项目名称+实验步骤编号KB2016PRRSV-0201-DC
注：制卡人指方案制定人员；发卡人指对该流程卡终审确认签字人，两人签字有效；接卡人指项目主管或助管；执行人指参与实验操作的人员；收卡人必须是部门主管或助管和发卡人共同签字；归档人由学术委员会常务委员任命二人共同负责签字。
大项目命名原则：公司名称+时间+项目+发卡人（接卡人）名字首字母简称
如：KB2016PRRSV-DZS
子项目命名原则：公司名称+时间+项目+子项目代码+发卡人（接卡人）名字首字母简称如：KB2016PRRSV-01-DZS
流程卡编号原则：公司名称+时间+项目+子项目代码+子项目中试验步骤+发卡人（接卡人）名字首字母简称，如：KB2016PRRSV-0101-DZS
子项目代码需由方案初审通过后经统筹中心备案领取。
网络克隆技术 在很多朋友都想学到网络克隆技术。但是网络上有那么几篇网络克隆的文章，并不是一那么准确。 所以这次小申子决定推出傻瓜教程系列第二弹.网络克隆篇。 本方法经过实验，绝对通过。而且只要网络好，系统没问题，绝对不会出现问题。 恩，好，不多说废话了，现在开始我们的教程。 首先.我们做好一张母盘.并将操作系统目录里的TEMP目录里的东西,以及临时文件夹全部清空.之后将母盘系统备份到另外一块硬盘上.首先确认备份的系统有一个比较大的分区.并确认能装下你的硬盘备份. 将准备好的另外一块硬盘挂在你做好的机器上.之后重新启动到DOS模式,启动GHOST.选择LOCAL→DISK→TO IMAGE.之后选择你的母盘,按回车 '
选择你你准备好的一个足够大的分区 给文件起个名字..按回车
它会问你压缩方式.选NO是不压缩.FAST是快速压缩.HIGH是高压缩率.由于我选的都是HIGH,而且从来没出过什么问题,在这里也推荐你使用.
因为FAT32格式分区最大只能识别2G的文件.所以每到达2G时候,会提示你会重新建立文件.
好了,文件建立完了,我们该建立GHOST服务器了.启动WINDOWS打开GHOSTSRV.EXE文件.我们讲在后面提供下载,也可以在GHOST企业版里找到.之后给服务器起一个名字.我起的名字是shenzi 选择克隆客户端 之后选择你备份到另外一个硬盘的备份文件. 点击接受客户的按扭
好了,现在服务器已经进入接收状态了. 之后到客户端,就是你准备要克地机器.在GHOST.EXE文件所在的目录里,创建一个WATTCP.CFG的文件.此文件是指定IP以及网关的.如果没有此文件GHOSTT会自动扫描DHCP服务器.不推荐使用DHCP服务器.所以我们用DOS的命令,EDIT建立一个WATTCP.CFG的文件吧. 在GHOST.EXE所在的目录里输入edit空格wattcp.cfg
机械加工工艺过程卡填写说明 +%)查表得到，不计准备和终结时间； (15) 设备负荷率=(13 x(4)十(251天x8小时x60分x(12)； (16) 根据需要填写。 (1)过程卡和工序卡的总页数； (2)当前页页序； (3)按零件图填写； (4)按设计任务书填写，包括了备品率和废品率； (5)按零件图填写； (6)填写“铸件”、“锻件”、“圆钢”、“板钢”等； (7)每毛坯可加工同一零件的数量； (8)工序号，可依自然数连续或不连续编号； (9)工序名称如“钻xx孔”、“粗铣xx面”、“攻xx螺纹” 等; (10)填写设备名称如“立钻”； (11)填写设备型号如“ Z5125A ”； (12)填写该工序所需设备数量； (13)基本时间t m和辅助时间t a之和，也称为操作时间。基本时 间取自工序卡。辅助时间按工序卡所表明的工序操作动作，查各动作的时间定额标准并累加得到(未见占基本时间百分比数据) ； (14)工时定额t t按公式t t= (t m+t a) [1+ ( a+? % ]计算。其中布置工作地时间、休息和生理需要时间按它们占作业时间的百分比
机械加工工序卡填写说明 (1 )、( 3)、(4)、( 5)、(6)、(11)同于对工艺过程卡相应内容的说明； (2)采用的切削液名称，如“水”、“水溶液”、“乳化液”等； (7)工序简图。要求：①主要简图是零件在机床上装夹位置的主视图，应有零件的外形轮廓，与本工序无关的结构要素不表示。②完整表示工序定位基 准、夹压力方向和作用面、夹压方式(机械夹紧、液压夹紧、气动夹紧、电磁夹紧)，也可规定夹压位置。③用特粗线条表示出加工面，注明工序尺寸及 公差、加工面的相对位置精度、表面粗糙度等。④表示工序同时装夹零件的数目和排列方式。⑤若绘制简图的位置不够，可另页绘制(该页上保留工序卡表头，其它位置绘简图)，顺序在本工序卡片之后，有页码。 (8)若需要专用夹具，填写夹具名称，如“钻夹具”。否则不填； (9)本工序工序内容序号，依自然数连续编号； (10)工序加工内容和主要技术要求。外协序只写工序名称和主要技术要求，如热处理的硬度和变形要求、电镀的镀层厚度。设计或工艺要求加工面配做配钻时，要在配做配钻前该面的最后工序另起一行注明，如“XX孔与XX 件配钻”； (11)填写设备型号如“ Z5125A ”； (12)专用的填写编号，由于没有编号规则，可填写刀辅具名称，并示以“专用”含义，如“成形铳刀”。标准的填写名称、规格，如“锥柄钻头①14.3X 200”、“ 45°车刀”； (13)填写量检具名称，如“孔位检具”、“卡规”等，已有“专用”含义。 标准的填写名称、规格、精度，如“卡尺0~125, 0.02”、“杠杆表0~0.8, 0.01 ”。 (14)、(15)、(16)、(17)切削用量三要素，由分析计算或查表得到。 (18 )工件切削部分的长度； (19 )直接改变加工对象几何状况或材料性质的工艺过程所消耗的时间，用相应加工方法基本时间计算公式计算。切削加工时，不仅与切削长度、走刀次数和切削用量有关，还与切入量、切出量、刀具尺寸等有关。
网络克隆软件或硬件一般都是利用多播服务来实现的，这些软件有好多，GHOST企业版应该是属于老大了，国产也有几个，但用得人似乎也不多，还原卡里自带的网络克隆挺好，但购买的人太少了，破解的又不能用。 要实现网络客户机的安装维护，网络克隆应该是个非常好的方法，不仅是初始安装还是日后维修维护，都不需要拆机，但没有软驱、光驱几乎是每一个网吧都这样，公司也并不一定都会有的，特别是一些人手一台且人很多的，BOSS都知道如何去省下这笔银子。 所需软件: 1. 3com dabs (提供TFTP无盘启动) 2. ghost 7.5/8.0企业版，为方便英文不好的朋友，在此使用7.5中文版 3. vmware虚拟PC的软件，不要用VIRTUAL PC，它不支持PXE ROM，此软件不是必需，是用来提供虚拟客户，相信很多朋友不会有二台以上机器的。 4. 操作系统，要NT以上的SERVER版，提供DHCP服务，好象XP PRO也有，不记得了。 这次要讲几个软件了，挺辛苦的。 所需硬件： 1. 一台电脑应该是需要了，作为服务器。 2. 客户机，要有支持PXE启动的ROM，写在主板里也可，此文不讲如何去写，如朋友有兴趣，我以后再贴。如果是网吧或公司那就正好了，够你玩得了。这才是实用的，并非测试了。 安装步骤： 这里可能要分三步来完成了， 一、软件安装； 二、服务器设置； 三，软件测试及使用。 先来讲一下预先需安装的软件： 一、VMW ARE WORKSTATION 4.5.1是一个虚拟PC的软件，可以让你一下子多出一个或N个电脑。很多情况下我们要测试系统或者玩黑客软件时及不想搞乱自己的系统来测试软件的，都用到这类软件，之所以选择它，是因其速度还可以，且支持PXE ROM启动，但其需要内存大，如果内存小的朋友请建虚拟机时把内存调小一点，否则启动不了虚拟机。 下载这个软件，直接点那个安装文件即可以了。出现安装向导，点“NEXT”，
密级：论文编号： 中国农业科学院 学位论文 猪嵴病毒全长cDNA感染性克隆的构建及拯救Construction and rescue of Porcine Kobuvirus full-length cDNA infectious clone 硕士研究生：李长龙 指导教师：冯力研究员 申请学位类别：农学硕士 专业：预防兽医学 研究方向：兽医微生物及分子生物学 培养单位：哈尔滨兽医研究所 中国农业科学院研究生院 2014年5月
Secrecy:No. Chinese Academy of Agricultural Sciences Master Dissertation Construction and rescue of Porcine Kobuvirus full-length cDNA infectious clone Ms. Candidate：Li Changlong Advisor：Prof. Feng Li Major：Preventive Veterinary Medicine Specialty：Molecular Biology and Veterinary Microbiology May 2014
独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名：时间：年月日 关于论文使用授权的声明 本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 (保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 论文作者签名：时间：年月日 导师签名：时间：年月日
湖南科技大学机械加工工艺过程卡片产品型号零件图号 产品名称变速箱零件名称变速箱下盖共 3 页第 1 页材料牌号HT200 毛坯种类金属型铸件毛坯外形尺寸754×400×186 每毛坯件数 1 每台件数 1 备注 工序号工序名称工序内容车 间 工 段 设备工艺装备 工时 准终单件 01 铸造金属型铸造毛坯 02 回火热处理 03 探伤检验 04 表面喷丸处理 10 粗铣以顶面为粗基准，粗铣箱体结合面X7010 面铣刀、游标卡尺20 粗铣以箱体结合面为基准，粗铣顶面X7010面铣刀、游标卡尺 30 钻孔结合上下箱体，钻、铰出两个定位孔2-φ12H8组合钻床麻花钻、铰刀、卡尺、塞 规 40 粗铣以结合面为基准两销定位，粗铣前后端面及凸台组合铣床面铣刀、游标卡尺50 粗铣以结合面为基准两销定位，粗铣右端面组合铣床面铣刀、游标卡尺60 半精铣以顶面为基准，半精铣箱体结合面X7010 面铣刀、游标卡尺70 半精铣以结合面为基准两销定位，半精铣前后端面至图纸要求组合铣床面铣刀、游标卡尺80 半精铣以结合面为基准两销定位，半精铣右端面至图纸要求组合铣床面铣刀、游标卡尺90 半精铣以结合面为基准两销定位，半精铣顶面至图纸要求X7010 面铣刀、游标卡尺100 半精铣结合上下箱体，铣结合面凹槽至图纸要求X7010 立铣刀、游标卡尺110 精铣以顶面为基准，精铣箱体结合面至图纸要求X7010 面铣刀、游标卡尺 120 钻顶面孔 以结合面为基准，用心轴穿过φ110，钻14-φ18组装孔；钻顶 面螺纹孔4-M12-6H；钻两肋板中间凸台M20×1.5螺纹孔 组合钻床麻花钻、卡尺、塞规 设计（日校对（日期）审核（日标准化（日会签（日 1 / 26
克隆，科学发展的必然产物 1997年克隆羊“多利”的问世证明了单性繁殖的可能性，这是生物学界的重大事件.“克隆”作为一项新生的科学技术手段，它标志着人类科学技术新的发展阶段的到来，它为人类探索生命的奥秘，研究生命的发生、发展的规律提供了一项重要的技术手段，它与人们业已掌握的其他科技手段一样，应予以充分的肯定。换句话说，克隆是科学发展到一定阶段的必然产物。 Sence the first successful experiment in cloning ，this technique has caught attentions of people all over the world，尤其在是否应该克隆人的问题上。因为它同时也带来了许多法律、道德、伦理上的问题。我的回答是肯定的，因为克隆不仅是一项技术，更重要的是它的使用价值。“克隆”是一种科学技术，人类既然能掌握它，就一定有办法控制它，而不会任由其危害人类社会。 在农业科学方面，可快速培育和扩繁抗病力强、生产性能高的优良动物；可以研究动物的发病机理，寻求新的有效治疗药物。人们利用“克隆”技术培育出大量具有抗旱、抗倒伏、抗病虫害的优质高产品种，大大提高了粮食产量。克隆技术对保护物种特别是珍稀、濒危物种来讲是一个福音，具有很大的应用前景。从生物学的角度看，这也是克隆技术最有价值的地方之一。 在当代，医生几乎能在所有人类器官和组织上施行移植手术。但就科学技术而言，器官移植中的排斥反应仍是最为头痛的事。排斥反应的原因是组织不配型导致相容性差。如果把“克隆人”的器官提供给
“原版人”，作器官移植之用，则绝对没有排斥反应之虑，因为二者基因相配，组织也相配。 这对于不孕不育家庭，单亲家庭和同性家庭来说也是个不错的选择。 克隆技术还可用来大量繁殖有价值的基因，例如，在医学方面，人们正是通过“克隆”技术生产出治疗糖尿病的胰岛素、使侏儒症患者重新长高的生长激素和能抗多种病毒感染的干挠素，等名贵药物。 Cloning,the inevitable product of scientific development The arrival of cloning Dolly in February 1997 proved the possibility of parthenogenesis, which was a major event in the biological sciences. As a new techniques, cloning marks the arrival of a new stage of development of human science and technology. And it is also an important technique to explore the mysteries of life for humans, study the law of the occurrence and development of life. Like other technological means mastered by people, cloning should be fully affirmed. In other words, cloning is the inevitable outcome of the scientific development to a certain stage. Sence the first successful experiments in cloning, this technique has caught attentions of people all over the world, Especially in the problem of whether we should clone human beings. Because it also gives rise to a lot of problems in law, morality, ethics and so on. My answer is
《DNA复制、转录与翻译练习》参考答案 一、名词解释 （略） 二、问答题 1、答：DNA在复制时首先两条链之间的氢键断裂两条链分开，然后以每一条链分别做模板各自合成一条新的DNA链，这样新合成的子代DNA分子中一条链来自亲代DNA，另一条链是新合成的，这种复制方式为半保留复制(semiconservative replication)。 并非所有的DNA复制都以半保留的方式进行，但双链DNA通常都以半保留方式复制。 2、答：在E.coli中，共发现了3种DNA聚合酶，即DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。 DNA聚合酶Ⅰ是个多功能酶，具有5’--→3’聚合功能；3’--→5’外切功能以及3’--→5’外切功能。DNA聚合酶Ⅱ与DNA聚合酶Ⅰ功能相似，但没有5’--→3’外切功能。 DNA聚合酶Ⅲ与DNA聚合酶Ⅱ功能相同，但其聚合活性比DNA聚合酶Ⅰ高1000倍，是E.coliDNA复制中的最主要酶。 DNA聚合酶Ⅳ和Ⅴ是在1999年才被发现的,它涉及DNA的错误倾向修复(errorprone repair)。当DNA受到较严重损伤时, 即可诱导产生这两个酶,使修复缺乏准确性(accuracy),因而出现高突变率。其生物学意义在于高突变率虽会杀死许多细胞,但至少可以克服复制障碍, 使少数突变的细胞得以存活。 3、答：DNA的双螺旋结构中的两条链是反向平行的，当复制开始解链时，亲代DNA分子中一条母链的方向为5′～3′，另一条母链的方向为3′～5′。DNA聚合酶只能催化5′～3′合成方向。在以3′～5′方向的母链为模板时，复制合成出一条5′～3′方向的前导链，前导链的前进方向与复制叉的行进方向一致，前导链的合成是连续进行的。而另一条母链仍以3′～5′方向作为模板，复制合成一条5′～3′方向的随从链，因此随从链会成方向是与复制叉的行进方向相反的。随从链的合成是不连续进行的，先合成许多片段，即冈崎片段。最后各段再连接成为一条长链。由于前导链的合成连续进行的，而随从链的合成是不连续进行的，所以从总体上看DNA的复制是半不连续复制。 DNA复制时，在滞后链上，较短的DNA片段（大约1000-2000个核苷酸）是在分段合成引物的基础上，非连续合成的，这些不连续的DNA片段最先由日本科学家冈崎在电子显微镜下发现，故称为冈崎片断(Okazaki fragment)。 引发体在滞后链上沿5'→3'方向不停的移动(这是一种相对移动，也可能是滞后链模板在移动)，在一定距离上反复合成RNA引物。DNA聚合酶Ⅲ从RNA引物的3，-OH 端合成冈崎片段。 4、答：DNA复制起始的体外实验表明需要6种蛋白,Dna A、Dna B、Dna C、组蛋白样蛋白(HU)回旋酶及单链结合蛋白(SSB)形成起始复合物。Dna A单体首先结合到复制起始点上4个含9 bp 的重复顺序上。然后20～40个Dna A单体结合到复制起始点形成一个核心。在Dna A蛋白的作用下位于复制起始点右侧的3个含13 bp的重复顺序开始解链形成开放复合体。Dna B/Dna C在复制起始区充当了起始的引发体（primosome）。Dna B?Dna C复合体转变为Dna B六聚物，形成复制叉。Dna B提供解旋酶（helicase）活性，使DNA解旋，可能它识别复制叉上潜在的单链结构，从13 bp的重复顺序上取代出Dna A，并开始解螺旋。Dna B在复制起始区域以很少的量（1－2六聚物）担负着催化作用。在那儿Dna B还具有激活Dna G引发酶的能力。解旋反应还需要另外两种蛋白，旋转酶（Gyrase）和SSB（单链结合蛋白）。旋转酶也就是Top Ⅱ，其作用是解
将外源基因通过体外重组后导入受体细胞，使该基因能在受体细胞内复制、转录、翻译和表达，整个操作称为基因重组技术。要实施该技术必须具备四大要素：工具酶、载体、基因和受体（宿主）细胞。 22楼 一、工具酶： 基因工程的基本技术是人工进行基因的剪切、拼接、组合。基因是一段具有一定功能的DNA分子，要把不同基因的DNA 线形分子片段准确地切出来，需要各种限制性核酸内切酶（restriction endonuclease）；要把不同片段连接起来，需要DNA 连接酶（DNA ligase）；要合成基因或其中的一个片段，需要DNA 聚合酶（DNA polymerase）等。因此，酶是DNA 重组技术中必不可少的工具，基因工程中所用的酶统称为工具酶。 工具酶就其用途而言可分为三大类：限制性内切酶、连接酶和修饰酶，其中限制性内切酶为一大类酶（达上千种）。基因重组正是利用了这些工具酶对DNA 分子进行一系列的酶催化反应，才得以在体外实现DNA 分子的切割和连接。因此，工具酶的发现为基因操作提供了十分重要的技术基础。首先重点介绍限制性内切酶（restriction endonucleases＝restriction enzyme），其他酶在相关内容中再一一介绍。 从分子生物学发展历史看，核酸限制性内切酶的发现和应用对该学科发展所起的作用是难以估量的。首先使外源基因在大肠杆菌中克隆的实验是在1973 年完成的，Stanley Cohen，Herbert Boyer（见补充资料2.1）正是利用了限制性内切酶这一分子手术刀才得以实现。 核酸限制性内切酶是原核生物中的一类能识别双链DNA 中特定碱基顺序的核酸水解酶。原核生物的限制和修饰系统犹如高等动物的免疫系统，依靠一对识别相同序列的核酸限制性内切酶和甲基化酶活性来对抗外来DNA 的入侵：当自身的基因组在复制完成下轮DNA 复制尚未开始前就被甲基化酶修饰(使某特定序列 甲基化), 避免了被对应的限制性内切酶的识别和水解，而入侵的噬菌体由于未来得及修饰而被破坏，从而保护细菌不受噬菌体的感染。各种细菌都能合成一种或几种顺序专一的核酸内切酶。这些酶的功能就是通过特异性序列的识别后进行DNA 的切割，来限制外源性DNA 侵入自身的细胞内，所以称这种核酸内切酶为限制酶。 根据酶的识别切割序列的特性、催化条件以及是否具有修饰酶的活性而分成三类：I、II、III类： 第I 类限制性内切酶是双功能酶，具有修饰活性（甲基化）和内切酶活性，作用时需要消耗ATP，能识别专一的核苷酸顺序，并在距离识别点大约1000 个核苷酸对处切割DNA 分子中的双链，但是切割的核苷酸顺序没有专一性，是随机的。 第II 类限制性内切酶只具有核酸内切酶活性，能识别专一的具有回文结构的核苷酸顺序，并在该顺序内的固定位置上切割双链，作用时不需要水解ATP 提供能量。 第III 类限制性内切酶也同时具有修饰活性和内切酶活性，具有专一的识别顺序，但不是对称的回文顺序。它在识别顺序旁边24-26 个核苷酸对的固定位置上切割双链，但这几个核苷酸对则是任意的。
07机制3班机械加工工艺过程卡片产品型号零件图号KCSJ-01 产品名称零件名称手柄共 1 页第 1 页材料牌号45 毛坯种类锻件毛坯外形尺寸每毛坯件数 1 每台件数 1 备注年产1万 工序号工序 名称工序内容车间工段设备工艺装备 工时 准终单件 10 模锻毛坯锻加工 20 粗铣端面B 粗铣端面B保证厚度尺寸28 机加工 铣工X52 专用夹具，端铣刀，游标卡尺 30 粗铣端面A 粗铣端面B保证厚度尺寸27 机加工 铣工X52 专用夹具，端铣刀，游标卡尺 40 精铣端面B 精铣端面B保证厚度尺寸26.5 机加工 铣工X52 专用夹具，端铣刀，游标卡尺 50 精铣端面A 精铣端面B保证厚度尺寸26 机加工 铣工X52 专用夹具，端铣刀，游标卡尺 60 粗镗小头孔粗镗小头孔到尺寸φ21.2H11机加工镗工T68 专用夹具，镗刀，游标卡尺 70 粗镗大头孔粗镗大头孔到尺寸φ37H11，保证中心 距128±0.2 机加工镗工 T68 专用夹具，镗刀，游标卡尺 80 粗铣小头槽粗铣小头槽槽宽9H11 机加工铣工X62W 专用夹具，锯片铣刀，游标卡尺 90 精铣小头槽精铣小头槽槽宽9H11 机加工铣工X62W 专用夹具，锯片铣刀，游标卡尺 100 钻大头径向孔钻大头径向孔φ4机加工钻工 Z525 专用夹具，麻花钻，游标卡尺 110 精镗小头孔精镗小头孔至尺寸φ22H9机加工 镗工 T68 专用夹具，镗刀，游标卡尺 120 精镗大头孔精镗大头孔至尺寸φ38H9机加工 镗工 T68 专用夹具，镗刀，游标卡尺 130 倒角倒大小头孔角，去毛刺机加工 钻工 Z525 专用夹具，倒角钻头，游标卡尺 140 终检入库检验零件尺寸 设计（日期）校对（日期）审核（日期）标准化（日期）会签（日期） 标记处数 更改 文件号 签字日期标记处数 更改 文件号 签字日期
关于细胞克隆的简述 姓名：付中凯班级：计本1102 学号：20113708 摘要：克隆技术即无性繁殖技术。通常的有性生殖是由雌雄交配，精子和卵子结合发育成胚胎，经妊娠后产出新的个体。克隆技术不需要雌雄交配，不需要精子和卵子的结合，只需从动物身上提取一个单细胞，用人工的方法将其培养成胚胎，再将胚胎植入雌性动物体内，就可孕育出新的个体。这种以单细胞培养出来的克隆动物，具有与单细胞供体完全相同的特征，是单细胞供体的“复制品”。关键词：无性繁殖两面性生物技术 引言：克隆是无性生殖所以它并不是根据基因重组、基因突变、染色体变异等原理。克隆动物就是将已有的动物，以人工无性繁殖的形式通过现代生物技术而创造的“生命”。早在20世纪50年代，人们就已经开始克隆动物研究了。1997年，克隆羊“多莉”的诞生标志着这一技术的重大发展。英国英格兰科学家和美国俄勒冈科学家先后培养出了“克隆羊”多利和“克隆猴”。克隆技术的成功，被人们称为“历史性的事件，科学的创举”。有人甚至认为，克隆技术可以同当年原子弹的问世相提并论。 克隆技术又称为“生物放大技术”，它经历了三个发展时期：第一个时期是微生物克隆时期，即用一个细菌可以很快复制出成千上万个和它一模一样的细菌，从而变成一个细菌群；第二个时期是生物技术克隆时期，比如用遗传基因一DNA进行克隆；第三个时期是动物克隆时期，即由一个细胞克隆成一个动物。克隆绵羊“多利”就是由一头母羊的体细胞克隆而来，使用的便是动物克隆技术。“自然界的许多动物，在正常情况下都是依靠父方产生的雄性细胞(精子)与母方产生的雌性细胞(卵子)融合(受精)成受精卵(合子)，再由受精卵经过一系列细胞分裂长成胚胎，最终形成新的个体。这种依靠父母双方提供性细胞、并经两性细胞融合产生后代的繁殖方法就叫有性繁殖。但是，如果我们用外科手术将一个胚胎分割成两块、四块、八块……最后通过特殊的方法使一个胚胎长成两个、四个、八个……生物体，这些生物体就是克隆个体。而这两个、四个、八个……个体就叫做无性繁殖系(也叫克隆)。” 1.细胞克隆-无性生殖的神奇 1.1利用供体细胞核与去核卵母细胞的融合形成胚胎，导入动物子宫使其怀孕最终产下幼体。 先将含有遗传物质的供体细胞的核移植到去除了细胞核的卵细胞中，利用微电流刺激等使两者融合为一体，然后促使这一新细胞分裂繁殖发育成胚胎，当胚胎发育到一定程度后，再被植入动物子宫中使动物怀孕，便可产下与提供细胞者基因相同的动物。 1.2提取两个或多个人的基因细胞进行组合形成胚胎,植入受体子宫，最终产出幼体。
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设计（日期）校对（日期）审核（日期）标准化（日期）会签（日期）标记处数更改文件号签字日期标记处数更改文件号签字日期 科技大学机械加工工序卡片产品型号零件图号 产品名称变速箱零件名称变速箱下盖共22 页第 1 页 车间工序号工序名称材料牌号 10 粗铣HT200 毛坯种类毛坯外形尺寸每毛坯可制件数每台件数 金属型铸件754×400×186 1 1 设备名称设备型号设备编号同时加工件数 双立轴圆工作台铣床X7010 夹具编号夹具名称切削液 工位器具编号工位器具名称工序工时(分) 准终单件 . 资料. .. .
工步号工步容工艺装备 主轴转速切削速度进给量被吃刀量进给 次数 工时/min r/min m/min mm/z mm 机动辅助 1 以顶面为粗基准，粗铣箱体结合面硬质合金面铣刀、游标卡尺125 157 0.24 5.0 1 1.90 设计（日期）校对（日期）审核（日期）标准化（日期）会签（日期）标记处数更改文件号签字日期标记处数更改文件号签字日期 科技大学机械加工工序卡片产品型号零件图号 产品名称变速箱零件名称变速箱下盖共22 页第 2 页 车间工序号工序名称材料牌号 20 粗铣HT200 毛坯种类毛坯外形尺寸每毛坯可制件数每台件数 金属型铸件754×400×186 1 1 设备名称设备型号设备编号同时加工件数 双立轴圆工作台铣床X7010 夹具编号夹具名称切削液 工位器具编号工位器具名称工序工时(分) 准终单件 . 资料. .. .
工步号工步容工艺装备 主轴转速切削速度进给量被吃刀量进给 次数 工时/min r/min m/min mm/z mm 机动辅助 1 以箱体结合面为基准，粗铣顶面硬质合金面铣刀、游标卡尺125 157 0.24 5 1 1.90 设计（日期）校对（日期）审核（日期）标准化（日期）会签（日期）标记处数更改文件号签字日期标记处数更改文件号签字日期 科技大学机械加工工序卡片产品型号零件图号 产品名称变速箱零件名称变速箱下盖共22 页第 3 页 车间工序号工序名称材料牌号 30 钻孔HT200 毛坯种类毛坯外形尺寸每毛坯可制件数每台件数 金属型铸件754×400×186 1 1 设备名称设备型号设备编号同时加工件数 组合钻床 夹具编号夹具名称切削液 工位器具编号工位器具名称工序工时(分) 准终单件 . 资料. .. .
压力容器制造工序过程卡 产品名称：制造编号：编制：审核：
总装工序过程卡产品名称： 工令号材料牌 号 标准 容器 类别 图号 检验 序号工序名称工序内容及工序要求操作责任人 项目结论签字 1筒节组焊筒节与筒节组对，按焊接工艺施焊，控制环缝错边量b≤ mm,纵向棱角度e≤ mm,环缝 %X射线 探伤，合格 2封头组焊封头与筒体组对，按焊接工艺施焊， 控制环缝错边量b≤mm， 环缝 %X射线探伤，合格 错边量 3整体划线按设备总图及管口方位图划出各接 管、支座方位及位置，注意使开孔 及支座位置避开筒体纵缝 开口方位及位置 4内件组对按图纸要求组对内件，尺寸方位符 合要求，按图纸要求焊接 方位及位置 5人孔法兰与 人孔接管组 焊 法兰与接管组对，控制环缝错边量 b≤mm，法兰面与接管轴线垂 直偏差c≤mm,按焊接工艺施 几何尺寸
焊，环缝%X射线探伤， 合格 总装工序过程卡产品名称： 工令号材料牌 号 标准 容器 类别 图号 检验 序号工序名称工序内容及工序要求操作责任人 项目结论签字 6接管法兰与 接管组焊 接管法兰与接管组对，控制环缝错边量b≤ mm，法兰面与接管轴线垂直偏差c≤法兰外 径1/100且不大于3mm，按焊接工艺施焊， 环缝 %X射线探伤，合格 几何尺寸 7设备法兰与 筒体组焊 设备法兰与筒体组对，控制环缝错边量 b≤mm，法兰面与筒体轴线垂直偏差c ≤mm ,按焊接工艺施焊，环缝%X射 线探伤，合格 几何尺寸 8筒体与人孔 组件组焊 划出人孔法兰中心线，与筒体中心线对（跨） 中布置，并使法兰平面与壳体中心线的水平 和垂直偏差≤ mm，按焊接工艺施焊，角 焊缝腰高H＝ mm 9接管法兰与按管法兰与筒体组对，法兰面与接管轴线垂方位及位置
网管必学：诚龙网维全自动PXE网刻工具图文教程 软件界面 设置完毕后，我们单击这里的“开始网克”，出现以下提示时，单击"确定"，服务器就准备完毕了； Ghost网克服务器 二、客户机的设置
现在的主板中，基本上都已经集成了网络启动功能，因此，我们只需要在BIOS 中，将第一启动设置为网卡启动就可以了； （小知识：有关主板如何设置网络启动，可以在主板说明书中找到；大家可以参考下说明书；如有任何问题，您也可以到： ask 来提问，我们将尽量详细为您解答；） 下面，我们将以老式REL8139网卡为例，说明如何进行网卡设置： Realtek RTL 8139网卡设置 按下电源开关，系统开始自检，当自检完硬盘、光驱后，出现以下提示： Realtek RTL 8139 (A/B/C)/RTL8130 Boot Agent Press Shift-F10 to configue…… 此信息默认为停留3秒钟，此时，按下SHIFT--F10进入网卡配置菜单，共有四个选择： 1． Network Boot Protocol (PXE RPL)按空格改变网络引导协议 2． Boot order (Rom Disable禁止BOOR ROM引导 Int 18h先从BIOS设置中的次序引导 Int19h先从BOOT ROM引导 PnP/BEV从BBS引导) 3． Show config Message (Enable Disable)启动时是否显示SHIFT—F10 4． Show Message time (3 seconds 4seconds 5seconds 8seconds 10seconds) 启动时shift—f10提示信息停留的时间。 新网卡的Boot order 选项为禁止BOOT引导，所以，所有新网卡必须进入设置程序，将其设为INT18 或INT19设置完毕后，按F4保存退出。
病毒感染细胞实验整体流程及原理 目的基因不能直接整合到大多数真核细胞，常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞，从而得到表达满足实验需求。 1、病毒的种类 病毒有很多种，常见的有慢病毒和腺病毒 1.1慢病毒 1.1.1原理 慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通siRNA 载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，Lentivirus-siRNA 克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。 1.1.2特点 1）直接包装成为假病毒颗粒，对分裂和非分裂细胞均有感染作用，适合RNAi 研究和体内实验中难于转染的细胞(比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞)。 2）可以通过简单方式，在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。 3）可用于基因敲除、基因治疗和转基因动物研究。 4）无需任何转染试剂，操作简便。 5）可以根据客户需要制备多种标记。 1.1.3慢病毒包装简要流程： 1）含有目的基因的慢病毒RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。 2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。 3）培养48hrs - 72hrs 左右，收集含有病毒的上清培养液。 4）病毒的纯化和浓缩。 5）分装、- 80 ℃保存。 6）滴度测定目的基因检定，并出具检测报告。 1.2、腺病毒 1.2.1原理 腺病毒(Adenovirus，Ad)是一种无包膜的线状双链DNA病毒，其复制不依赖于宿主细胞的分裂。有近50个血清型，大多数Ad载体都是基于血清型2和5，通过转基因的方式取代E1和E3基因，降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在高水平表达E1和E3基因的细胞中复制，因此是一种适用于治疗的高效控制系统。 1.2.2特点 1）几乎可以感染所有类型的细胞 2）可以获得复制缺陷型(E1 和E3 缺失) 的腺病毒 3）病毒滴度高，产生病毒经过浓缩后可以达到1012 PFU/mL，能有效的进行增殖。4）腺病毒载体感染宿主的范围比较广，制备容易，操作简单.
法兰盘机械加工工艺规程 陕西国防工业职业技术学院
目录 机械加工工艺过程卡．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1 机械加工工序卡．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3 零件图．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20 零件－毛坯合图．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21 夹具总装图．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22 夹具零件图．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23 刀具工作图．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24 量具工作图．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25
机械加工工艺过程卡及 工序卡 集团标准化小组：[VVOPPT-JOPP28-JPPTL98-LOPPNN]
机械加工工艺过程卡填写说明
（1）过程卡和工序卡的总页数； （2）当前页页序； （3）按零件图填写； （4）按设计任务书填写，包括了备品率和废品率； （5）按零件图填写； （6）填写“铸件”、“锻件”、“圆钢”、“板钢”等；（7）每毛坯可加工同一零件的数量； （8）工序号，可依自然数连续或不连续编号； （9）工序名称如“钻××孔”、“粗铣××面”、“攻××螺纹”等； （10）填写设备名称如“立钻”； （11）填写设备型号如“Z5125A”； （12）填写该工序所需设备数量； （13）基本时间t m和辅助时间t a之和，也称为操作时间。基本时间取自工序卡。辅助时间按工序卡所表明的工序操作动作，查各动作的时间定额标准并累加得到（未见占基本时间百分比数据）； （14）工时定额t t按公式t t=（t m+t a）[1+（α+β）﹪]计算。其中布置工作地时间、休息和生理需要时间按它们占作业时间的百分比（（α+β）﹪）查表得到，不计准备和终结时间； （15）设备负荷率=（13）×（4）÷（251天×8小时×60分×（12））； （16）根据需要填写。
机械加工工序卡填写说明 卡相应内容的说明； （2）采用的切削液名称，如“水”、“水溶液”、“乳化液”等； （7）工序简图。要求：①主要简图是零件在机床上装夹位置的主视图，应有零件的外形轮廓，与本工序无关的结构要素不表示。②完整表示工序定位基准、夹压力方向和作用面、夹压方式（机械夹紧、液压夹紧、气动夹紧、电磁夹紧），也可规定夹压位置。③用特粗线条表示出加工面，注明工序尺寸及公差、加工面的相对位置精度、表面粗糙度等。④表示工序同时装夹零件的数目和排列方式。⑤若绘制简图的位置不够，可另页绘制（该页上保留工序卡表头，其它位置绘简图），顺序在本工序卡片之后，有页码。 （8）若需要专用夹具，填写夹具名称，如“钻夹具”。否则不填； （9）本工序工序内容序号，依自然数连续编号；要技术要求，如热处理的硬度和变形要求、电镀的镀层厚度。设计或工艺要求加工面配做配钻时，要在配做配钻前该面的最后工序另起一行注明，如“××孔与××件配钻”； （11）填写设备型号如“Z5125A”； （12）专用的填写编号，由于没有编号规则，可填写刀辅具名称，并示以“专用”含义，如“成形铣刀”。标准的填写名称、规格，如“锥柄钻头Φ14.3×200”、“45°车刀”； （13）填写量检具名称，如“孔位检具”、“卡规”等，已有“专用”含义。标准的填写名称、规格、精度，如“卡尺 0~125，0.02”、“杠杆表0~0.8，0.01”。 （14）、（15）、（16）、（17）切削用量三要素，由分析计算或查表得到。 （18）工件切削部分的长度； （19）直接改变加工对象几何状况或材料性质的工艺过程所消耗的时间，用相应加工方法基本时间计算公式计算。切削加工时，
20世纪80年代以来，基因克隆技术与DNA化学合成方法相结合，建立和发展了定点突变技术。可以按照预定设计，在已知的DNA序列中增删或转换核苷酸，精确地是靶基因在特定位点发生碱基序列的变化，进而使基因表达及调控，基因产物发生相应改变。这种快速精确的基因突变已经被广泛地应用与基因工程和蛋白质工程之中。定点突变有多种方法，有的改变特定核苷酸，有的则是对一段最可能影响蛋白质功能的基因序列进行随机突变，产生一系列突变蛋白质。 寡核苷酸诱导的定点突变基本上分两类：一类是用单链噬菌体M13作载体的寡核苷酸介导的单链模板定点突变；另一类用双链质粒作载体，双引物法定点突变。为了在体外导入特定的点突变，小的限制性片段可以切除，并被包含所需要突变的合成接头所替代（称为盒式诱变）。如果不行，插入片段可以克隆到产生单链DNA的噬菌粒载体中，由所设计的错配引物知道DNA复制，产生异源双链的复制型，并在下面的复制循环中产生野生型和突变的复制型。 (图） 单链噬菌体作载体的定点突变的基本原理是，用已知序列的环状DNA变性后为模板，人工合成一段引物，将所要设计的定点突变寡核苷酸置于引物中，也就是说人工所合成的引
物不是完全和模板互补，而是在某个位点有意识地让碱基突变，和模板上的碱基不能配对，由于其他的碱基是互补的，所以任然可以通过复性，使引物和模板特异性结合。在M13单链环状模板上杂交一段寡核苷酸引物，利用DNA聚合酶和连接酶的作用，从引物延伸合成链，得到一个闭合环状的异源双链分子。由于预先在寡核苷酸引物中人为地引入碱基的错配对，插入或缺失，然后在将杂合双环DNA转化到细菌中，因此异源双链DNA经转化和筛选就可以分离到带有相应突变的DNA克隆。由于复制是半保留复制，经克隆后将有一半的后代环状DNA产生了定点突变，另一半和正常的亲代链一样。 环状双链质粒DNA作为载体进行基因的改造有它的优点。待改造基因中如有两个适当的限制性内切酶切点，可以用人工合成双链DNA片段置换两切点之间原有序列，在人工合成的双链DNA片段中包含有突变的序列。但是这种置换方法收到限制酶酶切位点的限制。 1.用M13DNA进行的寡核苷酸引物介导的定点突变：寡核苷酸引物介导的定点突变的步骤是用含有突变碱基的寡核苷酸片段作引物，在聚合酶的作用下启动DNA分子进行复制。主要过程是：（1）将待突变基因克隆到突变载体上； 2.制备含突变基因的M13DNA单链模板； 3.引物与模板与模
Maxdos V7.0 PXE版使用教程 工具下载地址：https://www.doczj.com/doc/4c13277444.html,/data/280506 教程内容：一、使用PXE启动，全自动网刻镜像恢复 二、使用PXE启动，Maxdos工具箱破解Windows登录密码 首先介绍一下什么是PXE 官方解释：PXE(preboot execute environment)是由Intel公司开发的最新技术,工作于Client/Server的网络模式，支持工作站通过网络从远端服务器下载映像，并由此支持来自网络的操作系统的启动过程，其启动过程中，终端要求服务器分配IP地址，再用TFTP(trivial file transfer protocol)或MTFTP(multicast trivial file transfer protocol)协议下载一个启动软件包到本机内存中并执行，由这个启动软件包完成终端基本软件设置，从而引导预先安装在服务器中的终端操作系统。 个人解释：简单来说就是有一台机器作为服务端（服务端提供需要网刻的镜像、DHCP和TFTP服务），一台或多台客户机作为客户端（客户端：就是需要网刻，也就是需要重装系统的机器，可以只有一台，也可以有多台）。首先，服务端配置好DHCP和TFTP服务，选择好镜像，然后客户端只需要配置为PXE启动，启动后就会自动从服务端的DHCP分配到一个IP 地址，然后通过TFTP下载启动软件包，接着加载镜像，安装系统。 教程一： 先来配置服务端，第一步配置本地网卡，网上的方法大多建议设置为DHCP，但这里建议设置为静态，个人感觉静态不容易出错 图1：只需要配置上IP和掩码即可