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液质法测定婴幼儿米粉中壬基酚和丙烯酰胺王浩;赵丽;于晓瑾;张杉;孙龙;潘红艳【摘要】建立高效液相色谱-质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)测定婴幼儿营养米粉中壬基酚和丙烯酰胺残留的检测方法.样品先经水溶解,再用无水乙醇超声提取,减压浓缩后复溶于5 mL 10％甲醇水溶液.以MGⅢ-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm)分离,流动相为甲醇和水(梯度洗脱),流速0.20 mL/min.同位素内标定量.在该优化条件下,定量限分别为1.5μg/kg和10μg/kg,方法回收率为90.2％～103.1％,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为3.80％～4.87％.结果表明该方法前处理简单,灵敏度高,适合于婴幼儿营养米粉中壬基酚和丙烯酰胺残留的同时快速检测.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2018(039)014【总页数】5页(P168-172)【关键词】液相色谱-质谱联用技术;壬基酚;丙烯酰胺;婴幼儿营养米粉【作者】王浩;赵丽;于晓瑾;张杉;孙龙;潘红艳【作者单位】国家食品质量安全监督检验中心,北京市食品安全监控和风险评估中心,北京100094;国家食品质量安全监督检验中心,北京市食品安全监控和风险评估中心,北京100094;国家食品质量安全监督检验中心,北京市食品安全监控和风险评估中心,北京100094;国家食品质量安全监督检验中心,北京市食品安全监控和风险评估中心,北京100094;国家食品质量安全监督检验中心,北京市食品安全监控和风险评估中心,北京100094;国家食品质量安全监督检验中心,北京市食品安全监控和风险评估中心,北京100094【正文语种】中文婴幼儿营养米粉是以一种或多种谷物（如：小麦、大米、大麦、燕麦、黑麦、玉米等）为主要原料，且谷物占干物质组成的25%以上，添加适量的营养强化剂和（或）其他辅料，经加工制成的适于6月龄以上婴儿和幼儿食用的辅助食品。
超高效液相色谱-串联质谱法测定奶粉和液体奶中的壬基酚作者：方玲来源：《现代食品》 2018年第14期方玲（上海天祥质量技术服务有限公司，上海200233）摘要：建立了超高效液相色谱 - 串联质谱（UPLC-MS/MS）测定奶粉和液态奶中壬基酚的分析方法。
奶粉和液态奶冻干成粉后加壬基酚同位素内标，再经环己烷 - 乙酸乙酯提取，凝胶渗透色谱净化，以水和甲醇作为流动相进行梯度洗脱，以电喷雾离子源（ESI）在负离子多反应监测模式进行测定，采用内标法定量。
方法的检出限为 1 μg/kg，定量限为 3 μg/kg，在0.5 ～ 10 ng/mL 线性关系良好，相关系数为 0.995，方法回收率为80% ～ 95%，RSD ＜ 10%。
该方法实用、快速、灵敏，适用于奶粉和液态奶中壬基酚的测定。
关键词：壬基酚；奶粉；液态奶；超高效液相色谱 - 串联质谱中图分类号：O657.63；TS207.5壬基酚（NP）是一种公认的环境激素，具有雌激素类特性和生物毒性，其对生物体的不良作用包括对内分泌系统、生殖系统和免疫系统的影响以及致癌作用等[1-2] 。
而调查发现，壬基酚大量存在于婴幼儿配方奶粉中，对于主要食用配方奶粉的婴幼儿来说有着极高的安全风险，壬基酚在刚开始发育的婴幼儿身上作用将更加明显，可能对婴幼儿的内分泌系统造成不可逆转的影响，使得婴幼儿性发育速度过快，免疫能力差[3] 。
近年来，国家对婴儿配方食品安全监管日趋严格，除了定期对日常营养指标有抽检外，一些婴儿配方食品中可能存在的有毒及环境污染物质也列入风险监测，其中就包括近年人们越来越视和关注的壬基酚[4] 。
目前，测定壬基酚残留的文献比较多，方法主要是气相 - 气质联用法[5]和液相 - 质谱联用法[6-8]等。
本研究建立了另外一种超高效液相色谱 - 串联质谱（UPLC-MS/MS）测定奶粉和液态奶中壬基酚的分析方法。
1 材料与方法1.1 材料与试剂试验用水，超纯水；甲醇（色谱纯）和乙腈（色谱纯），德国默克公司；乙酸乙酯（色谱纯）、环己烷（色谱纯），美国 Fisher 公司；壬基酚标准品及同位素内标（纯度＞ 99%），Dr. Ehrenstorfer GmbH，上海安谱公司代购。
固相萃取-超高效液相色谱串联质谱法同时测定食品中8种禁用色素近年来，随着食品安全问题的日益突出，对于食品中禁用色素的检测也越来越受到重视。
禁用色素是指在食品中不允许使用的色素，它可能带来食品安全隐患，对消费者的健康造成威胁。
开发一种快速、准确、灵敏的方法来同时测定食品中的禁用色素显得尤为重要。
固相萃取-超高效液相色谱串联质谱法（SPE-UHPLC-MS/MS）是一种应用广泛的方法，能够在较短的时间内对复杂样品进行分析，提高检测的灵敏度和准确性。
本文将介绍使用SPE-UHPLC-MS/MS方法对食品中8种禁用色素进行快速、准确检测的研究。
实验过程中，我们选择了一些常见的食品样品，包括肉制品、酱油、饮料等，以及一些模拟样品作为研究对象。
对样品进行固相萃取处理，使用固相萃取柱提取样品中的禁用色素。
接着，采用超高效液相色谱技术对提取得到的物质进行分离，并利用串联质谱进行检测。
在分析过程中，我们使用了高分辨率的质谱仪，以提高检测的准确性和灵敏度。
通过优化实验条件和仪器参数，我们成功建立了一种同时测定食品中8种禁用色素的SPE-UHPLC-MS/MS分析方法。
通过对实验结果的分析，我们发现这种方法具有较高的灵敏度和准确性。
实验结果表明，即使在低至0.1μg/kg的浓度下，我们也能够准确地检测到样品中的禁用色素。
我们还对方法进行了验证实验，结果表明该方法具有较好的重现性和准确性。
这说明SPE-UHPLC-MS/MS方法可以有效地应用于食品中禁用色素的检测。
我们还对这些禁用色素在不同食品样品中的分布情况进行了研究。
结果表明，不同食品样品中禁用色素的含量和种类有所差异，一些样品中甚至同时检测到了多种禁用色素。
这说明禁用色素对食品安全造成了一定的威胁，需要加强对食品中禁用色素的监管和检测。
本研究成功建立了一种用于食品中禁用色素的快速、准确检测的方法，为食品安全监管提供了重要的技朋支持。
我们也发现食品中禁用色素的问题仍然比较严重，需要引起相关部门和消费者的高度重视。
附件2食品中辛基酚等5种酚类物质的测定BJS 2019131 范围本标准规定了食品中辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、双酚A的液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于婴儿配方食品、畜肉、禽蛋、水产品、罐头食品、植物油中辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、双酚A的测定。
2原理试样中加入同位素内标后，经乙腈提取，离心，取上清液经固相萃取柱净化，采用液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。
3试剂和材料除另行规定外，本实验所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1 甲醇（CH3OH）：质谱级。
3.1.2 乙腈（CH3CN）：质谱级。
3.1.3 氨水（NH4OH）：色谱级。
3.2 试剂配制0.05% 氨水溶液（V/V）：取氨水（3.1.3）0.5mL用水稀释至1000 mL。
3.3 标准品辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、双酚A标准物质和辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、双酚A -D4同位素内标的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1，纯度≥98%。
3.4 标准溶液配制3.4.1标准储备溶液（100 mg/L）：分别称取辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和双酚A标准物质（3.3）10 mg（精确至0.000 1 g），用甲醇（3.1.1）溶解，并转移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，标准储备液浓度为100 mg/L。
溶液转移至试剂瓶中，贮存于-20 ℃冰箱中，有效期12个月。
3.4.2混合标准中间溶液（1 mg/L）：分别准确吸取辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和双酚A标准储备液(100 mg/L)(3.4.1) 1 mL至100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成1 mg/L的混合标准中间溶液，溶液转移至试剂瓶中，置于4 ℃冰箱中保存，有效期3个月。
3.4.3同位素内标标准储备溶液（100 mg/L）：分别称取辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、双酚A -D4同位素内标（3.3）10 mg（精确至0.000 1 g），用甲醇（3.1.1）溶解，并转移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，标准储备液浓度为100 mg/L。
1目的建立该程序为规范壬基酚和双酚A测定提供指导性文件。
2 适用范围本规程适用于婴幼儿食品及食用植物油和包材等双酚A、壬基酚含量的液相色谱-串联质谱法测定。
3 原理试样中(婴幼儿乳粉及粉状原料）的壬基酚和双酚A经乙酸乙酯-环己烷（体积比按1:1）提取后，同位素稀释高效液相色谱-串联质谱技术（UPLC-MS/MS）检测，与标准系列比较定量。
样品（油类）经过凝胶渗透色谱法（GPC）除脂净化（乙酸乙酯:环己烷（1:1，v/v）超声提取），同位素稀释高效液相色谱-串联质谱技术（UPLC-MS/MS）检测，与标准系列比较定量。
样品（膜）经过正己烷浸泡提取，氮吹（42℃）至干，用1ml甲醇定容后，同位素稀释高效液相色谱-串联质谱技术（UPLC-MS/MS）检测，与标准系列比较定量。
4 试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为色谱纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
乙酸乙酯环己烷壬基酚和双酚A 及其同位素内标（NP-d4、BPA-d4）甲醇氨水（分析纯）乙腈标准溶液壬基酚和双酚A标准储备液（ml）：分别称取壬基酚和双酚A的标准品（精确到），溶于甲醇中，用甲醇定容到100ml容量瓶中，放置于4℃冰箱中。
壬基酚和双酚A标准中间夜（2ug/ml）：分别吸取1ml壬基酚和双酚A标准储备液，用甲醇定容至100mL。
壬基酚和双酚A标准工作液：分别吸取壬基酚和双酚A标准中间夜10μl，25μl，50μl，75μl，100μl，150μl，250μl，然后分别加入50μl壬基酚和双酚A的同位素内标物标准中间液，最后加甲醇定容至1ml，配制成工作液浓度分别为20ng/ml，50ng/ml，100ng/ml，150ng/ml，200ng/ml，300ng/ml，500ng/ml。
内标物溶液壬基酚和双酚A同位素内标物标准储备液（ml）：分别称取壬基酚和双酚A的同位素内标物（精确到），溶于甲醇中，用甲醇定容到100ml容量瓶中，放置于4℃冰箱中。
超高效液相色谱-串联质谱法同时测定食品中双酚A和双酚S 曹杰;和佳鸳;易承学;张春玲;蒲彦利;徐虹【摘要】UHPLC-MS/MS was applied to the simultaneous determination of bisphenol A and bisphenol S in foods.The food sample was extracted with acetonitrile and purified with GCB solid phase extraction column.Waters BEH C18chromatographic column was used as stationary phase,and the mixture of water and methanol mixed in different ratios was used as mobile phase in gradient elution.ESI-and multi-reactions monitor mode were adopted in MS/MS.Isotope was used as internal standard.Linearity ranges of bisphenol A and bisphenol S were found in the range of 1.04-52.0,0.23-11.65 μg·L-1respectively,with detection limits(3S/N)of 0.30,0.10 μg·kg-1 respectively.On the base of blank sample,test for recovery was made by standard addition method;values of recovery found were in the range of 94.6%-101%,with RSD′s(n= 6)in the range of 2.5%-6.6%.%采用超高效液相色谱-串联质谱法同时测定食品中双酚A和双酚S的含量.食品样品经乙腈提取和石墨化炭黑吸附剂固相萃取柱净化.以Waters BEH C18色谱柱为分离柱,以不同体积比的水和甲醇的混合液为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾负离子源和多反应监测模式检测.采用同位素内标法定量.双酚A和双酚S的线性范围依次为1.04~52.0,0.23~11.65 μg·L-1,检出限(3S/N)依次为0.30,0.10 μg·kg-1.以空白样品为基体进行加标回收试验,所得回收率为94.6%~101%,测定值的相对标准偏差(n= 6)为2.5%~6.6%.【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2018(054)005【总页数】6页(P573-578)【关键词】超高效液相色谱-串联质谱法;双酚A;双酚S;食品【作者】曹杰;和佳鸳;易承学;张春玲;蒲彦利;徐虹【作者单位】镇江市疾病预防控制中心,镇江212004;镇江市疾病预防控制中心,镇江212004;镇江市疾病预防控制中心,镇江212004;镇江市疾病预防控制中心,镇江212004;镇江市疾病预防控制中心,镇江212004;镇江市疾病预防控制中心,镇江212004【正文语种】中文【中图分类】O657.63双酚A(BPA)学名2,2-二(4-羟基苯基)丙烷,简称二酚基丙烷,是一种典型的外源性内分泌干扰物,也称为环境激素。
利用液相色谱-串联质谱法测定食品中壬基酚残留李庆浩发布时间：2021-08-27T00:10:31.308Z 来源：《中国科技人才》2021年第13期作者：李庆浩[导读] 本文先简单介绍液相色谱-串联质谱法，以具体的试验为例，运用该测定方式分析动物肌肉及鸡蛋、植物油与粮谷等食品里的壬基酚残留量。
以期业内人士讨论参考。
柳州市质量检验检测研究中心 545000摘要：本文先简单介绍液相色谱-串联质谱法，以具体的试验为例，运用该测定方式分析动物肌肉及鸡蛋、植物油与粮谷等食品里的壬基酚残留量。
以期业内人士讨论参考。
关键词：液相色谱-串联质谱法；壬基酚；甲醇引言：壬基酚属于干扰物，若人体摄入过多，会扰动体内的激素，影响合成代谢，继而干扰生殖及免疫等。
而壬基酚一般是依托于微生物，通过降解形成。
因为其存在于水资源及土体中，人体食用带有壬基酚的食品，会影响人体正常机能。
如今，国内在食品包装上规定，不可检测到该种物质特定迁移量。
1液相色谱-串联质谱法该测定方式选用模式，检出限相对偏低，前处理过程比较简便。
因为在检测期间可能出现壬基酚污染的问题，所以需尽可能简化前期准备环节。
此检测方法的原理为：试样里目标化合物，通过有机溶剂的提取，经过萃取净化处理，使用专业仪器进行测定[1]。
2测定试验分析2.1试剂及配制本测定方法使用的实际都是色谱纯，若有特殊会另外说明。
测定试验所用的实际包括甲醇、水、乙腈、乙酸乙酯、环己烷。
其中后两者的混合溶液的配比应为：取的乙酸乙酯以及的环己烷，充分混合即可。
标准品的准备上，分子量为，纯度至少是；的分子量是，纯度需达到及其以上。
标准溶液的配制：一是标准储备液，精准称取标准品，放在的容器内，借助甲醇进行溶解，同时定容到刻度，混合成的储备液。
放在不超过的环境中保存，在一年内稳定。
二是内标储备液，精准称取的，让在的容量瓶内，同样选择甲醇溶解，定容到刻度。
其他处理条件和上一种储备液相同。
三是中间浓度的标准溶液，使用甲醇把标准储备液处理成浓度是中间浓度的标准溶液，放于不超过的环境中保存，稳定期是三个月。
1 壬基酚毒性壬基酚作为一种内分泌干扰物，对人体内分泌系统和免疫系统具有一定的破坏作用，同时也具有一定的致癌作用。
Inoue[1]等测定了12种工业用PVC膜和10种家庭用PVC膜中的壬基酚，并观察了不同PVC膜的溶解情况。
结果表明，工业PVC膜和家庭用PVC膜中均含有壬基酚。
为了研究壬基酚的毒性，李玉白[2]等人对SD 大鼠进行了动物实验。
结果表明，壬基酚降低了其抗氧能力，引起肝脏脂质过氧化损伤。
杨静[3]等人发现在围产期NP暴露不仅直接影响新生鼠胰腺ER的表达，而且会导致大鼠糖代谢紊乱。
在Knaak[4]等人的研究中，雄性大鼠被饲以6.6 mg/kg带有14C标记的壬基酚，然后收集其粪便、尿液和呼吸气体作为放射分析样本。
结果表明，壬基酚可被放射性尿液吸收。
目前，相关研究主要集中在动物和动物细胞方面，但对食品包装材料的研究相对匮乏，相关检测技术有待提高。
2 各国对包装产品中壬基酚的规定在法律层面，欧盟EU No 10/2011规定，食品接触材料向预期接触食品中的迁移物质总量应不高于10 mg/dm2，对于食品接触面积不好计算的包装材料及塑料制品，迁移到食品中的物质总量应低于60 mg/kg，其中三壬基酚亚磷酸酯抗氧剂迁移量应不大于 30 mg/kg。
我国在GB 4806.6-2016《食品安全国家标准 食品接触用塑料树脂》及GB 4806.7-2016《食品安全国家标准 食品接触用塑料材料及制品》中都未对壬基酚做出相关规定，只在GB 9685-2016《食品安全国家标准 食品接触及制品用添加剂使用标准》中规定壬基酚的迁移限量要求为0.01 mg/kg，但是对壬基酚含量没有提及。
3 壬基酚检测方法3.1 高效液相色谱法高效液相色谱（HPLC）是分析高沸点、高相对分子量、不同极性有机化合物的一种准确方法。
郭宗敏[5]等人采用高效液相色谱法测定了玉米油中壬基酚含量。
马强[6]等人采用高效液相色谱-二极管阵列检测器/荧光检测器测定了纺织品和食品包装材料中壬基酚、辛基酚和双酚A的含量。
壬基酚聚氧乙烯醚检测标准
壬基酚聚氧乙烯醚是一种常用的表面活性剂，广泛应用于洗涤剂、清洁剂、乳化剂等领域。
为了保障消费者的健康和安全，需要对壬基酚聚氧乙烯醚进行检测。
本文将介绍壬基酚聚氧乙烯醚的检测标准。
一、壬基酚聚氧乙烯醚的定义
壬基酚聚氧乙烯醚是一种非离子表面活性剂，其化学式为
C9H19C6H4(OCH2CH2)nOH，其中n为聚合度。
二、壬基酚聚氧乙烯醚的检测方法
常用的壬基酚聚氧乙烯醚检测方法包括高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法等。
其中，高效液相色谱法是最常用的方法。
三、壬基酚聚氧乙烯醚的检测标准
1. 国家标准
目前，我国对壬基酚聚氧乙烯醚的检测标准主要有以下两个：
（1）GB/T 26304-2010《洗涤剂中壬基酚聚氧乙烯醚含量的测定》
该标准规定了洗涤剂中壬基酚聚氧乙烯醚的测定方法和限量要求。
其中，壬基酚聚氧乙烯醚的限量为0.5%。
（2）GB/T 23994-2009《清洁剂中壬基酚聚氧乙烯醚含量的测定》
该标准规定了清洁剂中壬基酚聚氧乙烯醚的测定方法和限量要求。
其中，壬基酚聚氧乙烯醚的限量为0.5%。
2. 国际标准
国际上也有相关标准对壬基酚聚氧乙烯醚进行了规定，如ISO 15213-2003《表面活性剂中壬基苯醇聚氧乙烯醚含量的测定》。
四、结论
壬基酚聚氧乙烯醚是一种常用的表面活性剂，其检测标准对于保障消费者的健康和安全至关重要。
目前，我国对于壬基酚聚氧乙烯醚的检测标准已经比较完善，企业可以按照标准进行检测并确保产品质量。
DB北京市食品安全地方标准DB 11/ XXXXX—XXXX食品安全地方标准食品中壬基酚的测定高效液相色谱/串联质谱法（征求意见稿）XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施前言本标准为首次发布。
食品安全地方标准食品中壬基酚的测定高效液相色谱/串联质谱法1 范围本标准规定了多类食品中壬基酚痕量检测的制样方法和高效液相色谱/串联质谱检测方法。
本标准适用于动物肌肉、鸡蛋、奶粉、牛奶、植物油、粮谷等食品中壬基酚含量的液相色谱串联质谱测定和确证。
2 原理试样中的目标化合物经有机溶剂提取，凝胶渗透色谱或在线固相萃取技术净化，高效液相色谱-质谱/质谱仪测定，同位素稀释内标法定量。
3 试剂和材料除非另有说明，本法所用试剂均为色谱纯。
3.1 试剂3.1.1 甲醇(LC-MS级)。
3.1.2 乙腈。
3.1.3 水（LC-MS级）。
3.1.4 乙酸乙酯。
3.1.5 环己烷。
3.2 试剂配制乙酸乙酯-环己烷溶液（1+1，体积比）：取50 mL乙酸乙酯（3.1.4）与50 mL环己烷（3.1.5）混合。
3.3 标准品3.3.1 4-壬基酚（4-NP，分子量：220，纯度≥98.5%）。
3.3.2 4-正壬基酚氘代同位素内标（4-n-NP-d4，分子量:224，纯度≥97.8%）或相当者。
3.4 标准溶液配制3.4.1 标准储备液准确称取10.0 mg的标准品（3.3.1）于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，制成1 mg/mL 的标准储备液，-18 ℃以下保存，在12个月内稳定。
3.4.2 内标储备液准确称取10.0 mg的同位素内标（3.3.2）于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，制成1mg/mL 的标准储备液，-18 ℃以下保存，在12个月内稳定。
3.4.3 中间浓度标准溶液用甲醇将标准储备液（3.4.1）配制成浓度为1 μg/mL的中间浓度标准溶液，4 ℃以下保存，在3个月内稳定。
3.4.4 中间浓度内标溶液用甲醇将内标储备液（3.4.2）配制成浓度为250μg/L的中间浓度内标溶液，4 ℃以下保存，在3个月内稳定。
3.4.5 标准工作溶液根据需要，吸取一定量的中间浓度标准溶液（3.4.3）和中间浓度内标溶液（3.4.4），用甲醇配置成适当浓度的标准工作溶液（0.2、1、5、10、20、50、100和200 μg/L）并使得每个浓度点内标浓度均为10 μg/L。
测定粮谷样品时，标准工作液浓度为0.01、0.02、0.1、0.5、2、10和20 μg/L，内标浓度为1 μg/L。
标准工作溶液均在使用当天配制。
4 仪器和设备4.1 高效液相色谱/串联四极杆质谱仪：配电喷雾离子源。
4.2 在线固相萃取仪：含二元梯度泵或相当者、自动进样器（配100 μL或以上定量环）、柱温箱和在线脱气机。
4.3 电子天平：感量为0.0001 g和0.01 g。
4.4 组织匀浆机。
4.5 漩涡混合器。
4.6 冷冻离心机（最大转速10000 r/min）。
4.7 超声提取仪。
4.8 旋转蒸发仪。
4.9 凝胶渗透色谱仪：配玻璃样品管。
4.10 移液器。
4.11 粉碎机。
5 分析步骤5.1 试样制备5.1.1 样品准备5.1.1.1 动物肌肉从所取全部样品中取出有代表性样品约500 g，剔除筋膜。
用组织匀浆机充分捣碎均匀，装入洁净玻璃容器中，密封并标明标记，于-18 ℃以下冷冻保存，一周内进行处理。
5.1.1.2 鸡蛋从所取全部样品中取出有代表性样品约500 g，去壳后用组织匀浆机充分搅拌均匀，装入洁净玻璃容器中，密封并标明标记，于4 ℃以下保存，两天内进行处理。
5.1.1.3 奶粉及牛奶从所取全部奶粉样品中取出有代表性样品约500 g，混合均匀后装入洁净玻璃容器中，密封并标明标记，于4 ℃以下保存，一周内进行处理。
牛奶样品经冷冻干燥制成粉末，研磨均匀，保藏及处理方法同奶粉样品。
5.1.1.4 植物油将所取样品装入洁净玻璃容器中，密封并标明标记，常温保存，一周内进行处理。
5.1.1.5 粮谷从所取全部样品中取出有代表性样品约500 g，用粉碎机充分粉碎均匀，装入洁净玻璃容器中，密封并标明标记，于4 ℃以下保存，一周内进行处理。
5.1.2 提取5.1.2.1 动物肌肉、鸡蛋、奶粉动物肌肉、鸡蛋样品分别称取4 g（精确至0.01 g）、奶粉试样称取2 g（精确至0.01 g），置于50 mL 玻璃离心管中，加入80μL中间浓度内标溶液（3.4.4）和10 mL乙酸乙酯-环己烷溶液（3.2.1），涡旋混匀，超声提取20 min，于4 ℃3000 r/min 离心15min，上清液尽数转移至凝胶渗透色谱仪上样管中，待净化。
5.1.2.2 植物油取植物油样品0.8 g（精确至0.01 g）于凝胶渗透色谱仪上样管中，加入80μL中间浓度内标溶液（3.4.4）和10 mL乙酸乙酯-环己烷溶液（3.2.1），2000 r/min涡旋混合1 min, 待净化。
5.1.2.3 粮谷称取试样2 g（精确至0.01 g），置于50 mL玻璃离心管中，加入100μL中间浓度内标溶液（3.4.4）和5.0 mL 乙腈（3.1.2），超声提取30 min，4 ℃ 3000 r/min 离心15min，吸取1.0 mL上清液，加水定容至5.0 mL，待净化。
5.1.3 净化5.1.3.1 动物肌肉、鸡蛋、奶粉将5.1.2.1项所得上清液用凝胶渗透色谱仪进行净化。
采用苯乙烯树脂Biobead SX-3（300×10 mm）凝胶色谱柱（或相当柱），流动相为乙酸乙酯-环己烷溶液（3.2.1），流速 3.0 mL/min，进样量5 mL。
收集14～17 min组分于100 mL玻璃茄形瓶中，30 ℃120 r/min 旋转蒸发至干，1 mL甲醇定容后上机检测。
5.1.3.2 植物油将5.1.2.1项所得混合液用于凝胶渗透色谱仪净化，净化步骤同5.1.3.1。
5.1.3.3 粮谷将5.1.2.3项所得定容液5 mL过在线固相萃取-高效液相色谱-质谱/质谱联用系统进行净化和检测。
该系统的程序设置参考条件详见附录A。
5.2 仪器参考条件5.2.1 高效液相色谱条件高效液相色谱条件如下：——色谱柱：Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18柱（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）或其它等效柱；——捕集柱：Waters Isolator Column（P/N：186004476）或其它等效柱，安装于高效液相色谱仪进样阀之前；——流动相：A，甲醇；B，水。
梯度淋洗，参考梯度条件参见附表1；——流速：0.3 mL/min；——柱温：40 ℃；——进样体积：5 μL。
5.2.2 在线固相萃取液相色谱条件在线固相萃取液相色谱条件如下：——在线固相萃取色谱柱：SolEx TM HRP（2.1 mm× 20 mm，12μm~14 μm）或其它等效柱；——分析色谱柱：Waters ACQUITY UPLC TM BEH C18柱（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）或其它等效柱；——流动相：A，甲醇；B，水。
梯度淋洗，参考梯度条件参见附表B；——流速：梯度变化，参考梯度条件参见附表B；——柱温：40 ℃；——进样体积：100 μL。
5.2.3 质谱条件如下质谱条件如下所示：——电离源：电喷雾负离子模式；——毛细管电压：2.8 kV；——射频透镜电压：0 V；——源温度：150 ℃；——脱溶剂气温度：400 ℃；——脱溶剂气流量：1000 L/h；——碰撞室压力：3.1×10-3 mbar；——目标化合物的特征离子参见附表C。
5.3 标准曲线的制作按浓度由小到大的顺序，将标准系列工作溶液（3.4.5）分别注入高效液相色谱/串联质谱仪中，测定壬基酚及其内标峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以目标化合物峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标，绘制标准曲线。
标准溶液的液相色谱-质谱/质谱多反应监测（MRM ）色谱图参见图D 。
5.4 定性及定量 5.4.1 保留时间被测试样中目标化合物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在±2.5%之内。
5.4.2 信噪比待测化合物的定性离子的重构离子色谱峰的信噪比应大于等于3（S/N ≥3），定量离子的重构离子色谱峰的信噪比应大于等于10（S/N ≥3）。
5.4.3 定量离子、定性离子及子离子丰度比目标化合物的质谱定性离子必须出现，至少应包括一个母离子和两个子离子，而且同一检测批次，对同一化合物，样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比，其允许偏差不超过表1规定的范围。
表1 定性时相对离子丰度的最大允许偏差5.5 试样溶液的测定将试样溶液注入高效液相色谱/串联质谱仪中，得到目标化合物峰面积与内标峰面积的比值，根据标准曲线得到待测液中壬基酚的浓度，平行测定次数不少于两次。
6 分析结果的表述按式（1）计算动物肌肉、鸡蛋、奶粉及植物油中壬基酚残留量：100021000)(X ⨯⨯⨯-=m V c c o (1)按式（2）计算粮谷中壬基酚残留量：100051000)(X ⨯⨯⨯-=m V c c o (2)式中：X ——试样中壬基酚残留量，单位：微克每千克（μg/kg ）；c ——由回归曲线计算得到的上机试样溶液中壬基酚的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL ）； c o ——由回归曲线计算得到的过程空白样品中壬基酚的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL ）； V ——试样的定容体积，单位毫升为（mL ）； m ——试样的质量，单位为克（g ）。
7 测定低限按能够准确确认的目标化合物浓度来估计目标化合物在不同样品基质中的测定低限。
样品基质、取样量、色谱分离状况、电噪声水平以及仪器灵敏度均可能对样品的测定低限造成影响，因此噪声水平应从实际样品谱图中获取。
采用上述方法，壬基酚在不同基质中的测定低限分别为动物肌肉0.4μg/kg，鸡蛋0.4μg/kg，奶粉0.8μg/kg，牛奶0.08μg/kg，植物油2.0 μg/kg，粮谷1.0μg/kg。
8 准确度和精密度回收率试验采用三个加标浓度, 每个浓度六个平行。
不同基质中壬基酚的加标回收率在83.7%～119.0%之间，相对标准偏差（RSD）为3.6%～17.0%。
具体见表E。
9 质量控制实验中所用的器具均为玻璃材质，使用前在马弗炉中400℃烘烤4小时。
凝胶渗透色谱仪、在线固相萃取仪及液相色谱串联质谱仪的管线均为不锈钢或聚四氟乙烯材质。
每10个样品做一个溶剂空白。
每一批样品做3个过程空白。
凝胶渗透色谱仪每隔一个月用玉米油及壬基酚标准溶液（浓度为10ppm）进行洗脱的保留时间和峰形确证。
