用清除有机自由基DPPH法评价竹叶提取物抗氧化能力

竹叶柴胡总黄酮提取及抗氧化作用研究
陈桐;侯林清;覃凡倚;甘鑫睿;叶峻
【期刊名称】《辽宁化工》
【年(卷),期】2023(52)2
【摘要】为探究竹叶柴胡的药效机理,采用超声辅助法提取了竹叶柴胡中总黄酮,并确定了最佳工艺如下:提取剂为40%乙醇,料液比为1∶55,超声功率为200 W,温度为70℃,时间为50 min。

所测样品中总黄酮质量分数为46.45 g·kg^(-1),且竹叶柴胡提取液对DPPH和羟基自由基均有较好的清除率。

研究表明,竹叶柴胡有较好的抗氧化活性,具有抗病毒、抗衰老、抗癌等药效作用。

【总页数】4页(P187-189)
【作者】陈桐;侯林清;覃凡倚;甘鑫睿;叶峻
【作者单位】成都师范学院化学与生命科学学院
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
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研究简报用清除有机自由基DPPH法评价植物抗氧化能力3彭长连　陈少薇　林植芳　林桂珠(中国科学院华南植物研究所,广州510650)摘要　几种抗氧化剂的浓度与其清除1,12二苯基苦基苯肼(DPPH)能力呈显著的线性相关.不同抗氧化剂清除DPPH能力差异明显.抗坏血酸与DPPH反应的灵敏性高于其抑制肾上腺素氧化的能力.用DPPH法和亚油酸氧化法同时测定了生长在不同光强下植物叶片抗氧化能力的变化,两种方法所得结论相一致.结果表明清除有机自由基法是一种快速、简便、灵敏的评估植物抗氧化能力的可行方法.关键词　1,12二苯基苦基苯肼(DPPH),植物,抗氧化能力,自由基学科分类号　Q946 生物的抗氧化能力与其抗病性、抗逆性及延缓衰老密切相关.因而从天然植物中寻找有效的抗氧化剂应用于医药、食品、保健品、饮料、化妆品等之中,或从氧化与抗氧化代谢的平衡来探讨生物对变化环境条件的适应性机理,都是当前的研究热点之一. 迄今用于评价植物抗氧化能力的方法虽已有诸如硫氰酸盐(thiocyanate)法[1]、硫代巴比妥酸(TBA)法[2]、ORAC法(automated oxygen radical absorbance capacity assay)[3]等.但这些方法或者手续相当繁琐费时,或者所需试剂或大型仪器的费用昂贵,尚缺乏一种灵敏、简单易行的有效方法.1, 12二苯基苦基苯肼(1,12Diphenyl222picryl2 hydrazyl,DPPH)是一种稳定的有机自由基,通过检测生物试剂对DPPH自由基的清除能力可以表示其抗氧化性的强弱.然而对自由基信号的直接检测需要使用顺磁共振仪而使其难以普及.近年来,国外已有人初步利用DPPH溶液的紫红色吸光度变化作为清除自由基能力的分光光度测定[4,5],但对其准确性、灵敏度和可行性尚未有系统的探讨.本文旨在研究DPPH分光光度法用以评价植物抗氧化能力的可行性,为抗氧化剂的筛选和抗氧化胁迫机理的研究提供新的方法和依据.1　材料与方法111　仪器和试剂 紫外可见分光光度计(Beckman DU27),二苯基苦基苯肼(1,12diphenyl222picrylhydrazyl,DPPH),肾上腺素,硫代巴比妥酸(TBA),亚油酸,外源抗氧化剂抗坏血酸(AsA)、　皮素(QCT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丁基羟基甲苯(BHT),为Sigma公司产品,α2生育酚(α2TP)为Merck公司产品.自由基捕获剂1,22二羟基苯23,52二磺酸钠(Tiron),甲醇,乙醇为国产产品.112　植物材料 试验植物为广东省鼎湖山常绿阔叶林中的乔木黧蒴(Castanopsis f issa)和林下灌木九节(Psycot ria rubra).盆栽幼苗生长于本所试验地的自然光强(100%光)和遮阴降低光强为自然光的36%和16%条件下.012g叶片用50%乙醇浸提,研磨和离心(5000×g,15min),定容至10ml. 113　有机自由基(DPPH)消除能力的测定 参考Larrauri和Y okozawa等[4,5]的方法进行修改.利用DPPH溶液的特征紫红色团的吸收峰,以分光光度法测定加抗氧化剂或植物提取液后A525吸收的下降表示其对有机自由基消除能力.反应体积2ml,DPPH溶于少量甲醇后,以50%乙醇配制为120μmol/L.植物提取液稀释10倍,反应时加011ml稀释的提取液及119ml DPPH.室温下静置20min后测吸光度变化.样品对DPPH 的清除百分比=12[(A-B)/A0]×100%,这里A0为未加样的DPPH(119ml DPPH+011ml 50%乙醇)的吸光度,A为样品与DPPH反应后的吸光度,B为样品的空白(样品011ml+119ml　3中国科学院广州分院及广东省科学院测试基金和中国科学院“九五”重点基金(KZ9522J12105)联合资助.　Tel:(020)877056262405,E2mail:pengchl@　收稿日期:1999211220,修回日期:200020420250%乙醇)的吸光度.然后用公式:[(清除率×反应加入的DPPH 量)/样品质量(μg )]求得单位质量的外源抗氧化剂或植物样品对DPPH 的实际清除量.114　抑制亚油酸氧化能力的测定 最终浓度为0138mmol/L 的亚油酸加0133mmol/L H 2O 2加速氧化,在有或无植物提取液下置于室温放置5h ,不时摇动,随后用硫代巴比妥酸(TBA )法测定所产生的丙二醛(MDA )[6].用抑制MDA 形成的百分数表示抗氧化能力.115　抑制肾上腺素氧化 参照翁元凯等的方法[7],以碱性连二亚硫酸钠产生O ・2,用不同浓度的AsA 抑制O ・2对肾上腺素的氧化,480nm (肾上腺素红的特征吸收峰)检测吸收的下降.2　结果与讨论211　DPPH 的吸收光谱 有机自由基DPPH 溶液有两个特征吸收峰330nm 和525nm ,加入抗氧化剂抗坏血酸(AsA )和　皮素(QCT )后两个吸收峰皆降低(图1),但525nm 吸收的降低较显著,故选用可见光525nm 的吸收来表示DPPH 含量的变化,这与Larrauri 等[4]报道DPPH 吸收峰在517nm 有点差异.图1　DPPH 的吸收光谱212　抗氧化剂浓度与其清除DPPH 的关系 没食子酸(GIP )、　皮素(QCT )、还原型谷胱甘肽(GSH )和α2生育酚(α2TP )是植物体内常见的抗氧化剂,BHT 是人工合成的常用食品抗氧化剂,Tiron 则是人工合成的自由基捕获剂.图2可见这几种抗氧化剂的浓度皆与DPPH 的光吸收呈显著的线性负相关(图2),相关系数r 除BHT 为018977(图2b )外,其余都在019670～019935之间.抗氧化剂浓度越高,清除DPPH 的能力越大.结果说明无论是植物的内源抗氧化剂还是人工合成的抗氧化剂,其抗氧化性都可用DPPH 法作定量评价.图2　几种抗氧化剂与DPPH 吸收峰(A 525)下降的关系(a )■———■:QCT ,y 1=-010872x +110543,r =019904;●———●:GIA ,y 2=-012485x +110843,r =019935;(b )■———■:BHT ,y 3=-010245x +019008,r =018977;●———●:GSH ,y 4=-010149x +110715,r =019918;(C )■———■:α2TP ,y 5=-010233x +018558,r =019788;●———●:Tiron ,y 6=-010212x +017586,r =019670.213　不同抗氧化剂清除DPPH 能力的比较 表1看出计算降低DPPH 吸收50%时抗氧化剂的浓度(IC 50值)或每微克抗氧化剂实际清除DPPH 的数量皆表明,没食子酸的清除能力最强,皮素次之,而GSH 、α2TP 和两种人工合成的抗氧化剂BHT 及Tiron 则较低.这与Cao 等[8]利用ORAC 法的测定指出一些类黄酮比ASA 、α2TP 和GSH 有更强的抗氧化活性结果相一致.表1　几种抗氧化剂清除DPPH 自由基能力的变化抗氧化剂　IC 50(DPPH 吸收降低50%时抗氧化剂的量)　 ρ/μg c /μmol ・L -1DPPH 清除量/g ・g -1GIP2111612324122QCT 516791317170AsA 8141261535107BHT 13190351132183GSH 34136621121130α2TP 19150221631119Tiron16180381121187214　抗坏血酸清除DPPH 与抑制肾上腺素氧化的比较 抑制肾上腺素氧化也常用作测定抗氧化能力的一种方法.图3比较了肾上腺素法与DPPH 法用于评价抗坏血酸(AsA )抗氧化能力的灵敏度.结果看出AsA 含量与DPPH 吸收之间的斜率为-010638,相关系数为019986(图3b ),而AsA 含量与抑制肾上腺素氧化之间的斜率为-010011,相关系数为019775(图3a ).即DPPH 法的直线斜率和与AsA 含量的相关性皆大于肾上腺素法,表明其更为灵敏与准确.此外,肾上腺素法需在碱性条件下反应,其活性氧(O ・2)源也需通过化学反应产生,而DPPH 法则可直接检测DPPH 自由基的变化.图3　抗坏血酸抑制肾上腺素氧化(a)和清除DPPH (b)的比较(a )y 1=-010011x +011619,r =019775;(b )y 2=-010638x +110962,r =019986.215　DPPH 法和亚油酸氧化法测定植物叶片抗氧化能力的比较 亚油酸氧化法也是测定植物抗氧化能力的常用方法.用它和DPPH 法比较生长在不同光强下森林植物黧蒴和九节叶片的抗氧化能力(图4),可以看出两种方法的结果基本一致.随生长光强的增加,两种植物抗氧化能力都提高.自然光照下九节叶片的抗氧化能力大于黧蒴,而且光强对九节抗氧化能力的影响较黧蒴大,显示前者对光强的敏感性较高.由此结果进一步表证了DPPH 法研究植物抗氧化能力与植物种类及外界环境因子之间关系的可行性.图4　生长在不同光强下的植物提取物清除DPPH (a)和抑制亚油酸自动氧化(b)的变化□:黧蒴;■:九节. 综上所述,应用DPPH 法来评价外源抗氧化剂和植物抗氧化能力是一种快速(反应时间仅需20min左右)、简便(操作简单,且用一般的分光光度计即可测定)、灵敏(只需要少量的植物样品)、直接(抗氧化剂直接作用于DPPH自由基,测定DPPH吸收的变化,而其他许多方法都是间接测定氧化产物的减少)可行的方法.参　考　文　献1　Osawa T,Namiki M A.Novel type of antioxidant isolated from leaf wax of Eucalypt us leaves.Agric Biol Chem,1981,45(3): 735～7392　Ottolenghi A.Interaction of ascorbic acid and mitochondrial lipides.Arch Biochem Biophys,1959,79:355～3633　Cao G,Alessio H M,Culter R G.Oxygen2radical absorbance capacity assay for antioxidants.Free Radical Biol Med,1993,14(3):303～3114　Larrauri J A,Sanchez2Moreno C,Saura2Calixto F.Effect of temperature on the free radical scavenging capacity of extracts from red and white grape pomace peels.J Agric Food Chem,1998,46(7):2694～26975　Y okozawa T,Dong E,Natagawa T,et al.In vit ro and i n vivo studies on the radical2scavenging activity of tea.J Agric Food Chem,1998,46(6):2143～21506　林植芳,李双顺,林桂珠,等.水稻叶片衰老与超氧歧化酶、脂质过氧化的关系,植物学报,1984,26(6):605～615Lin Z F,Li S S,Lin G Z,et al.Acta Bot Sin,1984,26(6): 605～6157　翁元凯,黄　山,翁念宇.用碱性连二硫酸钠水溶液产生超氧阴离子自由基,生物化学与生物物理进展,1989,16(3): 209Wong Y K,Huang S,Wong L Y.Prog Biochem Biophys,1989, 16(3):2098　Cao G,Sofic E,Prior R L.Antioxidant capacity of tea and common vegetables.J Agric Food Chem,1996,44(11):3426～3431Detection of Antioxidative C apacity in Plants by Scavenging Organic Free R adical DPPH.PEN G Chang2Lian,CHEN Shao2Wei,L IN Zhi2Fang,L IN Gui2Zhu(South Chi na Instit ute of Botany,The Chi nese A cademy of Sciences,Guangz hou510650, China).Abstract　A very significant linear relationship was found between the capacity of scavenging DPPH free radical and concentrations of six antioxidants(r= 01898～01994)determined by spectrophotometry. There was an obvious difference in the capacity of scavenging DPPH free radical among different antioxidants.Both scavenging DPPH and inhibiting the oxidation of adrenalin were closely related with the concentration of ascorbic acid.The change of DPPH levels is more sensitive than that of adrenalin in the presence of ascorbate.The antioxidative ability in leaves extracts of two woody plants grown under different light intensities was measured by either scavenging DPPH or inhibiting the oxidation of linoleic acid.The same conclusion was drawn through these two assays.It is suggested that scavenging DPPH free radical is a rapid,simple,sensitive and practical assay for the evaluation of antioxidative capacity in plants.K ey w ords　1,12diphenyl222picrylhydrazyl(DPPH), plant,antioxidative capacity,free radical中国生物化学与分子生物学会简讯 由中国生物化学与分子生物学会承办的第十五届亚洲大洋洲生物化学家和分子生物学家联合会(FAOBMB)学术会议于10月21日至24日在北京举行。

第49卷第6期2021年3月广州化工Guangzhou Chemical IndustryVol.49No.6Mar.2021竹叶多糖提取分离及体外抗氧化自由基的研究周先泰陈蓉1,齐娜▽(1桂林医学院药学院，广西桂林541000；2南方医科大学中西医结合医院，广东广州510315)摘要:探讨竹叶多糖含量及体外抗氧化能力。

水提醇沉法得到竹叶粗多糖。

Sevag法脱蛋白和D101大孔树脂分离纯化, DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯脐)法和邻苯三酚法对粗多糖抗氧化性进行研究。

研究发现粗多糖收率0.525%,蛋白含量占粗多糖37.71%。

0.66mg/mL对DPPH自由基清除效果最大，清除率55.23%。

多糖浓度0.107-0.301mg/mL范围，对超氧自由基的清除效果逐渐提升。

结果表明水提醇沉法提取竹叶粗多糖产率较好，具有较好的体外抗氧化活性。

关键词：竹叶多糖；水提醇沉法；抗氧化；DPPH法；邻苯三酚法中图分类号：R285.5文献标志码：B文章编号：1001-9677(2021)06-0080-05Extraction and Separation of Polysaccharides from Bamboo andStudy on Antioxidant Free Radicals in Vitro*ZHOU Xian-tai1,CHEN Rong1,QI Na12(1College of Pharmacy,Guilin Medical University,Guangxi Guilin541000；2Integrated Hospital ofTraditional Chinese Medicine,Southern Medical University,Guangdong Guangzhou510315,China)Abstract:The content of polysaccharide and antioxidant capacity in vitro were studied.The crude polysaccharide of bamboo was obtained by water extraction and alcohol precipitation.Sevag method was used to take off the protein and D101 macroporous resin to purification,the antioxidant activity of crude polysaccharides was studied by DPPH(1,1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine)and o-phenylene three phenol method.The yield of bamboo polysaccharide by water extraction and alcohol precipitation was0.525%,and protein content accounted for37.71%of crude polysaccharide.When the solubility of crude polysaccharide was0.66mg/mL,the scavenging effect of DPPH radical was the highest,which was55.23%. When the solubility of crude polysaccharide was in the range of0.107~0.301mg/mL,the scavenging effect on superoxide radical was gradually improved.The results showed that the yield of crude polysaccharide from bamboo leaves was better by water extraction and alcohol precipitation,and crude polysaccharides had good antioxidant activity in vitro.Key words：Lophatherum Gracile Brongn polysaccharide;water extraction and alcohol precipitation；antioxidant; DPPH method；0-phenylene three phenol method竹子为禾本科(Gramineae)植物B,广泛分布于亚非大陆、南北美洲及太平诸岛地区，我国竹林资源占世界竹林资源的3%⑵。

DPPH法评价抗氧化活性研究进展韦献雅1，殷丽琴1，钟 成2，章明海1，牛应泽1,*（1.四川农业大学油菜研究中心，四川 成都611130；2.四川农业大学玉米研究所，四川 成都611130）摘 要：植物化合物或植物提取物的抗氧化活性的体外评价是研究功能因子的一个重要方面。

1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ，DPPH ）法常用于评价化合物或植物提取物的抗氧化活性，但由于没有一个标准化的方法，因而不同实验的结果难于相互比较。

本文从DPPH 法的原理、测定方法、检测波长、DPPH 初浓度、反应时间、清除率计算公式、结果表达、评价指标等几个方面对DPPH 法做归纳总结，分析几种外界因素对DPPH 法的影响，有助于研究者提高认识，从而准确的开展研究工作。

关键词：DPPH 法；自由基；抗氧化剂；抗氧化活性Advances in the DPPH Radical Scavenging Assay for Antioxidant Activity EvaluationWEI Xian-ya 1, YIN Li-qin 1, ZHONG Cheng 2, ZHANG Ming-hai 1, NIU Ying-ze 1,*(1. Rapeseed Research Center, Sichuan Agricultural University, Chengdu 611130, China;2. Maize Research Institute, Sichuan Agricultural University, Chengdu 611130, China)Abstract: in vitro evaluation of the antioxidant activity of plant compounds or plant extracts is an important aspect of functional factor research. The DPPH (1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) radical scavenging assay is widely used for antioxidant activity evaluation of plant compounds and extracts. However, this method lacks a standardized program so that results from different experiments may be difficult to compare with each other. The present review presents a comprehensive overview of the principle, measurement procedure and wavelength, initial DPPH f ree radical concentration, reaction time, calculation of the scavenging rate, expression of results and evaluation indices. Several external factors influencing the DPPH assay are also discussed.Key words: DPPH method; free radical; antioxidant; antioxidant activity 中图分类号：TS207.3 文献标志码：A 文章编号：1002-6630（2014）09-0317-06doi:10.7506/spkx1002-6630-201409062收稿日期：2013-06-25基金项目：四川省科技计划项目（12CGZHZX0712）；四川省教育厅重点科技项目（11LD018）作者简介：韦献雅（1980—），女，博士研究生，研究方向为作物遗传育种。

天然产物抗氧化活性的筛选方法及应用
一、筛选方法
1、DPPH自由基清除试验：DPPH自由基清除试验是用来检
测天然产物的抗氧化活性的一种常用方法，它可以测量天然产物抗氧化活性的强弱。

该方法的原理是利用天然产物中的抗氧化剂将DPPH自由基进行清除，从而检测天然产物的抗氧化
活性。

2、FRAP试验：FRAP试验也是一种检测天然产物抗氧化活性的常用方法，它可以测量天然产物抗氧化活性的强弱。

该方法的原理是利用天然产物中的抗氧化剂将Fe3+还原为Fe2+，从
而检测天然产物的抗氧化活性。

3、ABTS自由基清除试验：ABTS自由基清除试验也是一种
检测天然产物抗氧化活性的常用方法，它可以测量天然产物抗氧化活性的强弱。

该方法的原理是利用天然产物中的抗氧化剂将ABTS自由基进行清除，从而检测天然产物的抗氧化活性。

二、应用
1、食品抗氧化剂：天然产物的抗氧化活性可以用来制备食品
抗氧化剂，以延缓食品的氧化变质，延长食品的保质期。

2、医药抗氧化剂：天然产物的抗氧化活性可以用来制备医药
抗氧化剂，以防止药物氧化变质，延长药物的保质期。

3、保健品抗氧化剂：天然产物的抗氧化活性可以用来制备保
健品抗氧化剂，以防止保健品氧化变质，延长保健品的保质期。

第28卷,第7期 光谱学与光谱分析Vol 128,No 17,pp1578215822008年7月 Spectroscopy and Spectral Analysis J uly ,2008　用清除有机自由基DPPH 法评价竹叶提取物抗氧化能力郭雪峰,岳永德3,汤　锋,王　进,姚　曦国际竹藤网络中心,国家林业局竹藤科学与技术重点开放实验室,北京　100102摘　要　通过对1,12二苯基苦基苯肼(DPP H )溶液吸收光谱、DPP H 溶液反应体系的研究,得出以下结论,分光光度法测定DPP H 溶液反应体系的测定波长为51814nm ,反应体系为4100mL 25717mg ・L -1的DP 2P H 溶液中加1mL 不同浓度的抗氧化剂,反应体系加入抗氧化剂后反应时间为40min ;用上述方法研究评价合成抗氧化剂叔丁基对苯二酚(TB HQ )和2,62二叔丁基对甲酚(B H T )对DPP H 自由基清除率和浓度的关系,以IC 50值(清除率为50%时,抗氧化剂的浓度值)作为评价指标,测得合成抗氧化剂和效果最好竹叶提取物样品IC 50值分别为,TB HQ (21114mg ・L -1),B H T (42109mg ・L -1),M40(108140mg ・L -1),M40等竹叶提取物可以作为天然抗氧化剂进行开发。

关键词　竹叶提取物;1,12二苯基苦基苯肼;清除率;IC 50值中图分类号:TS20112 文献标识码:A 文章编号:100020593(2008)0721578205　收稿日期:2007209208,修订日期:2007212218　基金项目:国家“十一五”科技支撑项目(2006BAD19B08)和国际竹藤网络中心基本科研业务费专项资金(06/072B14)资助　作者简介:郭雪峰,1972年生,国际竹藤网络中心讲师 3通讯联系人 e 2mail :yueyd @引　言 竹叶作为一种“药食两用的天然植物”已被广大消费者所接受,竹叶提取物主要功能性成分为竹叶黄酮糖苷,具有抗氧化和抑菌活性,可以作为一种生物黄酮类保健营养素进行开发,前景广阔。

竹叶提取物清除DPPH自由基的测定方法作者：郑德勇， 安鑫南， ZHENG De-yong， AN Xin-nan作者单位：郑德勇,ZHENG De-yong(福建农林大学材料工程学院,福建,福州,350002)， 安鑫南,AN Xin-nan(南京林业大学化学工程学院,江苏,南京,210037)刊名：福建农林大学学报（自然科学版）英文刊名：JOURNAL OF FUJIAN AGRICULTURE AND FORESTRY UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)年，卷(期)：2005,34(1)被引用次数：43次1.郑德勇;安鑫南植物抗氧化剂研究展望[期刊论文]-福建林学院学报 2004(01)2.李清禄;林新华增效脂溶性茶多酚溶液的制备及其在食用植物油中的抗氧化性能[期刊论文]-福建农业大学学报(自然科学版) 2001(02)3.林河通;邹日娥延长冷藏龙眼果实货架寿命的技术 1997(01)4.郑宝东;陈丽娇几种抗氧化剂对余甘汁抗氧化的影响 1994(03)5.陆志科;谢碧霞竹叶化学成分的分析与资源的开发利用[期刊论文]-林业科技开发 2003(01)6.许钢;张虹;胡剑竹叶中的黄酮的提取研究 1999(07)7.唐莉莉竹叶多糖的分离提取及活性研究[期刊论文]-食品研究与开发 2000(01)8.郑德勇;安鑫南丛生竹叶提取物的成分与清除自由基的能力[期刊论文]-福建林学院学报 2004(03)9.姚志湘;粟晖;韦建平竹叶中有效成分的提取条件及抗氧化的活性研究 2000(01)10.宋怀恩;闻韧抗氧化剂筛选方法的研究进展[期刊论文]-中国药物化学杂志 2003(02)11.郑晶泉抗氧化剂抗氧化实验研究进展 2000(01)12.翁新楚;吴侯抗氧化剂的抗氧化活性的测定方法及其评价[期刊论文]-中国油脂 2000(06)13.Bors W;VAN BEEK T A Screening of plant extracts for antioxidant activity: a comparative study on three testing methods[外文期刊] 2002(01)14.Mirella N;GAULEJACN Comparative study of polyphenol scavenging activities assessed by different methods[外文期刊] 1999(02)15.夏向东;吕飞杰;台建祥抗氧化剂的功效及抗氧化活性的体外分析评价[期刊论文]-食品研究与开发 2001(01)16.HIDEYUKI I;KAHARA T Superoxide- and 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical-scavenging activitiesof soyasaponin β related to gallic acid[外文期刊] 2001(10)17.OSTRAKHOVICH E A;CARLESC Evaluation of scavenging activity assessed by Co( Ⅱ ) EDTA-induced luminol chemilu minescence and DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) free radical assay 2000(03)18.许申鸿;杭瑚二苯代苦味肼基自由基分光测定法及其应用的初步研究 1999(06)19.彭长连;陈少薇用清除有机自由基DPPH法评价植物抗氧化能力[期刊论文]-生物化学与生物物理进展 2000(06)20.冯涛;曹东旭;吕晓玲竹叶总黄酮含量的测定[期刊论文]-中国食品添加剂 2002(06)21.陈东晓;潘廷国;柯玉琴B对花椰菜叶片活性氧代谢的影响[期刊论文]-福建农林大学学报(自然科学版)2002(03)22.林如;薛秋华唐菖蒲鲜切花瓶插衰老过程中抗氧化酶活性和膜脂过氧化水平初探[期刊论文]-福建农林大学学报(自然科学版) 2002(03)1.李姣娟.周尽花.戴瑜.黄克瀛.LI Jiao-juan.ZHOU Jin-hua.DAI Yu.HUANG Ke-ying川桂叶总黄酮清除DPPH·自由基作用的研究[期刊论文]-中南林业科技大学学报2010,30(10)2.陈丛瑾.黄克瀛.李德良.王旭强.袁双山.CHEN Cong-jin.HUANG Ke-ying.LI De-liang.WANG Xu-qiang.YUAN Shuang-shan香椿叶提取物清除DPPH自由基能力的测定方法[期刊论文]-林产化学与工业2006,26(3)3.陆占国.封丹.李伟.LU Zhan-guo.FENG Dan.LI Wei孜然精油的提取及其清除DPPH自由基能力研究[期刊论文]-化学研究与应用2008,20(5)4.陈奕.谢明勇.弓晓峰.CHEN Yi.XIE Ming-yong.GONG Xiao-feng黑灵芝提取物清除DPPH自由基的作用[期刊论文]-天然产物研究与开发2006,18(6)1.谯明.郭炬亮.何悦.吴倩糙枝金丝桃抗氧化活性的研究[期刊论文]-广东化工 2013(15)2.张强.王松华.孙玉军.冯付春体外化学模拟体系中米糠肽抗氧化活性的研究[期刊论文]-食品与发酵工业2008(4)3.吴建中.欧仕益.汪勇甘蔗叶中黄酮类物质的提取及其抗氧化性研究[期刊论文]-现代食品科技 2009(2)4.OUYANG Na-na.李湘洲.LUO Zheng不同预处理方法对银杏提取液清除DPPH自由基的比较研究[期刊论文]-食品科技 2008(8)5.黄德红.杨艳芳.朱艳平.肖梦媛.吴和珍罗汉果茎的不同部位提取物清除DPPH自由基的作用[期刊论文]-中国药师 2011(1)6.孙玉军.陈彦.王松华.方玉明胡萝卜多糖体外抗氧化活性研究[期刊论文]-热带作物学报 2011(3)7.胡春弟.张锦红.徐亮.刘巍桂花总黄酮的提取及抗氧化能力研究[期刊论文]-食品与机械 2009(2)8.何跃君.岳永德.汤锋用清除有机自由基DPPH法评价竹叶挥发油抗氧化能力[期刊论文]-安徽农业大学学报2009(3)9.刘璇.米生权.张宇轩.崔胜楠.梁媛.赵晓红北京早园竹叶提取物的抗氧化活性研究[期刊论文]-环境与健康杂志2009(3)10.左光明.谭斌.秦礼康苦荞麸皮蛋白的提取分离及清除自由基作用研究[期刊论文]-食品科学 2008(11)11.程超.朱玉昌.莫开菊.汪兴平零余子皂甙的抗氧化特性研究[期刊论文]-食品科学 2007(10)12.邹雪.李然洪.周靖.吴天祥果胶酶处理对蓝莓半甜红酒风味成分影响的研究[期刊论文]-酿酒科技 2013(9)13.张强.王松华.蒋圣娟.吴伟洋葱不同溶剂提取物体外抗氧化活性评价[期刊论文]-科技信息 2012(5)14.李菁.朱艳平.陈清杰.李婷婷.吴和珍茶籽壳不同部位提取物清除二苯基苦基苯肼自由基作用[期刊论文]-中国药师 2012(3)15.徐俐.况小玲迷迭香对油茶籽油抗氧化作用研究初探[期刊论文]-贵州林业科技 2011(1)16.吴和珍.朱艳平.杨艳芳.肖梦媛.李菁.刘焱文罗汉果植株不同器官的抗氧化活性[期刊论文]-中国实验方剂学杂志 2011(4)17.夏玉红.董晋文.钟耕竹叶提取物的研究开发现状[期刊论文]-中国食品添加剂 2009(2)18.赵学超.陆建安.王淼.杨严俊鸡蛋黄中叶黄素清除DPPH自由基活性研究[期刊论文]-食品工业科技 2009(10)19.欧阳娜娜.李湘洲.罗正外场强化提取银杏总黄酮及抗氧化性能研究[期刊论文]-安徽农业科学 2007(35)20.郭芳言.朴美子杜香叶提取物清除DPPH能力的研究[期刊论文]-中国酿造 2012(7)21.缪成贵.陈庆榆.何华奇采用DPPH法测定四大药用名菊抗氧化活性[期刊论文]-安徽科技学院学报 2012(4)22.张强.王松华.孙玉军.蒋圣娟.宋玉洋葱中黄酮类化合物体外抗氧化活性研究[期刊论文]-农业机械学报2009(8)23.梁云.王洪新几种天然抗氧化剂清除自由基能力的比较研究[期刊论文]-安徽农业科学 2008(6)24.刘以道.周娅.李芬芳.袁德保.李奕星.郑晓燕.谭琳.陈娇.金志强葡萄糖-赖氨酸美拉德产物分级组分对香蕉酶促褐变的抑制[期刊论文]-热带作物学报 2013(10)25.岳彩艳.徐俐.尹智华冷藏对鱼腥草品质及酶活性变化的影响[期刊论文]-湖北农业科学 2011(16)26.王宏雨.谢宝贵.邓优锦.朱坚.赵晨.危国强.江玉姬45种食用菌液体发酵产物的抗氧化活性[期刊论文]-福建农林大学学报（自然科学版） 2010(1)27.贾炎.涂书新.唐世荣植酸和几种抗氧化物质对自由基清除能力的比较[期刊论文]-华中农业大学学报 2011(5)28.张强.宫璐婵.孟凡荣.孙凤扬.高加乐双孢菇多糖抗氧化活性的研究[期刊论文]-中国林副特产 2010(1)29.林诗云.王炯.冯桂权.黄相中.杨敏6种天然药提取物清除自由基和抗氧化活性研究[期刊论文]-云南民族大学学报（自然科学版） 2010(3)30.徐俐.耿阳阳.张红梅油茶籽油抗氧化及对自由基清除作用研究[期刊论文]-食品研究与开发 2013(17)31.杨海霞.关云静.邓建军.韩蓓.胡森科.张瑞娟猕猴桃籽粕蛋白质的提取分离及抗氧化活性[期刊论文]-食品与发酵工业 2013(9)32.周安存.汤金梁.冯务群.李辉不同方法提取的石榴皮总多酚抗氧化活性研究[期刊论文]-时珍国医国药 2012(2)33.魏智芸.滕建文.黄丽.韦保耀.夏宁.冯志臣地榆提取物抗氧化与抗过敏作用研究[期刊论文]-时珍国医国药2009(8)34.刘野.邹磊.宋焕禄真空结合热处理对西瓜汁抗氧化活性的影响[期刊论文]-食品工业科技 2013(8)35.刘畅.王昌涛.李刚.胡宝忠沙棘汁抗氧化活性的初步研究[期刊论文]-食品工业科技 2009(9)36.刘畅.岳文明.何聪芬.董银卯.王昌涛薏苡仁在曲霉发酵过程中成分及抗氧化性变化的研究[期刊论文]-食品科学 2009(23)37.郭刚军.何美莹.邹建云.龚加顺苦荞黄酮的提取分离及抗氧化活性研究[期刊论文]-食品科学 2008(12)38.张强.周正义.储俊.王延明大蒜、生姜、洋葱醇提物抗氧化活性的比较[期刊论文]-食品与发酵科技 2010(1)39.陈丛瑾.黄克瀛.孙崇鲁白英果提取物清除DPPH自由基活性研究[期刊论文]-食品研究与开发 2006(10)40.陈丛瑾.黄克瀛.李德良.王旭强.袁双山香椿叶提取物清除DPPH自由基能力的测定方法[期刊论文]-林产化学与工业 2006(3)41.杨东升.苏印泉.彭锋.玉泉幸一郎几种松萝中松萝酸含量及提取物清除DPPH自由基能力测定[期刊论文]-西北林学院学报 2007(4)42.刘薇.刘彦霞.赵建.文镜DPPH法测定保健食品脂溶性成份抗氧化能力的可行性研究[期刊论文]-中国酿造2011(4)43.彭芍丹.李积华.唐永富.黄晓兵.林丽静菠萝蜜不同部位抗氧化性的研究[期刊论文]-热带作物学报 2013(9)引用本文格式：郑德勇.安鑫南.ZHENG De-yong.AN Xin-nan竹叶提取物清除DPPH自由基的测定方法[期刊论文]-福建农林大学学报（自然科学版） 2005(1)。

DPPH自由基清除法[文献] Xican Li, Jing Lin, Yaoxiang Gao, Weijuang Han, Dongfeng Chen. Antioxidant activity and mechanism of Rhizoma Cimicifugae. Chemistry Central Journal. 2012; 6(1):140.[原理] DPPH（1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical）即1,1-二苯基-2-苦基肼基自由基。

分子中，由于存在多个吸电子的-NO2和苯环的大π键，所以，氮自由基能稳定存在。

N22当DPPH自由基被清除，其最大吸收波长519nm处的吸光度A值随之减小。

DPPH这种稳定的自由基为清除自由基活性的检测提供了一个理想而又简单的药理模型。

[实验步骤]1.1 DPPH测试液的配制取DPPH 1mg溶于约20mL溶剂（乙醇、95乙醇或甲醇）中，超声5min，充分振摇，务使上下各部分均匀。

取1mL 该DPPH溶液，在519nm处测A值，使A＝1.2-1.3之间最佳。

该DPPH溶液最好避光保存，3.5小时内用完。

1.2 样品液的配制样品用合适的溶剂溶解，为便于计算，可配成1mg/mL浓度。

溶剂根据样品的极性进行选择，首选95乙醇或无水乙醇，如不溶可用DMSO。

1.3 预试取DPPH溶液2mL，往其中加少量样品液，加样时，先少后多渐加，边加边混合，并观察溶液的褪色情况，当溶液颜色基本褪去时，记下样品的加样量。

此加样量即为样品的最大用量，在此最大用量的基础上，往前设置5个用量，使之成等差数列。

【如】在预试过程中，发现加样到200μL时，DPPH溶液颜色基本褪去，则100μL为该样品液的最大用量。

其用量梯度宜设为40、80、120 、160、200μL。

1.4测量A0值的测量：取DPPH溶液2 mL加入到小试管（或玻璃瓶）中，加95乙醇（或无水乙醇）1mL，充分混合，测A值（519nm），此A值为A0（A0多在0.7-0.9之间）。

收稿日期:2003-11-06 修回日期:2004-12-05基金项目:福建省林业厅基金资助项目(闽林[2000]08).作者简介:郑德勇(1966-),男,副教授.研究方向:树木提取物、林产化工工艺与设备.竹叶提取物清除DPPH 自由基的测定方法郑德勇1,安鑫南2(1.福建农林大学材料工程学院,福建福州350002;2.南京林业大学化学工程学院,江苏南京210037)摘要:确定了以光度计比色法测定天然抗氧化剂清除二苯基苦基苯肼(DPPH )自由基能力的条件.通过测定抗坏血酸、槲皮素、硫脲和芦丁的DPPH 自由基清除率曲线,提出以IC 50值作为评价试样清除DPPH 自由基能力的指标,并将此应用于21种丛生竹竹叶提取物清除DPPH 自由基能力的测定.关键词:竹叶提取物;光度计比色法;清除能力;二苯基苦基苯肼中图分类号:Q946文献标识码:A 文章编号:100627817(2005)0120059204D eterm i n i n g m ethod of D PPH free rad i ca l scaveng i n g acti v ity of bam boo leaf extracti ves ZHENG De 2yong 1,AN Xin 2nan 2(1.College of Materials Engineering,Fujian Agriculture and Forestry University,Fuzhou,Fujian 350002,China;2.College of Che m ical Engineering,Nanjing Forestry University,Nanjing,J iangshu 210037,China )Abstract:A s pectr ophot ometric method f or deter m ining 1,12di phenyl 222p icryl 2hydrazyl (DPPH )free radical scavenging activity of natural anti oxidants was put f or ward .The evaluating criteri on of DPPH free radical scavenging activity was regarded as “I C 50”by deter m ining the scavenging rate curves of ascorbic acid,quercetin,thi ocarba m ide and rutin .The DPPH free radical scavenging ac 2tivity of extractives fr om 21s pecies of cluster 2ba mboo ′s leaf were deter m ined by this method .Key words:leaf extractive of cluster 2ba mboo;s pectr ophot ometry;scavenging activity;1,12di phenyl 222p icryl 2hydrazyl植物抗氧化剂广泛应用于食品、医药、保健品和化妆品等行业[1-4].竹叶抽提物含有黄酮、苷类、活性多糖及特种氨基酸等[5,6],具有显著的抗氧活性、防腐性能和抑菌作用[7-9].竹叶提取物中的抗氧化有效成分主要是水溶、醇溶性物质,可通过测定二苯基苦基苯肼(DPPH )自由基的清除能力进行抗氧化活性研究.清除自由基的检测方法有许多种[10,11],体内试验比较灵敏、繁琐,周期较长,费用高,不适于大量样品的测定.大量样品的抗氧化活性筛选需采用体外实验法[12-15],其中电子自旋共振波谱法(ESR )是测定自由基的最直接而有效的体外试验技术,但需要昂贵的仪器和复杂的自由基捕集技术.DPPH 检测法[16,17]是通过DPPH 分子中1个稳定的自由基与抗氧化剂提供的1个电子配对结合,使DPPH 的特征紫色消失,因此可用于抗氧化剂清除自由基能力的评价.1　材料与方法1.1　仪器与试剂HP1100高效液相色谱仪(DAD 检测器)为美国安捷伦公司产品;UV2000型紫外分光光度计为上海光谱仪器厂产品.DPPH 的质量分数≥95%(Sig ma 产品).配制6.5×10-4mol ・L -1乙醇贮备液,置于冰箱,临用前用体积分数为50%的乙醇稀释.槲皮素、芦丁的质量分数≥95%.其他试剂均为分析纯.1.2　试样的制备竹叶采集于福建农林大学南平校区校园和南平市城郊林场丛生竹种源地.取约500g 竹叶,用清水洗净晾干,用微波炉加热30s 杀青,取出风干,破碎,并过20-80目筛,备用.取2份各5.0g 竹叶试样,分别经20mL 石油醚脱脂处理后,加入100mL 体积分数为60%的乙醇50℃提取10h (2次),倒出提取液,抽福建农林大学学报(自然科学版)第34卷第1期Journal of Fujian Agriculture and Forestry University (Natural Science Editi on )2005年3月滤,离心分离,提取液50℃真空浓缩,体积分数为50%的乙醇定容25.0mL,得到测试液.1.3　清除自由基能力的测定在试管中依次加入2.5mL 6.5×10-5mol ・L -1DPPH 溶液和1.5mL 体积分数为50%的乙醇,总体积为4.0mL,混匀20m in 后,于1c m 比色皿中测定D (517n m ),记为D 0;加入2.5mL 6.5×10-5mol ・L -1的DPPH 溶液和1.5mL 待测试样溶液,测定值记为D s ;加入2.5mL 体积分数为50%的乙醇和1.5mL 待测试样溶液,测定值记为D r .按式(1)计算DPPH 自由基清除率[18,19].清除率/%=1-D s -D r D 0×100(1)　抗氧化剂清除自由基能力采用清除DPPH 的I C 50值表示.将待测抗氧化剂配制成系列溶液,测定抗氧化剂质量与DPPH 自由基清除率,并绘制曲线,由曲线读取DPPH 自由基清除率为50%时所需抗氧化剂质量,按式(2)计算IC 50值.重复测定2次,平均值即为测定结果.因此,IC 50的物理意义为:当达到50%清除率时,单位质量抗氧化剂所清除的DPPH 质量.I C 50=50%×加入的DPPH 质量试样溶液中溶质质量(2)　1.4　提取物成分的测定取5.0mL 试液用烘干法测定固含物.采用按亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定总黄酮含量[20].采用HP LC 法测定芦丁含量,色谱条件为L i Chr os pher 100RP 28色谱柱(长100mm ,直径3.9mm ),甲醇∶磷酸(质量分数为0.3%)=65∶35,流速为0.8mL ・m in -1,进样6μL,检测波长为256nm.2　结果与分析图1　D PPH 紫外吸收光谱图　Fig .1　UV s pectrum of DPPH2.1　D PPH 紫外吸收光谱与测定波长的确定每个DPPH 分子在溶液中可生成一个稳定的含氮自由基,具有典型紫色,当它与提供1个电子的自由基清除剂作用时,生成无色产物,使溶液的典型紫色变浅.分别测定加入适量芦丁和槲皮素后的DPPH 溶液于280-600n m 的紫外光谱图.由图1可知,DPPH 溶液在320和517n m 的光密度都具有极大值,加入芦丁和槲皮素后这2个极大值都降低了,且517nm 处的极大值降低较显著,故选用D (517nm )表示DPPH 含量的变化可提高测定灵敏度.2.2　D PPH 溶液稳定性试验为了了解DPPH 自由基测定体系在天然抗氧化剂作用下光密度值随时间的变化规律,在DPPH 溶液中加入3种不同含量的槲皮素,每隔5-10m in 测定D (517nm ).结果表明在最初20m in 内,光密度下降较快;在20-40m in 内,反应体系的光密度基本保持不变;而50m in 后光密度的下降也有加快趋势.故测定时选定反应时间为20-30m in 较适宜.2.3　D PPH 溶液光密度曲线的测定在1.0×10-6-634×10-6mol ・L -1内按一定浓度间距配制18个系列DPPH 标准溶液,测定溶液的D (517n m ).结果发现,在1.0×10-6-200×10-6mol ・L -1范围内DPPH 溶液浓度与其光密度基本呈线性关系.线性方程为y =7116x +0.0035,R =0.9995,F =7281>F 0.01(1,8)=11.3(y 表示光密度值,0.05≤y ≤1.5;x 表示DPPH 含量).说明DPPH 溶液的光密度在一定范围内可表示为溶液中DPPH 的浓度,相应DP 2PH 溶液浓度的线性范围为1.0×10-5-20×10-5mol ・L -1. 抗坏血酸、槲皮素、芦丁和硫脲等在2.0×10-6-2000×10-6mol ・L -1内按一定浓度间距用体积分数・06・福建农林大学学报(自然科学版)第34卷为50%的乙醇配制成13个系列标准溶液,测定其DPPH 清除率.各抗氧化剂的DPPH 清除率与各抗氧化剂浓度均呈近似指数关系,在抗氧化剂浓度较低时,DPPH 清除率迅速上升,抗氧化剂浓度与DPPH 清除率之间接近线性关系;DPPH 清除率达到极大值时,继续提高抗氧化剂浓度,其DPPH 清除率不再上升.2.4　几种抗氧化剂的DPPH 清除率曲线研究各种抗氧化剂清除DPPH 的能力中发现,抗氧化剂浓度在4.0×10-6-40×10-6mol ・L -1范围内抗氧化剂浓度与DPPH 清除率之间基本呈线性关系.线性方程分别表示如下.抗坏血酸:y 1=16302x +0.2586,R =0.999,F =1884>F 0.01(1,3)=34.1;槲皮素:y 2=7471.3x +0.0675,R =0.977,F =64.2>F 0.01(1,3)=34.1;芦丁:y 3=5488.5x +0.118,R =0.986,F =104.7>F 0.01(1,3)=34.1;硫脲:y 4=7330.5x +0.1154,R =0.989,F =130.4>F 0.01(1,3)=34.1.其中:y 为DPPH 清除率,x 为抗氧化剂浓度.可见,在一定范围内,可以用DPPH 清除率表示抗氧化剂的自由基清除能力.　图2　几种抗氧化剂的D PPH 清除率曲线　Fig .2　Rates of scanvenging DPPH free radical activity of anti oxidants2.5　D PPH 清除能力的表示方法由于采用的DPPH 试液与试样溶液的浓度不同,不同试验测得的自由基清除率难以比较,造成测定资源浪费;此外,当抗氧化剂浓度较高时,其浓度与DPPH 清除率不成线性关系.因此“清除率”不能很好地表示抗氧化剂的活性.从图2中曲线形状可以看出,采用清除率极大值点或其他特征点所对应的抗氧化剂含量比较合理.由于极值点的测定较困难,误差也较大,而I C 50较易在曲线上准确标定,因此选择抗氧化剂的自由基清除能力为测定指标.采用该法测定的抗坏血酸、槲皮素、硫脲和芦丁的IC 50分别为8.31、1.00、3.82、0.41.IC 50值越高,抗氧化剂的自由基清除能力越强,可见抗坏血酸是较强的抗氧化剂.2.6　竹叶提取物清除D PPH 能力的测定选择抗氧化剂的自由基清除能力为测定指标,测定了21种丛生竹竹叶提取物的DPPH 清除率,并绘制曲线,计算出黄酮和固形物的IC 50.每种竹叶提取物均具有一定的清除自由基能力.与2.5节的测定结果相比,竹叶提取物以黄酮计算的IC 50与以槲皮素计算的比较接近,而以固形物计算的I C 50约为芦丁的50%.但竹叶提取物中不仅含有具有清除自由基能力的黄酮类,活性多糖类、特种氨基酸、植物内部的活性氧代谢、抗氧化酶活性[21,22]和各种微量元素、叶绿素等物质,也可能对IC 50的测定造成影响,因此究竟哪些成分对清除自由基能力贡献较大,尚需进一步研究.3　小结通过研究DPPH 溶液紫外光谱、浓度与光密度的关系,以及在DPPH 溶液中加入槲皮素和芦丁后的光密度特性等,认为采用比色法测定天然抗氧化剂清除自由基能力的条件是:波长517nm ,反应时间20-30m in .通过测定抗坏血酸、槲皮素、芦丁和硫脲的DPPH 清除率曲线,提出以IC 50值作为评价试样清除自由基能力的指标,抗坏血酸、槲皮素、硫脲和芦丁的I C 50分别为8.31、1.00、3.82、0.41.进而测定21种丛生竹竹叶提取物清除自由基的能力,分别以黄酮和固形物计算的I C 50值分别为1.07和0.19.致谢:丛生竹试样采集得到福建农林大学林学院陈世品和南平市城郊林业站吴丽华的大力支持和帮助,特此致谢|・16・第1期郑德勇等:竹叶提取物清除DPPH 自由基的测定方法参考文献:[1]郑德勇,安鑫南.植物抗氧化剂研究展望[J ].福建林学院学报,2004,24(1):88-91.[2]李清禄,林新华.增效脂溶性茶多酚溶液的制备及其在食用植物油中的抗氧化性能[J ].福建农业大学学报,2001,30(2):244-249.[3]林河通,邹日娥.延长冷藏龙眼果实货架寿命的技术[J ].福建农业大学学报,1997,26(1):113-118.[4]郑宝东,陈丽娇.几种抗氧化剂对余甘汁抗氧化的影响[J ].福建农业大学学报,1994,23(3):347-350.[5]陆志科,谢碧霞.竹叶化学成分的分析与资源的开发利用[J ].林业科技开发,2003,17(1):6-9.[6]许钢,张虹,胡剑.竹叶中的黄酮的提取研究[J ].分析化学研究简报,1999,27(7):857-859.[7]唐莉莉.竹叶多糖的分离提取及活性研究[J ].食品研究与开发,2000,21(1):8-10.[8]郑德勇,安鑫南.丛生竹叶提取物的成分与清除自由基的能力[J ].福建林学院学报,2004,24(3):193-196.[9]姚志湘,粟晖,韦建平,等.竹叶中有效成分的提取条件及抗氧化的活性研究[J 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竹叶黄酮的应用及市场概况一、竹子概述竹子是禾本科( Gram ineae ) 竹亚科(Bambusoideae)多年生常绿植物，有着复杂的次生代谢。

世界竹类植物约有70－80 属1 300多种，其中我国约有39属500余种。

我国江南竹资源丰富，竹林面积约为720万公顷，主要分布在广东、广西、福建、浙江、湖南、江西、四川、江苏、贵州和云南等省份。

竹叶在我国有悠久的利用历史，是一味传统的清热解毒药。

近年来对竹子的研究发现，竹叶中含有大量对人体有益的活性物质，包括黄酮酚酸类、生物活性多糖、氨基酸肽类、蒽醌类、萜类内酯等，其中酚酸类化合物、蒽醌类化合物、萜类内酯和生物碱等都有着较强的抑菌杀菌作用。

竹叶中主要有效成份的含量为：总黄酮含量1. 18% ～ 2. 02%，总酚含量2. 21%～2. 86%，总糖含量14. 35%～24. 61%，水溶性糖含量7. 86%～11. 45%， 多糖6. 49%～14. 55%，蛋白质含量10. 24%～16. 68%，含氮量2. 13%～2. 65%。

淡竹叶2002年被卫生部列入“既是食品又是药品的物品名单”。

二、竹叶黄酮概述又名竹叶抗氧化剂，英文名称antioxidant of bamboo leaves， 简称AOB，是从竹叶中提取出来的具有生理活性的生物黄酮，它是一种高效的生物抗氧化剂。

AOB为黄色粉末或晶体，总黄酮糖苷含量在≥24％，总香豆素类内酯≥12％，包括黄酮类、内酯类和酚酸类化合物，是一组复杂的、而又具有相互协同增效作用的混合物。

其中，黄酮类化合物主要是碳苷黄酮，四种代表化合物为：荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和异牡荆苷，内酯类化合物主要是羟基香豆素及其糖苷，酚酸类化合物主要是肉桂酸的衍生物，包括绿原酸、咖啡酸和阿魏酸等。

竹叶抗氧化物是一种具有本土资源特色和自主知识产权的、安全高效经济的天然食品抗氧化剂，于2003年底通过国家评审，2004年4月被批准列入《中华人民共和国食品添加剂使用卫生标准》(GB2760—1996)，允许的使用范围是：食用油脂、肉制品、水产品和膨化食品，最大使用量0.5g／kg。

不同溶剂竹叶提取物的抗氧化活性研究摘要：依次采用石油醚、氯仿、乙醇和水作为提取溶剂，竹叶提取物分别从对·OH 和O2-·的清除率和还原力比较研究其抗氧化活性。

结果表明:不同溶剂竹叶提取物对·OH和O2-·具有一定的清除能力, 且随浓度的增大而抗氧化性增强；随着不同溶剂竹叶提取物浓度的增大，其还原力显著增强。

该研究为竹叶提取物在食品和医药行业的应用提供了科学依据。

关键词：竹叶提取物抗氧化活性Study on the Antioxidant Activity of Different Solvent Extracts of Bamboo LeavesAbstract: Bamboo leaves were sequentially extracted with petroleum, chloroform, methanol and water, and the antioxidant abilities of the extracts of different solvent from bamboo leaves finally the scavenging effect on superoxide anion and hydroxyl radical and reducing power were determined. Result showed that the scavenging rate of bamboo leaves extracts to superoxide anion radical and hydroxyl radical assumed rise trend with the increase of extracts concentration. This study provided scientific basis for the application of cassia seed extracts in the line of food and medicine．Key Words: Bamboo Leaves Extract Antioxidant activity【引言】目前，抗氧化剂已广泛应用于食品工业、医药行业、和化妆品行业。

食品中植物提取物的抗氧化活性评价方法随着人们对健康生活的追求，越来越多的人关注食品中的植物提取物，并且研究表明这些植物提取物具有抗氧化活性。

那么问题来了，我们如何评价食品中植物提取物的抗氧化活性呢？本文将介绍一些常用的评价方法。

一、体外抗氧化活性评价方法1. DPPH 自由基清除法：DPPH（2,2-二苯基-1-苦肟基-1-丙烷）是一种广泛用于评价抗氧化活性的化合物，其带有紫色。

在受到自由基清除作用后，它会从紫色转变为黄色。

这个方法的原理是通过测量样品对DPPH自由基的清除能力来评价其抗氧化活性。

2. ABTS 自由基清除法：ABTS（2,2'-联氨基二（-2,6-二甲基苯基）氧化物）也是一种常用的评价抗氧化活性的化合物。

ABTS在受到自由基清除作用后，其吸收峰会由蓝色转变为无色。

通过测量样品对ABTS自由基的清除能力，可以评价其抗氧化活性。

3. 总抗氧化能力评价法：该方法通过测量样品与抗氧化剂（如维生素C或天然多酚）的协同作用来评价其抗氧化能力。

通常使用Fe2+和Fe3+离子体系作为模型，测量样品对Fe2+的抗氧化能力。

这个方法还可以评估样品中各种抗氧化剂之间的协同作用。

二、体内抗氧化活性评价方法1. SOD酶活力测定法：SOD（超氧化物歧化酶）是一种常见的抗氧化酶，能够清除生物体内产生的超氧阴离子自由基。

通过测量样品对SOD酶活力的影响，可以评价其在体内的抗氧化活性。

2. MDA含量测定法：MDA（丙二醛）是脂质过氧化产生的代谢产物，也是氧化应激损伤的指标之一。

通过测量样品对MDA含量的影响，可以评价其抗氧化活性。

这个方法常用于评价食品对脂质过氧化的抑制效果。

3. 细胞实验法：利用细胞模型评价抗氧化活性是一种比较常见的方法。

可以通过测量样品对细胞的保护效果，如抑制细胞氧化应激、提高细胞存活率等来评价其抗氧化活性。

这些方法虽然各有特点，但也存在一些局限性。

例如，体外抗氧化活性评价方法无法真实反映样品在体内的抗氧化能力；而体内抗氧化活性评价方法需要动物实验，成本较高且时间较长。

4种竹叶营养成分分析及其黄酮提取物体外抗氧化活性研究欧阳吾乐; 雷福红; 杨亚晋; 刘莉莉; 李青青; 郭爱伟【期刊名称】《《天然产物研究与开发》》【年(卷),期】2019(031)010【总页数】7页(P1669-1674,1830)【关键词】竹叶; 营养成分; 黄酮提取物; 抗氧化【作者】欧阳吾乐; 雷福红; 杨亚晋; 刘莉莉; 李青青; 郭爱伟【作者单位】西南林业大学生命科学学院; 云南省高校林木生物技术重点实验室昆明650224【正文语种】中文【中图分类】R284.2竹子是禾本科(Poaceae)竹亚科(Bambusoideae)多年生常绿植物，全世界记载的竹子约有60属1 200多种，广泛分布于东南亚、印度、中国、日本和南美等地[1]。

我国约有30属300余种[2]，而云南有“竹类故乡”之誉，是公认的竹类植物的起源地和现代分布中心之一，有29属220种，特有种在100种以上[3]。

竹叶具有一定的药用功效，中国古代许多药典都记载了竹子的药用价值，在《中华本草》中收录了紫竹(Phyllostachys nigra)、淡竹 (Phyllostachys glauca)、苦竹(Pleioblastus amarus)、毛竹(Phyllostachys heterocycla)、慈竹(Neosinocalamus affinis)、刺竹(Bambusa blumeana Schult.f)和桂竹(Phyllostachys bambusoides)等竹，竹叶具有清热除烦、消痰、止咳、健脾、生津利尿等功效，主治热病、烦渴、小儿惊痫、舌疮等[4]。

近年来竹子植物化学方面的研究表明，竹叶中含有许多天然活性成分如黄酮类、生物碱、有机酸、萜类、酚类、蒽醌、鞣质、皂甙、多糖等化合物[5]，其中黄酮类化合物是竹叶中重要的活性物质，竹叶中黄酮含量较高的有麻竹(Dendrocalamus latiflorus)为2.02%，毛金竹(Phyllostachys nigra)为1.98%，毛竹为1.70%，高节竹(Phyllostachys prominens)为1.55%，较低的有四季竹(Oligostachyum lubricum)(1.18%)和苦竹(1.35%)等[6]。

竹叶黄酮的抗氧化性能研究陈豪，陈欢，胡丁，郭辉1，罗宇倩1(1、浙江工业大学药学院，杭州，310014；2、浙江竹类资源生物技术研究开发中心，安吉，313300)摘要：采用不同的方法(DPPH法、邻苯三酚自氧化法(325 nm)和 Fenton 法)评价了竹叶黄酮的抗氧化活性,以Vc和茶多酚为阳性对照品.结果表明: 结果表明，竹叶黄酮具有很强的清除超氧负离子自由基（O2-）和DPPH自由基的能力，其EC50相应为18.3μg/ml和12.8μg/ml，分别是VC的约3.4倍和1.4倍；竹叶黄酮在清除羟自由基（·OH）时，EC50为0.67 mg/mL，比维生素C效果好。

关键词：竹叶；黄酮；抗氧化性Study on Antioxidant Activity of flavonoids from bamboo leavesChen hao,Chen huan, Hu ding,Guo Hui1, Luo Yuqian(1、College of Pharmacognosy of Zhejiang University of Technology Hangzhou 310014 Zhejiang2、Biological Technology R&D Center of Bamboo Resources, Anji 313300, Zhejiang) Abstract: The antioxidant activity of total flavonoids from bamboo leaves was determined by various assays, including DPPH radical-scavenging, self-oxidation of 1, 2, 3-phentriolassay method (325 nm) and Fenton reactions. The results showed that flavonoids from bamboo leaves have very strong scavenging capabilities for superoxide anion and DPPH free radical, their EC50values are 18.3μg/ml and 12.8μg/ml respectively, and are approximately 3.4 times and 1.4 times as much as that of vitamin C respectively. The scavenging capability of bamboo leaves flavonoids for hydroxyl radical is stronger than that of vitamin C, weaker than tea polyphenol, and its EC50 is 0.67 mg/mL.Key words: bamboo leaves; flavonoids; antioxidation淡竹叶和淡竹沥是中医一味传统的清热解毒药，早已为我国人们所认识。

天然植物有效成分的萃取及其抗氧化能力研究一、研究背景随着科技的发展和人们生活水平的提高，天然植物有效成分在食品、药品、化妆品等领域具有广泛的应用前景。

其中，植物中的抗氧化成分对于预防疾病、延缓衰老具有重要意义。

本方案旨在研究天然植物有效成分的萃取方法及其抗氧化能力，为相关领域提供理论依据。

二、研究目的1.探究不同萃取方法对天然植物有效成分的提取效果。

2.分析比较不同植物有效成分的抗氧化能力。

3.为天然植物有效成分的开发利用提供实验依据。

三、研究内容1.天然植物有效成分的萃取方法研究（1）选择具有代表性的天然植物，如绿茶、银杏、人参等。

（2）比较研究以下萃取方法：水提法、醇提法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法等。

（3）通过单因素实验和正交实验，优化萃取条件，提高有效成分的提取率。

2.天然植物有效成分抗氧化能力研究（1）采用高效液相色谱（HPLC）等方法对提取液中的有效成分进行定量分析。

（2）利用DPPH自由基清除法、ABTS自由基清除法、铁离子还原法等方法评价植物提取液的抗氧化能力。

（3）分析不同植物有效成分的抗氧化活性，筛选出具有较高抗氧化能力的植物种类。

四、研究方法1.材料与仪器（1）实验材料：绿茶、银杏、人参等天然植物。

（2）实验仪器：超声波清洗器、微波提取器、高效液相色谱仪、离心机、紫外可见分光光度计等。

2.实验步骤（1）天然植物有效成分的萃取：采用不同的萃取方法，对植物样品进行提取，优化提取条件。

（2）有效成分的定量分析：采用HPLC等方法对提取液中的有效成分进行定量分析。

（3）抗氧化能力评价：利用DPPH自由基清除法、ABTS自由基清除法、铁离子还原法等方法评价植物提取液的抗氧化能力。

五、预期成果1.确定一种高效、环保的天然植物有效成分萃取方法。

2.明确不同植物有效成分的抗氧化能力，为相关产品的研发提供理论依据。

3.发表相关学术论文，为天然植物有效成分的研究与应用提供参考。

六、研究进度安排1.第一阶段（1-3个月）：查阅文献，确定研究方案，进行材料选购和预处理。