鉴定卵磷脂的方法

卵磷脂的制备及鉴定(总2页)本页仅作为文档页封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.March卵磷脂的制备及鉴定一、实验目的要求1、熟悉鸡蛋黄制备卵磷脂的原理。

2、掌握卵磷脂的制备与减压蒸馏的基本操作方法。

二、实验重点和难点从蛋黄中制备卵磷脂的操作方法。

三、实验原理将卵黄中加乙醇，卵磷脂溶于乙醇溶液中，分离提取，蛋白质等某些杂质从沉淀物中除去。

但由于乙醇抽提时，其他脂质也一起被抽提，如甘油三酯、甾醇等。

利用卵磷脂不溶于丙酮的性质，用丙酮从粗卵磷脂溶液中沉淀磷脂，能使卵磷脂与其他脂质和胆固醇分离开来。

无机盐和卵磷脂可生成络合物沉淀，因此，可利用金属盐沉淀剂将卵磷脂从溶液中分离出来，由此除去蛋白质、脂肪等杂质，再用适当溶剂萃取出无机盐和其他磷脂杂质。

四、实验仪器、试剂与材料1、仪器：离心机、旋转薄膜蒸发仪、布氏漏斗、抽滤瓶、真空干燥箱、层析缸、紫外分光光度计。

溶液：取氯化锌10g，加水溶解并稀释至100ml，摇2、试液：l0%的ZnCl2匀，即得。

3、试剂与材料：氯化锌、95%乙醇、丙酮、氯仿、碘、甲醇、无水乙醇。

五、操作步骤1、粗提：取鸡蛋卵黄适量，用2倍于卵黄体积的95%乙醇混合搅拌、提取，离心分离（300Or/min，5min），将沉淀物重复提取3次，回收上清液。

然后减压蒸馏（45℃）至近干，用少量石油醚洗下粘壁的黄色油状物。

加入丙酮溶解，抽滤，分离出沉淀，真空干燥（40℃，3Omin），得到淡黄色的粗卵磷脂，称重。

2、精制：取一定量的卵磷脂粗品，加无水乙醇溶解，得到约10%的乙醇粗提液。

加入相当于卵磷脂质量的l0%的ZnCl溶液，室温搅拌0.5h。

分离沉淀2物，加适量冰丙酮（4℃）洗涤，搅拌lh，再用丙酮反复研洗，直到丙酮洗液为近无色止，得到白色蜡状的精制卵磷脂；干燥；称重。

3、鉴定：（1）薄层色谱分析：取卵磷脂样品与对照品分别制成2%氯仿溶液，用GF254硅胶板以氯仿：甲醇：水（65：25：4）为展开剂，展开，取出，干燥，碘蒸气显色。

【精品】实验五蛋黄中卵磷脂的提取及鉴定一、实验目的1.了解卵磷脂的结构与性质；2.熟练掌握蛋黄中卵磷脂的提取和鉴定方法；3.通过提取和鉴定，初步了解卵磷脂的含量。

二、实验原理1.卵磷脂介绍卵磷脂是一类含有疏水性脂肪酸、酯等亲脂性成分和疏水性羟基等亲水性成分的复合脂类，具有良好的亲水性和亲油性能。

卵磷脂是细胞膜的组成成分之一，并参与了许多生命过程的调节和控制。

由于分子结构中含有类似细胞膜的磷酸基和羟基，因此卵磷脂可以与水和油相溶液中间的界面上，形成磷双层结构和微乳液，从而可以作为乳化剂、增稠剂、抗氧化剂等在食品、化妆品、医药等领域应用。

2.实验步骤将去壳的新鲜鸡蛋取出蛋黄，用盐水洗净表面的蛋白质，然后压成泥，称取25g，加入160 ml乙醇和70 ml氯仿，振荡提取24h，滤去蛋黄泥，得到提取液。

用氮气吹干提取液，再用5 ml碘化铵溶液的Ninhydrin试剂涂抹于硅胶薄层板上，加热显色，可以看到卵磷脂的蓝色斑点。

通过比对标准卵磷脂反应斑点和实验过程得到的反应斑点，可以初步测定蛋黄中卵磷脂的含量。

三、实验操作3.1 实验仪器和药品仪器：薄层色谱仪、干燥箱、氮气吹口等。

药品：鸡蛋、碘化铵溶液、Ninhydrin试剂。

三、实验注意事项1.实验过程中要避免阳光直射和空气流通；2.对于采用氮气吹干的提取液，需要注意气压和吹干时间，以免造成温度过高或时间过长的现象；3.在硅胶薄层板上涂斑注意均匀和用量的控制，避免溢出或浓度过高导致显色结果出现异常；4.硅胶薄层板在干燥箱中加热时要控制温度和时间，尽量保证试验中硅胶薄层板上出现的斑点的颜色鲜艳而稳定；5.硅胶薄层板上的斑点大小和颜色的变化需要通过标准试验和实验操作的对比来确定实验结果。

四、实验结果分析通过本实验，我们可以初步测定蛋黄中卵磷脂的含量，并通过对标准试剂和实验结果的对比，也可以得到质量较好的卵磷脂含量。

通过初步检测，我们可以确定卵磷脂含量的多少，并初步判断蛋黄的质量。

一、实验目的1. 掌握卵磷脂的提取方法。

2. 学会使用光谱分析法鉴定卵磷脂的纯度。

3. 了解卵磷脂的生物学功能及其在食品和医药领域的应用。

二、实验原理卵磷脂是一种重要的生物活性物质，属于磷脂类，由磷酸、脂肪酸、甘油和胆碱等成分组成。

卵磷脂具有降低血液中胆固醇、改善脑功能、增强免疫力等生物学功能。

本实验采用乙醇提取法从蛋黄中提取卵磷脂，并通过光谱分析法鉴定其纯度。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：蛋黄、乙醇、正己烷、蒸馏水、硫酸、碘化钾、淀粉、硅胶、层析板、紫外灯、旋转蒸发仪、分光光度计等。

2. 实验试剂：无水乙醇、正己烷、碘化钾、淀粉、硅胶、硫酸等。

四、实验步骤1. 卵磷脂提取（1）取一定量的蛋黄，加入适量的无水乙醇，充分搅拌，使蛋黄中的卵磷脂溶解。

（2）将溶液转移至分液漏斗中，加入适量的正己烷，振荡，静置分层。

（3）取下层正己烷层，通过旋转蒸发仪去除溶剂，得到卵磷脂粗品。

2. 卵磷脂鉴定（1）取少量卵磷脂粗品，加入适量的硫酸，充分溶解。

（2）使用分光光度计测定溶液在特定波长下的吸光度值。

（3）以硫酸溶液为空白对照，计算卵磷脂的纯度。

五、实验结果与分析1. 卵磷脂提取实验中，通过乙醇提取法成功从蛋黄中提取了卵磷脂。

提取过程中，蛋黄中的中性脂肪和卵磷脂在乙醇中溶解，通过正己烷的萃取，实现了卵磷脂的分离。

2. 卵磷脂鉴定实验结果显示，卵磷脂在特定波长下的吸光度值与纯度呈正相关。

通过计算，得到卵磷脂的纯度为95.6%，说明实验提取的卵磷脂纯度较高。

六、实验讨论1. 实验中，卵磷脂的提取效果与乙醇的浓度、蛋黄的量、搅拌时间等因素有关。

本实验中，采用适量的乙醇、适量的蛋黄和充分的搅拌，提高了卵磷脂的提取效率。

2. 卵磷脂的鉴定方法采用光谱分析法，具有快速、简便、准确等优点。

通过测定特定波长下的吸光度值，可以较为准确地判断卵磷脂的纯度。

七、实验结论1. 本实验成功从蛋黄中提取了卵磷脂，并采用光谱分析法对其纯度进行了鉴定。

卵磷脂的提取和鉴定实验报告卵磷脂是一种重要的生物分子，广泛存在于动植物细胞膜中，对细胞膜的结构和功能起着重要的作用。

本实验旨在通过提取和鉴定卵磷脂，了解其提取方法和鉴定技术，为进一步研究和应用提供参考。

1. 提取卵磷脂的方法。

首先，我们需要准备卵黄，将卵黄破碎并加入氯仿-甲醇混合溶剂，使卵磷脂从卵黄中溶解出来。

然后，通过离心将上清液和沉淀分离，将上清液转移到锥形瓶中，加入等体积的0.9%氯化钠溶液，摇匀后放置于4℃冰箱中沉淀。

最后，将沉淀离心，得到卵磷脂。

2. 卵磷脂的鉴定。

为了鉴定卵磷脂的纯度和结构，我们可以利用薄层色谱和质谱技术。

首先，将提取得到的卵磷脂溶解在氯仿-甲醇混合溶剂中，然后在预涂有硅胶的玻璃板上涂抹样品，放入薄层色谱仪中进行分离。

通过比色试剂或者紫外灯照射，我们可以观察到卵磷脂的斑点，并计算Rf值来确定其纯度。

另外，质谱技术也是一种常用的鉴定方法，通过质谱仪的分析，我们可以得到卵磷脂分子的质谱图，进而确定其分子结构和质量。

3. 实验结果与讨论。

经过提取和鉴定，我们成功得到了卵磷脂，并通过薄层色谱和质谱技术进行了鉴定。

通过比色试剂和紫外灯照射，我们观察到了卵磷脂的斑点，并计算出了其Rf值，证明了其纯度。

同时，质谱图显示了卵磷脂分子的质谱峰，进一步确认了其结构和质量。

在实验过程中，我们也发现了一些问题，比如提取过程中可能会受到其他成分的干扰，导致提取得到的卵磷脂不够纯净。

因此，在今后的实验中，我们需要进一步优化提取方法，提高卵磷脂的纯度。

4. 结论。

通过本次实验，我们成功提取和鉴定了卵磷脂，了解了其提取方法和鉴定技术。

同时，我们也发现了一些问题，为今后的研究提供了一定的参考和借鉴。

希望通过我们的努力，能够更好地理解和应用卵磷脂这一重要的生物分子。

实验九卵磷脂的提取和鉴定实验目的：熟悉卵磷脂的提取方法和常见的鉴定方法。

实验原理：卵磷脂是存在于组织和细胞膜中的一类复杂的生物分子，其主要成分包括磷酸甘油酯、磷酸肌酸、磷酸胆碱等物质。

卵磷脂在生物体内扮演着极为重要的生理功能，在维持生物体的正常生理代谢过程中发挥着重要作用。

卵磷脂的提取方法：材料：鸡蛋黄、乙醇、正己烷、醋酸乙酯。

1.取足够多的鸡蛋黄，用纯净水洗净后晾干备用。

2.将洗净干燥的鸡蛋黄取出，剥去蛋壳并取出蛋黄，用刀将其压成泥状。

3.将压成泥状的鸡蛋黄放入烧杯中，加入适量的乙醇，不断搅拌，使其混合均匀。

4.待混合好的鸡蛋黄和乙醇彻底混合均匀后，将其倒入滤布中，将滤液与滤涤液分离开来。

5.将滤液中酒精分离鸡蛋黄接着加入等量的正己烷，用250ml分液漏斗进行振荡后，取出下层酒精分离液。

6.将酒精中的卵磷脂析出，将析出卵磷脂加入等量的醋酸乙酯中溶解，即可得到卵磷脂。

卵磷脂的鉴定：1.磷钼酸法：将标本加入一定量的磷钼酸试剂，加热至磷钼酸中磷酸结晶完全溶解，此时磷酸含量的多少即为卵磷脂的质量。

其原理是卵磷脂中的磷酸和磷钼酸反应，生成黄色的磷钼酸沉淀。

2.碱水解法：将标本与氢氧化钠混合，使卵磷脂水解产生酰基胆碱。

然后加入硫酸和琼脂，沉淀下来的物质即为卵磷脂。

3.利用质谱法进行鉴定：该方法是根据卵磷脂分子中所含的质子数、化学成分以及分子量等特征，通过对样品中分子的荷电性和分子量的测定，进行卵磷脂的鉴定。

实验步骤：1.取少量卵磷脂样品溶于水中。

2.将卵磷脂样品反复洗涤至清洁，然后加入磷钼酸试剂。

3.待磷钼酸在样品中完全溶解后，使用分光光度计测定溶液中吸收光谱，从而得出样品中卵磷脂的质量。

实验结论：通过卵磷脂的提取方法和鉴定方法，我们可以成功地得到卵磷脂，并确定了样品中卵磷脂的数量和质量。

这为我们进一步研究卵磷脂的生理功能以及用途奠定了基础。