实验方案-细胞表型检测

表型检测：增殖
细胞增殖的定义：
Cell Counting Kit-8 （CCK-8）分析细胞增殖的原理：
CCK-8 测细胞增殖操作流程：
CCK-8 测细胞增殖实验分组设计：
数据处理与绘图：
Tips：
1. 第一次做实验时，先做几个孔摸索接种细胞数量和加入CCK- 8 试剂后的培养时
间。

2. 铺板要混匀：a）可以先往孔里加50ul 培养基，再接种50ul 细胞悬液；b)不时地混
匀细胞悬液，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不等，可以每接种几个孔就混匀一下；c)铺完板后，还可以轻敲板底，帮助细胞分散均匀。

或者用振荡器摇板帮助细胞分散。

3. 培养板周围一圈孔容易蒸发，为了减少误差，培养板的四周只加无菌PBS，而不作
为指标检测孔。

4. 使用新鲜的完全培养基稀释cck8，完全混匀，把待测孔中旧的培养基吸掉，加入配
制好的含cck8 的培养基。

5. 加液时，枪尖贴着孔内壁慢慢加，避免出现气泡。

6. 每次测定都需要在同一块板上设置调零孔。

如果细胞培养时是含药物的，那么调零
孔里也要含有相应的药物。

7. 使用双波长检测，检测波长450nm-490nm，参比波长600-650nm。

450nm 最灵
敏。

CCK-8 法测细胞增殖适用范围：
⏹ 适用于检测贴壁细胞和悬浮细胞数量
⏹ 不能检测组织中的细胞数量
⏹ 不能确认细胞数量的变化是由细胞增殖增多还是细胞凋亡减少引起的，需要配合其
他实验结果进行综合判断
5。

细胞表型检测1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 供试品名称：人胎盘间充质干细胞、猴胎盘间充质干细胞的P4、P6、P8细胞1.1.2 主要试剂B液自配天津昂赛细胞基因工程有限公司D液自配天津昂赛细胞基因工程有限公司血清新西兰胎牛血清(特级) 上海依科赛生物制品有限公司 IgG-FITC BD公司货号：555748CD19-FITC BD公司货号：555412CD34-FITC BD公司货号：555821CD44- FITC BD公司货号：CD31- FITC BD公司货号：IgG-PE BD公司货号：555749CD11b-PE BD公司货号：555483CD45-PE BD公司货号：555388CD73-PE BD公司货号：550257CD90-PE BD公司货号：555596CD105-PE Serotec公司货号：MCA1557PEHLA-DR-PE BD公司货号：555812CD29-PE BD公司货号：1.1.3 主要仪器CO2培养箱离心机超净工作台显微镜1.1.4 主要耗材50ml离心管、5ml/10ml移液管、1.5ml EP管。

1.1.5 实验设计依据通过传代培养，我们可以得到相对纯的间充质干细胞，参考国际细胞治疗协会提出的间充质干细胞表型方面的标准，CD73、CD90和CD105阳性率不低于95％；CD45、CD34、CD11b、CD19 和HLA-DR阳性率不高于2％[1]。

检测在传代过程中的细胞的表型是否会发生变化。

我们设计检测P4代、P6和P8代细胞表型。

1.2 实验方法1.2.1细胞消化1、将原培养液倒净,用移液管取D液10ml冲洗细胞，倒净,此操作重复洗2 次；2、用移液管吸取加入B液2ml,盖上培养瓶盖子,摇晃使B液均匀覆盖瓶底,待细胞从培养壁脱落下来；3、用移液管吸取加入C液0.5ml, 终止消化，再加D液10ml，吹打细胞制成细胞悬液，将细胞悬液收集至离心管中；1.2.2 流式检测方法1、收集细胞，1000rpm离心5min，用D液洗一次，过滤；2、用适量D液将细胞重悬，100μl每管分装到1.5mlEP管中，每管细胞不少于用1×105，在每管中加入4μl要检测表型的抗体,室温避光放置30min；加入1mlD液混匀，离心弃上清，再用1mlD液混匀，离心弃上清，每管加入350-500μl D液重悬，移入流式管待测即可；3、用流式细胞仪检测荧光值,每管计数3000-10000个细胞；4、分析数据。

细胞表型检测实验有哪些？细胞表型是涉及基因和蛋白表达的多个细胞过程的集合体，这些过程导致细胞特定的形态和功能。

细胞表型检测，检测的是如下若干表型：周期、增殖、凋亡、迁移、侵袭、克隆形成、自噬、EMT （Epithelial-Mesenchymal Transition，上皮间充质转化）、血管生成。

在细胞内，将某目的基因敲除、敲降、过表达，建立稳转株后，与对照细胞一起，检测细胞表型，观察每项表型的变化，可推断该目的基因的功能。

细胞周期细胞周期是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程。

细胞内的DNA含量随着细胞周期进程发生周期性变化。

碘化丙啶（propidine iodide, PI）是一种核酸染料，可透过凋亡中晚期的细胞和死细胞，嵌入核酸DNA或RNA双链螺旋的碱基之间，使细胞核红染，并且荧光强度和所嵌入的核酸含量成正比。

细胞周期检测时，首先用RNA 酶将RNA消化排除影响，通过流式细胞术检测PI荧光强度直接反映细胞各时相的DNA分布状态，从而计算出各时相的百分率。

细胞增殖细胞增殖是生物体的重要生命特征。

细胞以分裂的方式进行增殖。

单细胞生物以细胞分裂的方式产生新的个体。

多细胞生物以细胞分裂的方式产生新的细胞，用来补充体内衰老和死亡的细胞；同时，多细胞生物可以由一个受精卵，经过细胞的分裂和分化，最终发育成一个新的多细胞个体。

一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后经过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。

在细胞达到饱和密度后，停止生长，进入平台期，然后退化衰亡。

可以用存活细胞数（万/mL）对培养时间（h或d）作图，得到生长曲线，可准确描述整个过程中细胞数目的动态变化。

目前主要使用MTT、CCK8和Am-blue三种试剂测定细胞生长曲线。

细胞迁移细胞迁移是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。

细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立、细胞体尾部收缩在时空上的交替过程。

流式细胞术分析PMA诱导THP1分化为巨噬细胞的表型特征一、本文概述流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种在液流中快速分析单个细胞的多参数特性的强大技术。

该技术通过标记特异性抗体与细胞表面或内部抗原的结合，结合流式细胞仪的高通量分析能力，使我们能够精确测量细胞群体的表型特征。

在生物医学研究中，流式细胞术广泛应用于细胞分化、细胞周期、细胞凋亡、信号转导等多个领域。

本文旨在利用流式细胞术分析佛波酯（Phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA）诱导人急性单核细胞白血病细胞系THP-1分化为巨噬细胞的表型特征。

我们将通过流式细胞术检测分化过程中细胞表面标志物的表达变化，如CDCD68等，以及细胞内分子如肿瘤坏死因子TNF-α、白介素IL-1β等的表达情况，从而全面揭示PMA诱导THP-1细胞向巨噬细胞分化的分子机制。

通过本文的研究，我们期望能够为深入理解巨噬细胞分化过程中的分子事件提供新的视角，并为开发针对巨噬细胞相关疾病的治疗策略提供理论依据。

本文还将探讨流式细胞术在细胞分化研究中的应用价值，以期为生物医学领域的研究人员提供有益的参考。

二、材料与方法1 细胞系：人单核细胞系THP-1，购自美国ATCC（American Type Culture Collection）。

2 试剂：佛波酯（Phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA），购自Sigma-Aldrich公司；RPMI 1640培养基、胎牛血清（FBS）、青霉素/链霉素双抗，购自Gibco公司；流式细胞术抗体，包括但不限于CDCDHLA-DR等，购自BD Biosciences或eBioscience公司。

3 仪器：流式细胞仪（如FACS Canto II，BD Biosciences）；二氧化碳培养箱；离心机；倒置显微镜。

1 细胞培养：THP-1细胞在含有10%胎牛血清、1%青霉素/链霉素双抗的RPMI 1640培养基中，于37℃、5% CO2的条件下培养。

常用检测肿瘤细胞表型的实验手段及原理
常用检测肿瘤细胞表型的实验手段主要包括细胞免疫表型分析、蛋白质表达诸分析和基因表达诸分析等。

1.细胞免疫表型分析:通过检测肿瘤细胞表面的抗原标记物，可以确定肿瘤细胞的免疫表型，从而了解肿瘤细胞的免疫应答和免疫逃逸机制。

2.蛋白质表达诸分析:通过比较肿瘤细胞和正常细胞之间的蛋白质表达谱，可以发现与肿瘤发生、发展相关的差异表达蛋白质，进-步揭示肿瘤细胞的生物学特征。

3.基因表达诸分析:通过检测肿瘤细胞和正常细胞之间的基因表达诸，可以发现与肿瘤发生、发展相关的差异表达基因，从而了解肿瘤细胞的基因组特征。

这些实验手段的原理主要是基于分子生物学和生物信息学的方法，通过对肿瘤细胞表面或内部的分子进行检测和分析。

从而获得肿瘤细胞的表型信息。

这些信息对于理解肿瘤细胞的生物学特征、寻找新的治疗靶点以及评估治疗效果具有重要意义。

免疫细胞表型检测的方法
免疫细胞表型检测的方法主要包括流式细胞术、免疫组化、免疫印迹、免疫荧光等技术。

其中，流式细胞术是最常用的技术之一。

它通过标记不同的抗原，使不同种类的免疫细胞在荧光染色后产生不同的信号，再通过流式细胞仪对这些信号进行检测和分析。

流式细胞术具有高通量、高灵敏度、高分辨率等优点，能够同时分析多个细胞表面分子的表达情况，可用于分析免疫细胞亚群的分布、测定细胞表面分子的表达量和分子结构等。

但是，其结果受到样本制备、实验条件等多种因素的影响，需要严格控制实验条件，保证结果的准确性和可重复性。

免疫细胞表型检测的方法在免疫学研究、疫苗开发、临床诊断和治疗等方面具有广泛应用。

例如，在肿瘤治疗中，流式细胞术可用于鉴定和分离肿瘤免疫细胞，评估肿瘤免疫监视功能，指导肿瘤免疫治疗策略的选择和调整。

在感染性疾病的诊断中，免疫组化、免疫印迹等技术可用于检测病原体的抗原或抗体，加强病原体的鉴别和定量分析。

- 1 -。

免疫细胞表型检测的方法免疫细胞表型检测是现代医学领域中的一项重要技术。

这项技术可以用来研究人体免疫系统中各种免疫细胞的数量、形态、分布和功能等方面的信息，以帮助医生和研究人员更好地理解免疫系统的工作原理。

在免疫细胞表型检测中，最常用的方法是流式细胞术。

这种技术可以快速、准确地检测出血液或组织中的不同类型免疫细胞，并确定它们的表型特征和功能状态。

流式细胞术通常涉及到以下几个步骤：第一步是样品处理。

在进行流式细胞术之前，需要将待检测的细胞样品进行处理。

对于血液样品，可以通过离心和裂解红细胞等方式将纯化的白细胞分离出来；对于组织样品，则需要进行细胞分离和制备。

第二步是标记物染色。

在进行细胞检测之前，需要将细胞表面的特定蛋白质标记出来，以便后续的检测。

这通常通过使用与蛋白质特异性结合的荧光染料或抗体来完成。

不同的标记物可以用来区分不同类型的免疫细胞。

第三步是细胞检测。

通过将标记物染色的细胞样品注入到流式细胞术仪器中，可以通过检测细胞表面标记物的荧光信号来识别和区分不同类型的细胞。

这项技术可以同时检测数千个细胞，从而提高检测的准确性和效率。

第四步是数据分析。

在进行流式细胞术之后，需要对检测到的细胞数据进行分析和解读。

这种分析通常涉及到利用计算机软件对数据进行处理，以确定不同类型的细胞的数量、分布和功能等信息。

总的来说，免疫细胞表型检测是一种非常重要的技术，它可以帮助医生和研究人员更好地理解和研究免疫系统的工作原理。

通过利用现代的流式细胞术技术，我们可以快速、准确地检测出不同类型的免疫细胞，并确定它们的表型特征和功能状态，为治疗和预防免疫系统相关疾病提供更多有价值的信息。

一、常规指标稻瘟菌菌落生长速度测定挑取活化好的稻瘟菌菌落边缘大小一致的菌块转移至淀粉酵母培养基正中央，倒置培养5 d、7 d后分别测量菌落直径，10 d后菌落照相。

实验进行三次重复，实验结果取平均值并进行统计分析。

稻瘟菌产孢量统计稻瘟菌在米糠培养基上生长7-10 d待菌丝长满整个培养基后，用无菌的载玻片刮去培养基表面的气生菌丝，25℃光照产孢2 d后，用无菌水冲洗表面的孢子及分生孢子梗，擦镜纸过滤得到孢子悬浮液，定容到相同体积后在血球计数板上统计每皿分生孢子的数量。

实验进行三次重复，实验结果取平均值并进行统计分析。

稻瘟菌致病性测定大麦离体接种：取7天叶龄的健康大麦叶片置于保湿处理的9 cm 培养皿中，将产孢培养基上的菌丝块用打孔器打孔后接于大麦叶片上，接种后置于20℃～28℃的保湿筒内避光保湿，24 h后移至24℃～26℃温室中光照、保湿以促进发病，5-7 d后调查大麦发病情况。

水稻活体接种：用塑料花盆盛装较为蓬松且肥沃的土壤育苗，以尿素和过磷酸钙作基肥，出苗后追施两次尿素，以使稻苗生长嫩绿，以利于发病。

待水稻长至三叶一芯期时将塑料花盆移入接种筒内，采用空压机连接喉头喷雾器喷雾接种，稻瘟菌分生孢子浓度控制在1.0 - 2.0×105个/mL。

水稻接种后置于20℃～28℃的保湿筒内避光保湿，24 h后移至24℃～26℃、空气湿度为80%的温室中促进发病，接种后7-10 d，参考国际水稻叶瘟分级标准，以野生型菌株为对照，采用目测法观察并记载各品种发病等级。

若同株叶片上出现不同发病等级，以最高发病等级代表该品种的发病等级。

突变体侵染时附着胞的形态观察观察孢子萌发率、附着胞形态和形成率的方法为在玻片表面滴2O L孢子悬浮液，28℃8 h时统计孢子萌发率，12 h时统计附着胞形成率并观察记载形态是否正常。

实验设3次重复。

洋葱表皮内侵染结构的观察孢子悬浮液浓度为2×104个/mL。

采用24孔细胞培养板，在每孔中加入2 mL 蒸馏水，撕取洋葱表皮外三层的内表皮，大小约5 mm×5 mm，置于蒸馏水上，将孢子悬浮液滴放在洋葱表皮上，液滴大小为10 μL，设置10 个重复，保湿培养，24 h及48 h后显微镜下观察侵染情况。

流式细胞仪细胞表型分析近年来，流式细胞仪凭借其高效准确的细胞表型分析能力，成为生物医学研究和临床诊断中不可或缺的仪器设备。

本文将介绍流式细胞仪的基本原理、使用方法以及在细胞表型分析中的应用。

一、基本原理流式细胞仪利用流体动力学和光学原理，实现对单个细胞的快速、准确分析。

其基本原理可概括为：将细胞悬浮液通过细长的柱状流动池，使细胞以单个颗粒的形式流过光源，光源照射在细胞上后，被激发的荧光和散射信号被光电倍增管接收并转化为电信号，最终通过电子学系统分析和记录。

二、使用方法1. 仪器准备：确保流式细胞仪处于正常工作状态，检查流体通路是否畅通，校正并调节光路。

2. 细胞样本制备：根据实验要求，选择并处理相应的细胞样本。

常见的样本处理包括细胞染色、标记和固定等，以增加细胞的可检测性。

3. 参数设置：根据实验需求，设置相应的参数，如激发波长、光敏元件的灵敏度和门限等。

4. 仪器清洗：使用流式细胞仪专用清洗液进行清洗，避免样本间的交叉污染。

5. 实验操作：将处理后的细胞悬浮液注入仪器流动池，并按照设定参数进行实验操作。

6. 数据获取与分析：流式细胞仪将采集到的信号转化为数字信号并存储，利用相应的软件进行数据分析、细胞计数、细胞分类、细胞周期分析等。

三、在细胞表型分析中的应用1. 免疫表型分析：通过选择性标记细胞表面或细胞内的免疫标记物，如细胞膜受体、蛋白质和胞内信号分子等，可以对免疫细胞的种类、活性和功能进行准确分析。

2. 细胞周期分析：通过标记细胞核的DNA含量，流式细胞仪可以对细胞的周期进行准确测定，包括G0/G1、S和G2/M期等，从而揭示细胞分裂、增殖和凋亡等过程。

3. 细胞凋亡检测：通过荧光标记细胞凋亡相关的指标，如磷脂外翻、DNA断裂和半胱氨酸蛋白酶活性等，流式细胞仪可以对细胞凋亡的程度和机制进行精确分析。

4. 细胞表面标记物表达分析：通过选择性标记细胞表面的特定抗原，流式细胞仪可以对细胞亚群和表面标记物的表达进行定量和定性分析，如免疫表型分析和肿瘤细胞表面标志物检测等。

细胞表型实验前提：设计实验组和对照组目的：研究肿瘤细胞表型特征或在特定情况下（相关基因或蛋白改变）肿瘤细胞的表型变化。

内容：细胞凋亡、周期、迁移、侵袭、迁移、趋化、增殖、生长等。

1.细胞凋亡➢概念：是指细胞在一定的生理或病理条件下，受内在遗传机制的控制自动结束生命的过程。

➢实验方法：检测试剂盒和细胞流式。

➢注意点：进行细胞凋亡实验时，要用不含EDTA的胰酶进行消化。

磷脂酰丝氨酸（PS）正常位于细胞膜内侧，但在细胞凋亡早期，PS可以从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境。

Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。

将Annexin V进行荧光素FITC标记可以用流式细胞仪进行检测。

胰酶中的EDTA能够螯合钙离子，从而削弱Annexin V结合效率，对凋亡实验造成不可控影响。

因此实验时，需要另外购买不含EDTA的胰酶，不能直接使用实验室现有的胰酶。

2.细胞迁移➢目的：测定肿瘤细胞的运动特性方法之一。

➢原理：体外培养单层细胞，人为制造空白区域——“划痕”，细胞逐渐进入空白区使划痕愈合。

➢实验方法：1）培养板接种细胞之前先用marker笔在培养板背面画横线标记（方便定位同一个视野）。

2）Day1, 种板，数量以贴壁后铺满板底为宜（也可在划痕前做其它处理如转染、感染）。

3）Day2，细胞铺满板底后，用10ul枪头比着直尺，垂直于孔板制造细胞划痕，尽量保证各个划痕宽度一致。

4）用PBS冲洗孔板三次，去除划痕产生的细胞碎片，加入有血清/无血清培养基。

注意点：✧根据不同细胞系的贴壁情况，选择是否立刻用PBS清洗。

例如转染后的huh7细胞系划痕后易飘起。

✧关于有血清/无血清培养基的选择：当划痕实验周期比较短的时候（小于48h），或者不考虑增殖对实验造成的影响，可以用有血清培养基培养。

当划痕实验周期比较长的时候，用无血清或者低血清或者用放线菌酮抑制细胞增殖。

5）将培养板放入培养箱培养，每隔8-12小时（至少一天2次）取出拍照。

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流式鉴定细胞表面标记物实验步骤【实验流程】一.前期样品准备二.上机前样品的处理三.流式细胞仪检测四.流式检测数据分析【具体步骤】一.前期样品装备1.MCF-7贴壁细胞的CD44+呈现低表达，可以不需要鉴定该细胞的CD44和CD24了。

但是可以接种一孔的MCF-7 DMSO组作为调节荧光染料PE泄露到FITC通道的补偿参考。

但是一般情况下，PE染料难以染上，故可人为破坏细胞作为阳性对照组，比如加药C60或者用冰冻使细胞死亡。

2.MDA-MB-231贴壁细胞高表达CD44+，接种一孔的MDA-MB-231 DMSO组作为调节荧光染料FITC泄露到PE通道的补偿参考。

3.调整细胞浓度使细胞第二天可以铺满即可。

所以前期样品准备可以按照下表：注：画“——”为调补偿专用，其余为实验组，为避免细胞数目不够，实验组可以设置两个复孔。

若是检测悬浮球，也可以按照以上的组别进行设置，。

二.上机前样品的处理(一)实验步骤1.消化：收集旧培养基并离心，用于终止贴壁细胞的消化。

贴壁细胞用200uL 0.25%胰蛋白酶消化，消化5分钟，然后加2mL离心过的培养基终止消化。

2.离心：800r/min ,离心5min，弃掉上清液。

3.重悬：加2mL PBS重悬，涡旋成单细胞悬液。

将该细胞悬液转移到流式样品管中，离心，弃去上清液。

加300uLPBS重悬细胞。

4.调补偿组加抗体：要设置同型对照和单染，标记FITC-ISO+PE-ISO组，FITC组，PE组。

每组加相应的抗体5~10ｕL。

5.实验组加抗体：每个实验组都要设置同型对照，标记FITC-ISO+PE-ISO组，FITC +PE组。

每组加相应的抗体5~10ｕL。

6.加细胞悬液：分别吸取对应细胞悬液50uL于流式管中（此时细胞数至少为1×106/mL以上）。

常温避光孵育20min。

7.孵育完成后，加2 mL PBS重悬细胞，1000r/min,离心5min。

8.离心后垂直倒掉上清液,再加200uL PBS重悬细胞，进行上机检测。

细胞表型检测 nk实验流程细胞表型检测NK实验流程。

一、实验前的准备。

咱们做这个NK细胞表型检测实验呀，就像准备一场小冒险一样。

首先得把实验要用的家伙事儿都准备好呢。

细胞肯定是不能少的啦，要确保细胞的状态是杠杠好的。

从细胞培养箱里把NK细胞取出来的时候，就感觉像是从宝贝盒子里拿出小宝贝一样，可得小心翼翼的。

还有那些检测试剂，像特异性的抗体之类的，这些就像是给细胞做检查的小工具，必须要保证它们没有过期，而且保存得妥妥当当的。

仪器设备也得提前检查好，比如说流式细胞仪，这可是我们的“大侦探”，要保证它能正常工作，不然实验做到一半它出故障，那可就糟心啦。

二、细胞的处理。

接下来就到细胞处理这个环节啦。

把NK细胞从培养瓶里弄出来的时候，可不能太粗暴哦。

要轻轻地吹打，就像轻轻抚摸一样，让细胞舒舒服服地变成单个的细胞悬液。

然后要计算细胞的数量，这个时候就感觉自己像个小会计一样，数得可认真啦。

细胞数量合适才能保证后续的实验结果准确呢。

如果细胞数量太多或者太少，就好像做菜的时候盐放多了或者放少了一样，味道就不对啦。

三、抗体的标记。

再说说抗体标记这一步吧。

这就像是给NK细胞穿上不同颜色的小衣服，让我们能清楚地识别它们。

把那些特异性的抗体加入到细胞悬液里，然后轻轻地混合均匀。

这个过程要慢慢来，不能着急。

想象一下，就像是给细胞精心打扮一样，每个细胞都要均匀地穿上“小衣服”。

这时候要是不小心把细胞弄破了，那就像把小衣服弄破了一样，可就不好看啦。

而且不同的抗体对应的是不同的细胞表型，就像不同的衣服代表不同的身份一样，可不能搞混咯。

四、流式细胞仪检测。

然后就是把标记好的细胞放到流式细胞仪里检测啦。

这时候就像是把打扮好的细胞们送到一个超级大舞台上，让它们展示自己。

流式细胞仪就会像一个超级摄影师一样，把每个细胞的“模样”都拍下来，然后根据它们穿的“小衣服”，也就是抗体标记，来区分不同的细胞表型。

这个过程中，我们就在旁边等着结果，就像等着自己的孩子表演完节目看成绩一样，心里有点小紧张又有点小期待呢。

B细胞表面标志的检测B细胞具有多种特异性抗原和受体，据此建立了相应的检测方法，一般用以研究B细胞各分化发育阶段的特性，也可藉以鉴定和计数各阶段B细胞在人外周血和淋巴样组织的分布以及疾病时的变化动态，为临床提供诊治相关疾病的有用信息。

一、B细胞表面抗原的检测B细胞表面有CD19、CD20、CD21、CD22和CD29等分化抗原，其中有些系全部B细胞所共有，而有些仅活化B细胞所特有，据此可用相应的CD系列单克隆抗体，通过间接荧光免疫法、酶免疫组化或ABC法加以检测。

健康成年人外周血CD20阳性细胞约占淋巴细胞总数的8％～12％。

二、B细胞受体的检测B细胞表面有膜免疫球蛋白（SmIg）、Fc受体、补体受体、EB病毒受体和小鼠红细胞受体，其中以SmIg为B细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指标。

（一）SmIg的检测大多采用间接荧光免疫法或包括ABC法在内的酶免疫组化法，关键是选用高效价、高特异性和高和力的荧光或酶标记的多价抗人Ig抗体，也可分别用各种类型的Ig，即IgM、IgG、IgA、IgE等抗血清，检测带有各种类型Ig的B细胞，在人外周血中以带有SmIgM的细胞数为最多。

B细胞经荧光标记的抗Ig抗体染色，细胞膜表面呈现的荧光着色可有不同的形式，开始均匀分布呈环状，其后集中在某些部位呈斑点状，然后又可集在一个部位呈帽状，最后可被吞饮入胞浆直至荧光消失。

这一现象是由于淋巴细胞膜由双层类脂组成，上嵌有蛋白分子，在体温条件下，膜呈半液体状，而镶嵌物能在其中移动。

当SmIg抗体发生结合时，由于抗血清为双价，使SmIg出现交联现象，这种抗原与抗体结合物可连成斑点和帽状，时间过长，帽状结合物可脱落或被吞饮而消失，因此染色后，观察时间不能超过30min，或在染色时加叠氮钠防止帽状物形成或被吞饮。

（二）Fc受体和补体受体的检测B细胞表面具有与IgGFc段结合的受体，极易与抗原抗体复合物中抗体Fc段牢固结合，故用相应抗体致敏的红细胞(EA)作批示物，在一定条件下，它能与带Fc受体的B细胞形成EA 花环，故称EA花环试验。