杆菌检测的最先进方法，目前在发达国家水质大肠菌群检测分别占到95%和90%的市场，以其方便快捷，假阳性低，适用大量样品快速检测等优点正逐步被国内检测部门所认可。

相对于多管发酵和滤膜法，酶底物法检测步骤大大减少，而且对实验环境要求不高，检测时间可减少到24小时，在日常水样监测及应急监测中具有很好的应用前景，可及时检测，预防，最大限度的减少重大公共安全事故的发生几率。

以GB5750-2006中总大肠菌群测定为例，比较三种方法，如表所示。

表1 多管发酵法、滤膜法及酶底物法比较统计方法优势：1.无需在无菌室内操作。

2.手工操作时间小于1分钟。

3.无需培养基制备和大量玻璃器皿灭菌。

4.24小时即可完成定性定量分析，无需验证试验。

已经列入1.GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法》微生物指标。

产品特点：1.colitech酶底物法检测试剂，LK定量检测盘/定量孔板，LK定量瓶出厂前均已灭菌，客户可以直接放心使用。

2.colitech酶底物法检测试剂是我公司潜心研制并符合GB/T5750.12-2006的酶底物法培养基，假阳性和假阴性均优于传统方法。

Colitag大肠菌群和埃氏大肠杆 菌快速检测方法
主要内容
• • • • • 基本概念 Colitag方法特点 基本介绍 检测过程 第三方认可
基本介绍
• 总大肠菌群酶底物法 在选择性培养基上能产生β-半乳糖苷酶的细菌群落， 该细菌群落能分解色原底物释放色原体使培养基呈现颜色 变化，以此技术来检测水中总大肠菌群的方法称为总大肠 菌群酶底物法 • 埃氏大肠杆菌酶底物法 在选择性培养基上能产生β-半乳糖苷酶，分解色原底 物，释放出色原体，从而使培养基颜色发生变化。同时， β-葡萄糖醛酸酶分解产生荧光物质，使菌落能够在紫外光 照射下产生特征性荧光，以此技术检测埃氏大肠杆菌的方 法称为埃氏大肠杆菌酶底物法。
检测过程
1. 取一包检测试剂，与 100 mL 被测液体混合； 2. 摇匀混合，充分溶解，若要定量则转移溶液至定量盘，在 35 摄氏度 的环境下培养 22-26 小时。培养后的水样进行以下认定：
A：如果水样呈黄色，说明有大肠菌群存在； B：如果用 366 nm UV灯照射呈现明显蓝色荧光，说明埃氏 大肠杆菌存在。
检测微生物种类：可同时检测大肠菌群和埃氏大肠杆菌，或同时检 测粪大肠杆菌和埃氏大肠杆菌 • 检测结果表达方式：可检测有/无，也可检测最可能细菌数（MPN） • 检测所需配套设备：可调恒温培养箱（至少可以控制 35+0.5 摄氏 和44.5+0.2 摄氏度），专用计数盘（如果只检测“有/无”则不需要此 项），366 nm UV灯（用 366 nm UV灯照射观察荧光）。 • 方法权威性：美国国家环保局认可的标准快速检测方法; 中国国家 标准中规定的“酶底物”法； 日本、韩国、 法国和巴西等国家的国家 标准。拥有“acid resuscitation”新技术专利 • 检测下限：1CFU/100mL 液体

卫生学评价 ， 检测的指标为大肠 菌群和大肠埃希 氏菌 或粪大肠菌群 （ 耐热大肠菌群） 以这些指标作为粪便 ， 污染的指示 菌。 采用的标准检测方法为膜过滤法和多 管发酵法。但这两种方法检测时间相对较长 ， ４— 需 ８ ７ ２小时 ， 需验 证 试 验 ， 验 步骤 较 为 繁 琐 ， 以 不 能 试 所
ｔｏ ｈｎ ｌ ｒｐ ｅｙ－ｐ－ －ｇｌｃｏ ｙ ａ ｏｉｅ 使培 养液 呈 黄 Ｄ ａａｔｐ ｒｎ ｓ ） ｄ
３２ 耗材 ： ． 取样 瓶或 使 用 灭 菌的 玻 璃瓶 ；ｌ 定 ５孔
量盘 或 ９ ７孔定 量盘 。
注 ： 孔定 量盘 可在 无需 稀释 的情 况 下 检测 ｌ ５ ｌ ～
２ 放在 ３ ±１ ） ６ ℃培养箱 ， 培养 ２ 小时 ； ４ 注： 如检测耐热大肠菌群 （ 粪大肠菌群） 则需放在
４ ．℃ ， ４５ 培养 ２ ４小时 ； 果 培养 时 间超过 ２ 时 ， 如 ８小 呈 阴性 结果 则结果 有效 ，如果 呈 阳性 结果 则结 果 无效 ， 需 重做 此水样 。
可在 ２ ４小时内同时定量检测出大肠茵群和 大肠埃希 氏菌。 此方法大大的减少 了 工作量 ， 免 了 避 使用 多管法的逐 级稀释带来的操作误差 ； 也避免 了使用滤膜 法时肉眼读数的人 为误差， 所以其假 阳性率和假 阴性率都比传统方
法低 。 由于 ２ ４小时 内就得 到 结果 ， 以很 好 的用 于 突发事件应 急 。 可
关键词 ： 大肠菌群 大肠埃希氏菌 固定底物酶底物 法 Ｃ ｌｅｔ可立得 试剂 ｏｌ （ ｉｒ
１背 景
出水 样 中大肠 菌群和 大肠埃 希 氏菌 的 ＭＰ 值 。 Ｎ
目前 我 国对 生 活饮 用 水 、 源 水 、 水 地表 水 等 进 行

西安立科环保科技有限公司水质大肠菌群酶底物法检测系统介绍一、检测用途：酶底物法测定用途：用于检测水中总大肠菌群粪大肠菌群（耐热大肠菌群）和大肠埃希氏菌。

可用于检测水的类型：饮用水、水源水、废水、食品水、地表水、地下水、海水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、畜牧用水、医疗用水等。

二、检测原理：酶底物法采用ONPG 和MUG 两种营养指示剂，这两种试剂分别可以被大肠菌群的β-半乳糖苷酶和大肠杆菌的β-葡糖醛酸酶分解代谢。

当大肠菌群在酶底物检测试剂中生长时，其使用β-半乳糖苷酶分解代谢ONPG，并使样品从无色变为黄色。

大肠杆菌使用β-葡糖醛酸酶分解代谢MUG 时，能够发出荧光。

三、优势特点：酶底物法为GB5750-2006收录的用于大肠杆菌检测标准方法，酶底物法是目前水中大肠杆菌检测的最先进方法，目前在发达国家水质大肠菌群检测分别占到95%和90%的市场，以其方便快捷，假阳性低，适用大量样品快速检测等优点正逐步被国内检测部门所认可。

相对于多管发酵和滤膜法，酶底物法检测步骤大大减少，而且对实验环境要求不高，检测时间可减少到24小时，在日常水样监测及应急监测中具有很好的应用前景，可及时检测，预防，最大限度的减少重大公共安全事故的发生几率。

以GB5750-2006中总大肠菌群测定为例，比较三种方法，如表所示。

表1 多管发酵法、滤膜法及酶底物法比较统计方法优势：1.无需在无菌室内操作。

2.手工操作时间小于1分钟。

3.无需培养基制备和大量玻璃器皿灭菌。

4.24小时即可完成定性定量分析，无需验证试验。

已经列入1.GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法》微生物指标。

产品特点：1.colitech酶底物法检测试剂，LK定量检测盘/定量孔板，LK定量瓶出厂前均已灭菌，客户可以直接放心使用。

2.colitech酶底物法检测试剂是我公司潜心研制并符合GB/T5750.12-2006的酶底物法培养基，假阳性和假阴性均优于传统方法。

微生物固定底物技术酶底物法测定仪原理：科立得--DST酶底物法是可在24小时内快速定量和定性检测“总大肠菌群及大肠埃希氏菌及粪大肠菌群”，其原理是利用了MMO-MUG特异性培养基的呈色和荧光反应，该方法比传统的滤膜法和多管法的假阳性和假阴性发生率更低，培养时间更短。

技术特点：1、DST酶底物法试剂完全符合《生活饮用水标准检验方法》的MMO-MUG 培养基，采用固定底物技术（DST）酶底物法，Snap包装。

200个/包。

能够精确检出100ml水样中单个的活性总大肠菌群和大肠埃希氏菌，以及粪大肠菌群，假阴性率低。

每个单位试剂可抑制200万个异养细菌，假阳性率低。

能够消除传统方法中的主观判断影响，准确性高于滤膜法及多管发酵法。

2006年被列入到《生活饮用水标准检验方法》（GB/T5750.12-2006），是国标认可的MMO-MUG培养基；经美国环保署的认可作为24 小时检验出厂水与源水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群（粪大肠菌群）的方法；通过水与废水检验的标准方法分析化学工作者协会 (AOAC) 、国际瓶装水协会 (IBWA) 及欧洲瓶装水协会 (EBWA)认证；中国、美国、加拿大、英国、德国、法国、日本、韩国、阿根廷、巴西、澳大利亚、新西兰、南非等50多国家及地区的饮用水，地表水，污水等检验标准。

年全球使用量超过数千万次，美国90%以上的实验室使用科立得试剂。

2、定量盘Quanti-tray或Quanti-tray 2000定量盘Quanti-tray（51孔定量盘），有50个标准孔格，1个大孔格。

无须稀释可检测200MPN/100ml总大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群Quanti-tray2000（97孔定量盘），有48个标准孔格，1个大孔格和48个小孔格，无须稀释可检测2419MPN/100ml总大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群3、无菌取样瓶含10%硫代硫酸钠10ml的无菌取样瓶，可定量100ml水样4、2009D程控定量封口机与符合《生活饮用水标准检验方法》固定底物技术（DST）酶底物法的MMO-MUG培养基配套使用的2009D程控定量封口机。

两种方法对水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌检测的对比阐述王佳发布时间：2021-11-02T02:04:35.347Z 来源：《中国科技人才》2021年第21期作者：王佳[导读] 通过多管发酵的检测法与酶底物检测法去研究水中所存在的总大肠菌群大肠埃希氏菌的变化情况，再将两种检测方法进行对比（适用性、灵敏度等），并了解多管发酵法和酶底物法这两种方法对水中菌群的检测结果。

通标标准技术服务有限公司南京分公司摘要：通过多管发酵的检测法与酶底物检测法去研究水中所存在的总大肠菌群大肠埃希氏菌的变化情况，再将两种检测方法进行对比（适用性、灵敏度等），并了解多管发酵法和酶底物法这两种方法对水中菌群的检测结果。

最终结果展示，两种方法（多管发酵法和酶底物法）对适用性菌株检测方面存在差异；在每100毫升的浓度中存在1MPN，酶底物检测法和多管发酵法相比较来说，酶底物检测法更加灵敏；而在加标样和平行样检测过程中，酶底物检测法则更为稳定。

总的来说，可以通过多管发酵法和酶底物法去检测两种菌群在水中的含量，但通过实践表明酶底物法的检测优势较为显著，此方法检测时间快、方法操作便捷、观察步骤简单，可以大范围应用在相关实验当中。

关键词：多管发酵检测法；酶底物检测法；检测结果1、材料与方法1.1材料与仪器此实验将运用到美国生物公司生产MMO-MUG培养基；中国青岛生物技术有限公司生产的乳糖蛋白胨培养基和EC- MUG培养基以及培养箱（36C+1C、44.5C士0.5C）；紫外线灯。

1.2 方法1.2.1 试验前准备菌株，EIEC的培养物，普通的含菌水样品，3克左右的MMO- MUG培养基粉末，根据实验配备调制的物质（EC- MUG培养基与乳糖蛋白胨培养液）。

1.2.2方法原理①多管发酵法。

多管发酵法试验应先接种水样到乳，糖蛋白胨培养基，于36℃培养箱内培养24h，如所有培养管均不产酸产气，则可报告为总大肠菌群阴性；如有产酸产气者，则需要转种于伊红美蓝平板，对可疑菌落进行革兰氏染色、镜检和证实试验以。

浅述酶底物法快速测定地表水中总大肠菌群与大肠埃希氏菌摘要：根据《生活饮用水卫生标准》中对微生物指示菌检测的方法要求，提出采取精确、快速、可靠的总大肠菌群及大肠埃希氏菌检测方法，通过试验方法对比、实际水样检测，比较酶底物法与多管发酵法、滤膜法用于生活饮用水地表水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测结果。

实验结果表明，酶底物法能够快速检测地表水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌，结果精确、快速、可靠，并认为在控制流行疾病的发生传播，从而保障公众健康安全有重要的预报价值和科学意义，同时鉴于我省大多数自来水公司的水质检测还没有增加此方法,建议今后该方法应得到普及和应用。

关键词：总大肠菌群；大肠埃希氏菌；酶底物法我国新的国家《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006）中对生活饮用水、水源水、地表水等进行卫生评价时，总大肠菌群（Total coliforms）和大肠埃希氏菌（Escherichia coli）是判定水质是否被粪便污染的两个重要指标，尤其是大肠埃希氏菌是粪便污染最有意义的指示菌，已被世界上许多组织、国家和地区使用。

新的国家《生活饮用水卫生标准》中加入大肠埃希氏菌指标，限值为100mL 不得检出大肠埃希氏菌。

并注明：若检出总大肠菌群，必须进行耐热大肠菌群或大肠埃希氏菌检测。

若水样中检出耐热大肠菌群或大肠埃希氏菌，则说明水质可能受到严重污染，必须采取相应措施。

目前，新国标中对总大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定有三种标准方法，多管发酵法、滤膜法和酶底物法，其中多管发酵法和滤膜法是目前常用的传统检测方法，这两种方法设备简单，试验步骤较为繁琐，对操作人员专业水平要求较高，不利于应急检测，和对水的卫生学状况做出快速评价。

酶底物法检测水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌具有操作方便、快速；干预性结果容易判断等特点，适用于水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的快速检测，对于及时准确的监测饮用水、地表水和水源水粪便污染状况，从而有效预报和控制流行疾病的发生与传播有重要意义。

当代化工研究Modern Chemical Research 2020・08百家争鸣总大肠菌群和大肠埃希氏菌检测方法的对比分析*陈翠玲(东营市胜丰职业卫生检测评价有限责任公司山东257000)摘耍：为了探究酶底物法、多管发酵法用于水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌餉检测中的效果.通过加标试验检测和实际水样检测等方式，比较酶底物法和多管发酵法对水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测效果算，结果显示两种检测方式在不同菌株检测适用性方面存在一定差异.针对水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测选择酶底物法和多管发酵法结果一致，说明两种方式均可用于水质微生物检测中，均有较为理想的应用效果.关键词：酶底物法；多管发酵法；总大肠菌群；大肠埃希氏菌中EB分类号：T文献标识码：AComparative Analysis of Total Coliform and Escherichia Coli Detection MethodsChen Cuiling(Dongying Shengfeng Occupational Health Inspection and Evaluation Co.,Ltd.,Shandong,257000) Abstracts In order to explore the effect of enzyme substrate method and multi-tube fermentation method on the detection of total coliforms and Escherichia coli in water Comparison of the detection results of the total coliform and Escherichia coli in water by enzyme substrate method and multi-tube f ermentation method by means of s tandard addition test detection and actual water sample detection.The results show that the two detection methods are detected in different strains.There are some differences in applicability.For the detection of t otal coliforms and Escherichia coli in water,the results of t he enzyme substrate method and the multi-tube f ermentation method were consistent,indicating that both methods can be used for detection of w ater quality microorganisms,and both have ideal application effects.Key words t enzyme substrate method；multi-tube f ermentation method；total coliform；Escherichia coli引言试验菌混悬液，MM0-MUG和EC-MUG培养基培养液分别放置在近年来，我国人民生活质量得到了不断的提升和改善，为了健康的考虑，人们对于自来水的水质也有了更加严格的要求，当前全球范围内大部分地区和国家均存在不同程度的自来水微生物污染问题，由于其关系着生命的健康，因此得到了社会各界人士的关注切。

水中大肠菌群快速检测方法－酶底物法与多管发酵法的比较《卫生研究》2006第3期孙宗科丁培薛金荣陈西平1吴榕2张雅婕3张淑红4遇晓杰5中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所，北京100021摘要：目的比较酶底物法与多管发酵法用于水中大肠菌群的检测。

方法应用加标试验和实际水样检测的方式，比较酶底物法与多管发酵法用于水中大肠菌群检测结果的一致性，以及假阳性率。

结果酶底物法与多管发酵法用于水中大肠菌群检测结果具有一致性，假阳性率无统计学意义的差别。

结论酶底物法可以用作评价水质微生物污染的标准方法。

关键词：大肠菌群酶底物法多管发酵法快速检测Comparison between rapid detection method of enzyme substrate technique and multiple-tube fermentation technique in water coliform bacteria detectionSun Zongke, Wu Rong, Chen Xiping, et al.Institute for Environment Hygiene and Health Related Product Safety, Chinese Centerfor Disease Control and Prevention, Beijing 100021, ChinaAbstract：In order to compare between rapid detection method of enzyme substrate technique and multiple-tube fermentation technique in water coliform bacteria detection, inoculated and real water samples are included in this experiment.Results demonstrate that enzyme substrate technique shows equivalence with multiple-tube fermentation technique. It is suggested that enzyme substrate technique can be used as a standard method for water microbiological safety evaluation.Key words：coliform bacteria, enzyme substrate technique,multiple-tube fermentation technique, rapid detection目前我国对生活饮用水、水源水、地表水等进行卫生学评价，检测的指标为大肠菌群（coliform bacteria）和粪大肠菌群(faecal coliforms)，以这两种指标作为粪便污染的指示菌。

材料院 科立得试剂 渊 美国爱德士生物科技股 份有限公司冤 曰 97 孔定 量盘 渊 含 49 个 大孔 袁 48 个小孔冤 曰 97 孔标准阳性比色盘曰 无菌水 渊 取适 量实验用水袁 经 121益高压蒸汽灭菌 20 min袁 备 用冤 遥 1.2 实验步骤
1冤 稀 释 遥 根 据 样 品 污 染 程 度 确 定 接 种 量 渊 见表 1冤 遥
水质监测技术要求遥
关键词：酶底物法曰 总大肠菌群曰 粪大肠菌群曰 大肠埃希氏菌
中图分类号：X172 文献标志码：A
文章编号： 1004-275X 渊 2020冤 002-047-03
A p p lic a b ility o f E n z y m e s u b s t ra te m e th o d in t o ta l c o lifo rm , fe ca l co lifo rm
1 实验部分
1.1 仪器和材料 仪器院 立式压力蒸汽灭菌锅 渊 江阴滨江医疗
设备有限公司 LS-35HG冤 曰 隔水式培养箱 渊 天津 市泰斯特仪器有限公司 GH4500冤 曰 程控定量封口 机 渊 重 庆 吉 飞 科 技 有 限 公 司 2009D冤 曰 紫 外 灯 渊 CM-10A冤 曰 玻璃器皿 渊 采样瓶尧 三角瓶尧 移液 管尧 量筒等玻璃器皿在试验前按无菌操作要求包 扎袁 121益高压蒸汽灭菌 20 min袁 烘干袁 备用冤 遥
a n d E s c h e ric h ia c o li
Yang Tao，Li Xianfang，Cui Zhongyuan，Wan Qiaoling
（Chongqing Monitoring Station，Water Quality Monitoring Network of National Urban Water Supply，

固定酶底物法测定生活饮用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌精密度分析摘要：总大肠菌群目前作为评价水质的一项指标，是反映水样是否受到粪便污染的指标。

固定酶底物法是从美国引进的一种大肠杆菌新型检测方法。

该方法采用酶底物法测定生活饮用水中的总大肠菌群、大肠埃希氏菌，分析了不同浓度水样的精密度，低浓度水样的精密度为，1.6%、2.0%;中浓度水样的精密度为1.3%、1.8%;高浓度水样的精密度为2.0%、4.3%;阳性标准菌株的精密度均为0.86%。

关键词：酶底物法总大肠菌群大肠埃希氏菌精密度微生物常規检测指标为总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌。

它们均可作为检验肠道致病菌的指示菌，是进行卫生学评价的重要内容。

总大肠菌群是指一群在37 ℃培养24 h，能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌[1]。

总大肠菌群目前作为评价水质的一项指标，是反映水样是否受到粪便污染的指标[2]。

生活饮用水中针对大肠菌群、大肠埃希菌等的检测技术主要包括乳糖蛋白胨多管发酵法、滤膜法、固体酶底物法[3] ，其中多管发酵法为仲裁法[4]。

固定酶底物法[5]是从美国引进我国的一种大肠杆菌检测方法，此方法简单、方便、快速、无培养基的制作与干扰等优点[6]。

目前被美国、欧洲及大部分亚洲国家广泛应用于水中总大肠菌群、粪大肠菌群（耐热大肠菌群）及大肠埃希氏菌的检测。

并通过美国EPA、《水与废水标准检测方法》以及我国《生活饮用水标准检验方法》认证[7]。

1 实验部分1.1 材料与试剂1.1.1试剂在该实验中酶底物法所用酶底物法检测试剂 MMO-MUG 培养基，无菌定量瓶（带100 mL刻度），51孔定量检测盘均购买于西安立科环保科技有限公司。

1.1.2仪器设备隔水式恒温培养箱型号：GHP-9270，高压蒸汽灭菌器型号：LDZX-50KBS，程控定量封口机型号：LK-2010，手提式暗箱紫外分析仪型号：ZK-5。

1.1.3 标准菌株阳性标准菌株：大肠埃希菌菌种号CMCC（B）44102 来源：南京便诊生物科技有限公司;阴性标准菌株：铜绿假单胞菌菌种号CICC 21636来源：中国工业菌种保藏中心。

1, 方法
本标准方法采用固定底物技术酶底物法 Defined Substrate Technology, DST
2，培养基：
采用Minimal Medium ONPG-MUG，简称 MMO-MUG培养基
3, 优点
• • • • 假阳性,假阴性底 操作简单,快速 定性,定量（51孔/97孔定量盘法） 50多个国家和组织认证
多管发酵法（Multiple Tube Fermentation, MTF) 滤膜法（Membrane Filtration, MF )
固定底物技术酶底物法(Defined Substrate Technology, DST)
酶底物法( Enzyme Substrate Test, EST)
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检测方法
多管发酵法（MTF）–共需3-5天时间
以100mL水样中大肠菌最可能数(most probable number, MPN)表示 培养基制备>试管培养（22－26小时）
产酸，产气 平板培养18－24小时
革兰氏染色，镜检
阴性结果（无产酸，产气）
观察菌落形态，挑取特征菌落
证实试验（培养24±2h，有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在 ）
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假阳性比较： vs 滤膜法
60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% US EPA 1989 Lewis & Fricker et al Mak 1989 1995 MF Colilert Colilert MF
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假阳性比较：vs 滤膜法
•报告者：英国泰晤士水务 •样品来源：泰晤士河，样品数450个
条件恶劣 专业的操作人员少
解决
无需专用的无菌室 操作简单，无需专门培训，只需 根据颜色变化判读结果，对操作 员要求低

3.3 设备：定量程控封口机；366nm 紫外灯；阳性对照物 注：定量程控封口机除了将定量盘进行封口外还对 100ml 水样平均分配到 51 个孔或者是 97 个 孔中。
中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载 体，致力于搭建产研结合的桥梁。以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推 动化工行业的发展。
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科标化工分析检测中心致力于推动化工产业发展，欢迎各行同仁前来洽谈、合作。
5.2 选用 51 孔定量盘 在不稀释的情况下，100ml 水样可检测 200 个总大肠菌群，大肠埃希氏菌，耐热大肠菌群（粪 大肠菌群）。
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4. 操作方法：
4.1 定性检测：
4.1.1 适用范围： 一般用于检测饮用水、瓶装水等；这些水样的结果是不得检出。所以只需用定性检测就可满足 试验要求。
4.1.2 操作步骤： 1) 将一个 Colilert 试剂倒入装有 100ml 水样的无菌取样瓶或无菌玻璃瓶中，混匀。 2) 放在 36±1℃培养箱，培养 24 小时； 注：如检测耐热大肠菌群（粪大肠菌群）则需放在 44.5℃，培养 24 小时；如果培养时间超过 28 小时，则阴性结果则结果有效，如果为阳性结果则结果无效，需重做此水样。 3) 根据下面的结果解释读取结果 4) 无需确认试验
5.3 选用 97 孔定量盘 在不稀释的情况下，100ml 水样可检测 2419 个总大肠菌群，大肠埃希氏菌，耐热大肠菌群（粪 大肠菌群）。

2020年4月鎳色科仗Jo u rn a l of G reen Science and T ech n o lo gy第8期酶底物法测定水中总大肠菌群、粪大肠菌群和 大肠埃希氏菌质量控制研究陈明桂，杨虹(1•天津天滨瑞成环境技术工程有限公司，天津300100;2•天津市生态环境监测中心，天津300100)摘要：对水中总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌测定的酶底物法的实验室内质量控制进行了研究。

结果表明：酶底物法可以通过加强实验室和实验过程的质量控制来获得更可靠、更准确的实验数据，以满足相关环境保护工作的要求。

关键词：酶底物法；总大肠菌群；粪大肠菌群；大肠埃希氏菌；质量控制中图分类号：X830 文献标识码：A文章编号：1674-9944(2020)8-0117-031引言总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌是人和温 血动物肠道中的正常寄生细菌，是水体粪便污染的最佳指示菌，也是水质评价的重要微生物指标之一。

总 大肠菌群是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，包括埃希氏菌属、肠杆菌属、柠檬酸菌属、克雷伯菌 属等菌属。

粪大肠菌群又叫耐热大肠菌群，是总大肠菌 群中的一部分，主要包括埃希氏菌属和耐热克雷伯菌属，其能够更为贴切反映水体受粪便污染程度。

大肠埃 希氏菌又称大肠杆菌，是总大肠菌群、粪大肠菌群的主要种类D]。

总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌常 用的测定方法主要有多管发酵法、滤膜法、纸片法和酶 底物法。

酶底物法由于具有检出限低、准确度高、操作 方便、时效性高等优点[2]，从而得到了广泛应用。

但目 前对酶底物法测定水中总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠 埃希氏菌的质量控制研究仍较少，本文将从实验部分、实验室要求、实验室人员、工作菌悬液、设备、标准阳性 比色盘和废弃物处理等方面对实验室质量控制进行研究，为检测结果的准确性提供保障，能够更好地服务环境保护工作。

2实验部分2.1试剂和材料Minimal Medium ONPG—MUG培养基；硫代硫酸 钠溶液：〇. 10 g/'m L;乙二胺四乙酸二钠溶液：0. 15 g/ m L;97孔定量盘;标准阳性比色盘。