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一、填空题1．采用固定底物技术酶底物法定性测定总大肠菌群和大肠埃希氏菌(粪大肠菌群)时，需要取 ml水样，在±℃培养 h。
①②答案：100 36 1 242．采用固定底物技术酶底物法定性测定总大肠菌群，水样加入培养基后经过适当温度及时间培养后，呈现色为阳性。
①答案：黄3．采用固定底物技术酶底物法定性测定大肠埃希氏菌，水样加入培养基后经过适当温度及时间培养后，将呈现——色的水样在暗处用波长为__ ___nm的紫外灯光照射，如果有产生则表示有大肠埃希氏菌存在。
②答案：黄 366 蓝色荧光4．采用固定底物技术酶底物法定量测定总大肠菌群和大肠埃希氏菌时，水样加入培养基摇匀后，需倒入51孔或97孔无菌定量盘内，以手抚平定量盘背面以，然后用封口。
①②答案:赶除孔穴内气泡程控定量封口机二、判断题1．总大肠菌群酶底物法是指在选择性培养基上能产生乒半乳糖苷酶的细菌群组，该细菌群组能分解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，以此技术来检测水中总大肠菌群的方法。
( )①答案：正确2．采用固定底物技术酶底物法测定总大肠菌群和大肠埃希氏菌可以定性测量，也可以定量测量。
( )①②答案：正确3．采用固定底物技术酶底物法可在48h判断水样中是否含有总大肠菌群和大肠埃希氏菌及含有的总大肠菌群和大肠埃希氏菌的最可能数值。
( )①②答案：错误正确答案为：应该是24h。
三、问答题采用固定底物技术酶底物法定量测定大肠埃希氏菌时，采用正确步骤培养后的样品，怎样判断大肠埃希氏菌的数值?②答案：采用固定底物技术酶底物法定量测定大肠埃希氏菌，采用正确步骤培养后的样品，观察51孔或97孔无菌定量盘，将变成黄色的水样的定量盘在暗处用波长为366nm的紫外灯光照射，如果有蓝色荧光产生则表示该定量盘孔穴中有大肠埃希氏菌存在，计算有荧光反映的孔穴数，对照MPN表即可查出大肠埃希氏菌最大可能数(MPN)，结果以MPN／100m1表示；如所有孔未产生荧光，则可报告为大肠埃希氏菌未检出。
基于两种方法对水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌检测的对比论述摘要：本文围绕两种方法对水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌检测的对比问题展开分析与探讨，首先阐述试验材料仪器准备以及试验操作方法，然后从适用性、灵敏度、稳定性以及均一性四个方面入手，对实验结果进行总结与讨论，仅供参考。
关键词：总大肠菌群；大肠埃希氏菌；检测1 材料与方法1.1 材料与仪器实验所需材料包括：MMO-MUG培养基（由美国DEXX公司提供）；乳糖蛋白胨培养基（由青岛海博生物技术有限公司提供）；EC-MUG培养基（由青岛海博生物技术有限公司提供）。
实验所需仪器包括：培养箱（工作温度区间为36.0±1.0℃，44.5±0.5℃）；紫外灯照射仪（工作波长为366.0nm）。
1.2 方法利用MMO-MUG培养基以及乳糖蛋白胨培养基对水中总大肠菌群进行检测，利用MMO-MUG培养基以及EC-MUG培养基对水中大肠埃希氏菌进行检测。
准备侵袭性大肠埃希氏菌培养物、加标水样、含菌水样、适用性菌株（包括宋内氏志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、以及奇异变形杆菌）、MMO-MUG培养基粉末（称取剂量2.7±0.4g）的，根据要求制备乳糖蛋白胨培养液以及EC-MUG培养基。
1.2.1 适用性实验取前期制作备用MMO-MUG培养液、乳糖蛋白胨培养液以及EC-MUG培养液，称取剂量为10.0mL/管，分别注入试验菌混悬液。
MMO-MUG培养液以及乳糖蛋白胨培养液在36.0±1.0℃培养箱内进行培养，维持24.0h后对培养结果进行观察；EC+-MUG培养液在44.5±0.5℃培养箱内进行培养，维持24.0h后对培养结果进行观察。
1.2.2 灵敏度实验侵袭性大肠埃希氏菌培养物经24.0h培养后制备为0.5麦氏度菌液，经10倍梯度稀释处理，在菌量1500.0MPN/100mL~1.0MPN/100mL区间范围内进行试验，平行试验2次对结果进行统计，以观察不同细菌浓度条件下两种检测方法在灵敏度方面的差异。
粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分,主要来自粪便。
在44.5℃温度下能生长并发酵乳糖产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。
用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开,使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群,从而更准确地反映出水质受粪便污染的情况。
现阶段,粪大肠菌群检测最常用的方法是多管发酵法和滤膜法。
但是这两种方法测定的时间都很长,至少需要48h ,步骤繁琐,需要验证试验,同时无菌操作对实验室硬件设施的要求非常高。
而固定底物酶底物法分析1个样品在实验室内操作的时间仅需要1min ,培养时间也缩短为24h ,在普通实验室内就能进行。
酶底物法能抑制200万个异样细菌,精确检测到每100mL 样品中的1个粪大肠菌群。
1实验部分1.1仪器与试剂主要仪器与试剂详见表1。
表1主要仪器与试剂一览表酶底物法快速测定地表水中粪大肠菌群实验研究敬小兰,文丽娜,库永刚(庆阳市环境监测站,甘肃庆阳745000)摘要：采用酶底物法测定地表水中的粪大肠菌群具有操作简便,快速,结果稳定,与多管发酵法相比,两种方法具有强相关性,无统计学意义上的差异,满足环境监测技术要求。
关键词：酶底物法;快速测定;粪大肠菌群中图分类号：X830.2文献标识码：A文章编号：(甘)LK000067(2019)01-06-08-03Rapid determination of fecal coliform in surface water by enzymeJing Xiaolan ,Wen Lina ,Ku Yonggang(Qingyang Environmental Monitoring Station,Qingyang 745000,China)Abstract:Enzyme substrate method for the determination of fecal coliform bacteria in surface wateris simple,rapid and pared with multiple -tube fermentation method,these two methods have strong correlation but no statistical difference,and meets the technical requirements of environmental monitoring.Key words 院enzyme substrate method;rapiddetermination;fecal coliforms收稿日期：2018-11-07作者简介：敬小兰(1977—),女,甘肃省庆阳市环县人,工程师,从事环境监测及监测质量管理工作。
西安立科环保科技有限公司水质大肠菌群酶底物法检测系统介绍一、检测用途：酶底物法测定用途：用于检测水中总大肠菌群粪大肠菌群（耐热大肠菌群）和大肠埃希氏菌。
可用于检测水的类型：饮用水、水源水、废水、食品水、地表水、地下水、海水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、畜牧用水、医疗用水等。
二、检测原理：酶底物法采用ONPG 和MUG 两种营养指示剂，这两种试剂分别可以被大肠菌群的β-半乳糖苷酶和大肠杆菌的β-葡糖醛酸酶分解代谢。
当大肠菌群在酶底物检测试剂中生长时，其使用β-半乳糖苷酶分解代谢ONPG，并使样品从无色变为黄色。
大肠杆菌使用β-葡糖醛酸酶分解代谢MUG 时，能够发出荧光。
三、优势特点：酶底物法为GB5750-2006收录的用于大肠杆菌检测标准方法，酶底物法是目前水中大肠杆菌检测的最先进方法，目前在发达国家水质大肠菌群检测分别占到95%和90%的市场，以其方便快捷，假阳性低，适用大量样品快速检测等优点正逐步被国内检测部门所认可。
相对于多管发酵和滤膜法，酶底物法检测步骤大大减少，而且对实验环境要求不高，检测时间可减少到24小时，在日常水样监测及应急监测中具有很好的应用前景，可及时检测，预防，最大限度的减少重大公共安全事故的发生几率。
以GB5750-2006中总大肠菌群测定为例，比较三种方法，如表所示。
表1 多管发酵法、滤膜法及酶底物法比较统计方法优势：1.无需在无菌室内操作。
2.手工操作时间小于1分钟。
3.无需培养基制备和大量玻璃器皿灭菌。
4.24小时即可完成定性定量分析，无需验证试验。
已经列入1.GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法》微生物指标。
产品特点：1.colitech酶底物法检测试剂，LK定量检测盘/定量孔板，LK定量瓶出厂前均已灭菌，客户可以直接放心使用。
2.colitech酶底物法检测试剂是我公司潜心研制并符合GB/T5750.12-2006的酶底物法培养基，假阳性和假阴性均优于传统方法。
西安立科环保科技有限公司水质大肠菌群酶底物法检测系统介绍一、检测用途：酶底物法测定用途：用于检测水中总大肠菌群粪大肠菌群（耐热大肠菌群）和大肠埃希氏菌。
可用于检测水的类型：饮用水、水源水、废水、食品水、地表水、地下水、海水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、畜牧用水、医疗用水等。
二、检测原理：酶底物法采用ONPG 和MUG 两种营养指示剂，这两种试剂分别可以被大肠菌群的β-半乳糖苷酶和大肠杆菌的β-葡糖醛酸酶分解代谢。
当大肠菌群在酶底物检测试剂中生长时，其使用β-半乳糖苷酶分解代谢ONPG，并使样品从无色变为黄色。
大肠杆菌使用β-葡糖醛酸酶分解代谢MUG 时，能够发出荧光。
三、优势特点：酶底物法为GB5750-2006收录的用于大肠杆菌检测标准方法，酶底物法是目前水中大肠杆菌检测的最先进方法，目前在发达国家水质大肠菌群检测分别占到95%和90%的市场，以其方便快捷，假阳性低，适用大量样品快速检测等优点正逐步被国内检测部门所认可。
相对于多管发酵和滤膜法，酶底物法检测步骤大大减少，而且对实验环境要求不高，检测时间可减少到24小时，在日常水样监测及应急监测中具有很好的应用前景，可及时检测，预防，最大限度的减少重大公共安全事故的发生几率。
以GB5750-2006中总大肠菌群测定为例，比较三种方法，如表所示。
表1 多管发酵法、滤膜法及酶底物法比较统计方法优势：1.无需在无菌室内操作。
2.手工操作时间小于1分钟。
3.无需培养基制备和大量玻璃器皿灭菌。
4.24小时即可完成定性定量分析，无需验证试验。
已经列入1.GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法》微生物指标。
产品特点：1.colitech酶底物法检测试剂，LK定量检测盘/定量孔板，LK定量瓶出厂前均已灭菌，客户可以直接放心使用。
2.colitech酶底物法检测试剂是我公司潜心研制并符合GB/T5750.12-2006的酶底物法培养基，假阳性和假阴性均优于传统方法。
微生物固定底物技术酶底物法测定仪原理：科立得--DST酶底物法是可在24小时内快速定量和定性检测“总大肠菌群及大肠埃希氏菌及粪大肠菌群”，其原理是利用了MMO-MUG特异性培养基的呈色和荧光反应，该方法比传统的滤膜法和多管法的假阳性和假阴性发生率更低，培养时间更短。
技术特点：1、DST酶底物法试剂完全符合《生活饮用水标准检验方法》的MMO-MUG 培养基，采用固定底物技术（DST）酶底物法，Snap包装。
200个/包。
能够精确检出100ml水样中单个的活性总大肠菌群和大肠埃希氏菌，以及粪大肠菌群，假阴性率低。
每个单位试剂可抑制200万个异养细菌，假阳性率低。
能够消除传统方法中的主观判断影响，准确性高于滤膜法及多管发酵法。
2006年被列入到《生活饮用水标准检验方法》（GB/T5750.12-2006），是国标认可的MMO-MUG培养基；经美国环保署的认可作为24 小时检验出厂水与源水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群（粪大肠菌群）的方法；通过水与废水检验的标准方法分析化学工作者协会 (AOAC) 、国际瓶装水协会 (IBWA) 及欧洲瓶装水协会 (EBWA)认证；中国、美国、加拿大、英国、德国、法国、日本、韩国、阿根廷、巴西、澳大利亚、新西兰、南非等50多国家及地区的饮用水，地表水，污水等检验标准。
年全球使用量超过数千万次，美国90%以上的实验室使用科立得试剂。
2、定量盘Quanti-tray或Quanti-tray 2000定量盘Quanti-tray（51孔定量盘），有50个标准孔格，1个大孔格。
无须稀释可检测200MPN/100ml总大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群Quanti-tray2000（97孔定量盘），有48个标准孔格，1个大孔格和48个小孔格，无须稀释可检测2419MPN/100ml总大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群3、无菌取样瓶含10%硫代硫酸钠10ml的无菌取样瓶，可定量100ml水样4、2009D程控定量封口机与符合《生活饮用水标准检验方法》固定底物技术（DST）酶底物法的MMO-MUG培养基配套使用的2009D程控定量封口机。
两种方法对水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌检测的对比阐述王佳发布时间：2021-11-02T02:04:35.347Z 来源：《中国科技人才》2021年第21期作者：王佳[导读] 通过多管发酵的检测法与酶底物检测法去研究水中所存在的总大肠菌群大肠埃希氏菌的变化情况，再将两种检测方法进行对比（适用性、灵敏度等），并了解多管发酵法和酶底物法这两种方法对水中菌群的检测结果。
通标标准技术服务有限公司南京分公司摘要：通过多管发酵的检测法与酶底物检测法去研究水中所存在的总大肠菌群大肠埃希氏菌的变化情况，再将两种检测方法进行对比（适用性、灵敏度等），并了解多管发酵法和酶底物法这两种方法对水中菌群的检测结果。
最终结果展示，两种方法（多管发酵法和酶底物法）对适用性菌株检测方面存在差异；在每100毫升的浓度中存在1MPN，酶底物检测法和多管发酵法相比较来说，酶底物检测法更加灵敏；而在加标样和平行样检测过程中，酶底物检测法则更为稳定。
总的来说，可以通过多管发酵法和酶底物法去检测两种菌群在水中的含量，但通过实践表明酶底物法的检测优势较为显著，此方法检测时间快、方法操作便捷、观察步骤简单，可以大范围应用在相关实验当中。
关键词：多管发酵检测法；酶底物检测法；检测结果1、材料与方法1.1材料与仪器此实验将运用到美国生物公司生产MMO-MUG培养基；中国青岛生物技术有限公司生产的乳糖蛋白胨培养基和EC- MUG培养基以及培养箱（36C+1C、44.5C士0.5C）；紫外线灯。
1.2 方法1.2.1 试验前准备菌株，EIEC的培养物，普通的含菌水样品，3克左右的MMO- MUG培养基粉末，根据实验配备调制的物质（EC- MUG培养基与乳糖蛋白胨培养液）。
1.2.2方法原理①多管发酵法。
多管发酵法试验应先接种水样到乳，糖蛋白胨培养基，于36℃培养箱内培养24h，如所有培养管均不产酸产气，则可报告为总大肠菌群阴性；如有产酸产气者，则需要转种于伊红美蓝平板，对可疑菌落进行革兰氏染色、镜检和证实试验以。
浅述酶底物法快速测定地表水中总大肠菌群与大肠埃希氏菌摘要：根据《生活饮用水卫生标准》中对微生物指示菌检测的方法要求，提出采取精确、快速、可靠的总大肠菌群及大肠埃希氏菌检测方法，通过试验方法对比、实际水样检测，比较酶底物法与多管发酵法、滤膜法用于生活饮用水地表水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测结果。
实验结果表明，酶底物法能够快速检测地表水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌，结果精确、快速、可靠，并认为在控制流行疾病的发生传播，从而保障公众健康安全有重要的预报价值和科学意义，同时鉴于我省大多数自来水公司的水质检测还没有增加此方法,建议今后该方法应得到普及和应用。
关键词：总大肠菌群；大肠埃希氏菌；酶底物法我国新的国家《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006）中对生活饮用水、水源水、地表水等进行卫生评价时，总大肠菌群（Total coliforms）和大肠埃希氏菌（Escherichia coli）是判定水质是否被粪便污染的两个重要指标，尤其是大肠埃希氏菌是粪便污染最有意义的指示菌，已被世界上许多组织、国家和地区使用。
新的国家《生活饮用水卫生标准》中加入大肠埃希氏菌指标，限值为100mL 不得检出大肠埃希氏菌。
并注明：若检出总大肠菌群，必须进行耐热大肠菌群或大肠埃希氏菌检测。
若水样中检出耐热大肠菌群或大肠埃希氏菌，则说明水质可能受到严重污染，必须采取相应措施。
目前，新国标中对总大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定有三种标准方法，多管发酵法、滤膜法和酶底物法，其中多管发酵法和滤膜法是目前常用的传统检测方法，这两种方法设备简单，试验步骤较为繁琐，对操作人员专业水平要求较高，不利于应急检测，和对水的卫生学状况做出快速评价。
酶底物法检测水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌具有操作方便、快速；干预性结果容易判断等特点，适用于水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的快速检测，对于及时准确的监测饮用水、地表水和水源水粪便污染状况，从而有效预报和控制流行疾病的发生与传播有重要意义。
浅述酶底物法快速测定地表水中总大肠菌群与大肠埃希氏菌摘要：根据《生活饮用水卫生标准》中对微生物指示菌检测的方法要求，提出采取精确、快速、可靠的总大肠菌群及大肠埃希氏菌检测方法，通过试验方法对比、实际水样检测，比较酶底物法与多管发酵法、滤膜法用于生活饮用水地表水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测结果。
实验结果表明，酶底物法能够快速检测地表水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌，结果精确、快速、可靠，并认为在控制流行疾病的发生传播，从而保障公众健康安全有重要的预报价值和科学意义，同时鉴于我省大多数自来水公司的水质检测还没有增加此方法,建议今后该方法应得到普及和应用。
关键词：总大肠菌群；大肠埃希氏菌；酶底物法
我国新的国家《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006）中对生活饮用水、水源水、地表水等进行卫生评价时，总大肠菌群（Total coliforms）和大肠埃希氏菌（Escherichia coli）是判定水质是否被粪便污染的两个重要指标，尤其是大肠埃希氏菌是粪便污染最有意义的指示菌，已被世界上许多组织、国家和地区使用。
新的国家《生活饮用水卫生标准》中加入大肠埃希氏菌指标，限值为100mL 不得检出大肠埃希氏菌。
并注明：若检出总大肠菌群，必须进行耐热大肠菌群或大肠埃希氏菌检测。
若水样中检出耐热大肠菌群或大肠埃希氏菌，则说明水质可能受到严重污染，必须采取相应措施。
目前，新国标中对总大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定有三种标准方法，多管发酵法、滤膜法和酶底物法，其中多管发酵法和滤膜法是目前常用的传统检测方法，这两种方法设备简单，试验步骤较为繁琐，对操作人员专业水平要求较高，不利于应急检测，和对水的卫生学状况做出快速评价。
酶底物法检测水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌具有操作方便、快速；干预性结果容易判断等特点，适用于水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的快速检测，对于及时准确的监测饮用水、地表水和水源水粪便污染状况，从而有效预报和控制
流行疾病的发生与传播有重要意义。
本文分别采用国标中的二种检测方法对地表水中的总大肠菌群和大肠埃希氏菌进行检测，通过比对，得出酶底物法不仅适用于地表水检测，还适用于应急检测，易于推广，可以较好的弥补传统方法的不足。
1 实验部分
1.1总大肠菌群和大肠埃希氏菌快速检测法原理
酶底物法是指在选择性培养基上能产生β-半乳糖苷酶（β-D- galactosidase）的细菌群组，该细菌群组能分解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，同时能产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解荧光底物释放出荧光产物，使菌落能够在紫外光下产生特征性荧光，以此技术来检测水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的方法。
1.2 主要设备和试剂
（1）设备
100mL稀释瓶（能耐高压的灭菌玻璃瓶）；1mL、10 mL移液管或移液枪；生化培养箱（36℃±1℃）；高压灭菌器；爱德士（IDEXX）定量培养用无菌塑料定量盘；爱德士（IDEXX）程控定量封口机；6W 波长365nm的紫外灯。
（2）试剂
培养基：MMO-MUG，该实验固定底物技术所需的MMO-MUG培养基采用市售科立得（Colilert）商品化制品。
生理盐水： 8.5g/L 用于稀释样品。
1.3 方法步骤
1.3.1 水样采集和稀释
检测水样需100 mL.如果水样污染严重，可对水样进行稀释。
用灭菌后的无菌玻璃管取10 mL水样加入到90 mL灭菌生理盐水中，必要时可加大稀释度。
1.3.2 定性反应
（1）用100 mL的无菌稀释瓶量取100 mL水样，加入一瓶科立得（Colilert）成品MMO-MUG培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解。
（2）在36±1℃培养箱中培养24小时。
（3）根据表1的说明判断定性检测结果。
表1 定性判读结果
1.3.3 定量分析
（1）用100 mL 的无菌稀释瓶量取100 mL 水样，加入MMO-MUG 培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解。
见图1。
（2）将前述100mL 水样全部倒入51孔无菌定量盘内，以手抚平定量盘背面以赶除孔穴内气泡。
见图2.
（3）用爱德士（IDEXX ）程控定量封口及封口后，在36±1℃ 培养箱中培养24小时。
见图3.
（4）根据定性结果，数出阳性格子数后对照MPN
表得到定量检测结果。
见
图
4。
图1 图2 图3 图4
2 实验结果与分析 2.1 实验结果的判读
将水样培养24h 后进行结果判读，如果结果为可疑阳性，可延长培养时间到28h 进行结果判读，超过28h 之后出现的颜色反应不作为阳性结果。
2.2 实际水样检测结果
本次实验分别采集三个不同地方的地表水进行同一方法（酶底物法）平行比对，不同方法（酶底物法和多管发酵法）比对实验，具体结果如下：
（1）地表水水样平行检测结果（酶底物法）
选取三个不同地表水源水样采用酶底物法进行多次平行检测，具体检测结果见表2。
表2
（2）同一水样不同检测方法比对（酶底物法和多管发酵法）
选取同一地表水源水样进行酶底物法和多管发酵法进行方法比对试验，具体试验结果如下图5、图6。
图5
图6
2.3结果分析和讨论
对酶底物法平行测定结果进行统计学分析，
对酶底物法和多管发酵法测定地表水样两组结果进行T检验，当置信度为95%
时，对照t值表t= ,而t
计值= ，，结果t
计
<t，检验结果说明两种方法不存在显
著性差异。
3 结语。
