细菌的培养法
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细菌培养细菌培养是指在体外环境中使用特定培养基和其他条件来促进细菌生长的一种方法。
它可以帮助我们在有限的条件下大量培育细菌,从而进行有关细菌的研究和应用。
细菌培养是一种用人工方法使细菌生长繁殖的技术。
细菌在自然界中分布极广,数量大,种类多,它可以造福人类,也可以成为致病的原因。
大多数细菌可用人工方法培养,即将其接种于培养基上,使其生长繁殖。
培养出来的细菌用于研究、鉴定和应用。
细菌培养是一个复杂的技术。
培养时应根据细菌种类和目的等选择培养方法、培养基,制定培养条件(温度、pH值、时间,对氧的需求与否等)。
一般操作步骤为先将标本接种于固体培养基上,做分离培养。
再进一步对所得单个菌落进行形态、生化及血清学反应鉴定。
培养基常用牛肉汤、蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、血液等和某些细菌所需的特殊物质配制成液体、半固体、固体等。
一般细菌可在有氧条件下,37℃中放18~24小时生长。
厌氧菌则需在无氧环境中放2~3天后生长。
个别细菌如结核菌要培养1个月之久。
由于细菌无处不在,因此从制备培养基时开始,整个培养过程必须按无菌操作要求进行,否则外界细菌污染标本,会导致错误结果;而培养的致病菌一旦污染环境,就会引起交叉感染。
以疾病诊断为目的进行的培养,要选择合适的标本(血、尿、便、脓液、分泌物等),并应结合临床情况解释所得结果。
以光合细菌培养方法为例。
光合细菌培养的方法,按次序分为容器、工具的消毒,培养基的制备,接种和培养管理四个步骤。
(一)容器、工具的消毒参考、此处从略。
(二)培养基的制备1.培养用水如果培养的光合细菌是淡水种,菌种培养可用蒸馏水,生产培养可用消毒的自来水(或井水)配制。
如果培养的光合细菌是海水种,则用天然海水配制培养基,注意在海水中加入磷元素时,不能用磷酸氢二钾,应用磷酸二氢钾,不然会产生大量沉淀。
2.灭菌和消毒菌种培养用的培养基应连同培养容器用高压蒸气灭菌锅灭菌。
小型生产性培养可把配好的培养液用普通铝锅或大型三角烧瓶煮沸消毒。
培养细菌真菌的方法
培养细菌和真菌是在实验室中进行的,以下是常用的方法:
1. 导入培养基:将所需的细菌或真菌菌株转移到含有适当培养基的培养皿中。
培养基通常包含适当的碳源、氮源、矿物质和生长因子,以促进微生物的生长。
2. 纯化培养:为了获得单一的细菌或真菌菌株,可以将其经过多次传代分离纯化。
这可以通过涂布、稀释等方法来实现。
3. 温度控制:细菌和真菌对温度的要求各不相同,通常会在适宜的温度下进行培养。
常见的温度范围为20-37摄氏度,但也有一些需要较低或较高温度的菌株。
4. 培养条件:不同菌株对于pH值、氧气和二氧化碳的要求也有所不同。
为了促进生长,可以调整培养条件以满足其需求。
5. 培养器具:常用的培养器具包括培养皿、试管、烧杯等。
这些器具应经过灭菌处理,以防止外部微生物的污染。
6. 培养时间:不同的细菌和真菌菌株具有不同的生长速度和生长周期。
培养时间的长短也会因此而有所不同。
需要注意的是,在进行细菌和真菌培养时,必须遵循实验室的安全操作规程,以防止对人员和环境造成污染和危害。
培养后的微生物菌株也应按照相关规定进行安全处理,以防止对环境和生物多样性造成影响。
实验一细菌的培养法一般细菌均可用人工方法进行培养,使其生长繁殖,以便进一步观察和研究它们的各种生物学特性。
为了获得良好的细菌培养物,在分离培养细菌时,除采用适宜的培养基并考虑到其他的培养条件(如温度、湿度、酸碱度、气体等)之外,掌握各种分离培养和接种的基本技术,也是重要环节。
在土壤、水、空气、以及人和动、植物体中,不同种类的细菌混杂地生活在一起。
若要研究其中某种细菌,就必须先将各种细菌进行分离,以得到只含有这一种细菌的纯培养。
分离培养细菌的方法有多种,平板划线法即是其中之一。
该法主要是借划线而将混杂的细菌在琼脂平板表面分散开,使单个细菌能固定在某一点,生长繁殖后形成单个的细菌集团(即菌落)以达到分离纯种的目的。
当细菌分离成纯种后,常需要接种到有关的培养基中,以测试其各种生物学性状。
一般可用斜面、液体和半固体培养基来检验细菌的培养特征,因此接种方法可相应的分为三种。
斜面培养基接种法常用于细菌的大量繁殖,保存菌种,或观察其某些生化特性。
琼脂斜面、尿素培养基、双糖铁培养基、柠檬酸盐培养基等具有斜面外形的固体培养基均可用此法接种。
液体培养基接种法可用于观察细菌不同的生长状况,有的呈均匀混浊,有的呈沉淀生长,还有的在液体表面形成菌膜;另外还可以供测定细菌生化特性之用。
凡是肉汤、葡萄糖蛋白胨水以及各种单糖发酵管等液体培养基均用此法接种。
穿刺接种法常用于半固体琼脂培养基、醋酸铅培养基、双糖铁培养基等的接种,前者用于测定细菌的动力,后二者则用于观察细菌的生化反应。
目的要求1.学习和掌握细菌分离和培养的各种基本技术。
2.进一步熟悉和掌握微生物的无菌操作技术。
材料1.菌种和培养基平板划线接种法斜面培养基接种法液体培养基接种法穿刺接种法菌种葡萄球菌和大肠杆菌的混合菌液大肠杆菌培养物大肠杆菌培养物枯草杆菌培养物变形杆菌培养物痢疾杆菌培养物培养基* 普通琼脂平板琼脂斜面培养基普通肉汤培养基半固体琼脂培养基*各培养基的组成及配置方法参见书后附录。
细菌的培养方法细菌的培养是微生物学实验中的重要步骤,正确的培养方法可以保证实验结果的准确性和可靠性。
在进行细菌培养之前,首先需要准备好培养基和培养条件。
培养基的选择应根据所需培养的细菌种类和实验目的来确定,而培养条件则包括温度、湿度、气体成分等因素。
接下来,我将介绍一些常用的细菌培养方法,希望能对您有所帮助。
首先,无菌操作是细菌培养的基础。
在进行细菌培养之前,需要做好无菌操作准备工作,包括清洁工作台、灭菌培养器具等。
操作者需要穿戴无菌手套,并在无菌条件下进行操作,以防止外界微生物的污染。
其次,常用的细菌培养方法包括表面培养和深层培养。
表面培养是将细菌培养在培养基表面,通常使用琼脂平板进行培养。
在进行表面培养时,需要将琼脂平板加热至液态状态后,倒入培养皿中,待琼脂凝固后,用无菌的接种环在琼脂表面划线接种。
而深层培养则是将细菌培养在培养基的深层,通常使用琼脂斜板或管内培养。
在进行深层培养时,需要将琼脂斜板或管内培养加热至液态状态后,倒入培养器具中,倾斜或斜放使琼脂凝固成斜面,然后用无菌的接种环在斜面上划线接种。
另外,对于不同种类的细菌,其培养条件也有所不同。
一般来说,大多数细菌的培养温度在30℃至37℃之间,但也有一些特殊的细菌需要在较低或较高的温度下进行培养。
此外,一些厌氧菌需要在无氧条件下进行培养,因此在培养这类细菌时需要使用厌氧培养器具,并在无氧条件下进行操作。
最后,细菌的培养时间也是需要注意的。
一般来说,细菌在培养基上的生长速度与培养条件、细菌种类等因素有关,因此在进行细菌培养时,需要根据具体情况控制培养时间,以保证细菌的生长和繁殖。
综上所述,正确的细菌培养方法对于微生物学实验的准确性和可靠性至关重要。
在进行细菌培养时,需要做好无菌操作准备工作,选择合适的培养基和培养条件,掌握常用的细菌培养方法,并根据不同细菌的特性进行相应的调整,以保证实验结果的准确性和可靠性。
希望本文对您有所帮助,谢谢阅读。
细菌的培养实验原理与方法
细菌的培养实验通过提供适宜的营养物质和环境条件,使细菌在实验室中快速繁殖和生长。
培养实验通常包括以下几个步骤:
1. 准备培养基:培养基是供细菌生长的营养物质的混合物。
根据细菌的需求,可以选择富含蛋白质、碳源、氮源、矿物质和水的培养基。
常用培养基包括营养琼脂糖平板、液体培养基等。
2. 预处理样本:如果从自然环境中获取样本,需要先进行预处理,如样本的稀释、过滤或接种到含有抗生素的培养基中。
3. 涂布或接种:将样本涂布在固体培养基的表面上,或者将样本接种到液体培养基中。
涂布可以通过将样本擦拭在琼脂糖平板上等方式进行。
4. 培养条件:在适宜的温度下,通常在30-37摄氏度之间,培养细菌。
温度过高或过低可能会抑制细菌的生长。
5. 培养时间:根据细菌的生长速度,选择适当的培养时间。
通常需要培养24-48小时,有些细菌可能需要更长的时间。
6. 细菌形态观察:使用显微镜观察细菌的形态特征,如形状、大小、颜色等。
7. 细菌计数:可以使用平板计数法或液体对数法对细菌进行计数。
需要注意的是,在进行细菌培养实验时,需要遵循无菌操作的原则,以防止其他细菌或霉菌的污染。
此外,实验室中还需要遵守相关的安全操作规程,如使用个人防护装备、正确处置废弃物等。
培养细菌真菌的方法步骤
一、准备工具和材料
1.培养皿:用于培养细菌和真菌的圆形或方形塑料或玻璃容器。
2.培养基:用于提供细菌和真菌生长所需营养的物质,可以是固体或液体。
3.接种环:用于将细菌或真菌从菌种中转移到培养基上的金属环。
4.灭菌锅:用于高温灭菌的工具,以杀死所有微生物。
5.显微镜:用于观察细菌和真菌形态的工具。
二、配置营养基
1.根据所培养的细菌或真菌的种类,选择适合的营养基配方。
2.将所需成分按比例称量并混合均匀。
3.加入适量的水,搅拌均匀,直到培养基呈适当粘稠度。
4.倒入培养皿中,等待凝固。
三、高温灭菌
1.将配置好的培养基放入灭菌锅中,进行高温灭菌。
2.灭菌时间根据培养基的种类和数量而定,一般需要15-30分钟。
3.灭菌完成后,将培养基取出,冷却至室温。
四、冷却接种
1.在无菌操作台上进行接种操作。
2.用接种环从菌种中取适量细菌或真菌,轻轻划在已冷却的培养基表面。
3.每个培养皿接种一个菌种,标记并放置在适宜的温度和湿度条件下培养。
4.根据需要,定期观察并记录细菌或真菌的生长情况。
以上是培养细菌真菌的基本步骤,具体操作可能会因所使用的菌种和培养条件而有所不同。
在进行培养时,建议按照相关指南和规范进行操作,以确保实验结果的准确性和可靠性。
(一)容器、工具的消毒。
(二)培养基的制备
1.培养用水
如果培养的光合细菌是淡水种,菌种培养可用蒸馏水,生产培养可用消毒的自来水(或井水)配制。
如果培养的光合细菌是海水种,则用天然海水配制培养基,注意在海水中加入磷元素时,不能用磷酸氢二钾,应用磷酸二氢钾,不然会产生大量沉淀。
2.灭菌和消毒菌种培养用的培养基应连同培养容器用高压蒸气灭菌锅灭菌。
小型生产性培养可把配好的培养液用普通铝锅或大型三角烧瓶煮沸消毒。
大型生产性培养则把经沉淀砂滤后的水用漂白粉(或漂白液)消毒后使用。
3.培养基配制根据所培养种类的营养需要选择合适的培养基配方。
按培养基配方把所需物质称量,逐一溶解,混合,配成培养基。
也可先配成母液,使用时按比例加入一定的量即可。
3
(三)接种培养基配好后,应立即进行接种。
光合细菌生产性培养的按种量比较高,一般为20%~50%,即菌种母液量和新配培养液虽之比为1∶4~1∶1,不应低于20%,尤其是微气培养,接种量更应高些,否则光合细菌在培养液中很难占绝对优势,影响培养的最终产量和质量。
4
(四)培养管理光合细菌的培养过程中,管理工作包括日常管理操作和测试,生长情况的观察、检查以及出现问题的分析处理等三个方面。
根据临床初步诊断及待检细菌的种类,可选用不同环境条件进行培养。
常用的有需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法。
为了提高检验的正确率,同一标本常同时采用两种或三种不同的培养法。
(一)需氧培养法本法是临床细菌室最常用的培养方法,适于一般需氧和兼性厌氧菌的培养。
将已接种好的平板、斜面和液体培养基等,置于35℃温箱中孵育18~24h,一般细菌可于培养基上生长,但有些难以生长的细菌需培养更长的时间才能生长。
另外,有的细菌最适生长温度是28℃~30℃,如鼠疫耶尔森菌,甚至在4℃也能生长,如李斯特菌。
(二)二氧化碳培养法有些细菌初次分离培养时须置5%~l0%C02环境才能生长良好,如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌,牛布鲁菌等。
常以下列方法供给C02。
1.二氧化碳培养箱:是一台特制的培养箱,既能调节C02的含量,又能调节所需的温度。
C02从钢瓶通过培养箱的C02,运送管进入培养箱内,调节好所需C02,浓度自动控制器后,将接种好的培养基直接放入培养箱中培养即可。
此法适于大型实验室应用。
2.烛缸法:将已接种好的培养基置干燥器内,并放入点燃的蜡烛。
干燥器盖的边缘涂上凡士林,盖上盖子,烛光经几分钟后自行熄灭,此时干燥器内C02含量约占5%~l0%,然后将干燥器放入35℃温箱内培养。
培养时间一般为18~24h,少数菌种需培养3~7天或更长。
3.化学法:按每升容积加入碳酸氢钠0.49和浓盐酸0.35ml的比例,分别置于容器内。
将容器连同接种好的培养基都放人干燥器内,盖紧干燥器的盖子,倾斜容器使浓盐酸与碳酸氢钠接触生成C02。
(三)厌氧培养法适用于专性厌氧菌和兼性厌氧菌的培养。
常用的厌氧培养法有:①疱肉培养基法;②焦性没食子酸法;③厌氧罐法;④气袋法;⑤厌氧手套箱法。
实验一细菌的培养法一般细菌均可用人工方法进行培养,使其生长繁殖,以便进一步观察和研究它们的各种生物学特性。
为了获得良好的细菌培养物,在分离培养细菌时,除采用适宜的培养基并考虑到其他的培养条件(如温度、湿度、酸碱度、气体等)之外,掌握各种分离培养和接种的基本技术,也是重要环节。
在土壤、水、空气、以及人和动、植物体中,不同种类的细菌混杂地生活在一起。
若要研究其中某种细菌,就必须先将各种细菌进行分离,以得到只含有这一种细菌的纯培养。
分离培养细菌的方法有多种,平板划线法即是其中之一。
该法主要是借划线而将混杂的细菌在琼脂平板表面分散开,使单个细菌能固定在某一点,生长繁殖后形成单个的细菌集团(即菌落)以达到分离纯种的目的。
当细菌分离成纯种后,常需要接种到有关的培养基中,以测试其各种生物学性状。
一般可用斜面、液体和半固体培养基来检验细菌的培养特征,因此接种方法可相应的分为三种。
斜面培养基接种法常用于细菌的大量繁殖,保存菌种,或观察其某些生化特性。
琼脂斜面、尿素培养基、双糖铁培养基、柠檬酸盐培养基等具有斜面外形的固体培养基均可用此法接种。
液体培养基接种法可用于观察细菌不同的生长状况,有的呈均匀混浊,有的呈沉淀生长,还有的在液体表面形成菌膜;另外还可以供测定细菌生化特性之用。
凡是肉汤、葡萄糖蛋白胨水以及各种单糖发酵管等液体培养基均用此法接种。
穿刺接种法常用于半固体琼脂培养基、醋酸铅培养基、双糖铁培养基等的接种,前者用于测定细菌的动力,后二者则用于观察细菌的生化反应。
目的要求1.学习和掌握细菌分离和培养的各种基本技术。
2.进一步熟悉和掌握微生物的无菌操作技术。
材料1.菌种和培养基平板划线接种法斜面培养基接种法液体培养基接种法穿刺接种法菌种葡萄球菌和大肠杆菌的混合菌液大肠杆菌培养物大肠杆菌培养物枯草杆菌培养物变形杆菌培养物痢疾杆菌培养物培养基* 普通琼脂平板琼脂斜面培养基普通肉汤培养基半固体琼脂培养基 *各培养基的组成及配置方法参见书后附录。
实验一细菌的培养法一般细菌均可用人工方法进行培养,使其生长繁殖,以便进一步观察和研究它们的各种生物学特性。
为了获得良好的细菌培养物,在分离培养细菌时,除采用适宜的培养基并考虑到其他的培养条件(如温度、湿度、酸碱度、气体等)之外,掌握各种分离培养和接种的基本技术,也是重要环节。
在土壤、水、空气、以及人和动、植物体中,不同种类的细菌混杂地生活在一起。
若要研究其中某种细菌,就必须先将各种细菌进行分离,以得到只含有这一种细菌的纯培养。
分离培养细菌的方法有多种,平板划线法即是其中之一。
该法主要是借划线而将混杂的细菌在琼脂平板表面分散开,使单个细菌能固定在某一点,生长繁殖后形成单个的细菌集团(即菌落)以达到分离纯种的目的。
当细菌分离成纯种后,常需要接种到有关的培养基中,以测试其各种生物学性状。
一般可用斜面、液体和半固体培养基来检验细菌的培养特征,因此接种方法可相应的分为三种。
斜面培养基接种法常用于细菌的大量繁殖,保存菌种,或观察其某些生化特性。
琼脂斜面、尿素培养基、双糖铁培养基、柠檬酸盐培养基等具有斜面外形的固体培养基均可用此法接种。
液体培养基接种法可用于观察细菌不同的生长状况,有的呈均匀混浊,有的呈沉淀生长,还有的在液体表面形成菌膜;另外还可以供测定细菌生化特性之用。
凡是肉汤、葡萄糖蛋白胨水以及各种单糖发酵管等液体培养基均用此法接种。
穿刺接种法常用于半固体琼脂培养基、醋酸铅培养基、双糖铁培养基等的接种,前者用于测定细菌的动力,后二者则用于观察细菌的生化反应。
目的要求1.学习和掌握细菌分离和培养的各种基本技术。
2.进一步熟悉和掌握微生物的无菌操作技术。
材料1.菌种和培养基平板划线接种法斜面培养基接种法液体培养基接种法穿刺接种法菌种葡萄球菌和大肠杆菌的混合菌液大肠杆菌培养物大肠杆菌培养物枯草杆菌培养物变形杆菌培养物痢疾杆菌培养物培养基* 普通琼脂平板琼脂斜面培养基普通肉汤培养基半固体琼脂培养基*各培养基的组成及配置方法参见书后附录。
2.接种环、接种针、酒精灯、记号笔、试管架等方法1.平板划线接种法(1)标记在培养皿底玻璃上,用记号笔注明接种的菌名、接种者姓名、班级、日期等。
(2)灭菌接种环点燃酒精灯,右手以持笔式握持接种环并放置火焰中烧灼灭菌,如图1-1,先将接种环的接种丝部分置于火焰中,待金属丝烧红并蔓延至金属环端,再直接烧灼金属环直至烧红,然后由金属环至金属杆方向快速通过火焰,随后再反方向通过火焰,如此2~3次。
图1-1 接种环的灭菌操作然后将接种环移开火焰,待其冷却。
注意,接种环不能距离火焰过远,一般应在距火焰10cm范围之内(视此范围为无菌环境);灭菌后的接种环不能再碰及他物。
(3)取菌种左手持装有葡萄球菌和大肠杆菌混合菌液的试管,用持有接种环的右手手掌及小指拔取试管棉塞,将试管管口迅速通过火焰2~3次进行灭菌。
将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中,取一接种环的混合菌液,然后退出菌种管。
将菌种管管口再次通过火焰2~3次灭菌,塞好棉塞,放至原来的位置。
(4)分离划线接种细菌(见图3-1)左手持琼脂平板培养基(将皿盖反放在桌上酒精灯附近),尽量使之直立以免空气中的细菌落入其中,并靠近火焰。
右手持接种环在琼脂平板上端来回划线,涂成一细菌薄膜(约占平板面的1/10),视为一区。
划线时使接种环与平板面成30~40度角,以腕力在平板表面行轻而快地来回滑动动作。
切记,接种环不应嵌进培养基内,避免将琼脂表面戳破。
旋转琼脂平板90度。
烧灼接种环,以杀灭环上的残留细菌,将接种环触及培养基表面以使其冷却。
灭菌接种环通过薄膜处作连续平行划线(约占平板1/5),此为二区。
注意接种环只通过薄膜1~2次,以获取薄膜处少量的细菌。
旋转琼脂平板90度。
烧灼接种环灭菌并使之冷却。
将灭菌接种环接二区连续平行划线(约占平板1/4),此为三区。
接种环只通过二区1~2次以获得少量细菌。
旋转琼脂平板90度。
接种环不必再灭菌,接三区连续平行划线,划满平板其余部分,此为四区。
注意各区接种线间尽量互不交接,以达到细菌逐渐稀释的目的。
(5)划线完毕,将琼脂平板放进皿盖,将培养皿倒放(这样可避免培养过程中凝结水自皿盖滴下,冲散菌落),送进37℃温箱培养。
(6)培养18~24小时后将培养皿取出。
观察琼脂平板表面生长的各种菌落,注意其大小、形状、边缘、表面结构、透明度、颜色等性状。
1 23 4图1-2 四区划线接种法2. 斜面培养基接种法(1)用记号笔在待接种的培养管上写明标记。
(2)点燃酒精灯。
(3)左手拇指、食指、中指及无名指分别握持菌种与待接种的培养基管,使菌种管位于左侧,斜面部均应向上,勿成水平,以免凝结水浸润培养基表面,甚至沾湿棉塞。
(4)以右手拇指和食指捏持转动两管棉塞,以便在接种时易于拔取。
(5)右手持接种环,在火焰上烧灼灭菌。
(6)以右手手掌及小指,小指及无名指分别拔取并夹持两管棉塞,将两管管口灭菌。
(7)将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管内,从斜面上轻轻挑取少量菌苔退出菌种管(注意,一要防止取菌过多;二要防止弄破培养基表面)。
再伸进待接种的培养基管,如图3-2进行斜面培养基接种,从斜面底部轻轻向顶端弯曲划线,不要触破培养基表面。
沾有细菌的接种环进出试管时不应触及到试管内壁和试管口。
(8)接种完毕,灭菌两试管的管口,塞好棉塞,并放至原来的位置上。
重新烧灼接种环,灭菌后放回试管架上。
接种好的试管放37℃温箱培养,18~24小时后观察生长情况。
图1-3 斜面培养基接种法3.液体培养基接种法(1)用记号笔在待接种培养基上写明标记。
(2)如斜面培养基的接种方法一样,握持菌种管及待接种的肉汤管。
(3)接种环灭菌冷却后,伸入菌种管取少量细菌再伸入肉汤管内,在接近液面管壁处轻轻研磨,蘸取少量肉汤调和,使菌混于肉汤中(见图3-3)。
塞好试管棉塞后,摇动液体,使细菌在液体中均匀分布。
(4)接种完毕,将接种环灭菌后放回试管架上。
肉汤管放37℃温箱培养,18~24小时后观察生长情况。
图1-4 液体培养基接种法4.穿刺接种法(1)用记号笔在待接种培养基上写明标记。
(2)如斜面培养基接种法,握持菌种管及待接种的半固体琼脂培养基。
(3)右手持接种针,灭菌冷却后,以针挑取菌苔,如图3-4垂直刺入半固体琼脂培养基的中心,刺达近管底部,但不必及于管底,然后循原路退出。
(4)接种完毕,接种针重行灭菌后放至试管架上,塞好棉塞,37℃培养18~24小时后取出观察细菌的生长情况。
图1-5 穿刺接种法实验二细菌的形态与结构各种细菌在一定环境条件下,有相对恒定的形态与结构。
了解细菌的形态与结构是鉴别细菌的重要方法之一。
此外,对分析细菌的致病性和免疫发生的机理等方面,也有一定的意义。
目的要求观察细菌的基本形态和一些细菌的特殊结构。
一、细菌的基本形态细菌在适宜的生长繁殖条件下所显示的形态可分为三大类:球菌、杆菌和螺形菌。
不同的细菌又可表现出不同的排列方式,在细菌的鉴别上有一定的参考价值。
材料1.球菌示教片葡萄球菌、链球菌和肺炎链球菌2.杆菌示教片大肠杆菌和炭疽杆菌3.螺形菌示教片霍乱弧菌方法1.使用显微镜的油镜观察球菌、杆菌和螺形菌的示教片。
2.注意各菌的形状、大小、排列方式等特点(注意:细菌染成什么颜色不是本实验要求,染色方法将在以后实验中实际操作)。
实验结果葡萄球菌链球菌肺炎链球菌大肠杆菌炭疽杆菌霍乱弧菌细菌形状细菌排列方式二、细菌的特殊结构细菌的特殊结构仅为某些细菌所具有,而且特殊结构的形成受到一定条件的限制。
虽然特殊结构不是细菌生存所必须的,但他们的存在将赋予细菌一定的功能,在致病性、抗原性、以及对细菌的鉴别上都有一定的意义。
材料1.破伤风梭菌示教片(示芽胞)2.肺炎链球菌示教片(示荚膜)3.变形杆菌示教片(示鞭毛)方法1.使用显微镜的油镜,观察细菌的芽胞、荚膜和鞭毛的示教片。
2.注意芽胞在菌体上的位置和大小;荚膜的大小及其与菌体的关系;注意鞭毛形态、数量及其位置。
将所观察到的细菌特殊结构的形态特点记录于下表中。
结果记录细菌破伤风梭菌肺炎链球菌变形杆菌特殊结构实验三革兰染色法活的细菌为无色半透明状,在普通光学显微镜下不易观察清晰。
若用染色的方法可使菌体表面及内部结构着色与背景形成鲜明对比,可在显微镜下清晰地观察其形态。
细菌的染色方法很多,其中最为广泛使用的一种鉴别染色法是由丹麦医生Christian Gram于1884年创建的革兰(Gram)染色法。
利用此法可将细菌分为革兰阳性细菌和革兰阴性细菌两大类。
革兰阳性菌因细胞壁中含有大量的肽聚糖和磷壁酸,可保留结晶紫与碘的复合物,并不被酒精脱色而显示为蓝紫色。
革兰阴性菌因其细胞壁中肽聚糖含量少,脂类物质含量高而被酒精脱色,经复染呈红色。
目的要求了解革兰染色的原理,掌握革兰染色的方法。
材料1.菌种葡萄球菌、大肠杆菌培养物2.染液结晶紫染液、卢戈(Rugol)碘液、95%酒精和沙黄染液3.其他玻片、接种环、酒精灯、无菌生理盐水等方法1.涂片取洁净玻片1张,作好标记后置实验台上。
点燃酒精灯,右手以持笔式握持接种环并放置火焰中烧灼灭菌。
用灭菌的接种环取无菌生理盐水2环,分别置于玻片左右两处。
然后左手持培养物琼脂平板;右手仍以持笔式将接种环再次放在火焰上灭菌,待接种环冷却后,挑取单一金黄色葡萄球菌菌落适量培养物,将培养物琼脂平板放回皿盖。
然后将挑取的细菌混合于其中一处的盐水中,涂抹均匀使成一层薄膜(若检材是液体,则不必加盐水),薄膜涂抹的面积约1.5×2.0cm2。
按上法制备大肠杆菌涂膜。
2.于室温中自然干燥。
3.固定涂片在酒精灯火焰上快速通过3~4次以固定细菌,并使其不易从玻片上脱落。
注意不要将涂片直接放在火焰上烤,以免破坏细菌结构。
4.染色(1)初染在涂膜上滴加结晶紫染液1~2滴,染1分钟,水冲洗,并轻轻倾去玻片上的积水。
(2)媒染加卢戈碘液1~2滴,染1分钟,水冲洗。
将表面积水甩干。
(3)脱色用95%酒精数滴滴于玻片上,频频摇晃以脱色,半分钟左右,立即用水冲洗(若涂膜较厚,可延长脱色时间;必须随时观察,以免脱色过度)。
(4)复染最后滴加沙黄染液1~2滴,复染1分钟后用水冲洗。
最后用吸水纸吸干。
5.用显微镜的油镜观察染色结果,将实验结果记录于下表中。
结果记录细菌染色性形态排列方式葡萄球菌大肠杆菌实验四抗酸染色法结核分枝杆菌是引起结核病的病原体,菌体细长略弯曲,有分枝生长趋势,因其细胞壁含有大量脂质,一般不易着色,若经加温或延长染色时间或提高染液浓度而着色后能抵抗盐酸酒精的脱色,故又称抗酸杆菌。
目的要求学习抗酸染色方法。
材料1.开放型肺结核病人痰标本涂片和枯草杆菌涂片2.抗酸染色剂(石炭酸复红染液、3%盐酸酒精、碱性美蓝染液),载玻片方法1. 染色①在已固定的涂片上滴加石炭酸复红液数滴,染色8~10分钟,水冲洗。