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第八章高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatograph)第一节概述（Generalization）以高压液体为流动相的液相色谱分析法称高效液相色谱法（HPLC）。
HPLC是20世纪70年代初发展起来的一种新的色谱分离分析技术。
具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广（样品不需气化，只需制成溶液即可）的特点，适用于高沸点、热不稳定有机及生化试样的分离分析。
HPLC基本方法是用高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂泵入装有填充剂的色谱柱，经进样阀注入的样品被流动相带入色谱柱内进行分离后依次进入检测器，由记录仪、或数据处理系统记录色谱信号再进行数据处理而得到分析结果。
高效液相色谱法按固定相不同可分为液－液色谱法和液－固色谱法；按色谱原理不同可分为分配色谱法（液－液色谱）和吸附色谱法（液－固色谱）等。
目前，化学键合相色谱应用最为广泛，它是在液－液色谱法的基础上发展起来的。
将固定液的官能团键合在载体上，形成的固定相称为化学键合相，具有固定液不易流失的特点，一般认为有分配与吸附两种功能，常以分配作用为主。
C18（ODS）是最常使用的化学键合相。
根据固定相与流动相极性的不同，液-液色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法，当流动相的极性小于固定相的极性时称正相色谱法，主要用于极性物质的分离分析；当流动相的极性大于固定相的极性时称反相色谱法，主要用于非极性物质或中等极性物质的分离分析。
《中国药典》中有50种中成药的定量分析采用HPLC法，在中药制剂分析中，大多采用反相键合相色谱法。
一、高效液相色谱法的特点目前经典LC主要用于制备，若用于分析则采用脱机或非连续检测。
经典LC填料缺陷，通常是填料粒度大、范围宽、不规则，不易填充均匀，扩散和传质阻力大，谱带展宽加大。
它存在致命弱点：速度慢、效率低和灵敏度低。
HPLC填料（高效固定相）颗粒细、直径范围窄、能承受高压。
第6节GC分析方法及其应用GC（高效液相色谱，Gas Chromatography）是一种用于化合物分离和分析的技术。
GC分析常用于分析描分析检测、食品和饮料分析、医药和环境分析等。
GC分析方法的基本原理是利用样品中的化合物在移动相（气体）和固定相（柱填料）之间的相互作用来实现化合物的分离。
在移动相中，以气态状态进入分离柱，并通过与柱填料表面的相互作用进行分离。
不同的化合物会因为它们与固定相的亲和力不同而有不同的滞留时间，从而实现分离。
分离后的化合物通过检测器检测，生成相应的信号。
GC分析方法的应用非常广泛。
以下是几个常见的应用领域：1.石油化工行业：GC分析可以用于分析原油和石油产品中的各种化合物，如饱和烃、芳烃和环烃等。
这对于石油炼制和石油产品质量控制非常重要。
2.环境分析：GC分析可以用于检测环境中的有机污染物，如挥发性有机物、农药和有机溶剂等。
这对于环境保护和生态恢复至关重要。
3.食品和饮料分析：GC分析可以用于检测食品和饮料中的添加剂、农药残留物和有害物质等。
这有助于保证食品和饮料的安全性和质量。
4.制药行业：GC分析可以用于质量控制和药物分析，例如检测药物中的杂质和溶剂残留物等。
GC分析的方法和步骤如下：1.样品制备：根据需要，将样品进行合适的处理和提取，以获得可以进入GC系统的合适样品。
2.设备准备：根据需要选择合适的柱填料和检测器，并进行柱装填和系统的初始设置。
3.样品注射：将样品装入注射器，并通过气流将样品注入GC系统。
4.分离：样品在柱填料中进行分离，根据化合物的性质和柱填料的特性选择适当的操作条件，如柱温、流速等。
5.检测：分离后的化合物通过检测器进行检测，产生相应的信号。
根据需要选择合适的检测器，如火焰离子化检测器（FID）、荧光检测器或质谱检测器等。
6.数据处理和分析：通过对检测到的信号进行记录和计算，获得样品中各组分的浓度和相对含量等信息。
GC分析方法具有高分辨率、快速分析速度和灵敏度高的优点。
高效液相色谱的应用研究进展【摘要】从1903年，色谱的开始使用，各种色谱技术应运而生，其中高效液相色谱由于其分析速度快、分离效率高、检测灵敏度高、检测自动化、适用范围广等优点，作为物质分离的重要工具，在各个方面都取得了很大的发展，并且出现了许多的新型色谱。
本文综述了变性高效液相色谱在生物遗传方面的应用，及高效液相色谱在医学方面的应用。
【关键字】HPLC（高效液相色谱） DHPLC（变性高效液相色谱）1.高效液相色谱概要色谱法是利用混合物中各组分在两相中分配系数不同，当流动相推动样品中的组分通过固定相时，在两相中进行连续反复多次分配，从而形成差速移动，达到分离的方法。
根据流动相的状态可分为气相色谱法和液相色谱法。
在液相色谱中，采用颗粒十分细的高效固定相并采用高压泵输送流动相，全部工作通过仪器来完成。
这种色谱称为高效液相色谱(1iighperformance liquid chromatography，HPLC)。
由于高效液相色谱法有分析速度快、分离效率高、检测灵敏度高、检测自动化、适用范围广等优点，高效液相色谱成为最为常用的分离和检测手段，在有机化学、生物化学、医学、药物学与检测、化工、食品科学、环境监测、商检和法检等方面都有广泛。
另外，在高效液相色谱法的基础上不断发展，变性高效液相色谱法(DHPLC)随之兴起，广泛用于生物学、遗传学等领域。
2.高效液相色谱在生物学的应用变性高效液相色谱法(DHPLC)是在高效液相色谱法的基础上发展起来的一种新方法。
DHPLC采用高压闭合液相流路，将DNA样品自动注入并在缓冲液携带下流过DNA分离柱，通过缓冲液的不同梯度变化，在不同分离柱温度条件下，由荧光检测被分离的DNA样品，从而实现对DNA不同的分析它因使用的温度不同而有不同的应用价值：①在非变性温度(40℃～5O℃ )条件下对不同长度的双链DNA进行分离，用于定量反相PCR、长度多态性分析以及杂合性缺失(LOH)分析等；②在部分变性温度(51℃～75℃)条件下进行基因突变，单核苷酸多态性和CpG甲基化的检测；③在完全变性温度(70℃～8O℃)条件下对寡核苷[1]酸进行质量控制和纯化，RNA分离及已知位点基因型的分析等。
