高尔基体中糖基转移酶的信号介导的动态保留
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某工业大学生物工程学院《细胞生物学》课程试卷(含答案)__________学年第___学期考试类型:(闭卷)考试考试时间:90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题(45分,每题5分)1. 单一核糖体只能合成一种类型的蛋白质。
()答案:错误解析:细胞质所有的核糖体都是相同的,可以类似物任何由特定mRNA翻译的特定酵素。
翻译后,核糖体从mRNA上释放出来,再开始翻译新的mRNA。
2. 膜泡转移不仅沿内质网→高尔基体方向进行顺行转运,也可沿反方向逆行转运。
()答案:正确解析:COPⅠ有被小泡便能进行两个方向的转运。
3. 基因扩增的结果是某些特定基因的拷贝数增加。
()答案:正确解析:基因扩增增加指细胞中某些基因的拷贝数专一性地大量是的现象。
4. 通过选择性剪接产生的一套蛋白质,它们的结构、功能完全不相同。
()答案:错误解析:一般情况下通过剪接所导致的外显子改变并不产生根本不同的蛋白质,而是一套结构相关机构、功能相似的蛋白质异形体。
5. 细胞内一种蛋白质总量是否处于稳定状态,取决于其合成速率、催化活性以及降解速率。
()答案:错误解析:合成蛋白质的含量取决于纯化和降解的比率,而与催化活性无关。
6. 单个基因的突变能够引起转决定。
()答案:错误解析:转决定是一群细胞突变的结果。
7. 载体蛋白,又称为通透酶,它像酶一样,不能改变反应平衡,只能增加达到反应平衡的速度,但是与酶不同的是,载体蛋白不对被转运的分子作任何修饰。
()答案:错误解析:传播方式蛋白与酶不同的是,载体蛋白不对被转运的分子作任何修饰;载体蛋白能改变运输过程的平衡点,加快物质沿自由能减少的方向跨膜运动的。
8. 微管在着丝粒处成核然后连接至动粒。
()答案:错误解析:微管在中心体处成核组装,然后连接到动粒。
9. 染色体上由于“位置效应”形成的非活性区在所有细胞后代中都能稳定的遗传下去。
细胞生物学-5(总分:100.00,做题时间:90分钟)一、填空题(总题数:7,分数:7.00)1.当某种溶酶体酶缺失或溶酶体发生的某个环节出现故障时,细胞的溶酶体内常常充满了未被降解的物质而引起疾病。
这类疾病一般称为 1,它是一种 2遗传病。
(分数:1.00)解析:储积症;隐性2.一种溶酶体贮存病是由于病人缺损N -乙酰葡萄糖胺磷酸转移酶,而不能产生 1,因而溶酶体酶在转运时,不能被受体识别进入溶酶体中,溶酶体中的生物大分子不能被降解。
(分数:1.00)解析:M6P标记3.肝细胞的解毒作用主要是在 1上进行的。
因为上面含有丰富的 2系统,使有害物质转化。
(分数:1.00)解析:光面内质网;氧化还原酶4.光面内质网功能主要包括 1、 2和 3。
而糙面内质网最主要的功能是 4。
(分数:1.00)解析:合成脂类;解毒作用;精原代谢;蛋白质加工和修饰5.通常内体与内吞体结合,在内体 1作用下,内吞体中 2和 3分离, 4形成的膜泡所携带的物质最终与溶酶体结合。
(分数:1.00)解析:酸性环境;配体;受体;内体膜6.在糙面内质网上合成的 1,除进行糖基化修饰外,还可以进行 2、 3和 4等修饰作用,以使新生多肽链折叠成正确的三维结构。
(分数:1.00)解析:蛋白质;羟基化;酰基化;二硫键的形成7.磷脂合成是在光面内质网的 1面上进行的,合成的磷脂向其他细胞部位转移的方式主要是 2和 3。
(分数:1.00)解析:细胞质基质侧;出芽的方式转运到高尔基体;借水溶性载体蛋白在膜之间转移二、选择题(总题数:13,分数:13.00)8.细胞质中合成脂类的重要场所是______。
(分数:1.00)A.糙面内质网B.光面内质网√C.高尔基体D.胞质溶胶解析:9.细胞内具有质子泵的细胞器包括______。
(分数:1.00)A.高尔基器√B.溶酶体C.核糖体D.叶绿体解析:10.细胞质中合成脂类的重要场所是______。
(分数:1.00)A.糙面内质网B.光面内质网√C.高尔基体D.胞质溶胶解析:11.次级溶解体内______。
大学细胞生物学考试(习题卷11)说明:答案和解析在试卷最后第1部分:单项选择题,共88题,每题只有一个正确答案,多选或少选均不得分。
1.[单选题]细胞色素c氧化酶是( )。
A)复合物ⅠB)复合物ⅡC)复合物ⅢD)复合物Ⅳ2.[单选题]有丝分裂器形成于( )。
A)前期B)前中期C)中期D)后期3.[单选题]以下关于细胞共性的描述,不正确的是( )。
A)组成细胞的基本元素是相同的B)所有的细胞包括病毒都具备两种核酸DNA与RNAC)核糖体是任何细胞不可缺少的基本结构D)所有的细胞均采用一分为二的分裂方式进行繁殖4.[单选题]不是细胞清除自由基的方式包括( )A)生化功能区室化B)保护性酶C)抗氧化分子D)氧化酶5.[单选题]暗视野显微镜具有很高的分辨率,可以达到( )A)0.4nmB)4nmC)40nmD)400nm6.[单选题]下列物质中,能抑制微丝解聚的是( )。
[南开大学2008年研;厦门大学2011研]A)秋水仙素B)紫杉醇C)鬼笔环肽D)细胞松弛素B7.[单选题]下列关于囊泡转运错误的说法是( )A)囊泡转运所承载和介导的物质运输,不仅是细胞内外物质交换和信号传递的重要途径,也是细胞物质定向运输的基本形B)特异性识别融合是囊泡准确转运的保障C)囊泡转运是驱动细胞膜及内膜系统功能结构转换和代谢的纽带D)囊泡转运所承载和介导的物质运输是单向的8.[单选题]真核细胞内最大、最重要的细胞器是( ):A)内质网B)高尔基体C)溶酶体D)细胞核9.[单选题]下列蛋白中,不是在糙面内质网上合成的是( )A)分泌性蛋白B)溶酶体酶蛋白C)膜整合蛋白D)肌动蛋白10.[单选题]早衰综合征支持下列哪个学说( )A)自由基学说B)代谢废物积累学说C)基因转录或翻译差异学说D)遗传决定学说11.[单选题]异染色质是( )。
A)高度凝集和转录活跃的B)高度凝集和转录不活跃的C)松散和转录活跃的D)松散和转录不活跃的12.[单选题]通道蛋白()A)运输时需要能量B)对运输的物质没有选择性C)逆浓度梯度转运物质D)是跨膜蛋白构成的亲水通道13.[单选题]哺乳动物成熟的红细胞( )A)没有细胞核B)没有线粒体C)永远失去了分裂能力D)以上都正确14.[单选题]用磷脂酶处理完整的人类红细胞,以下哪种膜脂容易被降解 ( )A)磷脂酰胆碱B)磷脂酰乙醇胺C)磷脂酰丝氨酸D)鞘磷脂15.[单选题]细胞凋亡指是( )A)细胞因增殖而导致的死亡B)细胞因损伤而导致的死亡D)机体细胞程序性的自杀死亡16.[单选题]有丝分裂后期,染色体向两端移动,主要是靠( )的收缩A)星体微管B)极微管C)动粒微管D)游离微管17.[单选题]以实验的方法在小鼠的染色体DNA中插入特定的外源基因是( )技术A)基因剔除小鼠B)转基因小鼠C)基因替换小鼠D)免疫缺陷18.[单选题]染色质包装的一级结构是( ):A)DNA双螺旋B)核小体串珠结构C)螺线管结构D)超螺线管结构19.[单选题]哪一种结构是非膜相结构A)内质网B)线粒体C)高尔基复合体D)染色体E)溶酶体20.[单选题]关于锌指蛋白,不正确的说法是A)每个锌指都有一个锌原子与Cys2/His2相连B)锌指数量为2~13个C)每个锌指间有7~8个氨基酸相连D)分布在细胞膜上E)能与DNA结合21.[单选题]核质比反映了细胞核与细胞体积之间的关系,关于核质比,错误的说法是( )。
安徽医科大学220级护理专业《细胞生物学》期末考试1. 关于通道蛋白介导的运输,叙述错误的是 [单选题] *通道蛋白分子无需与转运物质结合绝大多数通道蛋白形成有选择性开关的多次跨膜通道通道蛋白具备离子的选择性和构象可调控性(正确答案)配体门通道蛋白包括胞外配体门通道和胞内配体门通道2. 在受体介导的胞吞作用中,其大部分受体的命运是 [单选题] *受体不再循环进入溶酶体消化返回原来的质膜结构域(正确答案)参与跨细胞的转运与胞内体融合3. 不是前导肽特性的是 [单选题] *带有较多的碱性氨基酸酸性氨基酸含量多(正确答案)羟基氨基酸比较多具有双亲性4. 高尔基复合体中最具代表性的酶是 [单选题] *磷酸葡萄糖苷酶单胺转移酶(正确答案)细胞色素氧化酶糖基转移酶5. 下列细胞器中,有极性的是 [单选题] *溶酶体微体线粒体高尔基体(正确答案)6. 内质网上进行N-连接的糖基化,第一个糖残基是 [单选题] *半乳糖核苷糖N-乙酰葡萄糖胺(正确答案)N-乙酰半乳糖胺7. 下列说法不正确的是 [单选题] *内质网是细胞内所有膜结构的来源高尔基体膜脂的成分介于内质网和细胞膜之间高尔基体中由形成面到成熟面膜的厚度是逐渐减小的(正确答案)在内质网膜、高尔基体膜和质膜中,质膜上蛋白质的糖基化程度最高8. 在N-连接的糖基化中,与糖链相连接的是 [单选题] *天冬酰胺(正确答案)天冬氨酸脯氨酸羟脯氨酸9. 以下运输途径中,COPI包被参与的是 [单选题] *高尔基体→线粒体高尔基体→溶酶体高尔基体→内质网(正确答案)内质网→高尔基体10. 指导蛋白质到内质网上合成的氨基酸序列称为 [单选题] *导肽信号肽(正确答案)转运肽新生肽11. 反面高尔基体膜囊能将溶酶体酶识别并包装在一起,是因为这些蛋白质具有[单选题] *Ser-Lys-LeuKKXX序列M6P标志(正确答案)KDEL序列12. 以下运输途径中,COPII包被参与的是 [单选题] *质膜→内体高尔基体→溶酶体高尔基体→内质网内质网→高尔基体(正确答案)13. 线粒体外膜的标志酶是 [单选题] *单胺氧化酶(正确答案)腺苷酸激酶细胞色素氧化酶苹果酸脱氢酶14. 内质网的标志酶是 [单选题] *葡萄糖-6-磷酸酶(正确答案)酸性磷酸酶糖基转移酶过氧化氢酶15. 蛋白质从细胞质基质输入到线粒体内膜过程中涉及的膜受体是[单选题] *Tom70/22(正确答案)Tom40Tim22/54Tim9/1016. 过氧化物酶体蛋白分选进入过氧化物酶体过程中涉及到的通道是 [单选题] * Pex5Pex14Pex12/Pex10/Pex2(正确答案)Pex217. 指导蛋白质到内质网上合成的氨基酸序列称为()? [单选题]A、导肽B、信号肽(正确答案)C、转运肽D、新生肽答案解析:无18. 反面高尔基体膜囊能将溶酶体酶识别并包装在一起,是因为这些蛋白质具有()? [单选题]A、Ser-Lys-LeuB、KKXX序列C、M6P标志(正确答案)D、KDEL序列答案解析:无19. ras基因突变引起细胞过度分裂的原因是()? [单选题]A、发生突变后不能水解GTP(正确答案)B、发生突变后不能与GTP结合C、发生突变后不能同GRB和Sos结合D、发生突变后不能同Ras结合答案解析:无20. 在下列通讯系统中,受体可进行自我磷酸化的是()? [单选题]A、鸟苷酸环化酶系统B.酪氨酸蛋白激酶系统(正确答案)C.腺苷酸环化酶系统D.肌醇磷脂系统答案解析:无21. 下列激酶中,除哪项外,都是靶细胞蛋白的丝氨酸或苏氨酸磷酸化。
⾼尔基体⾼尔基体、溶酶体及过氧化物酶体最早发现于1855年,1889年,Golgi⽤银染法,在猫头鹰的神经细胞内观察到了清晰的结构,因此定名为⾼尔基体。
20世纪50年代以后才正确认识它的存在和结构。
⼀、形态与组成是由数个扁平囊泡堆在⼀起形成的⾼度有极性的细胞器。
常分布于内质⽹与细胞膜之间,呈⼸形或半球形。
凸出的⼀⾯对着内质⽹称为形成⾯或顺⾯(cis face)。
凹进的⼀⾯对着质膜称为成熟⾯或反⾯(trans face)。
顺⾯和反⾯都有⼀些或⼤或⼩的运输⼩泡。
扁平囊直径约1m,单层膜构成,中间为囊腔,周缘多呈泡状,4~4~88个扁平囊在⼀起(某些藻类可达⼀⼆⼗个),构成⾼尔基体的主体,即⾼尔基体堆(Golgi stack)。
⼆、功能区隔1、⾼尔基体顺⾯的⽹络结构(cis Golgi network,CGN):是⾼尔基体的⼊⼝区域。
接受由内质⽹合成的物质并分类后转⼊中间膜囊。
2、⾼尔基体中间膜囊(medial Golgi):多数糖基修饰、糖脂的形成以及与⾼尔基体有关的糖合成均发⽣此处。
3、⾼尔基体反⾯的⽹络结构(trans Golgi network,TGN):由反⾯⼀侧的囊泡和⽹管组成,是⾼尔基体的出⼝区域,功能是参与蛋⽩质的分类与包装,最后输出。
4、⾼尔基体周围还存在⼤⼩不等的囊泡⾼尔基体各部分膜囊具有不同的细胞化学反应:①嗜锇反应:cis⾯膜囊被锇酸特异地染⾊;②焦磷酸硫胺素酶(TPP酶):可特异显⽰⾼尔基体的trans⾯的1~2层膜囊;③胞嘧啶单核苷酸酶(CMP酶):可显⽰靠近trans⾯上的⼀些膜囊状和管状结构,CMP酶也是溶酶体的标志酶。
④烟酰胺腺嘌呤⼆核苷磷酸酶(NADP酶):可显⽰⾼尔基体中间⼏层扁平囊;⾼尔基体与细胞⾻架关系密切,在⾮极性细胞中,⾼尔基体分布在微管的负端----微管组织中⼼(MTOC)。
⾼尔基的膜囊上存在马达蛋⽩(cytoplasmic dynein和kinesin)和微丝的马达蛋⽩(myosin)。
第一章绪论一、简答题1. 你认为如何才能学好细胞生物学?2. 如何理解细胞学与细胞生物学,即两者有何差异?3. 如何理解“一切生命的关键问题都要到细胞中去寻找答案”?4. 细胞学说中的“细胞来自于细胞”观点是否具有局限性,如果具有局限性,试解释之。
二、填空题1. 细胞生物学的前身是。
细胞生物学在3个层次上研究细胞基本生命动规律的科学,这三个层次是,,。
2. 二十世纪五十年代,细胞生物学的形成和发展来自于两个方面的研究成果,一是,二是。
第二章细胞的统一性与多样性一、简答题1. 活着的细胞具有哪些特征?根据你的理解,请尽可能给出多的答案。
2. 构成一个细胞必需具有哪些基本结构?3. 古核细胞多生活在极端的生态环境中,其进化地位介于原核细胞和真核细胞之间,该观点是否正确?如正确,试述支持该观点的实验证据?4. 决定细胞体积大小的因素往往与该生物的DNA含量和细胞结构有关,如真核细胞比原核细胞体积大,但是其它因素也影响细胞体积大小,如原生动物的细胞体积比动物和植物细胞体积大,植物细胞比动物细胞大,分化成熟细胞比未分化细胞体积大。
根据你的理解和所掌握的知识,解释上述现象。
5. 真核细胞进化精巧的内膜系统,从而使它们能从外界输入物质,为什么这有利于真核细胞,试给出一个理由。
6. 细胞质量为10-12g,能每20 min分裂一次。
若一个细菌以这种速率进行分裂,试问,欲使细菌质量等于地球质量(6×1024kg),需要多长时间,而细菌大约起源于3.5×109年前,且一直在分裂,试将此事实与你的结果作一比较,解释这个表面上似乎矛盾的说法。
7. 几十亿年前地球上原核细胞和真核细胞的起源,我们一直知之甚少,根据你所掌握的知识,想象并描述地球上原核细胞和真核细胞的起源与进化。
8. 病毒的起源和进化存在两种相反的观点,一种观点认为,从进化的角度来看,应该是先有病毒,才有细胞,因为病毒不具有生命的全部属性,进化等级比细胞低,另一种观点认为先进化形成细胞,后出现病毒,因为病毒依赖于细胞而存活。
黄冈师范学院2012—2013学年度第二学期期末试卷考试课程:细胞生物学考核类型:考试A卷考试形式:闭卷出卷教师:杨谷良考试专业:生科、生工考试班级:生科201101-02班生工201101班一、名词解释(每小题2分,共14分)细胞生物学、原代培养、荧光漂白恢复技术、放射自显影技术、细胞连接、细胞周期、原癌基因二、填空题(每空0.5分,共 10分)1. 根据所处生理阶段的不同,溶酶体可以分为、和。
2. 细胞内膜泡运输的方式主要有三种:,和网格蛋白有被小泡。
3. 目前公认的第二信使主要有、、Ca2+、、。
4. 信号系统的主要特征:、、、。
5. 细胞质骨架主要包括、和三种结构组分。
6. 为了确保染色体的复制和稳定遗传,染色体起码应具备三种功能元件:至少一个、一个和在染色体两个末端必须有。
7. 内质网的主要功能是进行蛋白质和的合成。
三、单项选择题(每小题1分,共15分)1. 以下关于细胞生物学的描述,错误的是()A.是研究细胞的结构、功能和生活史的一门科学B.包括显微、超微、分子等三个层次的研究C.一门高度综合的学科,从细胞的角度认识生命的奥秘D.1838/39年细胞学说提出,标志着细胞生物学的诞生2. 单克隆抗体技术不包括下面哪种技术?()A.细胞融合B.细胞培养C.核移植3. 实验室常培养的HeLa细胞属于()A.成纤维细胞B.宫颈癌上皮细胞C.成纤维细胞D.卵巢细胞4. 透射电子显微镜的分辨力约为()A.0.2 μm.B.0.2 mm.C.0.2 nm.D.0.2 A.5. 疯牛病的病原体是一种()A.蛋白质B.病毒C.类病毒D.支原体6. 植物细胞和细菌的协同运输常利用哪一种的浓度梯度来驱动。
()A.钙离子B.质子C.钠离子D.钾离子7. 肝细胞中的脂褐质是()A.衰老的高尔基体B.衰老的过氧化物酶C.衰老的线粒体D.残体(后溶酶体)8. 信号识别颗粒(signal recognition particle,SRP)是一种()A.核糖核蛋白(ribonucleoprotein)B.糖蛋白(glycoprotein)C.脂蛋白(lipoprotein)D.热休克蛋白(hsp)9. 受体下行调节(receptor down-regulation)指受体()A.被修饰而失活B.被转移到细胞其它部位C.被送到溶酶体中降解10. v-SNAREs存在于()A.靶膜B.质膜C.运输小泡膜D.任何一种膜11. 以下哪一种情况没有ATP合成()A.用高钾低钠溶液浸泡细胞,然后转入低钾高钠溶液B.用酸性溶液浸泡亚线粒体颗粒,然后转入中性溶液C.用溶液碱性浸泡类囊体,然后转入中性溶液12. 绿色植物的细胞内存在几个遗传系统()A.1B.2C.3D.413. 在酵母中称start点,在哺乳动物中称R点(restriction point)的细胞周期检验点(check point)是()A.G1/S检验点B.S期检验点C.G2/M检验点D.中-后期检验点14. 让G1期细胞和S期细胞融合,则G1期细胞的染色体开始()A.解旋B.凝缩C.复制D.分裂15. 过量TDR可将细胞周期阻断在()A.G1期(gap1)B.S期(synthesis phase)C.G2期(gap2)D.M期(mitosis)四、简答题(第1小题8分,第2小题6分,第3小题5分,第4小题6分,共25分)1. 请叙述细胞的基本共性2. 单链RNA病毒可以分为正链RNA病毒和负链RNA病毒,区分的标准是什么?3. 研究质膜的结构与功能时,为什么多选用红细胞作为研究材料?4. 什么叫多聚核糖体?以多聚核糖体的形式行使功能的生物学意义是什么?五、问答题(第1小题12分,第2小题12分,第3小题12分,共36分)1. 如何通过荧光共振能量转移技术研究两个蛋白质之间是否发生相互作用?2. 溶酶体的M6P发生途径3. 蛋白质糖基化的基本类型、特征及生物学意义是什么?黄冈师范学院2012—2013学年度第二学期期末试卷参考答案及评分标准考试课程:细胞生物学考核类型:考试A卷考试形式:闭卷出卷教师:杨谷良考试专业:生科、生工考试班级:生科201101-02班生工201101班一、名词解释(每小题2分,共14分。
糖基转移酶的研究概述邓传怀(河北大学生命科学学院2012生物技术中国保定071000)摘要糖基转移酶在生物体内催化活化的糖连接到不同的受体分子,如蛋白、核酸、寡糖、脂上,糖基化的产物具有很多生物学功能并具有高度的底物专一性。
本文综述了糖基转移酶的种类、功能、特性及其在组合生物合成中的应用与研究前景。
关键词糖基转移酶结构功能应用Outline about research ofglycosyltransferasesDeng Chuanhuai( College of Life Sciences , Biotechnology 2012, Hebei University ,Baoding )Abstract Glycosyltransferase catalyzing the biosynthesis of the sugar attached to different activated receptor molecules, such as proteins, nucleic acids, oligosaccharides, the lipid glycosylation product has many biological functions with a high degree of substrate specificity[1]. In glycosylation project, carried out by enzymatic protein glycosylation and important means of natural glycosylated glycoproteins to study the structure and function of glycoproteins[2].This article provides anoverview of the categories, functions, characteristics of Gtfs, their app lications in combinatorial biosynthesis, and the p rospects for research.Key Words Glycosyltransferase Structure and Function Application糖基转移酶是广泛存在于内质网和高尔基体内的一大类酶类[3],参与体内重要的活性物质如糖蛋白和糖脂中糖链的合成。
东南大学农学院2021级《细胞生物学》课程试卷(含答案)__________学年第___学期考试类型:(闭卷)考试考试时间:90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题(40分,每题5分)1. 荚膜是细胞膜的特殊结构,可以理解成是细胞膜的特殊区域。
()答案:错误解析:荚膜是某些细菌细胞表面的特殊结构,是位于细胞壁表面的一层的黏液物质。
2. 间隙连接属于通讯连接,信号分子可以通过间隙连接的通道,而其他代谢分子不能通过。
()答案:错误解析:间隙连接的通道允许小分子代谢物质和信号分子通过,是细胞间代谢偶联的基础。
代谢偶联现象在体外培养细胞中被证实。
3. 所有的受体都是跨膜蛋白质。
()答案:错误解析:细胞表面的受体多为跨膜糖蛋白,但细胞内的受体如基因宏观调控政策蛋白等不一定基因是。
4. 病毒的增殖是以一分为二的方式进行分裂的。
()答案:错误解析:病毒缺少完整的酶系统,没有核糖体,不具有合成自身成分的原料和能量,为专性寄生型,必须侵入易感的宿主细胞,依靠宿主细胞的酶系统、原料和电磁波复制病毒病毒的核酸,借助宿主细胞的翻译病毒的蛋白质。
病毒这种增殖的工具称为“复制”。
病毒复制的过程分为附着、穿入、脱壳、生物合成及装配释放释放三个步骤,与一分为二的分裂方式完全不同。
5. 在原核细胞中,由DNA转录mRNA和由mRNA翻译蛋白质是同时并几乎在同一部位进行。
()答案:正确解析:真核与原核细胞非常明显的一个显著差是:真核细胞核内转录,细胞质内翻译,具有恰当的阶段性与区域性,而原核的转录与翻译同时、同地进行。
6. α、β、和γ三种类型的肌动蛋白都存在于肌细胞中。
()答案:错误解析:只有α肌动蛋白存在于肌细胞中。
7. 在细胞水平上进行的任何遗传操作,通过细胞培养和植株再生,最终可以将细胞的遗传修饰变成植物的遗传修饰,从而改变整个植物的遗传特性。
()答案:错误解析:植物细胞具有细胞全能性。
高尔基体中糖基转移酶的信号介导的动态保留Linna Tu, William C. S. Tai,* Lu Chen, David K. Banfield†高尔基的糖基转移酶是一种酶家族的有序的修改糖蛋白的具体方式蛋白。
第二类组成,这些膜蛋白的特点是短期暴露细胞质氨基末端尾巴和一腔酶域。
细胞质尾巴发挥本地化的糖基转移酶的作用,外壳蛋白复合物COPI泡介导的逆行运输也在高尔基内工作。
然而,这些酶缺乏的尾巴能识别COPI序列。
在这里,我们发现Vps74p绑定到在多数的酵母细胞质尾巴五聚体主题目前高尔基本地化的糖基转移酶,以及COPI。
我们建议Vps74p保持稳定,高尔基州的糖基转移酶动态定位到COPI通过促进其纳入小泡。
在高尔基体的功能,作为新合成的蛋白质分拣中心和作为糖蛋白的翻译后修饰的位置。
蛋白糖基化是发起的内质网(ER)。
糖蛋白,然后经过由高尔基组本地化广泛的顺序糖基转移酶糖链伸长和阐述介导的。
虽然他们独特的催化糖基化反应,并显示脑池的分布特点,高尔基居民糖基转移酶都是II型膜蛋白组成的短期暴露细胞质N末端(尾)组成一个单独得薄膜区,一个导向主干区域和催化结构域的腔。
Avariety的功能已确定了影响这些酶(1-3):在跨膜区(4-8),特定区的腔面向非催化区(6,8),催化域之间的相互作用(9,10)和细胞质尾(11-13)。
稳态这些酶的分布状态维持一个动态的过程,它涉及到从晚期高尔基到早期生理池的检索,以及与高尔基和内质网,于是他们过境回到池对它们的功能(14,15 )。
虽然糖基转移酶的功能,直接的一个特定的酶一池或另一稳态变化,大概外壳蛋白复合物(COPI),小泡是由其中这些酶大部分被回收(14,16的主要手段)。
然而,高尔基居民糖基转移酶缺乏规范COPI在其细胞质尾巴结合基序,我们设法查明的蛋白质,可以结合这些酶的尾巴,COPI可以促进其纳入小泡。
我们确定了一个基本与高尔基删除相关的杀伤力居民圈套遗传屏幕前部抑制Vps74p(水溶性N -乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体),Sft1p,高尔基内的(17)逆行运输所需的一种蛋白质。
Vps74p是一个蛋白质家族,其中包括哺乳动物蛋白GPP34(GmX33a)和GPP34R(GmX33b)(18-21)的成员。
虽然VPS74删除了对酵母细胞生长无明显影响,vps74D细胞已知非分类的羧肽酶Y,这说明Vps74p参与蛋白质的运输(22)。
我们注意到,vps74D缺陷细胞中的糖基(GPI)的处理锚定蛋白Gas1p。
Gas1p是修改增加了N -和O -连接碳水化合物,因为它穿越途中的高尔基体与细胞表面(图1A)(23)。
在酵母中的Gas1p缺乏N中所涉及的酶菌株命运的比较和Oglycosylation揭示了在缺乏的A1 ,2 - mannosyltransferase,Kre2p(图1,A和B)(24)细胞类似的加工缺陷。
我们考虑到Vps74p可能需要Gas1p运输和审查功能Gas1p贩运单体的可能性,红色荧光蛋白(Gas1p - mRFP)融合蛋白在细胞缺乏Vps74p(25)。
然而,Gas1p位置在vps74D细胞mRFP是无法区别的,在野生型细胞(图1c)。
像GPP34(18),Vps74p是一个外周膜蛋白(图1,D和E),因此,只会有能力直接的物理与细胞质相互作用面向N端11个氨基酸的Kre2p。
我们建造了一个混合体,其中蛋白质的Kre2p的细胞质和跨膜区域融合到N -端mRFP 结束(Kre2CT - mRFP)。
在野生型细胞,Kre2CT - mRFP是局部的无数小点在整个细胞质中,这部分的重叠,绿色荧光蛋白(GFP)融合到高尔基体,居民蛋白质,Rer1p(绿色荧光蛋白- Rer1p)(图1楼)。
此外,由于不Rer1p(26)和Mnn9p糖基转移酶复合物(16),高尔基体和内质网之间的Kre2CT -绿色荧光蛋白循环通过COPI建立依赖机制(图中一)。
在vps74D细胞,但是,Kre2CT - mRFP是定位于液泡(图1)。
这种效果是不是因为在高尔基保留一般不足驻地膜蛋白,因为绿色荧光蛋白本地化Rer1p到高尔基没有受到影响。
这些调查结果是一致的为Vps74p的Kre2p在高尔基体的动态保存的作用,并确定了N -端11个氨基酸的蛋白质为保留足够的调解。
酵母基因中,尤其是在糖基化涉及被删除细胞显示减少了在场的可行性calcofluor白(连续)。
细胞缺乏VPS74更为敏感,连续超过kre2D细胞(图中二),所以我们推断,Vps74p调解可能增加糖基转移酶的高尔基本地化。
当VPS74从表达Mnn9 -绿色荧光蛋白,Mnn2 -绿色荧光蛋白,或Ktr6CTGFP菌株删除,这些蛋白的确非局部化,要么一泡状烟雾(Mnn9 - GFP)的,或对液泡(Mnn2 内腔- GFP和Ktr6CTGFP)(图2A)条。
对齐的N端对酵母糖基转移酶家族成员细胞质尾巴暴露了一个semiconserved motif (F/L)-(L/V)-(S/T)(27)在对家庭的一些成员的(表1)细胞质尾巴。
我们取代Phe4丙氨酸Leu5 - Ser6(滑膜)在Kre2p和评估的命运关于本地化的kre2这些替换(AAA6)的CT -绿色荧光蛋白,以及对突变全长蛋白的能力,kre2(AAA6),来处理Gas1p在kre2D细胞。
kre2(AAA6)的CT -绿色荧光蛋白是非局部化对在野生型细胞(图2B条液泡内部),和细胞表达他们对酶的唯一来源kre2(AAA6)来自缺乏KRE2基因在细胞的功能相同的不能完全处理Gas1p (图2C型)。
我们建议,在Gas1p加工缺陷有关的图的不稳定。
1。
Vps74p 是需要Kre2p在高尔基保留。
(甲)的位置和顺序的糖基转移酶在Gas1p参与行动加工(29)。
(乙)vps74D细胞缺陷类似Gas1p处理缺陷缺乏Kre2p 细胞。
相对位置完全处理,糖化Gas1p(mGas1p)和急诊室驻留Gas1p前体形式(pGas1p)的说明。
(c)运输的Gas1p - mRFP到细胞表面,在vps74D 细胞不受影响。
比例尺,5毫米。
(四)Vps74p结合膜。
全细胞提取物(WCEs)遭到了离心连续弹一点三零零万克(13K)和10万克(10万)和颗粒(P)和上清液(S)的受SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS - PAGE电泳)和染色。
(五)Vps74p是一个外周膜蛋白。
酵母WCEs提取裂解液与单(磅)或1%海卫X100(Tx100),0.1M的碳酸钠pH值11.5(pH值),或1 M氯化钠(盐)在裂解液。
(六)Kre2CT - mRFP而不是绿色荧光蛋白,Rer1p是非局部化在vps74D细胞液泡流明。
有关的试剂和方法的详细说明使用,见(24)。
DIC的,微分干涉对比。
Kre2p在缺乏Vps74p细胞。
事实上,Kre2p明显减少丰富vps74D细胞,以及kre2丰富的野生型细胞非常相似vps74D细胞(图二维)到Kre2p的(AAA6)。
此外,Gas1p处理kre2D细胞表达N -末端Kre2p杂交产生的蛋白质含有类似图案滑膜糖基转移酶[同Anp1异常(表1)]是从野生型细胞(图3a 区分)。
进一步的证据表明,类似主题的财务和后勤系统是很重要的识别获得由Vps74p从酵母双杂交实验,其中野生型或滑膜丙氨酸取代胞质尾的Kre2p [kre2C3(AAA6)]是用来评估Vps74p约束力。
虽然Vps74p是能够绑定到野生型的Kre2p胞质尾序列,发现没有互动和kre2C3之间Vps74p(AAA6)(图3B)款。
Vps74p直接绑定的Kre2p胞质尾,和FLS主题替换减少约束力(图3C 和图。
三)。
该Anp1-Kre2混合蛋白恢复Gas1p加工kre2D细胞(图3a)的无力令人费解,因此我们认为有可能承认的Vps74p glycosyltransferas中,除了滑膜样主题。
最近的一项研究表明,一个在Mnn9p回收二元序列从高尔基重要作用,内质网(13),和我们的酵母双杂交化验,Kre2p稳定性研究和活细胞成像实验的支持,为KR8肽要求在Vps74的Kre2p(图四)依赖保留。
此外,我们发现没有滑膜样内残留的要求极样Kre2p主题,而F4和L5,是必不可少的结合Vps74p (图五)。
因此,Vps74p关于酵母高尔基体结合位点,符合居民的糖基转移酶的(F/L)-(L/I/V)-X-X-(R/K)的一个主题是在16 高尔基居民酶的存在(见表1)。
为了测试这项建议的有效性,我们研究了Mnn5命运绿色荧光蛋白,其中包含一个序列,符合共识(LIXXK6)在vps74D细胞。
与我们的预测,Mnn5 -绿色荧光蛋白相一致的是非局部化在这些细胞中(图六)液泡流明。
Vps74p可以促进或阻止从高尔基这些酶顺贩运或协助其通过高尔基回收池或从高尔基体到急诊室,在这个过程通过COPI大衣(图中一)糖基转移酶介导高尔基保留。
为了区分这些可能性,我们研究了Kre2CT命运绿色荧光蛋白在细胞中的组成性高表达Vps74p。
我们推断,如果Vps74p运作在急诊室回收途径,表达的蛋白质可能将转向稳定的Kre2CT态分布,从高尔基体到内质网绿色荧光蛋白。
这确实是如此; VPS74表达了对稳定的Kre2CT国家定位的影响,绿色荧光蛋白是不是因为在急诊室块或间接出口到逆行运输一般加速度(图三维)。
Vps74p -绿色荧光蛋白在Kre2CT的逆行运输作用也得到了我们的基因研究。
除了VPS74,我们还发现基因编码的高尔基囊泡大衣复杂COPI或基板(图七)组件。
由于Sft1p是在高尔基(17)逆行运输需要,我们推测,作此sft1D细胞缺乏这些基因表达的补偿。
此外,观察基因之间的相互作用和VPS74缺陷突变体在ER -高尔基贩卖(图七)。
鉴于Mnn9p复杂(16)和Kre2CT -绿色荧光蛋白(图中一)周期的电脑操作员之间的高尔基体和ER -依赖性,我们认为有可能Vps74p可能功能的电脑操作员共同调解回收图2。
VPS74的删除导致非局部化和高尔基一个子集糖基转移酶的降解。
(甲)Mnn2 -绿色荧光蛋白,Mnn9 -绿色荧光蛋白,并Ktr6CT -绿色荧光蛋白是vps74D细胞的非局部化。
(乙)氨基酸的替换在Kre2胞质尾FLS6序列[kre2(AAA6)的CT -绿色荧光蛋白]结果的蛋白质非局部化。
(A 和B)比例尺,5毫米。
(丙)细胞表达作为其Kre2p的唯一来源kre2(AAA6)有缺陷的Gas1p处理。
(丁)kre2(AAA6)是不稳定的vps74D细胞。
(+)或(- )表示h后内切糖苷。
在糖化(糖)和deglycosylated(去糖)的Kre2p 形式,见箭头。