HPLC-基础知识

高效液相色谱知识收藏1. 分离原理：HPLC利用固定在填料中的固定相和流动相（溶剂）之间的相互作用来分离混合物中的化合物。

固定相通常是多孔填料，而流动相则是溶解样品混合物的溶剂。

在流动相的作用下，样品中的化合物会以不同速率通过固定相，从而实现分离。

2. 设备组成：HPLC主要由溶剂输送系统、样品进样器、固定相柱和检测器组成。

溶剂输送系统用于向柱中输送流动相，样品进样器用于将样品注入HPLC系统，固定相柱用于实现化合物的分离，检测器用于检测分离出的化合物。

3. 应用领域：HPLC广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全、生命科学研究等领域。

它可以用于分离和测定各种化合物，包括药物、天然产物、食品添加剂等。

4. 操作要点：在进行HPLC分析时，需要注意溶剂的选择、固定相柱的条件、检测器的调试等细节。

同时，样品的预处理和进样器的设定也会影响分析结果的准确性和稳定性。

5. 数据分析：HPLC分析通常会生成大量的数据，包括色谱图谱、保留时间、峰面积等。

对这些数据进行分析和解释是HPLC分析的关键步骤，可以借助数据处理软件进行数据分析和处理。

总的来说，HPLC是一种高效、准确的分析技术，可广泛应用于化学、生物和医药领域。

了解HPLC的基本原理和操作要点，可以有效提高样品分析的准确性和效率。

HPLC是一种高效、准确的分析技术，可广泛应用于化学、生物和医药领域。

了解HPLC的基本原理和操作要点，可以有效提高样品分析的准确性和效率。

在HPLC分析中，固定相柱是至关重要的部分，不同的固定相柱适用于不同的样品类型和分离要求。

以下是一些常见的固定相类型：1. 反相色谱柱：反相色谱利用极性差异来进行化合物的分离，通常用于水溶性化合物的分离。

反相色谱柱的填料通常是非极性的，比如碳链分子。

常见的反相色谱柱填料包括C18、C8、C4等，它们的碳链长度不同，可以实现对不同极性化合物的分离。

2. 正相色谱柱：正相色谱是基于化合物在极性填料上的分离，适用于非极性化合物的分离。

_HPLC基础高效液相基本原理和使用方法HPLC（高效液相色谱）是一种分离和分析化学品的常用技术。

它通过将需要分离的化合物溶解在流动相中，然后在高压马达的驱动下，将混合物通过填充了固定相的柱子，利用固定相与流动相间的相互作用来分离混合物中的成分。

HPLC主要由柱子系统、流动相系统、检测系统和数据处理系统组成。

HPLC的基本原理是通过不同样品成分与固定相之间的相互作用来分离化合物。

固定相可以是各种各样的填料，如硅胶、C18烷基硅胶等。

当样品进入柱子时，各个成分会以不同的速度进行吸附和解吸，从而分离出各组分。

流动相系统是HPLC中的重要部分，它主要负责将混合物带入柱子和在柱子中移动。

流动相可以是无机溶液，也可以是有机溶剂与无机溶液的混合物。

常见的流动相包括水，甲醇，乙酸和醋酸等溶液。

检测系统用于检测流出柱子的化合物并生成信号。

HPLC的常见检测器包括紫外-可见光谱检测器（UV-Vis）和荧光检测器。

它们通过测量样品在不同波长下的吸收或荧光发射来定量分析各个组分。

数据处理系统用于接收和处理从检测系统获得的信号。

它可以通过线性回归方法将信号转换成样品浓度，并通过柱子排列和峰面积积分来确定样品中各成分的含量。

在使用HPLC之前，首先要准备样品。

样品的制备涉及样品的提取、纯化和浓缩等步骤。

样品提取方法的选择取决于所分析样品的性质和所需分离的化合物类型。

接下来，需要准备流动相。

选择适当的流动相是成功分析的关键。

流动相的选择根据所需分离的化合物种类，以及固定相和样品的亲疏水性来确定。

然后，选择适当的柱子。

柱子的选择取决于分析目标和分离条件。

HPLC柱子的尺寸和填料类型会影响分析的时间和分离的效果。

之后，需要设置检测器，并根据所需分析的化合物选择合适的检测器。

对于紫外-可见光谱检测器，需要选择合适的波长以提高灵敏度和分辨率。

在实际操作中，还需要考虑一些其他因素。

例如，设置压力和流速以控制样品在柱子中的流动速度。

还需要进行一些温度调节，以确保溶剂和柱子的稳定性。

第一章高效液相色谱仪的特点混合物最有效的分离、分析方法。

俄国植物学家茨维特在1906年分离叶绿素，色谱法是一种分离技术。

混合物分离过程：试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配。

一相固定不动，称为固定相。

另一相是携带试样混合物流过固定相的流体(气体或液体)，称为流动相。

特点：高压、高效、高速、高灵敏适合高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。

与GC 互补性三、液相色谱组成：（一）、输液系统泵、进样阀、色谱柱、检测器、工作站（记录仪）（二）、附件过滤装置、脱气装置、柱温箱、收集装置等等。

（三）、工作程序：液体进入泵-压力传感器-脉动缓冲器-进样阀-色谱柱检测器（四）、泵体组成部分：电机、马达、双柱塞串联泵腔、缓冲器、压力传感器、面贴（五）、检测器组成部分：1、电器部分（变压器、氘灯板、系统电源伴、控制板、显示板、前置板、面贴）2、光学部分（氘灯、灯箱、光学盒、凹面镜、分光镜、小参比、单色器、流通池、前置板）（六）、HPLC的分类1、吸附色谱Adsorption Chromatography用固体吸附剂作固定相，以不同极性溶剂做流动相依据样品中各组分在吸附剂上吸附性能的差别来实现分离。

2、分配色谱Partition Chromatography用载带在固相基体上的固定液做固定相，以不同极溶剂作流动相。

依据样品中各组分在固定液上分配性能的差别来实现分离。

3、离子色谱Ion Chromatography用高效微粒离子交换剂作固定相，以具有一定PH值的缓冲液做流动相，依据离子型化合物中各离子组分与离子交换剂上表面带电荷基团进行可逆离子交换能力的差别来实现分离。

4、体积排阻色谱Size Exclusion Chromatography用化学惰性的多孔性凝胶做固定相，按固定相对样品中组分分子体积阻滞作用的差别来实现分离。

又分：a、Gel Filtration Chromatography（GFC）以水为流动相的体积排阻色谱b、Gel Permeation Chromatography（GPC）以有机溶剂为流动相的体积排阻色谱5、亲和色谱以在不同基体上，键合多种不同特性的特性的配位体做固定相用具有不同PH值的缓冲溶液作流动相，依据生物分子（氨基酸、肽、蛋白质、核碱、核酸、核苷酸、酶等）与基体上键合的配位体之间存在的特异性亲和作用能力的差别而实现对具有生物活性的生物分子的分离。

1 液相色谱基础知识1.1 液相色谱名词术语Mobile phase：流动相，在色谱柱中存在着相对运动的两相，一相为固定相，一相为流动相。

流动相是指在色谱过程中载带样品（组分）向前移动的那一相。

Stationary phase：固定相，柱色谱或平板色谱中既起分离作用又不移动的那一相。

Gradient elution: 梯度洗脱,一个分析周期中，按一定程序不断改变流动相的浓度配比, 使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。

Detection wavelength：检测波长，retention time：保留时间，被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间Peak:峰Peak Base：峰基线，经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。

一般应平行于时间轴Peak Height：峰高，色谱峰顶点至峰底的距离。

Peak Width：峰宽，色谱峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点间的距离Peak Width at Half Height：半峰高宽Peak Area：峰面积Tailing Peak: 后沿较前沿平缓的不对称峰Leading Peak:前沿较后沿平缓的不对称峰Ghost Peak: 假峰，并非由试样所产生的峰Baseline Drift:基线漂移Baseline Noise:基线噪音Band Broadening:组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象. 1.2 流动相1.2.1 流动相类型正相液相色谱流动相：一般正相色谱固定相极性大于流动相极性，采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。

常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等），极性小的组分先出柱。

反相液相色谱流动相：一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。

HPLC基礎知識三、色譜法分類按兩相的物理狀態可分為：氣相色譜法(GC)和液相色譜法(LC)。

氣相色譜法適用於分離揮發性化合物。

GC根據固定相不同又可分為氣固色譜法(GSC)和氣液色譜法(GLC)，其中以GLC應用最廣。

液相色譜法適用於分離低揮發性或非揮發性、熱穩定性差的物質。

LC同樣可分為液固色譜法(LSC)和液液色譜法(LLC)。

此外還有超臨界流體色譜法(SFC)，它以超臨界流體（界於氣體和液體之間的一種物相）為流動相（常用CO2），因其擴散係數大，能很快達到平衡，故分析時間短，特別適用於手性化合物的拆分。

按原理分為吸附色譜法(AC)、分配色譜法(DC)、離子交換色譜法(IEC)、排阻色譜法(EC，又稱分子篩、凝膠過濾(GFC)、凝膠滲透色譜法(GPC）和親和色譜法。

（此外還有電泳。

）按操作形式可分為紙色譜法(PC)、薄層色譜法(TLC)、柱色譜法。

四、色譜分離原理高效液相色譜法按分離機制的不同分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法（正相與反相）、離子交換色譜法、離子對色譜法及分子排阻色譜法。

1〃液固色譜法使用固體吸附劑，被分離組分在色譜柱上分離原理是根據固定相對組分吸附力大小不同而分離。

分離過程是一個吸附－解吸附的平衡過程。

常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁，粒度5~10μm。

適用於分離分子量200~1000的組分，大多數用於非離子型化合物，離子型化合物易產生拖尾。

常用於分離同分異構體。

2〃液液色譜法使用將特定的液態物質塗於擔體表面，或化學鍵合於擔體表面而形成的固定相，分離原理是根據被分離的組分在流動相和固定相中溶解度不同而分離。

分離過程是一個分配平衡過程。

塗布式固定相應具有良好的惰性；流動相必頇預先用固定相飽和，以減少固定相從擔體表面流失；溫度的變化和不同批號流動相的區別常引起柱子的變化；另外在流動相中存在的固定相也使樣品的分離和收集複雜化。

由於塗布式固定相很難避免固定液流失，現在已很少採用。

現在多採用的是化學鍵合固定相，如C18、C8、氨基柱、氰基柱和苯基柱。

HPLC色谱柱的基础知识及使用技巧一、引言高效液相色谱法（HPLC）是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的分析技术。

色谱柱是HPLC系统的核心组成部分，其性能直接影响分析结果的准确性和可靠性。

本文将详细介绍HPLC色谱柱的基本原理、分类、使用及维护等方面的专业知识。

二、色谱柱的基本原理色谱法是一种基于不同物质在固定相和移动相之间的分配平衡进行分离的物理化学方法。

HPLC色谱柱的核心是固定相，它是由硅胶、氧化铝、活性炭等颗粒状物质组成。

当样品溶液通过色谱柱时，不同物质根据其与固定相的相互作用力大小，依次从固定相中解吸下来，从而实现各成分的分离。

三、色谱柱的分类1.正相色谱柱：适合分离极性化合物，如糖类、醇类等。

2.反相色谱柱：适合分离非极性化合物，如脂肪酸、烃类等。

3.离子交换色谱柱：适合分离带电离子或极性化合物，如氨基酸、核酸等。

4.体积排阻色谱柱：适合分离大分子物质，如蛋白质、多糖等。

四、色谱柱的选择与使用1.根据分析物的性质选择合适的色谱柱。

2.确保色谱柱不受污染，使用前需进行清洗和活化。

3.避免过度使用压力，以延长色谱柱的使用寿命。

4.定期更换色谱柱，以保证分析结果的稳定性。

五、色谱柱的维护与保养1.使用后及时清洗色谱柱，防止残留物对柱子的污染。

2.色谱柱应储存于干燥、避光的环境中，避免受潮或暴晒。

3.对于长期不用的色谱柱，应定期检查其性能并进行活化处理。

4.避免将色谱柱置于高温或低温环境中，以防止硅胶固定相产生裂纹或变形。

5.定期更换流动相，以保证流动相的质量和稳定性。

同时，流动相的pH值应控制在固定相所能承受的范围内。

6.在使用过程中，应时刻关注色谱柱的压力变化。

若发现异常压力或突然变化，应及时检查柱子是否堵塞或受损。

若确有问题，应立即停止使用并进行修复或更换。

7.在使用过程中，还应注意观察色谱峰的形状和大小。

若发现异常峰或分离效果变差，应考虑更换流动相或清洗柱子。

若问题仍未解决，应考虑更换色谱柱。

高效液相色谱知识收藏1.Agilent1100高压液相色谱仪基本操作步骤Agilent1100液相基本操作步骤 (2)2.Agilent1100高压液相色谱仪维护保养知识保养事项： (4)3.高压液相色谱HPLC常见故障及排除方法 (6)4.液相色谱柱使用及保养 (7)5.高压液相色谱HPLC培训教程(一) (8)6.高压液相色谱HPLC培训教程(二) (9)7.高压液相色谱HPLC培训教程(三) (11)8.高压液相色谱HPLC培训教程(四) (13)9.高压液相色谱HPLC培训教程(五) (16)10.高压液相色谱HPLC培训教程(六) (18)11.高压液相色谱HPLC培训教程(七) (21)12.高效液相色谱仪中反相HPLC柱子的清洁和再生 (22)13.HPLC对流动相的基本要求 (25)14.高效液相色谱 (26)15.Waters 600E-2487 HPLC系统SOPWaters高效液相色谱系统操作规程 (37)16.高效液相色谱仪(Agilent 1100)操作注意事项 (40)17.色谱扫盲班 (41)Agilent1100高压液相色谱仪基本操作步骤Agilent1100液相基本操作步骤(一)、开机：1、打开计算机,进入Windows NT （或Windows 2000）画面,并运行Bootp Server程序。

2、打开 1100 LC 各模块电源。

3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面。

4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。

5、把流动相放入溶剂瓶中。